阳离子多杀菌素衍生物及其制备方法和应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610356840.0 (22)申请日 2016.05.26 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105884844 A (43)申请公布日 2016.08.24 (73)专利权人 中南大学 地址 410083 湖南省长沙市岳麓区麓山南 路932号 (72)发明人 马大友刘苏友罗志勇赖青 彭坤坚刘丽君 (74)专利代理机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 43113 代理人 卢宏周栋 (51)Int.Cl. C07H 17/08(2006.01) C07H 1。

2、/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 WO 2010150100 A1,2010.12.29,权利要求 1-3， 说明书第1段. US 6001981 A,1999.12.14,全文. CN 102190694 A,2011.09.21,全文. CN 102977166 A,2013.03.20,全文. Jia Zhou， 等.The anticancer efficacy of paclitaxel liposomes modified with mitochondrial targeting conjugate in resistant lun。

3、g cancer. Biomaterials .2013,第34卷(第14期),第3626-3638页. 赖青， 等.多杀菌素B的半合成制备方法. 农 药学学报 .2016,第18卷(第3期),第299-303页. Min Han， 等.Mitochondrial Delivery of Doxorubicin via Triphenylphosphine Modification for Overcoming Drug Resistance in MDA-MB-435/DOX Cells. Molecular Pharmaceutics .2014,第11卷(第8 期),第2640-2649。

4、页. Qinglian Hu， 等.Mitochondria-Targeted Cancer Therapy Using a Light-Up Probe with Aggregation-Induced-Emission Characteristics. Angew. Chem. Int. Ed. .2014,第53卷第14225-14229页. 审查员 臧乐芸 (54)发明名称 阳离子多杀菌素衍生物及其制备方法和应 用 (57)摘要 本发明公开了阳离子多杀菌素衍生物及其 制备方法和应用。 所述阳离子多杀菌素衍生物的 结构如式(I)式所示。 所述阳离子多杀菌素衍生 物能用于制备抗肿瘤药物。 。

5、权利要求书5页 说明书14页 CN 105884844 B 2019.02.01 CN 105884844 B 1.阳离子多杀菌素衍生物， 其特征在于， 所述阳离子多杀菌素衍生物结构如式(I)所 示： 式(I)中： R为H或甲基， X为阴离子， linker为式(II)、 式(III)、 式(IV)所示的基团， 式(II)、 式(III)、 式(IV)中n018。 2.如权利要求1所述的阳离子多杀菌素衍生物， 其特征在于， 所述阴离子X选自氯、 溴、 碘、 硫酸氢根、 甲磺酸根、 苯磺酸根、 对甲苯磺酸根或氢氧根。 3.如权利要求1所述的阳离子多杀菌素衍生物， 其特征在于， 所述阳离子多杀菌素。

6、衍生 物具体为式()、 式()、 式()、 式()、 式()、 式()所示的化合物： 权利要求书 1/5 页 2 CN 105884844 B 2 4.如权利要求1所述阳离子多杀菌素衍生物的制备方法， 其特征在于， 所述方法包括如 下步骤： (1)制备中间体1和中间体2： 将多杀菌素溶于溶剂， 并加入单质碘和乙酸钠， 反应后去除溶剂并加入饱和硫代硫酸 钠溶液， 用溶剂萃取数次， 合并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂并分离纯化后得中间体 1， 其中， 所述多杀菌素、 单质碘、 乙酸钠的物质的量的比为1:(110):(110)， 所述溶剂用 量为每1g多杀菌素使用11000mL溶剂， 所述饱和。

7、硫代硫酸钠溶液用量为每1g多杀菌素使 用11000mL饱和硫代硫酸钠溶液； 将多杀菌素溶于110mol/L硫酸溶液中反应结束后用水和溶剂萃取数次， 合并萃取 液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂得中间体2； (2)制备中间体3、 中间体4和中间体5： 将中间体1溶于溶剂中， 加入末端二卤代烷烃反应后去除溶剂， 加入水后用溶剂萃取数 次， 合并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂并分离纯化后得中间体3， 其中， 所述中间体1和 权利要求书 2/5 页 3 CN 105884844 B 3 末端二卤代烷烃的物质的量比为1:(110)， 所述溶剂用量为每1g中间体1使用11000mL 溶剂； 将中间体1。

8、溶于溶剂中， 加入脂肪酰卤反应后去除溶剂， 加入水后用溶剂萃取数次， 合 并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂并分离纯化后得中间体4， 其中， 所述中间体1和脂肪 酰卤的物质的量比为1:(110)， 所述溶剂用量为每1g中间体1使用11000mL溶剂； 将中间体2溶于溶剂中， 加入脂肪酰卤反应后去除溶剂， 加入水后用溶剂萃取数次， 合 并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂并分离纯化得到中间体5， 其中， 所述中间体2和脂肪 酰卤的物质的量比为1:(110)， 所述溶剂用量为每1g中间体1使用11000mL溶剂； (3)制备化合物A、 化合物B和化合物C， 所述化合物A、 化合物B和化合物C。

9、为阳离子多杀 菌素衍生物： 将中间体3、 中间体4和中间体5分别溶于溶剂中， 加入三苯基膦反应后去除溶剂， 用正 己烷/异丙醇重结晶数次， 经分离纯化后得到阳离子多杀菌素的衍生物： 化合物A、 化合物B 和化合物C， 其中， 所述中间体3与三苯基膦的物质的量的比为1： (120)， 所述中间体4与三 苯基膦的物质的量的比为1： (120)， 所述中间体5与三苯基膦的物质的量的比为1： (1 20)， 所述溶剂用量为每1g中间体3或中间体4或中间体5使用11000mL溶剂； 步骤(1)、 (2)和(3)中所述溶剂为质子性溶剂或非质子性溶剂； 上述步骤(1)至(3)涉及到的中间体及化合物结构式如下。

10、： 权利要求书 3/5 页 4 CN 105884844 B 4 5.如权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)、 (2)和(3)中所述溶剂为乙醇、 甲醇、 石油醚、 乙酸乙酯、 丙酮、 二氯甲烷、 氯仿、 乙腈或N,N-二甲基甲酰胺； 步骤(1)、 (2)和(3)中 所述反应的温度为-10200； 步骤(1)、 (2)中所述干燥剂为无水硫酸钠或无水氯化钙。 权利要求书 4/5 页 5 CN 105884844 B 5 6.如权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)、 (2)和(3)中所述分离纯化是经硅胶 柱层析分离纯化。 7.如权利要求1至3任一项所述的阳离子多杀菌素衍生物在。

11、制备抗肿瘤药物中的应用。 权利要求书 5/5 页 6 CN 105884844 B 6 阳离子多杀菌素衍生物及其制备方法和应用 技术领域 0001 本发明涉及多杀菌素的结构衍生物， 特别是涉及多杀菌素衍生物上引入三苯基膦 阳离子， 其制备方法及用于抗肿瘤等方面的用途。 背景技术 0002 多杀菌素(Spinosad)是由刺糖多胞菌(Saccharopolyspora spinosa)发酵液中提 取的一种能够同时激活-氨基丁酸受体和烟碱型乙酰胆碱受体的大环内酯类无公害高效 生物杀虫剂， 由陶氏益农公司于上世纪九十年代初期开发并推向市场， 商品化的多杀菌素 主要活性成分为多杀菌素A和多杀菌素D(式。

12、1)， 分别占多杀菌素总含量的85及15左右。 多杀菌素A作为其主要成分， 安全性很高(LD50rat,oral5000mg/kg， ip1000mg/kg)。 希腊 ENTARCO SA公司2010年在一份专利中证实多杀菌素能作用于呼吸链复合物II， 有抑制线粒 体氧化磷酸化作用， 体外、 体内实验均显示了较好的抗肿瘤活性(对肿瘤细胞株BxPC-3, Du145,PC-3,MDA-MB-231的GI50分别为11.1、 12.5、 13.3、 13.4 g/mL)。 多杀菌素A和多杀菌 素D的化学结构式如下： 0003 0004 氧化磷酸化相关的作用靶点位于线粒体基质内， 即线粒体内膜的内侧。

13、， 多杀菌素 为分子量较大的电中性分子， 不易透过线粒体内膜进入线粒体基质内， 不利于其发挥抑制 线粒体氧化磷酸化的作用。 如果能将多杀菌素对线粒体氧化磷酸化的抑制作用与亲脂性阳 离子对肿瘤细胞线粒体的选择性作用结合起来， 设计合成亲脂性阳离子多杀菌素衍生物， 则能提高多杀菌素进入线粒体内膜的能力， 使其选择性积聚于肿瘤细胞线粒体内， 发挥抑 制线粒体氧化磷酸化的作用。 0005 因此， 基于上述思想， 我们考虑在多杀菌素上进行结构修饰， 引入不同的烷基侧 链， 再进一步引入亲脂性三苯基膦阳离子， 提高其进入线粒体的能力， 设计合成了一类结构 新颖的阳离子多杀菌素衍生物， 并发现它们具有很强的。

14、抗肿瘤活性。 发明内容 0006 本发明的目的之一为提供一类全新的阳离子多杀菌素衍生物。 说明书 1/14 页 7 CN 105884844 B 7 0007 所述阳离子多杀菌素衍生物结构如式(I)所示： 0008 0009 式(I)中： 0010 R为H或甲基， X为阴离子， linker为式(II)、 式(III)、 式(IV)所示的基团， 0011 0012 式(II)、 式(III)、 式(IV)中n018。 0013 优选地， 所述阴离子X选自氯、 溴、 碘、 硫酸根、 硫酸氢根、 磷酸根、 甲磺酸根、 苯磺酸 根、 对甲苯磺酸根或氢氧根。 0014 优选地， 所述阳离子多杀菌素衍生。

15、物具体为式()、 式()、 式()、 式()、 式 ()、 式()所示的化合物： 说明书 2/14 页 8 CN 105884844 B 8 0015 0016 本发明的目的之二为提供以上阳离子多杀菌素衍生物的制备方法。 0017 所述阳离子多杀菌素衍生物的制备方法技术路线如下： 说明书 3/14 页 9 CN 105884844 B 9 0018 0019 (1)制备中间体1和中间体2： 说明书 4/14 页 10 CN 105884844 B 10 0020 将多杀菌素溶于溶剂， 并加入单质碘和乙酸钠， 反应后去除溶剂并加入饱和硫代 硫酸钠溶液， 用溶剂萃取数次， 合并萃取液， 加入干燥剂。

16、干燥， 旋干溶剂并分离纯化后得中 间体1， 其中， 所述多杀菌素、 单质碘、 乙酸钠的物质的量的比为1:(110):(110)， 所述溶 剂用量为每1g多杀菌素使用1 1000mL溶剂， 所述饱和硫代硫酸钠溶液用量为每1g多杀菌 素使用11000 mL饱和硫代硫酸钠溶液； 0021 将多杀菌素溶于110mol/L硫酸溶液中反应结束后用水和溶剂萃取数次， 合并萃 取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂得中间体2； 0022 (2)制备中间体3、 中间体4和中间体5： 0023 将中间体1溶于溶剂中， 加入末端二卤代烷烃反应后去除溶剂， 加入水后用溶剂萃 取数次， 合并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干。

17、溶剂并离纯化后得中间体3， 其中， 所述中间体1 和末端二卤代烷烃的物质的量比为1:(110)， 所述溶剂用量为每1g中间体1使用1 1000mL溶剂； 0024 将中间体1溶于溶剂中， 加入脂肪酰卤反应后去除溶剂， 加入水后用溶剂萃取数 次， 合并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂并分离纯化后得中间体4， 其中， 所述中间体1和 脂肪酰卤的物质的量比为1:(110)， 所述溶剂用量为每1g中间体1使用11000mL溶剂； 0025 将中间体2溶于溶剂中， 加入脂肪酰卤反应后去除溶剂， 加入水后用溶剂萃取数 次， 合并萃取液， 加入干燥剂干燥， 旋干溶剂并分离纯化得到中间体5， 其中， 所述。

18、中间体2和 脂肪酰卤的物质的量比为1:(110)， 所述溶剂用量为每1g中间体1使用11000mL溶剂； 0026 (3)制备化合物A、 化合物B和化合物C， 所述化合物A、 化合物B和化合物C为阳离子 多杀菌素衍生物： 0027 将中间体3、 中间体4和中间体5分别溶于溶剂中， 加入三苯基膦反应后去除溶剂， 用正己烷/异丙醇重结晶数次， 经分离纯化后得到阳离子多杀菌素的衍生物： 化合物A、 化合 物B和化合物C， 其中， 所述中间体3与三苯基膦的物质的量的比为1： (120)， 所述中间体4 与三苯基膦的物质的量的比为1： (120)， 所述中间体5与三苯基膦的物质的量的比为1： (1 20。

19、)， 所述溶剂用量为每1g中间体3或中间体4或中间体5使用11000mL溶剂； 0028 步骤(1)、 (2)和(3)中所述溶剂为质子性溶剂或非质子性溶剂。 0029 步骤(1)、 (2)和(3)中所述溶剂为乙醇、 甲醇、 石油醚、 乙酸乙酯、 丙酮、 二氯甲烷、 氯仿、 乙腈或N,N-二甲基甲酰胺等； 步骤(1)、 (2)和(3) 中所述反应的温度为-10200 ； 步骤(1)、 (2)和(3)中所述干燥剂为无水硫酸钠或无水氯化钙等。 所述分离纯化是经硅 胶柱层析分离纯化。 0030 上述的阳离子多杀菌素衍生物能用于制备抗肿瘤药物。 具体实施方式 0031 实施例1 0032 N-去甲基多杀。

20、菌素A的制备 说明书 5/14 页 11 CN 105884844 B 11 0033 0034 N-去甲基多杀菌素A的结构式 0035 在500mL茄型瓶中， 依次加入5.00g(6.83mmol)多杀菌素A和200mL 甲醇， 将1.12g (13.66mmol)乙酸钠溶于1mL水中并加入反应体系， 最后加入6.94g单质碘(27.32mmol)， 搅 拌下于70下回流反应12h。 反应过程中用1mol/L的氢氧化钠溶液保持反应液pH89。 旋 转蒸发除去甲醇， 加入100mL饱和硫代硫酸钠溶液， 用乙酸乙酯(3100mL)萃取， 合并有机 相， 用无水硫酸钠干燥4h。 减压旋转蒸发脱去溶。

21、剂后经硅胶(200目300 目)柱层析洗脱 剂： V(乙酸乙酯):V(甲醇):V(三乙胺)10:1:0.1纯化得N-去甲基多杀菌素A为淡黄色固 体3.96g， 收率81。 m.p.8189； 1H NMR(400MHz,CDCl3)， ： 6.78(s,1H) ,5.89(d,J 9.8Hz,1H),5.81(d, J9.8Hz,1H),4.894.84(m,1H),4.734.64(m,1H),4.534.47 (m, 1H) ,4.364.29(m,1H) ,3.693.62(m,1H) ,3.593.55(m,4H) , 3.533.45(m, 10H),3.353.26(m,1H),3。

22、.173.09(m,2H),3.06 2.99(m,1H),2.922.84(m,1H), 2.51(s,3H),2.452.32(m,3H),2.31 2.23(m,1H),2.232.12(m,2H),2.021.90(m, 2H),1.831.71(m, 1H),1.621.40(m,9H),1.35(d,J6.1Hz,4H),1.29(d,J6.2Hz, 3H),1.19 (d,J6.7Hz,4H),0.980.88(m,1H),0.83(t,J7.4Hz,3H)； 13C NMR (100MHz, CDCl3)， ： 202.76,172.56,147.57,144.08,129.3。

23、3,128.78, 103.12,95.40,82.24,81.01, 80.85,77.68,76.05,74.45,67.91,60.95,60.59, 59.01,57.70,49.42,47.58,46.02, 41.50,41.15,37.36,36.26,34.29,34.19, 33.11,30.42,30.11,28.37,27.35,21.50, 19.04,17.79,16.24,9.37； HR-ESI-MS： C40H63NO10M+H+， 计算值718.453 02， 测定值 718.452 39。 0036 实施例2 0037 N-去甲基多杀菌素D的制备 0038 。

24、0039 N-去甲基多杀菌素D的结构式 0040 按实例1， 用多杀菌素D代替多杀菌素A， 得白色固体3.8g， 收率77。 HR-ESI-MS： 说明书 6/14 页 12 CN 105884844 B 12 C41H65NO10M+H+， 计算值731.460 85， 测定值731.460 39。 0041 实施例3 0042 17-O-Psa多杀菌素A的制备 0043 0044 17-O-Psa多杀菌素A的结构式 0045 在250mL单颈瓶中， 依次加入5g(6.83mmol)多杀菌素A和100mL 新制1mol/L H2SO4， 搅拌下于80下反应4h。 停止反应， 冷却至室温， 抽。

25、滤， 用新制1mol/L H2SO4溶液(500mL)洗 涤滤渣。 收集滤渣， 加入100mL 水， 用二氯甲烷(3200mL)萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥4h。 减压旋转蒸发脱去溶剂后得17-O-Psa多杀菌素A为白色固体3.9g， 收率95。 0046 实施例4 0047 17-O-Psa多杀菌素D的制备 0048 0049 17-O-Psa多杀菌素D的结构式 0050 按实例3， 用多杀菌素D代替多杀菌素A， 得白色固体4.0g， 收率 99。 0051 实施例5 0052 N-脱甲基-N-(3-溴丙基)多杀菌素A的制备 0053 0054 N-脱甲基-N-(3-溴丙基)多杀菌。

26、素A的结构式 0055 在50mL单颈瓶中， 依次加入1g(1.39mmol)中间体化合物1和20mL 乙腈， 再加入 385mg(2.78mmol)碳酸钾和426 L(4.18mmol)1,3-二溴丙烷， 搅拌下于45下反应24h。 停止 说明书 7/14 页 13 CN 105884844 B 13 反应， 冷却至室温， 抽滤除去碳酸钾固体， 旋转蒸发除去乙腈， 加入50mL水， 用乙酸乙酯(3 50mL)萃取， 合并有机相， 用无水硫酸钠干燥4h。 减压旋转蒸发脱去溶剂后经硅胶(200 目 300目)柱层析洗脱剂： V(石油醚):V(乙酸乙酯)4:1纯化得N- 脱甲基-N-(3-溴丙基)。

27、多 杀菌素A为白色固体122mg， 收率10。 0056 实施例6 0057 N-脱甲基-N-(3-溴丙基)多杀菌素D的制备 0058 0059 N-脱甲基-N-(3-溴丙基)多杀菌素D的结构式 0060 按实例5， 用多杀菌素D代替多杀菌素A， 得白色固体121mg， 收率 10。 0061 实施例7 0062 N-脱甲基-N-(6-溴己基)多杀菌素A的制备 0063 0064 N-脱甲基-N-(6-溴己基)多杀菌素A的结构式 0065 按实例5， 用1,6-二溴己烷代替1,3-二溴丙烷， 得白色固体304mg， 收率 25。 0066 实施例8 0067 N-脱甲基-N-(氯乙酰基)多杀菌。

28、素A的制备 0068 0069 N-脱甲基-N-(氯乙酰基)多杀菌素A的结构式 说明书 8/14 页 14 CN 105884844 B 14 0070 在25mL单颈瓶中， 依次加入500mg(0.70mmol)中间体化合物1和 10mL二氯甲烷， 称 取288mg(2.09mmol)碳酸钾加入反应体系， 量取157 L (2.09mmol)氯乙酰氯加入反应体系， 搅拌下于室温下反应12h。 停止反应， 抽滤除去碳酸钾固体， 加入100mL水， 用二氯甲烷(3 100mL)萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥4h。 减压旋转蒸发脱去溶剂后经硅胶(200目 300目)柱层析洗脱剂： V(石油醚。

29、):V(乙酸乙酯)4:1纯化得淡黄色固体420mg， 收率 76。 0071 实施例9 0072 17-O-溴丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa的制备 0073 0074 17-O-溴丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa的结构式 0075 在50mL单颈瓶中， 依次加入1.10g(1.82mmol)17-O-Psa多杀菌素A 和30mL二氯甲 烷， 称取0.50g(3.65mmol)碳酸钾加入反应体系， 量取423 L 4-溴丁酰氯(3.65mmol)加入 反应体系， 搅拌下于室温下反应12h。 停止反应， 抽滤除去碳酸钾固体， 加入100mL水， 用二氯 甲烷(3100mL)萃取， 合并有机相， 。

30、无水硫酸钠干燥4h。 减压旋转蒸发脱去溶剂后经硅胶 (200 目300目)柱层析洗脱剂： V(石油醚):V(乙酸乙酯)4:1纯化得白色固体0.62g， 收率46。 0076 实施例10 0077 17-O-溴丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa的制备 0078 0079 17-O-溴丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa的结构式 0080 按实例9， 用17-O-Psa多杀菌素D代替17-O-Psa多杀菌素A， 得白色固体0.60g， 收率 44。 0081 实施例11 0082 17-O-碘丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa的制备 说明书 9/14 页 15 CN 105884844 B 15 0083。

31、 0084 17-O-碘丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa的结构式 0085 在25mL单颈瓶中， 依次加入292mg(0.39mmol)17-O-溴丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa 和10mL丙酮， 称取118mg(0.79mmol)碘化钠加入反应体系， 搅拌下于50下反应6h。 停止反 应， 冷却至室温， 抽滤除去析出的 NaBr固体， 旋转蒸发除去丙酮， 加入10mL水， 用乙酸乙酯 (320mL)萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥4h。 减压旋转蒸发脱去溶剂后经硅胶(200 目 300目)柱层析洗脱剂： V(石油醚):V(乙酸乙酯)2:1纯化得淡黄色固体213mg， 收率 69。 00。

32、86 实施例12 0087 17-O-碘丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa的制备 0088 0089 17-O-碘丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa的结构式 0090 按实例11， 用17-O-溴丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa代替17-O-溴丁酸酯-多杀菌素A- 17-Psa， 得淡黄色固体220mg， 收率71。 0091 实施例13 0092 N-脱甲基-N-(3-三苯基膦)丙基多杀菌素A溴化季磷盐的制备 0093 0094 N-脱甲基-N-(3-三苯基膦)丙基多杀菌素A溴化季磷盐的结构式 【式()】 0095 在25mL单颈瓶中， 依次加入200mg(0.24mmol)N-脱甲基-N-(3。

33、-溴丙基)多杀菌素A 和15mL乙腈， 称取125mg(0.48mmol)三苯基膦加入反应体系， 搅拌下于85下回流反应3d。 说明书 10/14 页 16 CN 105884844 B 16 旋转蒸发除去乙腈， 用正己烷和异丙醇V(正己烷)： V(异丙醇)3:1重结晶两次后经 Sephadex LH20凝胶柱层析(洗脱剂： 甲醇)纯化得白色固体102mg， 收率39。 1H NMR(500 MHz,CDCl3) 7.92-7.85(m,6H),7.85-7.79(m,3H),7.76-7.70(m,6H),6.78(s, 1H),5.90 (d,J10.0Hz,1H),5.81(d,J10.。

34、0Hz,1H),4.87(s,1H),4.72-4.65 (m,1H),4.40(d,J 9.0Hz,1H),4.37-4.30(m,1H),4.08-3.94(m,1H),3.89-3.77 (m,1H),3.66-3.60(m,1H), 3.59-3.56(m,4H),3.54-3.46(m,10H),3.33-3.25(m, 1H),3.18-3.10(m,2H),3.06-3.00 (m,1H),2.92-2.85(m,1H),2.83-2.71(m,2H), 2.42(d,J12.6Hz,1H),2.32-2.24(m,1H), 2.23-2.16(m,1H),2.13-2.06(m。

35、,3H), 1.98-1.91(m,2H),1.83-1.72(m,3H),1.61-1.58(m, 8H),1.32-1.26(m,6H), 1.25-1.22(m,1H),1.20-1.17(m,4H),1.16-1.13(m,3H),0.92- 0.88(m,1H),0.84 (t,J7.5Hz,3H)； 13C NMR(101MHz,CDCl3) 202.74,172.54,147.50, 144.07, 135.11,133.78,130.63,129.35,128.82,95.44,82.28,81.05,77.73,76.07, 67.95, 60.93,59.01,57.72,。

36、49.46,47.61,46.06,41.52,41.17,37.39,36.30,34.29, 30.17, 28.37,21.44,17.81,16.28,9.36； HR-ESI-MS:C61H83BrNO10PM-Br+计算值 1020.57 491测定值1020.57 568. 0096 实施例14 0097 N-脱甲基-N-(3-三苯基膦)丙基多杀菌素D溴化季磷盐的制备 0098 0099 N-脱甲基-N-(3-三苯基膦)丙基多杀菌素D溴化季磷盐的结构式 【式()】 0100 按实例13， 用N-脱甲基-N-(3-溴丙基)多杀菌素D代替N-脱甲基-N-(3- 溴丙基)多 杀菌素A，。

37、 得白色固体100mg， 收率34。 HR-ESI-MS: C62H85BrNO10PM-Br+计算值1034.59 056测定值1034.59 032. 0101 实施例15 0102 N-脱甲基-N-(3-三苯基膦)己基多杀菌素A溴化季磷盐的制备 0103 0104 N-脱甲基-N-(3-三苯基膦)己基多杀菌素A溴化季磷盐的结构式 【式()】 说明书 11/14 页 17 CN 105884844 B 17 0105 在25mL单颈瓶中， 依次加入300mg(0.34mmol)N-脱甲基-N-(6-溴己基)多杀菌素A 和15mL乙腈， 称取178mg(0.68mmol)三苯基膦加入反应体系。

38、， 搅拌下于85下回流反应3d。 旋转蒸发除去乙腈， 用正己烷和异丙醇V(正己烷)： V(异丙醇)3:1重结晶一次后经 Sephadex LH20凝胶柱层析(洗脱剂： 甲醇)纯化得白色固体254mg， 收率65。 1H NMR(500 MHz,CDCl3) 7.90-7.84(m,6H),7.84-7.79(m,3H),7.75-7.70(m,6H),6.78(s, 1H),5.89 (d,J9.5Hz,1H),5.81(d,J10.0Hz,1H),4.87(s,1H),4.71-4.65(m, 1H),4.43(s,1H), 4.36-4.30(m,1H),3.84(s,2H),3.67-3。

39、.61(m,1H),3.58-3.55(m, 4H),3.53-3.46(m,10H), 3.33-3.26(m,1H),3.16-3.10(m,2H),3.05-3.00(m,1H), 2.91-2.85(m,1H),2.44-2.39(m, 1H),2.31-2.24(m,2H),2.21-2.12(m,3H), 2.00-1.91(m,2H),1.72-1.64(m,9H),1.58- 1.46(m,8H),1.31-1.28(m,4H), 1.24-1.22(m,4H),1.20-1.18(m,4H),0.95-0.87(m,1H), 0.83(t,J7.5Hz,3H)； 13C NM。

40、R(101MHz,CDCl3) 202.79,172.46,147.50,144.08,135.05, 133.74, 133.64,130.59,130.47,129.34,128.81,118.68,117.82,95.43,82.26,81.03, 80.76, 77.71,76.06,67.93,60.92,59.01,57.70,49.44,47.60,46.04,41.50,41.16, 37.38, 36.29,34.32,34.21,30.13,28.37,23.02,22.52,21.46,17.81,16.25,9.35； HR- ESI-MS:C64H89BrNO10PM。

41、-Br+计算值1062.62 186测定值1062.62 097. 0106 实施例16 0107 N-脱甲基-N-(2-三苯基膦)乙酰基多杀菌素A氯化季磷盐的制备 0108 0109 N-脱甲基-N-(2-三苯基膦)乙酰基多杀菌素A氯化季磷盐的结构式 【式()】 在 25mL单颈瓶中， 依次加入300mg(0.38mmol)N-脱甲基-N-(氯乙酰基) 多杀菌素A和15mL乙 腈， 称取198mg(0.76mmol)三苯基膦加入反应体系， 搅拌下于85下回流反应3d。 旋转蒸发 除去乙腈， 用正己烷和异丙醇V (正己烷)： V(异丙醇)3:1重结晶一次后经Sephadex LH20凝胶柱层析。

42、(洗脱剂： 甲醇)纯化得白色固体204mg， 收率51。 1H NMR(400MHz,CDCl3) 7.97-7.88(m,6H),7.77-7.70(m,3H),7.68-7.61(m,6H),6.78(s,1H),5.89(d,J 9.6Hz, 1H),5.84-5.78(m,1H),4.87(s,1H),4.71-4.63(m,1H),4.51-4.42(m, 1H),4.36-4.29(m, 1H),3.59-3.55(m,4H),3.54-3.45(m,10H),3.35-3.30(m,2H), 3.16-3.09(m,2H),3.05- 2.99(m,1H),2.91-2.83(m。

43、,1H),2.71(s,1H),2.45-2.37 (m,1H),2.32-2.23(m,1H),2.22- 2.12(m,1H),1.98-1.90(m,2H),1.85-1.67(m, 8H),1.60-1.42(m,8H),1.31-1.27(m,4H), 1.23(d,J6.0Hz,2H),1.19-1.14(m, 3H),0.99(d,J6.0Hz,2H),0.94-0.87(m,1H),0.82 (t,J7.2Hz,3H)； 13C NMR(126MHz,CDCl3) 202.71,172.53,164.95,147.41,144.15, 134.37,133.97, 129.96。

44、,129.34,128.81,120.13,119.41,103.54,102.98,95.48,82.29, 81.08,80.57, 77.75,76.09,67.95,60.91,59.00,57.71,49.46,47.62,46.04,41.51, 说明书 12/14 页 18 CN 105884844 B 18 41.17,37.39, 36.30,34.24,30.85,30.07,28.38,28.02,26.51,24.86,21.49,18.25, 17.98,17.81, 16.14,9.33； HR-ESI-MS:C60H79ClNO11PM-Cl+计算值1020.53。

45、 853测定值 1020.54 498. 0110 实施例17 0111 17-O-(4-三苯基膦)丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa碘化季磷盐的制备 0112 0113 17-O-(4-三苯基膦)丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa碘化季磷盐的结构式 【式()】 0114 在25mL单颈瓶中， 依次加入232mg(0.29mmol)17-O-碘丁酸酯-多杀菌素A-17-Psa 和15mL丙酮， 称取155mg(0.59mmol)三苯基膦加入反应体系， 搅拌下于60下回流反应3d。 旋转蒸发除去丙酮， 用正己烷和异丙醇V(正己烷)： V(异丙醇)3:1重结晶两次后经 Sephadex LH20凝胶柱。

46、层析(洗脱剂： 甲醇)纯化得淡黄色固体145mg， 收率48。 1H NMR(500 MHz,CDCl3) 7.92-7.86(m,6H),7.84-7.80(m,3H),7.75-7.70(m,6H),6.83(s, 1H),5.91- 5.87(m,1H),5.82-5.78(m,1H),5.08-5.02(m,1H),4.86(s,1H), 4.71-4.64(m,1H),4.36- 4.30(m,1H),4.07-3.91(m,2H),3.57-3.55(m,4H), 3.52-3.46(m,10H),3.43-3.39(m,1H), 3.15-3.09(m,2H),3.06-3.01。

47、(m,1H), 2.98-2.88(m,3H),2.45-2.40(m,1H),2.33-2.26(m, 1H),2.23-2.15(m,1H), 1.99-1.91(m,3H),1.78-1.68(m,3H),1.65-1.46(m,4H),1.41- 1.33(m,2H),1.30 (d,J6.5Hz,3H),1.12(d,J6.5Hz,3H),0.95-0.88(m,1H),0.82(t,J 7.5Hz, 3H)； 13C NMR(101MHz,CDCl3) 201.58,172.81,172.42,147.93,143.75, 135.07, 133.88,130.60,129.44,。

48、128.81,118.50,117.64,95.51,82.28,81.01,77.80, 76.14, 75.66,67.98,60.88,59.02,57.75,49.54,47.68,46.15,45.31,41.45,41.14, 37.43, 36.34,34.35,33.38,33.20,32.68,30.16,28.14,22.15,21.64,20.82,18.18, 17.85, 16.81,9.37； HR-ESI-MS:C55H70IO10PM-I+计算值921.47 011测定值 921.47 021. 0115 实施例18 0116 17-O-(4-三苯基膦)丁酸酯-。

49、多杀菌素D-17-Psa碘化季磷盐的制备 0117 0118 17-O-(4-三苯基膦)丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa碘化季磷盐的结构式 【式()】 0119 按实例17， 用17-O-碘丁酸酯-多杀菌素D-17-Psa代替17-O-碘丁酸酯- 多杀菌素 说明书 13/14 页 19 CN 105884844 B 19 A-17-Psa， 得淡黄色固体140mg， 收率45。 HR-ESI-MS: C56H72IO10PM-I+计算值935.48 576测定值935.48 583. 0120 抗肿瘤活性活性实验 0121 (1)胰酶消化对数期人乳腺癌MCF-7细胞或结肠癌细胞HCT116,终止后离心收集， 制成细胞悬液。 0122 (2)接种细胞： 根据细胞增长速率以每孔100 L体积设置好细胞密度， 接种 96孔 板， 设置4个复孔， 同时设置调零孔(培养基、 MTT、 二甲基亚砜)， 对照孔(细胞、 相同浓度的药 物溶解介质、 培养液、 MTT、 二甲基亚砜， DMSO终浓度。