用作5－羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂的N－吡咯烷－3－基－酰胺衍生物.pdf

式(I)化合物和其药物和/或兽医药可接受的衍生物，其中R1是H、C1－6烷基、－C(X)Y、C3－8环烷基、芳基、het、芳基－C1－4烷基或het－C1－4烷基，其中环烷基、芳基或het基团任选被至少一个独立地选自C1－8烷基、C1－8烷氧基、OH、卤代、CF3、OCF3、SCF3、羟基－C1－6烷基、C1－4烷氧基－C1－6烷基和C1－4烷基－S－C1－4烷基的取代基取代；R2是芳基或杂芳基，每个任选被至少一个独立地选自C1－8烷基、C1－8烷氧基、OH、卤代、CF3、OCF3、SCF3、羟基－C1－6烷基、C1－4烷氧基－C1－6烷基和C1－4烷基－S－C1－4烷基的取代基取代；R3是C1－6烷基、C3－8环烷基、C3－8环烷基－C1－6烷基、芳基、het、芳基－C1－4烷基或het－C1－4烷基，其中环烷基、芳基或het基团任选被至少一个独立地选自C1－6烷基、C1－6烷氧基、OH、卤代、CF3、OCF3、SCF3、羟基－C1－6烷基、C1－4烷氧基－C1－6烷基和C1－4烷基－S－C1－4烷基的取代基取代；X是S或O；Y是H、C1－6烷基、芳基、het、芳基－C1－4烷基或het－C1－4烷基；n是1或2，其前提是当n是1时，m是0或1，和当n是2时，m是0，其中如果m是0，则*表示手性中心。本发明的化合物显示作为5－羟色胺和去甲肾上腺素再摄入抑制剂活性，因而在各种治疗领域具有用途，例如尿失禁。

1、  式(I)化合物：

和其药物和/或兽医药可接受的衍生物，
其中
R¹是H、C_1-6烷基、-C(X)Y、C_3-8环烷基、芳基、het、芳基-C_1-4烷基或het-C_1-4烷基，其中环烷基、芳基或het基团任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
R²是芳基或杂芳基，每个任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
R³是C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基、芳基、het、芳基-C_1-4烷基或het-C_1-4烷基，其中环烷基、芳基或het基团任选被至少一个独立地选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
X是S或O；
Y是H、C_1-6烷基、芳基、het、芳基-C_1-4烷基或het-C_1-4烷基；
n是1或2，其前提是当n是1时，m是0或1，和当n是2时，m是0，其中如果m是0，则^*表示手性中心；
芳基是苯基、萘基、蒽基或菲基；
杂芳基是芳香5-或6-员杂环，其含有至少一个N、O或S杂原子，任选稠合于芳基；
het是芳香或非芳香4-、5-或6-员杂环，其含有至少一个N、O或S杂原子，任选稠合于5-或6-员碳环或含有至少一个N、O或S杂原子的第二个4-、5-或6-员杂环。

2、  权利要求1的化合物，其中R¹是H。

3、  权利要求1或2的化合物，其中m是0，^*表示R或S对映体。

4、  权利要求3的化合物，其中^*表示S对映体。

5、  上述任一权利要求的化合物，其中R²是苯基、萘基或喹啉基，每个任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代。

6、  权利要求5的化合物，其中R²是苯基或萘基，每个任选被1、2或3个独立地选自卤代、OH、C_1-4烷基和CF₃的取代基取代。

7、  上述任一权利要求的化合物，其中R³是C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-4烷基或芳基-C_1-4烷基。

8、  权利要求7的化合物，其中R³是C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-2烷基、苯基-CH₂-或萘基-CH₂-。

9、  权利要求1的化合物，其中
R¹是H；
R²是苯基或萘基，每个任选被1、2或3个独立地选自卤代、OH、C_1-4烷基和CF₃的取代基取代；
R³是C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-3烷基、苯基-CH₂-或萘基-CH₂-，和
m是0。

10、  权利要求1的化合物，其选自：

2，  3-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  4--二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2-氯-3-甲基-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3-氟-2-甲基-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3-甲氧基-2-甲基-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3-氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
4-氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

3，  4-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-(2-萘基甲基)-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-(2-萘基甲基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]-2-萘甲酰胺；
N-丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]-1-萘甲酰胺；
4-氯-N-(3，4-二氯苄基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-吡咯烷-3-基-N-(5，6，7，8-四氢萘-1-基甲基)-苯甲酰胺；
N-(2，4-二氯-苄基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-(3-氯-4-甲基-苄基)-2-氟-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-2-羧酸丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-2-羧酸异丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-2-羧酸(2，2-二甲基-丙基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
3-氯-N-异丁基-4-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-异丁基-2，3-二甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2-氯-4-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2-氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-2-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-4-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-丁基-2，4-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-环戊基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(2-乙基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(3-甲基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3，4-三氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(2-环丙基-乙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸异丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；

2，  4-二氯-5-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-(3-甲基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

3，  4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-(1，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(1，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-环己基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

3，  4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸仲丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
N-仲丁基-2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-仲丁基-2，4-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-(1-乙基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(1-乙基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸(1-乙基-丙基)-吡咯烷-3-基-酰胺；

2，  3-二氯-N-环丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-环丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-吡咯烷-3-基-N-(1，2，2-三甲基-丙基)-苯甲酰胺；
N-叔丁基-2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸环戊基-吡咯烷-3-基-酰胺；

2，  3-二氯-N-苯基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

3，  4-二氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-N-异丁基-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-丁基-2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-丁基-3，4-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-2-羧酸环丁基甲基-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-1-羧酸环丁基甲基-吡咯烷-3-基-酰胺；

3，  4-二氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
4-氯-N-异丁基-2-甲氧基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
4-氯-N-异丁基-3-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-异丁基-3-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸(3-甲基-丁基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-1-羧酸(2，2-二甲基-丙基)-吡咯烷-3-基-酰胺；

3，  4-二氯-N-(3-甲基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-(4-氟-苯基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-(4-氟-苯基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸(4-氟-苯基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
N-丁基-2，3，4-三氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3，4-三氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-吡咯烷-3-基-N-(3-三氟甲基-苄基)-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-N-苯基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

3，  4-二氯-N-苯基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3，4-三氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸苯基-吡咯烷-3-基-酰胺；

2，  3，4-三氯-N-(2-环丙基-乙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  3-二氯-N-(2-环丙基-乙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2-溴-4-氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
4-氯-2-乙氧基-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-溴-4-氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-5-氟-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

3，  4-二氯-N-异丁基-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；

2，  4-二氯-3-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  3-二氯-4-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  3-二氯-5-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  4，5-三氯-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  5-二氯-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  5-二氯-4-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  3，5-三氯-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

2，  3-二氯-6-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

3，  4-二氯-6-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；

3，  4-二氯-2-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2-氯-3，6-二氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；和
4-氯-N-(2，3-二氯苄基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
或其药物和/或兽医药可接受的衍生物。

11、  权利要求10的化合物，它是2，3-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺或其药物和/或兽医药可接受的衍生物。

12、  药物组合物，其含有权利要求1-11中任何一项的化合物和可药用的辅料、稀释剂或载体。

13、  用作药物的权利要求1-11中任何一项的化合物。

14、  权利要求1-11中任何一项的化合物在制备用于治疗涉及哺乳动物中一元胺转运蛋白功能调节的疾病的药物中的用途。

15、  权利要求1-11中任何一项的化合物在制备用于治疗涉及哺乳动物中5-羟色胺或去甲肾上腺素调节的疾病的药物中的用途。

16、  权利要求15的用途，其中涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素的调节。

17、  权利要求1-11中任何一项的化合物在制备用于治疗哺乳动物中尿道疾病、抑郁、疼痛、早泄、ADHD或纤维肌痛的药物中的用途。

18、  权利要求17的用途，用于在哺乳动物中治疗尿失禁，例如GSI或USI。

19、  治疗其中涉及一元胺转运蛋白功能调节的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1-11中任何一项的化合物。

20、  治疗其中涉及5-羟色胺或去甲肾上腺素调节的疾病的方法，包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1-11中任何一项的化合物。

21、  权利要求20的方法，其中涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素的调节。

22、  治疗尿道疾病、抑郁、疼痛、早泄、ADHD或纤维肌痛的方法，包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1-11中任何一项的化合物。

23、  权利要求22的方法，其中尿道疾病是尿失禁，例如GSI或USI。

24、  制备权利要求1-11中任何一项化合物的方法，包括使式(X)化合物：

其中R³、n和m是如上定义的，Y是R¹或保护基团，与酸或酰卤：R²COX反应，其中X是OH或卤素，和根据需要或要求脱保护基。

用作5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂 的N-吡咯烷-3-基-酰胺衍生物
本发明涉及抑制一元胺再摄取的新酰胺化合物、它们的制备方法、含有它们的药物组合物和它们在药物中的用途。
本发明的化合物显示作为5-羟色胺和去甲肾上腺素再摄取抑制剂的活性，因而在各种治疗领域中均有用途。例如，本发明的化合物用于治疗其中涉及一元胺转运蛋白功能调节的疾病，更具体地，治疗其中涉及5-羟色胺或去甲肾上腺素的再摄取抑制的疾病，尤其是治疗其中同时涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素抑制的疾病，例如尿失禁。
根据第一方面，本发明提供式(I)化合物：

和其药物和/或兽医药(veterinarily)可接受的衍生物，
其中
R¹是H、C_1-6烷基、-C(X)Y、C_3-8环烷基、芳基、het、芳基-C_1-4烷基或het-C_1-4烷基，其中环烷基、芳基或het基团任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
R²是芳基或杂芳基，每个任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
R³是C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基、芳基、het、芳基-C_1-4烷基或het-C_1-4烷基，其中环烷基、芳基或het基团任选被至少一个独立地选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
X是S或O；
Y是H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、芳基、het、芳基-C_1-4烷基或het-C_1-4烷基；
n是1或2，其前提是当n是1时，m是0或1，和当n是2时，m是0，其中如果m是0，则*表示手性中心；
芳基是苯基、萘基、蒽基或菲基；
杂芳基是芳香5-或6-员杂环，其含有至少一个N、O或S杂原子，任选稠合于芳基；
het是芳香或非芳香4-、5-或6-员杂环，其含有至少一个N、O或S杂原子，任选稠合于5-或6-员碳环或含有至少一个N、O或S杂原子的第二个4-、5-或6-员杂环。
在本发明的一项实施方案中，R¹是H和R²、R³和m是如上定义的。
在本发明的另一实施方案中，m是0，R¹、R²和R³是如上定义的。当m是0时，*表示R或S对映体构型。因此，在另一实施方案中，m是0，R¹、R²和R³是如上定义的，*表示S对映体。
在另一实施方案中，R¹、R³和m是如上定义的，R²是苯基、萘基或喹啉基，每个任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；在另一实施方案中，取代基可选自卤代、OH、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基和CF₃。苯基、萘基或喹啉基可任选被1、2或3个取代基取代，每个独立地选自卤代、OH和C_1-4烷基。在另一实施方案中，R²是苯基，被两个选自氯、氟、OH和C_1-4烷基的取代基取代。在另一实施方案中，R²是二氯苯基。
在另一实施方案中，R¹、R²和m是如上定义的，R³是C_1-6烷基、C_3-8环烷基或C_3-8环烷基-C_1-6烷基。在另一实施方案中，R³是C_1-6烷基、C_3-6环烷基或C_3-6环烷基-C_1-4烷基。
在本发明的另一实施方案中，提供式II化合物：

和其药物和/或兽医药可接受的衍生物，
其中
R⁴是苯基、萘基或喹啉基，每个任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；
R⁵是C_1-6烷基、C_3-8环烷基、C_3-8环烷基-C_1-6烷基、芳基或芳基-C_1-4烷基，其中环烷基和芳基任选被至少一个独立地选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代；和
m是0或1，其中当m是0时，则*表示R或S对映体。
在另一实施方案中，R⁵和m是如上定义的，R⁴是苯基、1-萘基或2-萘基，每个任选被至少一个独立地选自C_1-8烷基、C_1-8烷氧基、OH、卤代、CF₃、OCF₃、SCF₃、羟基-C_1-6烷基、C_1-4烷氧基-C_1-6烷基和C_1-4烷基-S-C_1-4烷基的取代基取代。所述取代基可任选选自C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、OH、卤代和CF₃。苯基或萘基可被1、2或3个取代基取代。在一项实施方案中，苯基或萘基被两个取代基取代。在另一实施方案中，苯基或萘基被两个独立地选自氯、氟、C_1-4烷基和OH的取代基取代。在另一实施方案中，苯基或萘基被两个氯基团取代。
在另一实施方案中，R⁴和m是如上定义的，R⁵是C_1-6烷基、C_3-6环烷基或C_3-6环烷基-C_1-4烷基。
在另一实施方案中，R⁴和R⁵是如上定义的，m是0。在该实施方案中，*表示R或S对映体。在另一实施方案中，m是0和*表示S对映体。
在另一实施方案中，提供式III化合物

和其药物和/或兽医药可接受的衍生物，
其中
R⁶是苯基、萘基或喹啉基，每个任选被至少一个独立地选自卤代、OH、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基和CF₃的取代基取代；
R⁷是C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、芳基或芳基-CH₂-，其中环烷基和芳基任选被至少一个独立地选自卤代、OH、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基和CF₃的基团取代；和
*表示R或S对映体。
在另一实施方案中，R⁷和*是如上定义的，R⁶是苯基、1-萘基或2-萘基，每个任选被至少一个独立地选自卤代、OH、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基和CF₃的取代基取代；所述取代基可任选选自氯、氟、C_1-4烷基、OMe和OH。苯基和萘基可被1、2或3个取代基取代。在另一实施方案中，苯基和萘基被1、2或3个独立地选自氟和氯基团取代。
在另一实施方案中，R⁶和*是如上定义的，R⁷是C_1-6烷基、C_3-6环烷基或C_3-6环烷基-C_1-4烷基。在另一实施方案中，R⁷是C_1-6烷基、任选C_3-6烷基。当R⁷是C_3-6烷基时，它可以是支链C_3-6烷基。
在另一实施方案中，R⁶和R⁷是如上定义的，*表示S对映体。
在另一实施方案中，提供式IV化合物：

和其药物和/或兽医药可接受的衍生物，
其中
R⁸是苯基，任选被1-3个卤代取代基取代；
R⁹是C_1-6烷基；和
*表示R或S对映体。
R⁸任选是二氯苯基，R⁹是C_3-4支链烷基和*表示S对映体。R⁹可以是异丁基。
在另一实施方案中，本发明提供选自下列的化合物：
2，3-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2-氯-3-甲基-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3-氟-2-甲基-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3-甲氧基-2-甲基-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3-氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
4-氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3，4-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-(2-萘基甲基)-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-(2-萘基甲基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]-2-萘甲酰胺；
N-丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]-1-萘甲酰胺；
4-氯-N-(3，4-二氯苄基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
4-氯-N-(2，3-二氯苄基)-N[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
和其药物和/或兽医药可接受的衍生物，
此外，在本发明的范围内的化合物的非限制实例包括：
N-吡咯烷-3-基-N-(5，6，7，8-四氢萘-1-基甲基)-苯甲酰胺；
N-(2，4-二氯-苄基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-(3-氯-4-甲基-苄基)-2-氟-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-2-羧酸丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-2-羧酸异丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-2-羧酸(2，2-二甲基-丙基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
3-氯-N-异丁基-4-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-异丁基-2，3-二甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2-氯-4-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2-氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-2-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-4-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-丁基-2，4-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-环戊基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(2-乙基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(3-甲基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3，4-三氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(2-环丙基-乙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸异丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
2，4-二氯-5-氟-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-(3-甲基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3，4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-(1，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(1，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-环己基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3，4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸仲丁基-吡咯烷-3-基-酰胺；
N-仲丁基-2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-仲丁基-2，4-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-(1-乙基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(1-乙基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸(1-乙基-丙基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
2，3-二氯-N-环丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-环丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-环戊基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-N-(1，2，2-三甲基-丙基)-苯甲酰胺；
N-叔丁基-2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸环戊基-吡咯烷-3-基-酰胺；
2，3-二氯-N-苯基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3，4-二氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-氯-N-异丁基-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-丁基-2，3-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-丁基-3，4-二氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-2-羧酸环丁基甲基-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-1-羧酸环丁基甲基-吡咯烷-3-基-酰胺；
3，4-二氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
4-氯-N-异丁基-2-甲氧基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
4-氯-N-异丁基-3-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-异丁基-3-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸(3-甲基-丁基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
萘-1-羧酸(2，2-二甲基-丙基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
3，4-二氯-N-(3-甲基-丁基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-(4-氟-苯基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-(4-氟-苯基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸(4-氟-苯基)-吡咯烷-3-基-酰胺；
N-丁基-2，3，4-三氯-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3，4-三氯-N-环丁基甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
N-吡咯烷-3-基-N-(3-三氟甲基-苄基)-苯甲酰胺；
2，4-二氯-N-苯基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3，4-二氯-N-苯基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3，4-三氯-N-(2，2-二甲基-丙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
萘-1-羧酸苯基-吡咯烷-3-基-酰胺；
2，3，4-三氯-N-(2-环丙基-乙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，3-二氯-N-(2-环丙基-乙基)-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2-溴-4-氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
4-氯-2-乙氧基-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3-溴-4-氯-N-异丁基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
3，4-二氯-N-异丁基-2-甲基-N-吡咯烷-3-基-苯甲酰胺；
2，4-二氯-3-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，3-二氯-4-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，3-二氯-5-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，4，5-三氯-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，5-二氯-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，5-二氯-4-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，3，5-三氯-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，3-二氯-6-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3，4-二氯-6-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
3，4-二氯-2-氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2-氯-3，6-二氟-N-异丁基-N-[吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
2，4-二氯-5-氟-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺；
和其药物和/或兽医药可接受的衍生物。
药物和/或兽医药可接受的衍生物是指式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或任何在向患者给药时能够提供(直接或间接)式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物或其活性代谢物或残基的其它化合物的任何药物或兽医药可接受的盐、溶剂化物、酯或酰胺或该酯或酰胺的盐或溶剂化物。
对于药物或兽医药用途，如上所述的盐将是药物或兽医药可接受的盐，但其它盐可找到在例如制备式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物和其药物或兽医药可接受盐中的用途。
上述药物或兽医药可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。
合适酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、右旋樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、半乙二磺酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、羟苯酰苯甲酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、糖质酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐和甲磺酸盐。
合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铵、精氨酸、苄星、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、氨基乙酸、赖氨酸、镁、甲葡胺、乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇和锌盐。
对合适盐的综述，参见“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use”，Stahl和Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)。
式(I)、(II)、(III)或(IV)的可药用盐可容易地通过混合所述化合物的溶液和根据需要所需的酸或碱制备。所述盐可由溶液沉淀，通过过滤收集或可通过蒸发溶剂回收。在盐中离子化程度可由完全离子化改变至几乎非离子化。
本发明的可药用的溶剂化物包括式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的水合物和溶剂化物。
同样包括在本发明范围中的是配合物，例如笼形物、药物-宿主包合配合物，其中，与上述溶剂化物相反，药物和宿主以化学计量或非化学计量存在。同样包括在本发明中的是含有可以是化学计量或非化学计量的两种或多种有机和/或无机组分的药物配合物。得到的配合物可离子化、部分离子化或非离子化，对该配合物的综述，参见J Pharm Sci，64(8)，1269-1288，Haleblian(8月，1975)。
式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物可在该化合物的任何官能团上改性以提供药物或兽医药可接受的衍生物。该衍生物地实例在Drugs of Today，Volume19，Number 9，1983，pp 499-538、Topics in Chemistry，Chapter 31，pp 306-316和“Design of Prodrugs”H.Bundgaard，Elsevier，1985，Chapter 1(其内容引入本文作为参考)中描述，包括：酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝基酯、硫酸酯、亚砜、酰胺、磺酰胺、氨基甲酸酯、含氮化合物、磷酰胺、配糖、醚、缩醛和缩酮。
本领域技术人员将进一步理解的是，现有技术中称为“前-部分”的某些部分，例如如H.Bundgaard在“Design of Prodrugs”(ibid)中所述，在合适官能团存在于本发明的化合物中时，可放置在该官能团上。
由于R¹-R⁹的某些含义(例如仲丁基)定义的不对称碳原子或由于整数m的数值，式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物可含有一个或多个手性中心，该化合物存在许多立体异构形式(例如一对旋光异构体或对映体形式)。应理解本发明包含本发明化合物的所有异构体，包括所有几何、互变和旋光形式和它们的混合物(例如互变或外消旋混合物)。
本发明的化合物可存在一种或多种互变异构体，其所有互变异构体和它们的混合物包括在本发明的范围中，例如要求保护2-羟基吡啶基还覆盖了其互变异构体α-吡啶基。
应理解本发明包括式(I)、(II)、(III)或(IV)的放射性同位素标记化合物。
式(I)、(II)、(III)或(IV)和其药物和兽医药可接受的衍生物还可存在超过一种的结晶形式，一种称为多晶现象的特性，所有该多晶形式(“多晶型物”)包含在本发明的范围内。多晶现象通常会响应于温度或压力或两者的改变而产生，还会由结晶方法的变化而产生。多晶型物可用不同的物理特征区别，通常化合物的X射线衍射图、溶解性和熔点用于区别多晶型物。
除非另有说明，任何烷基可以是直链或支链的，是1-8个碳原子，例如1-6个碳原子或1-4个碳原子，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。当烷基含有超过一个碳原子时，它可以是不饱和的。因此，术语C_1-6烷基包括C_2-6烯基和C_2-6炔基。同样，术语C_1-8烷基包括C_2-8烯基和C_2-8炔基，术语C_1-4烷基包括C_2-4烯基和C_2-4炔基。
术语卤素用于表示氟、氯、溴或碘。
除非另有说明，术语het包括任何芳香、饱和或不饱和的4、5或6元杂环，其含有最多4个选自N、O和S的杂原子。该杂环基团的实例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑基、二氧戊环基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡喃基、吡啶基、哌啶基、二氧杂环己基、吗啉代、二硫杂环己基、硫代吗啉代、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基、环丁砜基、四唑基、三嗪基、吖庚因基、氧氮杂庚因基、硫氮杂庚因基、二氮杂庚因基和噻唑啉基。此外，术语杂环包括稠合杂环基团，例如苯并咪唑基、苯并噁唑基、咪唑并吡啶基、苯并噁嗪基、苯并噻嗪基、噁唑并吡啶基、苯并呋喃基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氢喹唑啉基(dihydroquinazdinyl)、苯并噻唑基、苯二酰亚氨基、苯并二氮杂庚因基、吲哚基和异吲哚基。术语het、杂环基和杂环应同样解释。
为避免疑问，除非另有说明，术语取代的是指被一个或多个定义的基团取代。在其中基团可选自许多可选择的基团的情况下，选择的基团可以相同或不同。此外，术语独立地是指在超过一个取代基选自许多可能的取代基时，那些取代基可以是相同或不同的。
在下文中，式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物和其药物和兽医药可接受的衍生物、上述的放射性同位素标记的类似物、上述异构体和上述多晶型物均称为“本发明的化合物”。
在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物是式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的药物和兽医药可接受的衍生物，例如，式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的药物或兽医药可接受的盐或溶剂化物(例如式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的药物或兽医药可接受的盐)。
在本发明另一个实施方案中，其提供本发明的化合物，它是具有SRI或NRI IC₅₀值为200nM或以下的5-羟色胺和/或去甲肾上腺素一元胺再摄入的抑制剂。在另一个实施方案中，化合物具有100nM或以下的SRI和/或NRI IC₅₀值。在另一个实施方案中，化合物具有50nM或以下的SRI或NRIIC₅₀值。在更另一个实施方案中，化合物具有25nM或以下的SRI和NRI IC₅₀值。
根据图解1，式(V)化合物可由式(VI)化合物通过与醛R^3’CHO反应，随后与酸或酰氯R²COX(其中X是OH或卤素)反应和脱保护基制备。
                      图解1

在上述图解中，R²和m是如上定义的，PG是保护基团，基团-CH₂R^3’满足R³的定义。
(a)-还原氨化
1胺(VI)与醛反应形成2胺(VII)是还原氨化反应，其中胺和醛的脱水后通过用金属氢化物试剂还原形成的亚胺或在合适溶剂中在室温下氢化进行。
在该反应中，等摩尔量的胺和醛通常用三乙酰氧基硼氢化钠(STAB)、NaCN(BH)₃或NaBH₄在合适溶剂(例如DCM、THF)在室温下处理1-24小时。或者在胺和醛混合1-18小时后，加入在合适溶剂(例如THF、MeOH、EtOH)中的过量还原剂(例如NaBH₄、LiAlH₄、STAB)，任选在干燥剂(例如分子筛)存在下或用Dean-Stark装置用合适的溶剂(例如甲苯、二甲苯)除去水。另一种方法包括在钯或镍催化剂(例如Pd/C、RaneyNi)存在下在氢气气氛下，任选在高温和高压下，在合适溶剂(例如EtOH)中催化氢化。
还原氨化的更具体实例包括用胺或者在10％Pd/C存在下，任选在三乙胺存在下在乙醇中在约415kPa(约60psi)氢气在室温下处理醛18小时或在过量硼氢化钠存在下在甲醇中在室温下处理胺6小时。
(b)-酰胺形成
在酸或酰卤和胺(VII)间肽键的形成可用如下方法进行：
(i)酰卤和胺(VIII)，用过量酸接受剂，在合适溶剂中，或
(ii)酸，任选用常规偶合剂，和胺(VII)，任选在催化剂存在下，用过量酸接受剂，在合适溶剂中。
该反应的实例如下：
(i)酰氯(任选就地产生)与过量胺(VII)，任选用过量3胺，例如Et₃N、Hunig碱或NMM，在DCM或二噁烷中，任选在高温下反应1-24小时；
(ii)酸，WSCDI/DCCl/TBTU和HOBT/HOAT与过量胺(VII)和过量NMM、Et₃N、Hunig碱在THF、DCM或EtOAc中在室温下反应4-48小时；或
(iii)酸和PYBOP/PyBrOP/Mukaiyama试剂与过量胺(VII)和过量NMM、Et₃N、Hunig碱在THF、DCM或EtOAc中在室温下反应4-24小时。
在酰卤是酰氯(即X＝Cl)时，它可通过标准方法就地产生，随后与胺(VII)和三乙胺在二氯甲烷中在70℃反应90分钟。
(c)-脱保护基
当PG是合适的胺保护基团，优选BOC、三氟乙酸基或苄基时，由(VII)除去PG形成未保护的胺(V)通过对保护基团选择的方法进行，如在下述文献中说明，“Protective Groups in Organic Synthesis”，第3版，TW Greene andPGM Wuts.John Wiley and Sons，Inc.，1999，列为本文参考文献。
该脱保护基反应的实例如下：
当PG是BOC时，脱保护基包括用过量强酸(例如盐酸、TFA)在室温下在合适溶剂(例如DCM、EtOAc、二噁烷)中处理(VII)。
当PG是三氟乙酸基时，脱保护基包括用碱(例如K₂CO₃、Na₂CO₃、NH₃、Ba(OH)₂)在醇溶剂(例如MeOH、EtOH)中，任选用水和任选在高温下处理(VII)。
当PG是Bz时，脱保护基包括或者用过渡金属或过渡金属盐氢化催化剂(例如Pd/C、Pd(OH)₂)在氢供体(例如NH₄⁺HCO₂^-)存在下在极性溶剂(例如四氢呋喃、乙醇、甲醇)中，任选在高温和/或高压下进行转移氢化，或者在钯或镍催化剂(例如Pd/C、RaneyNi)存在下在氢气气氛下，任选在高温和高压下，在合适溶剂中催化氢化。
更具体地：
当PG是BOC时，脱保护基包括或者用过量的4M盐酸在二噁烷中在室温下处理18小时或者用TFA在DCM中在室温下处理4.5小时。
当PG是三氟乙酸基时，脱保护基包括用K₂CO₃在甲醇∶水混合物(5∶1-10∶1)中在室温下处理18小时。
当PG是Bz时，脱保护基包括用NH₄⁺HCO₂^-和10％Pd/C在乙醇中在温和回流下处理6-20小时。
根据图解2，式(IX)化合物可由式(VI)化合物通过与R³-L在合适条件下反应制备，其中L是离去基团。得到的式(IX)化合物随后可通过以类似于图解1中所述的方法形成酰胺和脱保护基转化为式(II)化合物。
                        图解2

在上述图解中，R²、R³和m是如上定义的，PG是合适的保护基团和L是离去基团，其含义尤其将取决于反应的性质和所采用的具体反应条件。合适的离去基团对熟练技术人员是明显的，在许多标准有机化学书中描述，例如：“Advanced Organic Chemistry”，Jerry March，第3版，Wiley(1985)，第587页，列为本文参考文献；它们包括卤素(例如Br)和磺酸酯(例如甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯)。
方便地，R³是芳基，L是Br和反应(d)在合适溶剂中在高温下在钯催化剂存在下进行。该钯催化的芳基氨化反应是本领域技术人员已知的。
图解2方法的更具体实例包含用式(IV)胺在三(二亚苄基丙酮)合二钯、2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’-联萘和叔丁醇钠存在下在甲苯中在100℃处理芳基溴18小时。
根据图解3，式(IX)化合物可由式(XII)的酮通过与伯胺R³-NH₂在合适条件下反应制备。得到的式(IX)化合物随后可通过以类似于图解1中所述的方法形成酰胺和脱保护基转化为式(II)化合物。
                           图解3

在上述方案中，R²、R³和m是如上定义的，PG是合适的保护基团。
伯胺R³-NH₂与酮(XII)的反应(e)可合适地是还原氨化反应，其中胺和酮的脱水后可通过将生成的亚胺还原，例如用金属氢化物试剂或在合适条件下氢化进行。
方便地，胺和酮的反应在THF中在三异丙醇钛(IV)存在下在室温下进行18小时，随后用在甲醇中的过量硼氢化钠在室温下还原5小时。
技术熟练人员能够选择对所需式(I)、(II)、(III)或(IV)的化合物最合适的合成方法，当然，上述图解可根据本领域技术人员的常用知识根据需要改进。
例如，技术熟练人员当然将理解连接于脱保护基的酰胺(II)或(V)的哌啶或吡咯烷氮的氢(根据m的数值)可根据需要通常使用常规合成方法用其它基团替换以形成其中n是1和m是0或1的式(I)化合物。
此外，其中n是2和m是0的式(I)化合物可用类似于上述的方法使用合适原料制备。
对本领域技术熟练人员显然的是，一个或多个敏感官能团在式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物合成中将需要被保护和脱保护基。这可通过常规技术实现，例如如“Protective Groups in Organic Synthesis”，第3版，TW Greene and PGMWuts.John Wiley and Sons，Inc.，1999，列为本文参考文献，它还描述了除去该基团的方法。
对本领域技术人员显然的是，在最终脱保护基阶段前制备的本发明化合物的某些保护的衍生物本身可不具有药物活性，但在某些情况下，可口服或肠胃外给药，随后在体内代谢以形成具有药物活性的本发明的化合物。因此，该衍生物可描述为前药。此外，本发明的某些化合物可用作本发明的其它化合物的前药。
因此，根据本发明的另一方面，其提供制备式(I)、(II)、(III)或(IV)化合物的方法，其包括使式(X)化合物：

其中R³、n和m是如上定义的，Y是R¹或保护基团，与酸或酰卤：R²COX反应，其中X是OH或卤素，和根据需要脱保护基。
当R³包括直接键合于氮原子的亚甲基部分时，式(X)化合物可通过使式(XXI)化合物与醛R^3’CHO(其中-CH₂R^3’满足R³的定义)反应制备。

用另一种方法，式(X)化合物可通过使式(XXI)化合物与化合物R³-L反应制备，其中L是离去基团，任选选自卤化物、甲磺酸酯和三氟甲磺酸酯。
此外，式(X)化合物可通过使式(XXII)化合物与化合物R³-NH₂反应制备：

上述某些中间体是新化合物，应理解所有新中间体构成本发明的另一方面。
外消旋化合物可使用制备HPLC和带有手性固定相的柱分离，或用本领域技术人员已知的方法拆分以得到单独对映体。此外，手性中间体可拆分和用于制备本发明的手性化合物。
根据本发明的另一方面，其提供了本发明的化合物在体内形成的一个或多个代谢物。
本发明的化合物可具有如下优点，它们是更有效的，具有更长的作用持续时间，具有更宽的活性范围，是更稳定的，具有较小副作用或是更有选择性的或比现有技术的化合物具有其它更有用的性质。
本发明的化合物是有用的，因为它们在哺乳动物，包括人体中具有药理学活性。因此它们用于治疗或预防其中用于涉及一元胺转运蛋白功能调节的疾病，更具体地，治疗其中涉及5-羟色胺或去甲肾上腺素的再摄入抑制的疾病，尤其是治疗其中涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素抑制的疾病。
因此，本发明的化合物用于治疗尿失禁，例如真正压迫性尿失禁(GSI)、压迫性尿失禁(USI)或老年尿失禁；活动过度膀胱(OAB)，包括先天逼尿肌不稳定、因神经性疾病(例如帕金森病、多发性硬化、脊椎侧索损伤和休克)引起的逼尿肌活动过度和膀胱流出阻塞(例如良性前列腺增生(BPH)、尿道狭窄或狭窄)引起的逼尿肌活动过度、夜间eneuresis、由于上述疾病的结合引起的尿失禁(例如与活动过度膀胱相关联的真正压迫性尿失禁)和泌尿疾病，例如尿频和尿急。
由于上述药理学活性，本发明的化合物还用于治疗抑郁症，例如重性抑郁症、再发抑郁症、单一偶发事件抑郁症、亚综合症状抑郁症、癌症患者抑郁症、帕金森患者抑郁症、心肌梗塞后的抑郁症、儿科抑郁症、儿童虐待引起的抑郁症、不育妇女的抑郁症、产后抑郁症、经前焦虑和脾气暴躁老人综合症。
由于上述药理学活性，本发明的化合物还用于治疗认知疾病，例如痴呆，尤其是退变性痴呆(包括老年痴呆、早老性痴呆、皮克疾病、亨廷顿舞蹈症、帕金森病和Creutzfeldt-Jakob病)和血管痴呆(包括多梗塞痴呆)以及与头颅内空间占用损害、外伤、感染和相关疾病(包括HIV感染)、代谢、毒素、缺氧和维生素缺陷有关的痴呆；与年龄有关的轻度认知损伤，尤其是与年龄有关的记忆损伤(AAMI)、遗忘症和与年龄相关的认知衰退(ARCD)；精神疾病，例如精神分裂症和颠狂；焦虑症，例如一般化焦虑症、恐怖症(例如旷野恐怖、社会恐怖症和简单恐怖症)、恐慌症、强迫观念与行为症、外伤后应激症、混合焦虑与抑郁；个性疾病，例如回避反应个性症和注意涣散多动症(ADHD)；性功能障碍，例如早泄、男性勃起功能障碍(MED)和女性性功能障碍(FSD)(例如女性性激发症(FSAD))；经前综合症；季节性情感症(SAD)；饮食疾病，例如神经性食欲缺乏和神经性易饿症；肥胖；食欲抑制；由药物瘾或物质滥用引起的化学品依赖，例如沉溺于尼古丁、酒精、可卡因、海洛因、镇静安眠药和苯并二氮杂庚因瘾；断瘾综合症，例如由上述化学品依赖引起的综合症；头痛，例如偏头痛、串头痛、慢性突发性偏头痛、与血管疾病有关的头痛、与化学品依赖或由化学品依赖引起的断瘾综合症有关的头痛和紧张头痛；疼痛；帕金森病，例如帕金森病中的痴呆、精神抑制药引起的帕金森神经功能障碍和迟缓运动障碍)；内分泌疾病，例如高泌乳素血症；血管痉挛，例如在大脑血管系统；小脑紊乱；图雷特综合症；拨毛发癖；盗窃癖；情绪不稳定；病理性叫喊；睡眼疾病(例如昏倒)和休克。
由于上述药理学活性，本发明的化合物还用于治疗许多其它病症或疾病，包括低血压；胃肠道疾病(包括运动性和分泌的改变)，例如过敏性肠综合症(IBS)、肠梗阻(例如手术后肠梗阻和脓毒症时的肠梗阻、胃轻瘫(例如糖尿病胃轻瘫)、消化器官溃疡、胃食管回流症(GORD，或其同义词GERD)、肠胃气胀和其它功能性肠疾病，例如消化不良(例如非溃疡消化不良(NUD))和非心脏性胸腔疼痛(NCCP)和纤维肌痛综合症。
由于上述药理学活性，本发明的化合物还可用于治疗疼痛。例如，拉伤/扭伤引起的疼痛、手术后疼痛(任何类型外科手术后的疼痛)、外伤后疼痛、烧伤、心肌梗塞、急性胰腺炎和肾绞痛。还通常由于治疗相互作用，例如化学治疗毒性、免疫治疗、激素治疗和放射性治疗产生的癌症相关的剧烈疼痛综合症。其它实例包括与肿瘤相关的疼痛(例如骨骼疼痛、头痛和面部疼痛、内脏疼痛)或与癌症治疗有关的疼痛(例如化学治疗后综合症、慢性手术后疼痛综合症、放射后综合症)、背疼，它可能是由于疝气或破裂的椎间盘或腰面关节(lumber facet joint)、骶骨关节、对脊椎旁肌或后纵向韧带异常。
此外，本发明的化合物还可用于治疗神经痛。这定义为由神经系统中主要损害或功能障碍引发或导致的疼痛(IASP定义)。神经损害可由外伤和疾病引起，因此术语‘神经性疼痛’包含具有不同病因的疾病。它们包括，但不限于，糖尿病的神经病、疱疹后的神经痛、背痛、癌症的神经病、化学治疗引起的神经病、HIV神经病、假肢痛、Carpal Tunnel综合症、慢性酒精中毒、甲状腺功能衰退、三叉神经痛、尿毒症、外伤引起的神经病或维生素不足。
其它类型的疼痛包括，但不限于：
-炎性疼痛，例如关节痛，包括类风湿性关节炎(RA)和骨关节炎(OA)和炎性肠疾病(IBD)；
-肌肉-骨骼疾病，包括，但不限于骨痛、纤维肌痛、脊椎炎、血清阴性(非类风湿性)关节病、非关节风湿病、dystrophinopathy、糖原分解、多肌炎、脓性肌炎；
-中枢神经痛或‘丘脑痛’，被定义为由神经系统损害或功能障碍引起的疼痛，包括，但不限于中枢神经中风后疼痛、多发性硬化、脊椎侧索损伤、帕金森病和癫痫症；
-心脏和血管疼痛，包括但不限于，绞痛、心肌梗塞、左房室瓣狭窄、心包炎、Raynaud现象、sclerodoma、骨骼肌局部缺血；
-内脏疼痛和胃肠疾病，包括与痛经有关的疼痛、骨盆痛、膀胱炎和胰腺炎；
-头痛，包括，但不限于偏头痛、有先兆的偏头痛、无先兆的偏头痛、串头痛、紧张型头痛；和
-口面疼痛，包括，但不限于牙痛、颞下颌肌筋膜痛。
尤其感兴趣的疾病包括尿失禁，例如混合失禁，GSI和USI、疼痛、郁抑症、焦虑症，例如强迫观念与行为症和外伤后应激症、个性疾病，例如ADHD、性功能障碍和化学品依赖和由化学品依赖引起的断瘾综合症。
因此，根据另一方面，本发明提供：
i)用于人或兽医药的本发明的化合物；
ii)用于治疗其中涉及一元胺转运蛋白功能调节的疾病，例如尿失禁的本发明的化合物；
iii)本发明化合物在制备用于治疗其中涉及一元胺转运蛋白功能调节的疾病的药物中的用途；
iv)用于治疗其中涉及5-羟色胺或去甲肾上腺素调节的疾病的本发明化合物；
v)本发明化合物在制备用于治疗其中涉及5-羟色胺或去甲肾上腺素调节的疾病的药物中的用途；
vi)用于治疗其中涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素调节的疾病的本发明化合物；
vii)本发明化合物在制备用于治疗其中涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素调节的疾病的药物中的用途；
viii)用于治疗尿失禁，例如GSI或USI的本发明化合物；
ix)本发明化合物在制备用于治疗尿失禁，例如GSI或USI的药物中的用途；
x)治疗其中涉及一元胺转运蛋白功能调节的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的本发明的化合物；
xi)治疗其中涉及5-羟色胺或去甲肾上腺素调节的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的本发明的化合物；
xii)治疗其中涉及5-羟色胺和去甲肾上腺素调节的疾病的方法，其包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的本发明的化合物；
xiii)治疗尿失禁，例如GSI或USI的方法，其包括向需要该治疗的患者给药治疗有效量的本发明的化合物。
应当理解，本文所有提及的治疗包括治愈、减轻和预防治疗，除非另有说明。
本发明的化合物可单独地或作为联合治疗的部分给药，如果给药联合治疗药物，则活性成分可依次或同时以单独或联合的药物配方给药。
用于辅助治疗的合适药物的实例包括：
雌激素激动剂或选择性雌激素受体调节剂(例如HRT治疗或拉索昔芬)；
α-肾上腺素能受体激动剂，例如苯丙醇胺或R-450；
α-肾上腺素能受体拮抗剂(例如芬妥拉明、多沙唑嗪、坦洛新、特拉唑嗪和哌唑嗪(prazasin))，包括选择性α_1L-肾上腺素受体拮抗剂(例如WO98/30560实施例19)；
β-肾上腺素能激动剂(例如克仑特罗)；
蕈毒碱受体拮抗剂(例如，托特罗定或奥昔布宁)，包括蕈毒碱M3受体拮抗剂(例如，达非那新)；
Cox抑制剂，例如Cox-2抑制剂(例如，塞来昔布、罗非昔布、伐地昔布、帕瑞昔布或依托昔布)；
速激肽受体拮抗剂，例如神经激肽拮抗剂(例如，NK1、NK2或NK3拮抗剂)；
β3受体激动剂；
5HT₁配体(例如，丁螺环酮)；
5HT₁激动剂，例如曲坦(例如，舒马普坦或那拉曲坦)；
多巴胺受体激动剂(例如，阿扑吗啡，用作药物的教导可在US-A-5945117中找到)，包括多巴胺D2受体激动剂(例如，premiprixal，Pharmacia Upjohn化合物编号PNU95666或罗匹尼罗)；
黑肾上腺皮质激素受体激动剂(例如melanotan II)；
PGE受体拮抗剂；
PGE1激动剂(例如，前列地尔)；
其它一元胺转运蛋白抑制剂，例如去甲肾上腺素再摄入抑制剂(例如，瑞波西汀)、5-羟色胺再摄入抑制剂(例如舍曲林、氟西汀或帕罗西汀)或多巴胺再摄入抑制剂；
5-HT3受体拮抗剂(例如，奥丹西隆、格拉司琼、托烷司琼、阿扎司琼、多拉司琼或阿洛司琼)；
磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，例如PDE2抑制剂(例如，赤-9-(2-羟基-3-壬基)-腺嘌呤或EP 0771799的实施例100，列为本文参考文献)，尤其是PDE5抑制剂(例如，昔多芬、1-{[3-(3，4-二氢-5-甲基-4-氧代-7-丙基咪唑并[5，1-f]-as-三嗪-2-基)-4-乙氧基苯基]磺酰基}-4-乙基哌嗪，即伐地那非，也称为BayerBA 38-9456；或Icos Lilly’s IC351，参见如下结构)。
IC351(Icos Lilly)
因此，在另一方面，本发明提供含有本发明化合物与其它治疗药物的联合药物。
对于人体使用，本发明的化合物可单独给药，但在人体治疗中，通常将以与根据所需给药途径和标准药物实践选择的合适的药物赋形剂、稀释剂或载体的混合物给药。
例如，本发明的化合物可以含有调味或着色剂的片剂、胶囊(包括软凝胶胶囊)、阴道栓剂(ovule)、酏剂、溶液或悬浮液形式口服、口含或舌下给药，所述剂型用于立即、延迟、改性、持续、双重、控释或脉冲输送应用。本发明的化合物还可经鼻腔内(intracavernosal)给药，本发明的化合物还可经快速分散或快速溶解剂型给药。
该片剂可含有赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙、氨基乙酸和淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、崩解剂，例如淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐和造粒粘合剂，例如聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯树胶。此外，可包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油基酯和滑石。
相似类型的固体组合物还用作明胶胶囊中的填料，在这方面，优选的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、奶糖或高分子量聚乙二醇。对于含水悬浮液和/或酏剂，本发明的化合物和其可药用的盐可与各种增甜剂或调味剂、着色物质或染料、与乳化剂和/或悬浮剂和与稀释剂，例如水、乙醇、丙二醇和甘油或其组合混合。
改进的释放和脉冲释放剂型可含有赋形剂，例如对立即释放剂型详细描述的那些，和附加的赋形剂，它用作释放速率改进剂，它们涂覆在装置上和/或包括在装置体内。释放速率改进剂包括，但不排他地限于，羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、乙酸纤维素、聚环氧乙烷、黄原胶、Carbomer、甲基丙烯酸铵共聚物、氢化蓖麻油、巴西棕榈蜡、石蜡、乙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸共聚物和它们的混合物。改进释放和脉冲释放剂型可含有一种释放速率改进赋形剂或多种释放速率改进赋形剂的组合，释放速率改进赋形剂可存在于剂型内，即在基质内和/或在剂型上，即在表面或涂层上。
快速分散或溶解剂型配方(FDDF)可含有如下成分：天冬甜素、乙酰舒泛钾、柠檬酸、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、二抗坏血酸、丙烯酸乙酯、乙基纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、甲基丙烯酸甲酯、薄荷调味剂、聚乙二醇、热解硅石、二氧化硅、淀粉乙醇酸钠、硬脂酰基富马酸钠、山梨糖醇、木糖醇。用于本文描述FDDF的术语分散或溶解取决于所使用的药物物质的溶解性，即在药物物质不溶解时，可制备快速分散剂型，在药物物质溶解时，可制备快速溶解剂型。
本发明的化合物还可肠胃外给药，例如静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅骨内、肌内或皮下，或它们可通过输注技术给药。对于肠胃外给药，它们最好以无菌水溶液形式使用，它含有其它物质，例如足够的盐或葡萄糖以制备与血液等渗的溶液。如果需要，水溶液应是适当缓冲的(优选3-9pH)。在无菌条件下制备合适肠胃外制剂容易用本领域技术人员已知的标准制药技术完成。
用于向人患者口服和肠胃外给药，本发明的化合物或其盐或溶剂化物的日剂量水平通常为10-500mg(单一或分开的剂量)。
因此，例如本发明的化合物或其盐或溶剂化物的片剂或胶囊根据需要可含有单个或同时两个或多个给药的5mg-250mg活性化合物。在任何情况下临床医生将确定最适合于任何个体患者的实际剂量，将随具体患者的年龄、体重和反应变化。上述剂量是平均情况下的举例，当然存在个别的情况，使用更高或更低的剂量范围，它们在本发明的范围内。技术熟练人员将理解，在治疗某些疾病(包括PE)中，本发明的化合物可采用基于“需要”(即需要或要求)的单一剂量。
片剂配方实例
通常片剂配方可典型含有约0.01mg-500mg本发明的化合物(或其盐)，而片剂供给重量为50mg-1000mg。说明用于10mg片剂配方的实例：
成分                            ％w/w
化合物游离碱或盐                10.000^*
乳糖                            64.125
淀粉                            21.375
交联羧甲基纤维素钠              3.000
硬脂酸镁                        1.500
^*该数量根据药物活性调节，基于游离碱重量。
本发明的化合物还可鼻内或通过吸入给药，方便地以干粉吸入剂或由加压容器、泵、喷洒器或喷雾器的气溶胶喷雾剂输送，使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃，例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商标])或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA[商标])、二氧化碳或其它合适气体。在加压气溶胶情况下，剂量单元可通过提供输送计量数量的阀确定。加压容器、泵、喷洒器或喷雾器可含有活性化合物的溶液或悬浮液，例如使用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂，它还可含有润滑剂，例如脱水山梨糖醇三油酸酯。用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(由例如明胶制备)可配制成含有本发明的化合物和合适粉末基质，例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
气溶胶或干粉制剂优选设定使得每个计量剂量或“一喷(puff)”含有向患者输送的1-50mg本发明的化合物。气溶胶的全部日剂量将为1-50mg，它可以单一剂量给药或更常见的以一天内分开的剂量给药。
本发明的化合物还可配制用于经喷雾器给药。用于喷雾器装置的制剂可含有如下成分：增溶剂、乳化剂或悬浮剂：水、乙醇、甘油、丙二醇、低分子量聚乙二醇、氯化钠、氟代烃、聚乙二醇醚、脱水山梨糖醇三油酸酯、油酸。
或者，本发明的化合物可以栓剂或阴道栓形式给药，或它们可以凝胶、水凝胶、洗液、溶液、乳膏、软膏或扑粉形式局部施用。本发明的化合物还可经皮或皮下给药，使用通过使用皮肤膏药。它们还可通过眼睛、肺部或直肠途径给药。
对于眼科使用，本发明化合物可配制成在等渗的，pH调节的无菌盐水中的微小颗粒的悬浮液，或优选配制成在等渗的，pH调节的无菌盐水中的溶液，任选与防腐剂，例如苯扎氯铵混合。另一方面，它们可在油膏，例如石蜡中配制。
对于皮肤的局部应用，本发明的化合物可配制合适的软膏，它含有悬浮或溶解在例如与一种或多种如下物质的混合物的活性化合物：矿物油、液体石蜡、白石蜡、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，它们可配制成悬浮或溶解在例如一种或多种如下物质的混合物的合适的洗液或乳膏：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、聚山梨醇酯60、鲸蜡基酯、石蜡、硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
本发明的化合物还可与环糊精结合使用。已知环糊精与药物分子形成包含或非包含配合物。药物-环糊精配合物的形成可改进药物分子的溶解性、溶解速率、生物利用度和/或稳定性。药物-环糊精配合物通常用于大多数剂型和给药途径。作为与药物直接配合的替换物，环糊精可用作辅助添加剂，例如作为载体、稀释剂或增溶剂。α-、β-和γ-环糊精是最常使用的，合适实例在WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148中描述。
对于向人患者口服或肠胃外给药，式(I)化合物和其可药用的盐的日剂量水平为0.01-30mg/kg(单一或均分的剂量)，优选为0.01-5mg/kg。因此，片剂将含有1mg-0.4g化合物，根据需要，用于单个或同时两个或多个给药。在任何情况下临床医生将确定最适合于任何特定患者的实际剂量，将随特定患者的年龄、体重和反应变化。当然上述剂量仅是平均情况下的举例，存在使用更高或更低的剂量的情况，它们在本发明的范围内。
优选口服给药。
对于兽医药使用，根据通常兽医药实践，本发明的化合物根据通常的兽医实践以合适可接受的制剂给药，兽医外科医生将确定剂量方案和给药途径，以最适合于特定动物。
因此，根据另一方面，本发明提供含有本发明的化合物和可药用的辅料、稀释剂或载体的药物制剂。
关于上述的联合药物(combination)还可方便地以药物制剂形式使用，因此含有如上定义的联合药物与可药用的辅料、稀释剂或载体的药物制剂构成本发明的另一方面。该联合药物的各个组分可以单独的药物制剂或联合的药物制剂依次或同时给药。
当本发明的化合物与第二种治疗药物联合使用时，每种化合物剂量可不同于化合物单独使用时的剂量，合适剂量本领域熟练技术人员会容易地知道。
本发明用如下非限制实施例举例说明，其中使用如下缩写和定义：
APCI              常压化学电离
Arbacel         过滤剂
Br                宽
BOC               叔丁氧基羰基
CDI               羰基二咪唑
δ                                  化学位移
d                 双重峰
Δ                                 加热
DCCI              二环己基碳二亚胺
DCM               二氯甲烷
DMF               N，N-二甲基甲酰胺
DMSO              二甲基亚砜
ES⁺              电喷雾电离正扫描
ES^-              电喷雾电离负扫描
h                 小时
HOAT              1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBT              1-羟基-7-苯并三唑
HPLC              高压液相色谱
m/z               质谱峰
min               分
MS                质谱
NMM                 N-甲基吗啉
NMR                 核磁共振
q                   四重峰
s                   单峰
t                   三重峰
TBTU                2-(1-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐
Tf                  三氟甲烷磺酰基
TFA                 三氟乙酸
THF                 四氢呋喃
TLC                 薄层色谱法
TS⁺                热喷雾电离正扫描
WSCDI               1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
如下制备例和实施例举例说明本发明，但不以任何方式限制本发明。所有温度为℃，快速柱色谱法用Merck硅胶60(9385)进行，固相萃取(SPE)色谱法用Varian Mega Bond Elut(Si)柱体(Anachem)在15mmHg真空下进行。薄层色谱法(TLC)用Merck硅胶60板(5729)进行。熔点用GallenkampMPD350装置测定，未校正。NMR用Varian-Unity Inova 400MHz nmr波谱仪或Varian Mercury 400MHz nmr波谱仪进行。质谱用Finnigan Navigator单四极电喷雾质谱仪或Finnigan aQa APCI质谱仪进行。
制备例1
(3R)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁基酯

将(3R)-3-叔丁氧基羰基氨基)吡咯烷(3.0g，16.1mmol，市场上由Flurochem得到)和吡啶(3.87mL，48.3mmol)溶解在二氯甲烷(55mL)中，反应混合物在氮气下在0℃搅拌1小时。在10分钟内向反应混合物中滴加三氟乙酸酐(2.74mL，32.2mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液，使反应混合物温热到室温，搅拌2小时。反应混合物用二氯甲烷(100mL)稀释，用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。分离有机层，用硫酸镁干燥，真空浓缩。粗产物用甲苯(2×30mL)共沸蒸馏得到标题产物。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：1.40(s，9H)，1.82(dd，1H)，2.08(dd，1H)，3.33(m，1H)，3.46(m，1H)，3.59-3.77(brm，2H)，4.06(m，1H)，7.22(m，1H)。
MS ES+m/z 281[MH]⁺。
制备例2
(3R)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-胺盐酸盐

将制备例1的Boc保护的胺(4.59g，16.1mmol)溶解在二氯甲烷(100mL)中，反应混合物在0℃搅拌1小时。随后氯化氢气体鼓泡通过得到的溶液10分钟，使反应混合物温热到室温。将氯化氢气体和氮气分别鼓泡通过溶液15和10分钟，反应混合物真空浓缩得到标题产物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：1.27(m，2H)，1.65(m，1H)，1.81(m，1H)，2.10(m，2H)，3.32(m，2H)，3.61(m，1H)。
MS ES+ m/z 183[MH]⁺。
制备例3
(3S)-3-(异丁基氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯

将(3S)3-氨基-吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯(3g，16.1mmol)加入异丁醛(1.61mL，17.7mmol)和10％Pd/C(360mg)在乙醇(60mL)中的溶液中，反应混合物在约415kPa(约60psi)氢气下18小时。反应混合物通过Arbocel过滤，用乙酸乙酯充分洗涤。滤液真空浓缩，粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用1∶1乙酸乙酯∶戊烷洗脱得到标题产物2.8g，(73％)。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：0.92(d，6H)，1.44(s，9H)，1.63(m，2H)，2.00(m，1H)，2.39(m，2H)，3.02(m，1H)，3.25(m，2H)，3.48(m，2H)，3.60(m，1H)。
MS APCI+243[MH⁺]。
制备例4
(3S)-N-丁基-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-胺

将三乙胺(1.9mL，13.72mmol)和丁醛(1.3mL，14.41mmol)加入(S)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-基胺(3.0g，13.72mmol)(J.Med.Chem.，1996，39(14)，2771页，No.6)在乙醇(60mL)中的溶液中。反应混合物用10％Pd/C(300mg)处理，在室温下在约415kPa(约60psi)氢气中放置18小时。反应混合物通过Arbocel过滤，用乙酸乙酯充分洗涤。滤液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥，真空浓缩。粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用25∶75∶0至100∶0∶0至99∶0∶1乙酸乙酯∶戊烷∶三乙胺洗脱得到标题产物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：1.01(t，3H)，1.38(m，2H)，1.47(m，2H)，1.86-2.09(m，2H)，2.62(m，2H)，3.38-3.87(brm，6H)。
MS APCI+m/z 239[MH]⁺。
制备例5
(3S)-N-异丁基-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-胺

使用叔丁基醛，采用类似于制备例4中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：0.91(t，6H)，1.26(d，2H)，1.47(m，2H)，1.72(m，1H)，2.42(m，2H)，3.39(m，2H)，3.77(m，1H)，4.09(m，1H)。
MS APCI+m/z 239[MH]⁺。
制备例6
(3S)-1-苄基-N-(2-萘甲基)吡咯烷-3-胺

将3-萘甲醛(2.0g，12.8mmol)和(3S)-1-苄基-3-氨基-吡咯烷(2.37g，13.4mmol)在甲醇(30mL)中的溶液在氮气下在室温下搅拌6小时。加入硼氢化钠(969mg，25.6mmol)，反应混合物在室温下放置18小时。反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯(x3)提取，合并有机层，用硫酸镁干燥并真空浓缩。粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用100∶0至97∶3二氯甲烷∶甲醇洗脱得到标题产物4.01g。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：1.62(m，1H)，2.19(m，1H)，2.48(m，2H)，2.80(m，2H)，3.42(m，1H)，3.63(s，2H)，3.92(m，2H)，7.26(m，5H)，7.44(m，3H)，7.78(m，4H)。
MS APCI+m/z 317[MH]⁺。
制备例7
(3R)-1-苄基-N-(2-萘基甲基)吡咯烷-3-胺

用(3R)-1-苄基-3-氨基-吡咯烷，采用类似于制备例6中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：1.65(m，1H)，2.18(m，1H)，2.51(m，2H)，2.78(m，2H)，3.41(m，1H)，3.63(m，2H)，3.94(s，2H)，7.22(m，1H)，7.28(m，4H)，7.43(m，3H)，7.79(m，4H)。
MS APCI+m/z 317[MH]⁺。
制备例8
(3R)-N-(3，4-二氯苄基)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-胺

用制备例2的胺和3，4-二氯苯甲醛，采用类似于制备例6中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：1.88(m，2H)，2.63(m，1H)，3.36-3.78(m，7H)，7.32(m，1H)，7.59(m，2H)。
MSAPCI+m/z 341[MH]⁺。
制备例9
(3R)-N-(2，3-二氯苄基)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-胺

用制备例2的胺和2，3-二氯苯甲醛，采用类似于制备例6中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：1.92(m，2H)，3.29-3.74(m，7H)，3.83(m，1H)，7.27(m，1H)，7.51(m，2H)。
MS APCI+m/z 341[MH]⁺。
制备例10-12

将合适的羧酸RCO₂H(1mmol)溶解在冰浴冷却的二氯甲烷(5mL)中，冷却的溶液用草酰氯(0.248mL，2.5mmol)和1滴N，N-二甲基甲酰胺处理。除去冰，反应混合物温热到室温，在室温下搅拌2小时。反应混合物真空浓缩，将产物加入三乙胺(0.229mL，1.64mmol)和制备例3的胺(200mg，0.83mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液中。反应混合物加热到70℃45分钟，然后冷却到室温。反应混合物真空浓缩，产物溶解在二氯甲烷中，用10％柠檬酸溶液和2M氢氧化钠溶液洗涤。分离有机层，真空浓缩。粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用100∶0-98∶2二氯甲烷∶甲醇洗脱得到标题产物。

制备例13
(3S)-3-[(2，3-二氯苯甲酰基)(异丁基)氨基]吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯

将制备例3的胺(200mg，0.826mmol)加入三乙胺(0.229mL，1.652mmol)在二噁烷(5mL)中的溶液中，反应混合物用2，3-二氯苯甲酰基氯(207mg，0.99mmol)处理。反应混合物加热到70℃，搅拌90分钟，反应混合物真空浓缩，产物溶解在二氯甲烷中用2M氢氧化钠和10％柠檬酸溶液洗涤。分离有机层，真空浓缩，粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷洗脱得到标题产物278mg，(81％)。
MS APCI+m/z 315[MH]⁺。
制备例14-17

上述通式的如下化合物用制备例3的胺和合适的酰氯，采用类似于制备例13中所述的方法制备：

制备例18
N-[(3S)-1-苄基吡咯烷-3-基]-N-(2-萘基甲基)苯甲酰胺

将苯甲酰基氯(0.12mL，1.043mmol)加入制备例6的胺(300mg，0.948mmol)和三乙胺(0.26gel，1.896mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，反应混合物在氮气下在室温下放置18小时。反应混合物用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩得到标题产物380mg。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：1.83-2.62(brm，4H)，2.84(m，2H)，3.62(m，2H)4.56(m，1H)，5.05(m，2H)，7.24(m，4H)，7.31-7.60(m，9H)，7.78(m，4H)
MS ES+m/z 421[MH]⁺
制备例19
N-[(3R)-1-苄基吡咯烷-3-基]-N-(2-萘基甲基)苯甲酰胺

用制备例7的胺，采用类似于制备例18中所述的方法制备标题化合物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：1.94-2.58(brm，6H)，2.86(m，2H)，3.62(m，1H)，5.08(m，2H)，7.23(m，4H)，7.34-7.60(m，9H)，7.79(m，4H)
MS APCI+m/z 421[MH]⁺
制备例20
N-丁基-N-[(3S)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-基]-1-萘甲酰胺

用制备例4的胺和1-萘甲酰基氯，采用类似于制备例18中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：0.61(m，2H)，0.98(m，3H)，1.32-1.60(brm，4H)，3.06(m，2H)，3.27-3.76(m，4H)，5.28(m，1H)，7.39(m，1H)，7.45(m，3H)，7.72(m，1H)，7.89(m，2H)。
MS APCI+m/z 393[MH]⁺。
制备例21
N-叔丁基-N-[(3S)-1--(三氟乙酰基)吡咯烷-3-基]-2-萘甲酰胺

用1-萘甲酰基氯和制备例3的胺，采用类似于制备例18中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：0.84(m，8H)，2.00(m，1H)，3.25(m，2H)，3.93(m，2H)，4.38(brm，1H)，5.31(m，2H)，7.24(m，2H)，7.38-7.62(m，5H)。
MS APCI+m/z 393[MH]⁺。
制备例22
4-氯-N-(3，4-二氯苄基)-N-[(3R)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-基]苯甲酰胺

将制备例8的胺(180mg，0.58mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中，反应混合物用三乙胺(0.16mL，1.16mmol)处理。将反应混合物冷却到0℃，滴加4-氯苯甲酰基氯(0.08mL，0.63mmol)。反应混合物在氮气下搅拌18小时，反应混合物再用二氯甲烷稀释，用水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，真空浓缩。粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用100∶0至95∶5二氯甲烷∶甲醇洗脱得到标题产物。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：2.02(m，2H)，3.37-3.72(m，4H)，4.61(m，2H)，5.68(m，1H)，7.22-7.59(m，7H)。
MS APCI+m/z 479[MH]⁺。
制备例23
4-氯-N-(2，3-二氯苄基)-N-[(3R)-1-(三氟乙酰基)吡咯烷-3-基]苯甲酰胺

用制备例9的胺，采用类似于制备例22中所述的方法制备该化合物。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：2.04(m，2H)，3.37-3.76(m，4H)，4.46-4.76(m，3H)，7.22-7.58(brm，7H)。
MS APCI+m/z 479[MH]⁺。
实施例1
2，3-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺柠檬酸盐
.HOC(CO₂H)(CH₂CO₂H)₂
将制备例13的Boc保护的产物(10.55g，25.4mmol)溶解在氮气下在二氯甲烷(20mL)中，反应混合物用三氟乙酸(20mL，260.5mmol)处理。反应混合物随后在室温下上搅拌4.5小时。反应混合物真空浓缩，残余物溶解在二氯甲烷(200mL)中，用1M氢氧化钠溶液(100mL)洗涤。分离有机相，用硫酸镁干燥并真空浓缩。残余物用乙酸乙酯(10x)共沸蒸馏，随后真空干燥得到标题产物的游离碱无色油状物，7.281g(91％)。一部分产物(3.327g，10.56mmol)用柠檬酸(2.028g，10.56mmol)在甲醇中的溶液处理，真空浓缩，高真空干燥得到标题产物粉色固体4.71g。
¹HNMR(MeOD，400MHz)：0.80(t，6H)，1.89(m，2H)，2.11(brm，2H)，2.53(m，2H)，2.68-2.91(m，4H)，3.59(m，1H)，3.82(m，2H)，4.37(m，1H)，7.40(m，2H)，7.61(m，1H)。
MS APCI+m/z 315[MH⁺]。
实施例2
2，4-二氯-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐

将制备例14的BOC保护产物(157mg，0.561mmol)加入在二噁烷(1mL)中的4M盐酸在二氯甲烷(5mL)中的溶液中，反应混合物在室温下搅拌18小时。反应混合物真空浓缩，产物用二氯甲烷和乙醚共沸蒸馏，随后用乙醚研制得到标题产物103.3mg，(87％)。
¹HNMR(MeOD，400MHz)：0.80(m，6H)，1.89(m，1H)，2.51(m，2H)，2.90(m，1H)，3.20(m，2H)，3.52(m，1H)，3.78(m，2H)，4.30(m，1H)，7.40(m，1H)，7.46(d，1H)，7.58(s，1H)。
MS APCI+m/z 315[MH⁺]。
实施例3-8

上述通式的如下化合物用类似于实施例2所述的方法制备得到所示化合物的盐酸盐：

实施例9
N-(2-萘基甲基)-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐

在氮气下将制备例18的苄基保护的产物(370mg，88mmol)、甲酸铵(555mg，8.798mmol)和10％Pd/C(40mg)在乙醇(5mL)中的溶液回流6小时。反应混合物通过Arbocel过滤，用乙醇充分洗涤，滤液真空浓缩。粗产物用硅胶柱色谱法纯化，用100∶0∶0至90∶10∶1二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨水洗脱。将产物溶解在最少量稀盐酸在二氯甲烷中的溶液中，真空浓缩。产物用乙醚(x3)研制，真空干燥得到标题产物120mg，(36％)。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：2.06(m，2H)，2.98(brs，1H)，3.79(m，3H)，4.43(m，1H)，4.71(m，2H)，7.25-7.59(m，9H)，7.78(m，1H)，7.93(m，3H)。
MSAPCI+m/z 331[MH]⁺。
实施例10
N-(2-萘基甲基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐

用苄基保护的制备例19的产物作为原料，采用类似于实施例9中所述的方法制备标题化合物，收集160mg，(47％)标题化合物。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：2.11(m，2H)，3.00(m，1H)，3.35(brm，3H)，4.44(m，1H)，4.78(m，2H)，7.28-7.56(brm，9H)，7.81(m，1H)，7.96(m，3H)。
MS ES+m/z 331[MH]⁺。
实施例11
N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]-2-萘甲酰胺盐酸盐

将碳酸钾(92mg，0.66mmol)加入制备例21的三氟乙酸基保护的产物(130mg，0.33mmol)在水(0.5mL)和甲醇(5mL)中的溶液中，反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物真空浓缩，粗产物溶解在1∶1的10％碳酸钾溶液∶乙酸乙酯混合物(25mL)中。有机层用硫酸镁干燥，真空浓缩。粗产物溶解在乙酸乙酯中，用在乙醚中的1M盐酸处理，在室温下搅拌1小时。反应混合物真空浓缩得到标题产物。
¹HNMR(MeOD，400MHz)：0.79(d，6H)，1.93(m，1H)，2.56(m，2H)，3.25(m，3H)，3.55(t，1H)，3.80(m，2H)，4.36(m，1H)，7.48(d，1H)，7.59(m，2H)，7.96(m，4H)。
MS ES+m/z 298[MH⁺]。
实施例12
N-丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]-2-萘甲酰胺盐酸盐

用制备例20的三氟乙酸基保护的产物作为原料，采用类似于实施例11所述的方法制备该化合物。
¹HNMR用(MeOD，400MHz)：0.62(m，3H)，1.04(m，2H)，1.72(m，2H)，2.65(m，2H)，3.07(m，2H)，3.21(m，1H)，3.59(m，1H)，3.87(m，2H)，4.42(m，1H)，7.30(s，m，1H)，7.57(m，3H)，7.78(m，1H)，8.00(m，2H)。
MS ES+m/z 297[MH]⁺。
实施例13
4-氯-N-(3，4-二氯苄基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐

用制备例22的三氟乙酸基保护的产物作为原料，采用类似于实施例11所述的方法制备该化合物，收集标题产物，75mg，(47％)。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：1.58(m，1H)，1.83(m，1H)，2.60(m，1H)，2.81(m，2H)，3.42(m，2H)，4.61(m，2H)，7.25(m，1H)，7.39-7.59(m，7H)。
实施例14
4-氯-N-(2.3-二氯苄基)-N-[(3R)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐

用制备例23的三氟乙酸基保护的产物作为原料，采用类似于实施例11所述的方法制备该化合物，收集标题产物，90mg(52％)。
¹HNMR(DMSO-D₆，400MHz)：1.62(m，1H)，1.88(m，1H)，2.61(m，2H)，2.85(m，2H)，4.28(m，1H)，4.59(t，2H)，7.24(m，1H)，7.36(m，1H)，7.42-7.58(m，6H)。
MS ES+m/z 385[MH]⁺。
实施例15
2，4-二氯-5-氟-N-异丁基-N-[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐

用制备例3的胺和2，4-二氯-5-氟苯甲酰基氯，采用类似于制备例13所述的方法制备(3S)-3-[(2，4-二氯-5-氟苯甲酰基)(异丁基)氨基]吡咯烷-1-羧酸叔丁基酯，得到所需产物340mg。
MS ES+m/z 455[MNa]⁺。
2，4-二氯-5-氟-N-异丁基-N[(3S)-吡咯烷-3-基]苯甲酰胺盐酸盐由上述化合物用类似于实施例2中所述的方法制备以得到标题产物灰白色固体，100mg。
MS APCI+m/z 333[MH]⁺。
实验值：C，47.22；H，5.87；N，7.08％。C₁₅H₁₉Cl₂FN₂O.HCl.0.7H₂O计算值：C，47.17；H，5.64；N，7.33％。
实施例16
如下测定实施例1-14化合物的NRI IC₅₀和SRI IC₅₀，结果示于表1中。
生物活性
如下用化合物抑制人5-羟色胺和/或去甲肾上腺素转运蛋白的5-羟色胺和/或去甲肾上腺素再摄入的能力测试化合物的生物活性。
(i)细胞培养
用人5-羟色胺转运蛋白(hSERT)、去甲肾上腺素转运蛋白(hNET)或多巴胺转运蛋白(hDAT)稳定转染的人胚胎肾细胞(HEK-293)用标准细胞培养技术(细胞在37℃，5％CO2下在补加10％透析胎牛血清(FCS)、2mM L-谷氨酰胺和250μg/ml遗传霉素(hSERT和hNET细胞)的Dulbecco′s Modified Eagle′sMedium(DMEM)培养基或补加5％FCS、5％新生小牛血清、2mM L-谷氨酰胺和2.5mg/ml嘌呤霉素(hDAT细胞)的DMEM-培养基中生长)培养。在试验前，通过用细胞解离溶液(sigma)解离和离心收获细胞，以750,000细胞/ml存活细胞密度重新悬浮在标准试验缓冲液中(参见如下)。
(ii)抑制剂效力测定
所有试验化合物以4mM溶解在100％DMSO中，用水稀释至1％DMSO得到合适试验浓度。试验在96孔滤膜底板上进行。表达合适人转运蛋白的细胞(75,000细胞/试验孔)在含有试验化合物、标准抑制剂(正对照)或化合物载体(在水中的DMSO，在每个试验孔中最终DMSO浓度是0.1％)的标准试验缓冲液中在25℃预培养5分钟。通过加入³H-5-羟色胺、³H-去甲肾上腺素或³H-多巴胺基质开始反应，所有反应在25℃下在振荡培养器中进行。对hSERT和hDAT试验培养时间为5分钟，对hNET试验为15分钟。通过加入冰冷洗涤缓冲液(参见如下)停止反应，随后用真空歧管过滤试验混合物，用冰冷的洗涤缓冲液迅速洗涤，随后定量参入细胞的³H-基质的数量。过滤/洗涤试验板在45℃干燥1小时，加入闪烁液体，用闪烁计数测定放射性。试验化合物的效力定量为IC₅₀值(相对于最大(仅化合物载体)和最小(被标准抑制剂完全抑制)响应抑制50％放射性标记基质特定摄入细胞所需的试验化合物浓度)。
(iii)标准试验缓冲液组成：
三(羟基甲基)氨基甲烷盐酸盐(26mM)
NaCl(124mM)
KCl(4.5mM)
KH₂PO₄(1.2mM)
MgCl₂.6H₂O(1.3mM)
抗坏血酸(1.136mM)
葡萄糖(5.55mM)
pH 7.40
CaCl₂(2.8mM)
帕吉林(100μM)
注：缓冲液的pH在加入CaCl₂和帕吉林前用1MnaOH调节到7.40。
洗涤缓冲液组成：
三(羟基甲基)氨基甲烷盐酸盐(26mM)
NaCl(124mM)
KCl(4.5mM)
KH₂PO₄(1.2mM)
MgCl₂.6H₂O(1.3mM)
抗坏血酸(1.136mM)
pH 7.40，4℃，用6MHCl。
(iv)试验参数概括