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1、(10)申请公布号 CN 102702160 A (43)申请公布日 2012.10.03 CN 102702160 A *CN102702160A* (21)申请号 201210210790.7 (22)申请日 2012.06.26 C07D 311/36(2006.01) (71)申请人 吉林化工学院 地址 132022 吉林省吉林市龙潭区承德街 45 号 (72)发明人 于丽颖 成乐琴 罗亚楠 (54) 发明名称 酒石酸催化大豆异黄酮糖苷水解制备大豆异 黄酮苷元的方法 (57) 摘要 本发明公开了一种酒石酸催化大豆异黄酮糖 苷水解制备大豆异黄酮苷元的方法。该方法以含 量 92的糖苷型大豆。
2、异黄酮糖苷为原料， 以食品 添加剂级酒石酸为催化剂， 在一定温度和压力下， 原料中的大豆异黄酮糖苷水解为大豆异黄酮苷 元， 糖苷水解苷元的水解率达到 100。本发明工 艺操作简单， 更重要的是用可食用酒石酸为催化 剂， 使水解过程完全绿色环保， 水解产物无需分离 直接用于大豆保健品和功能性食品， 解决了使用 无机酸催化过程中设备腐蚀、 废水污染和食用产 品安全性差的问题。发明的方法是适用于产业化 生产大豆异黄酮苷元的一种实用技术。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3。
3、 页 附图 2 页 1/1 页 2 1. 一种酒石酸催化糖苷型大豆异黄酮水解苷元的方法， 其特征在于 ： 以含量 92的糖 苷型大豆异黄酮为原料， 将原料加入到苹果酸水溶液中， 超声波溶解， 将反应液转移到高压 釜中， 反应温度为 120 140， 反应时间为 3 5 小时， 反应结束后， 冷却反应液到室温， 取一定量反应液用饱和碳酸钠水溶液中和至 pH 7， 用乙酸乙酯萃取， 取酯层， 在硅胶板上 点样， 放入展开剂 ( 乙酸乙酯氯仿甲醇 5 5 2) 中展开， 紫外灯下观察水解程度 ； 另取一定量反应液用甲醇稀释到 100ppm， 用 HPLC 定性和定量检测反应液中苷元的含量。 2. 根。
4、据权利书要求 1 所述的酒石酸溶液的浓度在 0.5molL-1 3.0molL-1之间， 酒 石酸种类选用食品添加剂级类型酒石酸。 权 利 要 求 书 CN 102702160 A 2 1/3 页 3 酒石酸催化大豆异黄酮糖苷水解制备大豆异黄酮苷元的方 法 所属技术领域 0001 本发明涉及一种酒石酸催化大豆异黄酮糖苷水解制备大豆异黄酮苷元的方法。 背景技术 0002 大豆异黄酮是大豆等豆科植物在生长过程中产生的一种次级代谢产物， 研究发 现， 摄入足够量的大豆异黄酮可以有效降低患骨质疏松症、 妇女更年期综合症、 高胆固醇 症、 以及心血管疾病和癌症的风险。大豆中天然存在的异黄酮主要成分有 3。
5、 类， 即染料木素 (genistein)类、 大豆苷元(daidzein)类和黄豆黄素(glycitein)类， 各自又主要以4种形 式存在 ： 丙二酰基葡萄糖苷型、 乙酰基葡萄糖苷型、 - 葡萄糖苷型和糖苷配基型 ( 苷元 )， 其中结合型的糖苷占到了总异黄酮含量的 80 95。研究发现， 糖苷形式的大豆异黄酮 不能直接被小肠壁吸收， 必须经水解去除糖基转化为游离型的苷元才可被小肠吸收， 因而 发挥生物活性的主体是游离型的苷元。 如何有效的将糖苷型的大豆异黄酮通过水解转化成 游离型的苷元以增强大豆异黄酮的生物活性已成为近年来世界各国科学家研究的热点。 0003 大豆异黄酮的转化方法最常用的。
6、是酸催化法、 碱催化法、 酶催化法。 酸水解法是大 豆异黄酮糖苷的水解中使用最多的一种方法。 酸水解通常用盐酸、 硫酸作催化剂， 强酸条件 下水解同时对大豆异黄酮苷元的稳定性有所影响。 糖苷键具有缩醛结构， 对碱较稳定， 但异 黄酮糖苷键具有酯苷性质， 可用碱水解为大豆异黄酮苷元和葡萄糖， 但碱催化产物苷元容 易降解， 应用受到很大限制。 酶水解法具有水解条件温和、 产物稳定性好、 纯度高等特点， 但 酶生产成本很高， 而且酶不容易重复利用， 还需要进一步寻找价廉物美的能够水解大豆异 黄酮的 - 葡萄糖苷酶， 进一步研究低成本的酶固化技术。 0004 酒石酸， 2， 3- 二羟基丁二酸， 是一。
7、种存在于植物的有机酸， 含有较高含量酒石酸的 植物有葡萄、 罗望子和香蕉等， 葡萄酒酿造工业产生的副产物酒石， 通过酸化处理即可制得 L-酒石酸。 酒石酸与柠檬酸类似， 最常见用途是作为食品添加剂， 它经常添加到特定类型糖 果或饮料中增加酸味， 并且是发酵粉的活性成分， 也可作为食品中的抗氧化剂， 生化试验中 可利用其作为除氧剂或药物工业的原料。 0005 酒石酸催化大豆异黄酮水解苷元， 转化过程具有高收率、 高选择性、 低成本的特 点， 随着人们生活质量的提高， 低碳环保理念逐渐深入人心， 大豆异黄酮的转化工艺势必也 需要向绿色无公害， 低碳环保方向发展。 发明内容 0006 针对现有大豆异。
8、黄酮转化苷元工艺中选用盐酸催化、 碱催化和酶催化等技术缺 陷， 采用可食用酒石酸催化大豆异黄酮水解工艺， 操作简单， 酒石酸酸性较小， 不污染环境、 水解完全。 酒石酸无毒可食用， 因此水解产物不需分离既可用于大豆保健品和功能性食品。 0007 本发明所述的酒石酸催化大豆异黄酮水解工艺， 由以下步骤组成 ： 0008 配制 0.5molL-1 3.0molL-1的酒石酸溶液 ； 取 92.0大豆异黄酮糖苷 50mg 说 明 书 CN 102702160 A 3 2/3 页 4 置于 50mL 圆底烧瓶中， 加入酒石酸水溶液 10ml， 超声水浴 1 小时， 超声频率 45KHz， 水浴温 度 。
9、75。反应液转移到高压釜中， 反应温度为 120 140， 反应时间为 3 5 小时， 反应 结束后， 冷却反应液到室温。 0009 取一定量反应液用饱和碳酸钠水溶液中和至 pH 7， 用乙酸乙酯萃取， 取酯层， 在 硅胶板上点样， 放入展开剂 ( 乙酸乙酯氯仿甲醇 5 5 2) 中展开， 紫外灯下观察 水解程度 ； 另取一定量反应液用甲醇稀释到 100ppm， 用 HPLC 定性和定量检测反应液苷元的 含量， 原料糖苷峰消失， 糖苷的水解率达到 100， 苷元的含量超过 97.0以上。 0010 步骤中高压釜是指进行水解反应的仪器。 0011 步骤中高效液相色谱色谱仪系统定性定量测定样品中的。
10、异黄酮含量。色谱条 件 ： 色谱柱 ： Shimadzu VP-ODS C18 柱 (1504.6mm， 5m)， 流动相 ： A ： 0.4磷酸水溶液 B ： 甲醇 ； 梯度洗脱程序 ： 0-10min， 30-35 B ； 10-20min， 35-40 B ； 20-30min， 40-55 B ； 30-40min， 55-65 B。流速 ： 1mL/min ； 检测波长为 ： 260 nm， 测定温度为 40 ； 进样量 ： 20L。 0012 步骤中水解率水解前后大豆异黄酮糖苷含量之差 / 水解前大豆异黄酮糖苷含 量 100 0013 步骤中苷元的含量采用外标法测定。 附图说明 0。
11、014 1. 标准品混合液色谱图见图 1。 0015 2. 原料 92大豆异黄酮色谱见图 2。 0016 3. 大豆异黄酮糖苷水解产物色谱图 3。 0017 本发明取得技术进步 ： 0018 1. 本发明采用酒石酸催化大豆异黄酮糖苷水解苷元， 增加了具有催化大豆异黄酮 糖苷水解苷元的新的催化剂品种 ； 0019 2. 酒石酸可食用， 无毒， 与其他催化剂水解工艺相比， 操作简单， 催化工艺绿色环 保， 增加了食用安全性 ； 0020 3. 大豆异黄酮糖苷水解率达到 100， 水解产物无需分离， 直接用于大豆保健品 和功能性食品。 具体实施方式 0021 实施例 1 ： 0022 取 92.0大。
12、豆异黄酮糖苷 50mg 置于 50mL 圆底烧瓶中， 加入 0.5molL-1酒石酸 水溶液10mL， 超声水浴1小时， 超声频率45KHz， 水浴温度75。 反应液转移到高压釜中， 反 应温度为 140， 反应时间为 5 小时， 反应结束后， 冷却反应液到室温。 0023 取一定量反应液用饱和碳酸钠水溶液中和至 pH 7， 用乙酸乙酯萃取， 取酯层， 在 硅胶板上点样， 放入展开剂 ( 乙酸乙酯氯仿甲醇 5 5 2) 中展开， 紫外灯下观察 水解程度 ； 另取一定量反应液用甲醇稀释到 100ppm， 用 HPLC 定性和定量检测反应液糖苷和 苷元含量， 原料糖苷峰消失， 糖苷的水解率达到 1。
13、00， 苷元的含量为 97.3。 0024 实施例 2 ： 说 明 书 CN 102702160 A 4 3/3 页 5 0025 取 92.0大豆异黄酮糖苷 50mg 置于 50mL 圆底烧瓶中， 加入 1.0molL-1酒石酸 水溶液10mL， 超声水浴1小时， 超声频率45KHz， 水浴温度75。 反应液转移到高压釜中， 反 应温度为 120， 反应时间为 5.0 小时， 反应结束后， 冷却反应液。 0026 其他操作同实施例1， 取一定量反应液用饱和碳酸钠水溶液中和至pH7， 用乙酸 乙酯萃取， 取酯层， 在硅胶板上点样， 放入展开剂 ( 乙酸乙酯氯仿甲醇 5 5 2) 中 展开， 紫。
14、外灯下观察水解程度。 同时， 另取一定量反应液用甲醇稀释到100ppm， 用HPLC定性 和定量检测反应液糖苷和苷元含量， 原料糖苷峰消失， 糖苷的水解率达到 100， 苷元的含 量为 98.0。 0027 实施例 3 ： 0028 取 92.0大豆异黄酮糖苷 50mg 置于 50mL 圆底烧瓶中， 加入 1.5molL-1酒石酸 水溶液10ml， 超声水浴1小时， 超声频率45KHz， 水浴温度75。 反应液转移到高压釜中， 反 应温度为 130， 反应时间为 3 小时， 反应结束后， 冷却反应液。 0029 其他操作同实施例1， 取一定量反应液用饱和碳酸钠水溶液中和至pH7， 用乙酸 乙酯。
15、萃取， 取酯层， 在硅胶板上点样， 放入展开剂 ( 乙酸乙酯氯仿甲醇 5 5 2) 中 展开， 紫外灯下观察水解程度。 同时， 另取一定量反应液用甲醇稀释到100ppm， 用HPLC定性 和定量检测反应液糖苷和苷元含量， 原料糖苷峰消失， 糖苷的水解率达到 100， 苷元的含 量为 97.8。 0030 实施例 4 ： 0031 取 92.0大豆异黄酮糖苷为 50mg 置于 50mL 圆底烧瓶中， 加入 3.0molL-1酒石 酸水溶液10mL， 超声水浴一小时， 超声频率45KHz， 水浴温度75。 反应液转移到高压釜中， 反应温度为 120， 反应时间为 4 小时， 反应结束后， 冷却反应。
16、液。 0032 其他操作同实施例1， 取一定量反应液用饱和碳酸钠水溶液中和至pH7， 用乙酸 乙酯萃取， 取酯层， 在硅胶板上点样， 放入展开剂 ( 乙酸乙酯氯仿甲醇 5 5 2) 中 展开， 紫外灯下观察水解程度。 同时， 另取一定量反应液用甲醇稀释到100ppm， 用HPLC定性 和定量检测反应液糖苷和苷元含量， 原料糖苷峰消失， 糖苷的水解率达到 100， 苷元的含 量为 98.5。 说 明 书 CN 102702160 A 5 1/2 页 6 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102702160 A 6 2/2 页 7 图 3 说 明 书 附 图 CN 102702160 A 7 。