技术领域
本发明属于医药化工领域，涉及一种3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨类衍生物、其药物组合物、其制备方法及用途。
背景技术
3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(T1105)和6-氟-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(T705)，以及T1105的核苷衍生物(T1106)(结构见图1)是一类病毒的RNA聚合酶的抑制剂，具有较好抗病毒作用。据报道，T705单独使用或与神经氨酸酶抑制剂联合使用，有很好的对抗流感病毒作用(Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2007，Vol.51，No.3，845-851；Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2010，126-133，PCT专利：WO2000010569)。T1105在体内和体外模型中表现出非常好的对抗口蹄疫病毒的作用(PCT专利：WO20071139081)。此外T705和T1106对其它RNA病毒所致疾病也有很好的疗效。例如，T705对小鼠模型的西方型马脑炎有治疗作用(Antiviral Research 82(2009)169-171)；T705和T1106对仓鼠的黄热病有治疗作用(Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2009，202-209)；T705在体内和体外对沙粒病毒和布尼亚病毒感染引起的疾病有治疗作用(Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2007，3168-3176)。T705对被西尼罗病毒感染的啮齿类动物有治疗作用(Antiviral Research 80(2008)377-379)；T705对静脉病毒感染有治疗作用(Antiviral Research 86(2010)121-127)。
T1105和T705，以及T1105的核苷衍生物T1106这三个化合物具有类似的作用机制，在体内都可以转化为相应的核苷三磷酸的形式，通过模拟鸟苷三磷酸(GTP)竞争性的抑制病毒RNA聚合酶而发挥抗病毒作用(ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY，2005，Vol.49，No.3，p.981-986)。
尽管T1105和T705在体外模型中有很好的抗病毒作用，但是这两个化合物都存在一些不良的药代动力学性质，不利于它们药效的发挥。例如T1105的口服吸收很差，体内消除也很快。虽然其在体外表现出很好的抗口蹄疫病毒的活性，IC50为1.6ug/mL，但是猪口服给药，每天两次，要达到200mg/Kg的剂量才能达到理想的抗口蹄疫的效果。T705的消除较快，存在半衰期短的问题，导致其用药剂量较大，每天口服剂量为800mg-2400mg。
发明内容
本发明人经过深入的研究，得到了一类新的3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨类衍生物(式I化合物)，并且惊奇地发现，该衍生物在体内能够转化成T705或T1105，显示出良好的抗病毒效果，具有作为抗病毒药物的潜力。由此提供了下述发明：
本发明的一个方面涉及式I所示的化合物、其可药用盐、其水合 物、或其溶剂化物，
式I
其中，
R1为氢或卤素；
R2和R3独立地选自：氢、(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基、1-(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、以及羟基或卤素取代的C1-6烷基；
所述卤素选自氟、氯、溴、以及碘，并且
当R2和R3同时为氢时，R1不能为氢或氟。
实施例17和18的实验证明了式I化合物在小鼠和猴子体内能够转化成T705或T1105。实施例17证实小鼠口服给药化合物3和化合物12的口服生物利用度明显高于T705。实施例18证实猴子口服给药化合物10和化合物12的口服生物利用度明显高于T705。由于T705或T1105的的抗病毒和防治口蹄疫的作用是现有技术中已知的，因此本领域技术人员能够预料到式I化合物也具有抗病毒和防治口蹄疫的活性。
实施例19的实验结果证明，化合物12对小鼠死亡率、平均生活日、肺病变及肺指数的抑制效果有可重复的统计显著性，且治疗效果优于目前上市的流感治疗药物磷酸奥司他韦。
此外，本领域技术人员知晓，溶剂化物对化合物的结构没有改变，只改变化合物的物理性质，因此也应有相同生物学活性。
根据本发明任一项所述的式I化合物、其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物，其中，
所述(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基为(C1-6烷基酰氧基)-亚甲基或(C1-6烷基酰氧基)-乙基；
所述1-(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基为1-(C1-6烷基酰氧基)-亚甲基或1-(C1-6烷基酰氧基)-乙基。
根据本发明任一项所述的式I化合物、其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物，其中，
其满足如下的(1)-(3)任一项或多项：
(1)R1为氢或氟；
(2)R2为氢、乙酰氧基-亚甲基、或2-四氢呋喃基；
(3)R3为氢、乙酰氧基-亚甲基、羟甲基、2-四氢呋喃基、新戊酰氧基-亚甲基、丁酰氧基-亚甲基、异丁酰氧基-亚甲基、乙酰氧基-乙基。
在具体的实施方案中，本发明的式I化合物、其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物，其选自如下的表1所示的化合物：
表1：本发明部分具体化合物
，以及其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其包含本发明任一项所述的式I化合物、其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物。
根据本发明任一项所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的载体或辅料；具体地，所述药物组合物为固体制剂、注射剂、外用制剂、喷剂、液体制剂、或复方制剂。
通常所述药物组合物含有0.1-90重量％的式I化合物和/或其可药用盐和/或其水合物和/或其溶剂化物。药物组合物可根据本领域 已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为哺乳动物用的适当的施用形式或剂量形式。
所述式I化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓 剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分式I化合物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明的再一方面涉及本发明中任一项所述的式I化合物的制备方法，包括如下的方法(1)-(5)中的任一方法所述的步骤：
(1)在非质子有机溶剂中，并且在有机碱或无机碱的存在下，使6-R1-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨与卤代甲基羧酸酯得到相应的N-[(C1-6烷基酰氧基)-亚甲基)]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨或4-[(C1-6烷基酰氧基)-亚甲基)]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，与1-卤代C1-6烷基基羧酸酯反应，得到相应的N-[1-(C1-6烷基酰氧基)-乙基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨或4-[1-(C1-6烷基酰氧基)-乙基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，
其中，
R4为C1-6烷基；
R5为氢或C1-6烷基；
X为氟、氯、溴、或碘；
(2)在非质子有机溶剂中，使6-R1-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨直接与2，3-二氢呋喃反应；或在PPTS(对甲基苯磺酸吡啶盐)和/或p-TsOH(对甲基苯磺酸)的催化下，使6-R1-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨与2，3-二氢呋喃反应，制备6-R1-N-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，6-R1-4-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，和6-R1-[N，4-二-(四氢呋喃-2-基)]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，
(3)在非质子有机溶剂中，使6-R1-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨直接与2-C1-6烷氧基四氢呋喃在加热下的条件下反应，制备 6-R1-N-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，6-R1-4-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，和6-R1-[N，4-二-(四氢呋喃-2-基)]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，
其中，R为C1-6烷基，优选为叔丁基；
(4)在非质子有机溶剂中，并且在路易氏酸存在下，使硅醚化的6-R1-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨与2-乙酰氧基四氢呋喃反应，制备6-R1-N-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，6-R1-4-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，和6-R1-[N，4-二-(四氢呋喃-2-基)]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，
(5)在非质子有机溶剂中，并且在三甲基氯硅烷和三乙胺的参与下，使6-R1-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨与2，3-二氢呋喃反应，制备6-R1-N-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，6-R1-4-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，和6-R1-[N，4-二-(四氢呋喃-2-基)]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨，
上述的方法(1)-(5)中，R1独立地为氢或卤素。
根据本发明所述的制备方法，其中，方法(1)-(5)中：
所述的非质子有机溶剂选自二氯甲烷、DMF、乙腈、DME、以及THF中的一种或多种；
所述有机碱选自三乙胺、DBU、以及二异丙基乙胺中的一种或多种；
所述无机碱为碳酸钾或碳酸铯；
所述卤代为氟、氯、溴或碘取代。
根据本发明任一项所述的制备方法，其中，
方法(3)中，所述2-C1-6烷氧基四氢呋喃为2-叔丁氧基四氢呋喃；
方法(4)中，所述路易氏酸选自SnCl4、TiCl4、以及叔丁基二甲基硅基三氟甲磺酸酯；优选SnCl4。
本发明的再一方面涉及本发明中任一项所述的式I化合物、其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物或者本发明任一项所述的药物组合 物在制备抗病毒药物中的用途。
具体地，本发明中所述病毒为RNA病毒；具体地，为流感病毒(Influenza Virus)、HCV病毒(Hepatitis C Virus)、布尼亚病毒(Bunyavirus)、白令病毒(Phlebovirus)、口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus)，西尼罗病毒(West Nile virus)、沙粒病毒(Arenavirus)、西方马脑炎病毒(Western Equine Encepha litis Virus)、或黄热病病毒(Yellow Fever Virus)；具体地，所述流感病毒为甲1(H1N1)亚甲型流感病毒。
本发明的再一方面涉及本发明中任一项所述的式I化合物、其可药用盐、其水合物、或其溶剂化物或者本发明任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或哺乳动物口蹄疫的药物中的用途；具体地，所述哺乳动物为偶蹄动物；具体地，所述偶蹄动物为猪、牛、或羊。
本发明的再一方面涉及一种在体内或体外抗病毒的方法，包括给予受试者有效量的式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物，或者有效量的包含式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物的药物组合物的步骤。具体地，所述受试者为哺乳动物，例如偶蹄动物(例如猪、牛、或羊)。
本发明的再一方面涉及一种治疗和/或预防哺乳动物口蹄疫的方法，包括给予哺乳动物有效量的式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物，或者有效量的包含式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物的药物组合物的步骤。具体地，所述哺乳动物为偶蹄动物。具体地，所述偶蹄动物为猪、牛、或羊。式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物，或者有效量的包含式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物的药物组合物可以单独使用，也可以与动物饲料或饮用水混合使用。
式I化合物或其可药用盐或其水合物或其溶剂化物的给药剂量取 决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。
可改变药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据式I化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
当用于上述治疗和/或预防或辅助治疗时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“预防和/或治疗有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学预防和/或治疗的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001-1000mg/kg体重/天，例如介于0.01-100mg/kg体重/天，例如介于0.01-10mg/kg体重/天。
根据本发明的化合物可以有效地预防和/或治疗本发明所述的各种疾病或病症。
在本发明中，术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
术语“C1-C6烷基”或“C1-6烷基”(包括C1-6烷基酰氧基或(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基或1-(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基中的任一个C1-6烷基)是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基、3-甲基戊基等。相应地，“C1-6烷基酰氧基”也可作类似理解。在本发明的一个实施方案中，所述“C1-C6烷基”或“C1-6烷基”为C1-3烷基或C4-6烷基。在本发明的一个实施方案中，所述(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基为(C1-3烷基酰氧基)-C1-3烷基或(C4-6烷基酰氧基)-C4-6烷基。在本发明的一个实施方案中，所述1-(C1-6烷基酰氧基)-C1-6烷基为1-(C1-3烷基酰氧基)-C1-3烷基或1-(C4-6烷基酰氧基)-C4-6烷基。
术语“C1-C6烷氧基”或“C1-6烷氧基”，是指具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-氧戊基、异氧戊基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-氧己基、3-甲基戊氧基等。在本发明的一个实施方案中，所述“C1-C6烷氧基”或“C1-6氧基”为C1-3烷氧基或C4-6烷氧基。
发明的有益效果
本发明的化合物在体内可转化为T1105或T705的形式而发挥抗病毒的作用，同时可明显提高化合物的生物利用度，并延长化合物T705或T1105在体内的作用时间。
附图说明
图1：小鼠分别口服化合物3、4、6和T705后的T705的药-时曲线。
图2：小鼠分别口服化合物10、11、12、13和T705后的T705的药-时曲线。
图3：小鼠分别口服化合物7、9和T1105后的T1105的药-时曲线(T1105口服给药后血中未检测出T1105)。
图4：猕猴分别口服化合物3、10、12、11、13和T705后的药-时曲线(在药物检测时，3只猴子，给与1种药物检测完成后，经过不少于3天的清洗期，再给予下一种受试药物)。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：N-[(乙酰氧基)-亚甲基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物1)和4-[(乙酰氧基)-亚甲基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物2)的制备
化合物2 化合物1
在氮气保护下，将1.39g(10mmol)的T1105溶于10mL无水DMF中，室温搅拌15min后，呈悬浮液，滴加氯甲基乙酸酯2.12g (20mmol)，碘化钾(2mmol)和三乙胺3.03g(30mmol)，加完后溶液澄清。在室温搅拌24小时后，将反应液真空浓缩至干，用乙酸乙酯充分洗涤此残余物多次，合并各次的乙酸乙酯相，浓缩至干，硅胶拌样后用Flash柱层析分离(二氯甲烷/甲醇洗脱)得到两个主要产物，分别为N-[(乙酰氧基)-亚甲基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物1)和4-[(乙酰氧基)-亚甲基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物2)。
化合物1：
1HNMR(CCl3)，δ2.18(3H，s)，5.92(2H，s)，6.42(1H，brs)，7.66(1H，d，J＝4.0Hz)，7.70(1H，d，J＝4.0Hz)，9，04(1H，brs)；ESIMS(m/e)250(MK+)，234(MNa+)，221(MH+)
化合物2：
1HNMR(CCl3)，δ2.12(3H，s)，，5.88(1H，brs)，6.25(2H，s)，7.52(1H，brs)，8.35(1H，s)，8.39(1H，s)；ES IMS(m/e)250(MK+)，234(MNa+)，221(MH+)。
实施例2：6-氟-4-[(乙酰氧基)-亚甲基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物3)和6-氟-4-(羟甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物4)的制备
化合物4 化合物3
方法同合成实施例1，只是以T705代替T1105，主要得到6-氟-4-[(乙酰氧基)-亚甲基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物 3)和6-氟-4-(羟甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物4)。
化合物3：
1HNMR(CDCl3)δ2.12(3H，s)，5.85(1H，brs)，6.21(2H，s)，7.38(1H，s)，8.20(1H，d，J＝8.4Hz)；ESIMS(m/e)，252(MNa+)，230(MH+)
化合物4：
1HNMR(DMSO-d6)δ5.77(3H，s)，7.82(1H，brs)，8.00(1H，brs)，8.41(1H，d，J＝8.4Hz)；ESIMS(m/e)，188(MH+)。
实施例3：4-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物5)的制备
化合物5
将400mg(2.87mmol)的T1105悬浮在20mL的THF中，加入2，3-二氢呋喃1.1g(15.5mmol)和PPTS(9mg)，室温下搅拌反应48小时，将反应物过滤，滤去不溶物，浓缩得到油状物，放置固化，甲醇洗涤得到粉状固体，为化合物5。
化合物5：
1HNMR(DMSO-d6)，δ1.75-1.85(1H，m)，1.90-2.10(2H，m)，2.35-2.45(1H，m)，3.90-4.00(1H，m)，4.30-4.40(1H，m)，6.04-6.12(1H，m)，7.55(1H，d，J＝4.0Hz)，7.72(1H，br s)，7.78(1H，d，J＝4.0Hz)，8.39(1H，brs)；ESIMS(m/e)，210(MH+)，232(MNa+)。
实施例4：6-氟-4-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物6)的制备
化合物6
将400mg(2.54mmol)的T705悬浮在20mL的THF中，加入2，3-二氢呋喃1.1g(15.5mmol)和PPTS(9mg)，室温下搅拌反应72小时，将反应物过滤，滤饼用THF洗涤得到粉状固体，为化合物6。
化合物6：
1HNMR(DMSO-d6)，δ1.78-1.88(1H，M)，1.91-1.99(1H，m)，2.06-2.14(1H，m)，2.34-2.43(1H，m)，3.91-3.97(1H，m)，4.39-6.08(1H，m)，7.93(1H，br s)，7.98(1H，d，J＝5.6Hz)，8.68(1H，brs)；ESIMS(m/e)228(MH+)，250(MNa+)。
实施例5：N-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物7)的制备
化合物7
在干燥的三口瓶中，加入1.075g(7.7mmol)的T1105和1.67g(11.6mmol)的2-叔丁氧基四氢呋喃，用5mL的无水DMF溶解，N2保护下加热至150℃，反应12小时，降至室温后，加入10mL二氯甲烷，有固体析出，过滤收集此固体，用甲醇重结晶两次，在用乙腈重结晶一次，得到白色固体250mg，为化合物7。
化合物7：
1HNMR(DMSO-d6)，δ1.77(2H，m)，2.71(2H，m)，3.42(1H，m)，4.56(1H，br s)，6.36(2H，dd，J＝5.6Hz)，6.93(1H，d，J＝6.0Hz)，9.72(1H，d，J＝6.0Hz)，10.56(1H，br s).ES IMS(m/e)，210(MH+)， 232(MNa+)。
实施例6：6-氟-N-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物8)的制备
在干燥的三口瓶中，加入377mg(2.4mmol)的T705和670mg(4.8mmol)的2-叔丁氧基四氢呋喃，用5mL的无水NMP(N-甲基吡咯烷酮)溶解，N2保护下加热至140℃反应10小时，补加200mg(1.4mmol)的2-叔丁氧基四氢呋喃，继续在此温度下反应10小时。然后降至室温后，减压蒸去溶剂，残余物用制备TLC分离纯化(二氯甲烷/甲醇)展开，得到白色固体100mg，为化合物8。
化合物8：
1HNMR(CDCl3)，δ(ppm)，1.90-2.10(3H，m)，2.40-2.50(1H，m)，3.85-3.95(1H，m)，4.00-4.10(1H，m)，5.88(1H，m)，7.79(1H，brs)，8.28(1H，d，J＝8.0Hz)，12.44(1H，brs)。
实施例7：N，4-二-(四氢呋喃-2-基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物9)的制备
化合物9
向带有温度计和干燥管的干燥三口瓶中，加入1.39g(10mmol)的T1105和无水DMF20mL，充分搅拌后得到悬浮液，用注射器加入 2.16g(20mmol)的三甲基氯硅烷和1.01g(10mmol)三乙胺，保持内温不高于33℃，然后在室温下反应7小时，将此反应减压浓缩至干，然后Flash柱层析(二氯甲烷/甲醇洗脱)，得到浅黄色固体，为化合物9。
化合物9：
ESIMS(m/e，100)302(MNa+，45)，280(MH+，30)，232(58)，210(100)，156(48)。
实施例8：6-氟-4-(新戊酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物10)的制备
方法同合成实施例1，只是以T705代替T1105，以新戊酸氯甲酯代替乙酸氯甲酯，得到6-氟-4-(新戊酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物10)。
化合物10：
1HNMR(CDCl3)，δ(ppm)，1.18(9H，s)，6.21(2H，s)，6.21(1H，brs)，7.42(1H，brs)，8.29(1H，d，J＝8.8Hz)；ESIMS(m/e)272(MH+)。
实施例9：6-氟-4-(丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物11)的制备
化合物11
方法同合成实施例1，只是以T705代替T1105，以丁酸氯甲酯代替乙酸氯甲酯，得到6-氟-4-(正丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物11)。
化合物11：
1HNMR(CDCl3)δ0.92(3H，t，J＝7.2Hz)，1.66(2H，m)，2.35(2H，t，J＝7.2Hz)，6.22(2H，s)，6.44(1H，bs)7.43(1H，brs)，8.19(1H，d，J＝8.4Hz)；ESIMS(m/e)258(MH+)。
实施例10：6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)的制备(1)
化合物12
在氮气保护下，将1.57g(10mmol)的T705溶于10mL无水DMF中，室温搅拌15m in后，滴加三乙胺3.03g(30mmol)，降温至0℃，再滴入氯甲基乙酸酯3.41g(25mmo l)，加毕，升至室温反应24小时后，将反应液冲入100mL冷水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，用1N盐酸洗涤两次，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，氯化钠溶液洗涤， 硫酸钠干燥，浓缩至干，硅胶拌样后用Flash柱层析分离(二氯甲烷/甲醇洗脱)主要得到6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)。
化合物12：
1HNMR(CDCl3)δ1.16(6H，d，J＝6.8Hz)，2.59(1H，m)，6.21(2H，s)，6.30(1H，bs)，7.41(1H，brs)，8.19(1H，d，J＝8.4Hz)；ESIMS(m/e)258(MH+)。
实施例11：6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)的制备(2)
化合物12
在氮气保护下，将1.57g(10mmol)的T705溶于10mL无水DMF中，室温搅拌15m in后，滴加三乙胺3.03g(30mmol)，降温至0℃，再滴入溴甲基乙酸酯2.12g(20mmol)，加毕，在室温搅拌24小时后，将反应液冲入100mL冷水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，用1N盐酸洗涤两次，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，氯化钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，浓缩至干，硅胶拌样后用Flash柱层析分离(二氯甲烷/甲醇洗脱)主要得到6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)。
实施例12：6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)的制备(3)
化合物12
方法同合成实施例11，只是以二异丙基乙胺代替三乙胺，主要得到6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)。
实施例13：6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)的制备(4)
化合物12
在氮气保护下，将1.57g(10mmol)的T705溶于10mL无水DMF中，室温搅拌15m in后，加入碳酸钾(20mmol)，降温至0℃，再滴入溴甲基乙酸酯2.12g(20mmol)，加毕，在室温搅拌24小时后，将反应液冲入含有40mmol的HCl的100mL冷水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，用1N盐酸洗涤两次，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，氯化钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，浓缩至干，硅胶拌样后用Flash柱层析分离(二氯甲烷/甲醇洗脱)主要得到6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)。
实施例14：6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)的制备(5)
化合物12
方法同合成实施例13，只是以碳酸铯代替碳酸钾，主要得到6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)。
实施例15：6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)的制备(6)
化合物12
在氮气保护下，将1.57g(10mmol)的T705溶于10mL无水DMF中，室温搅拌15min后，滴加三乙胺3.03g(30mmol)，降温至-30℃，再滴入碘甲基乙酸酯2.12g(20mmol)的乙腈溶液，加毕，在-30℃下反应24小时后，逐渐升至0℃反应8小时，将反应液冲入100mL冷水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，用1N盐酸洗涤两 次，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，氯化钠溶液洗涤，硫酸钠干燥，浓缩至干，硅胶拌样后用Flash柱层析分离(二氯甲烷/甲醇洗脱)主要得到6-氟-4-(异丁酰氧基亚甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物12)。
实施例16：6-氟-4-[1-(乙酰氧基)-乙基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物13)的制备
方法同合成实施例1，只是以T705代替T1105，以1-氯甲基乙酸酯代替乙酸氯甲酯，得到6-氟-4-[1-(乙酰氧基)-乙基]-3-氧代-3，4-二氢-2-吡嗪甲酰氨(化合物13)。
化合物13：
1HNMR(CDCl3)δ1.73(3H，d，J＝5.6Hz)，2.08(3H，s)6.50(1H，br s)，7.22(1H，q，J＝5.6Hz)，7.35(1H，br s)，8.17(1H，d，J＝8.4Hz)；ESIMS(m/e)244(MH+)。
实施例17：小鼠体内代谢实验
实验药物：化合物1-13、T1105、T705。
实验对象：KM小鼠(雄性，27±2g)，按体重随机分为15组，，每组3只。
实验方法：
按0.0637mmol/10ml/kg的剂量(对于T705或T1105相当于10mg/10ml/kg)分别口服灌胃给予受试化合物(每个化合物对应一组即3只小鼠)。于给药不同时间点眼眶采血20μL，加入20μL阳离 子内标乙腈溶液，20μL阴离子内标乙腈溶液，40μL乙腈，振荡，18000g离心10min，取上清LC/MS/MS进样，分别测定相应的受试化合物和T705或T1105的浓度。在小鼠内代谢时以T1105计算的生物利用度[AUC(μM*h)]数值。
实验结果：
如附图1-3和表2-3所示。
表2：T705及其衍生物化合物3、4、6、10、11、12、13等在小鼠和猴子体内代谢时以T705计算的生物利用度[AUC(μM*h)]和半衰期[T1/2(h)]数值
表3：T1105及其衍生物化合物7和9在小鼠体内代谢时以T1105计算的生物利用度[AUC(μM*h)]数值
结果显示，化合物3、10、11、12、13在小鼠口服给药的条件下能够有效改善T705的药代动力学性质。其中化合物3可明显提高小鼠体内以T705计算的血药浓度和口服生物利用度[AUC(μM*h)]。化合物12能明显提高以T705计算的血药浓度和口服生物利用度，并延长半衰期。化合物10、11、13虽然不能提高以T705计算的口服生物利用度，但能延长以T705计算的半衰期。T1105衍生物化合物7和9在小鼠口服给药的条件下，其以T1105计算的口服生物利用度明显高于T1105口服给药的口服生物利用度。实际上，T1105在0.0637mmol/10ml/kg剂量下口服给药时，在在小鼠血浆中没有检测出T1105，说明T1105的口服生物利用度很低。
实施例18：猴子体内代谢试验
实验药物：化合物3、10、12、11、13和T705。
实验对象：猕猴3只。
实验方法：猕猴3只，按0.0637mmol/1ml/kg分别口服灌胃给予一种受试药物。于给药不同时间点静脉取猴血浆50μL，加入50μL不同浓度的T705乙腈标准溶液，加入50μL阴离子内标乙腈溶液，100μL乙腈，使分析样品相当于血浆浓度100、500、1000、5000、10000ng/ml。振荡，18000g离心10min，取上清LC/MS/MS进样，测定T705浓度。以血浆样品中T705的检出峰面积与内标峰面积比值对理论浓度进行线性拟合。
经过不少于3天的清洗期，再给予下一种受试药物。
实验结果：如图4和表2-3所示。
结果显示，在猴子口服给药的条件下，化合物3、10、11、12、13等五个化合物能够有效地改善T705的药代动力学性质，其中化合物3、11、13能明显提高以T705计的半衰期，化合物10、11、12、13等四个化合物可明显提高以T705计的血药浓度和口服生物利用度，化合物12和10在提高以T705计的血药浓度和口服生物利用度这两方面的效果最为明显。
实施例19：化合物12在小鼠流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)感染模型中的药效学研究
实验药物：化合物12应用生理盐水配制成无色透明溶液。实验时化合物12配成不同浓度的溶液，采取口服灌胃给药。
实验动物：昆明种小鼠，第一、二批雌雄各半，第三批为雌性，16-18克，为中国医学科学院啮齿类动物养殖中心提供，有健康证书。
所用病毒：流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)鼠肺适应株(中国医学科学院医药生物技术研究所提供，也可以商购或者使用其它的H1N1流感病毒株)。毒种对小鼠LD50为10-5左右。
对照药物：磷酸奥司他韦，军事医学科学院毒物药物研究所提供。
实验方法：
流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)感染方法：乙醚麻醉小鼠后，用加样器经鼻滴入40μl适当稀释的病毒液。
给药方式：实验样品和对照药物均为灌胃给药。
第一批实验：化合物12剂量：30mg/kg，100mg/kg、300mg/kg给药组三个剂量组，每组20只小鼠。感染后约1小时给药。感染对照以生理盐水同量处理。阳性对照药磷酸奥司他韦(5mg/kg)一日一次灌胃，给药时间同治疗组。
第二批实验：化合物12剂量：30mg/kg，100mg/kg、300mg/kg给药组三个剂量组，每组20只小鼠。感染后约1小时给药。感染对照以生理盐水同量处理。阳性对照药磷酸奥司他韦(10mg/kg)一日一次灌 胃，给药时间同治疗组。
给药时间qd×5，每批实验同时滴定病毒LD50。
病毒分离实验：以适量流感病毒FM-1型感染小鼠，将感染小鼠分为三组，分别用100mg/kg化合物12、磷酸奥司他韦10mg/kg、生理盐水对照处理。每组20只动物。在感染后24小时、48小时、72小时、96小时从每组取5只处死，无菌取肺。称重，冻存于-85℃冰箱。将所取肺组织加入10倍体积MEM及适量玻璃粉，充分研磨成匀浆。4℃，12000rpm离心1分钟，收集上清。对上清液进行等比稀释，在MDCK细胞上于24、48小时观察CPE，滴定每个肺的TCID50。
观察判断指标：实验观察死亡率、平均生活日、肺病变、肺指数以评价药效。
肺病变、肺指数：感染后第4天晚小鼠禁食，次日，即感染后第5天，分组处死小鼠，取出鼠肺，肉眼判断肺病变程度。0表示无肺病变，1-4为每级递增25％的肺病变。每只小鼠称体重及肺重，计算每只小鼠之肺指数，进而求得每组之平均肺指数，进行比较及统计处理。肺指数为肺重与鼠重之比。
死亡率、平均生活日：每日观察，记录每组死亡只数，共2周，计算死亡率及平均生活日。
统计方法：采用统计程序，用t检验分析方法检验药物毒性结果、肺指数的病变结果；用Ridit检验检验肺病变；Kaplan-Meier法比较死亡率及平均生活日。
实验结果：
实验观察平均生活日指标。化合物12对小鼠流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)感染的存活率和平均生活日实验结果见表4。肺病变、肺指数实验结果见表5。
表4：化合物12对流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)感染的小鼠模型药效试验存活率和平均生活日结果
与病毒对照作Kaplan-Meier法检验，*p＜0.05，＊＊p＜0.05。
表5：化合物12对流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)感染的小鼠模型药效试验肺病变、肺指数结果
与病毒对照作t检验，*p＜0.05；**p＜0.01。
化合物12在二批实验内均显示对小鼠死亡率、平均生活日、肺病变及肺指数的抑制效果有可重复的统计显著性。说明化合物12对小鼠流感病毒甲1(H1N1)亚甲型(FM1株)实验感染有可重复的治疗效果，且治疗效果优于目前上市的流感治疗药物磷酸奥司他韦。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。