一种植物源多糖及含该植物源多糖的化妆品.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810741339.5 (22)申请日 2018.07.08 (71)申请人 吴听雨 地址 210009 江苏省南京市中山北路85号 江苏彭瑞生物技术有限公司 (72)发明人 吴听雨包东毅 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) C12P 21/06(2006.01) C07K 1/34(2006.01) A61K 8/73(2006.01) A61Q 19/00(2006.01) A61Q 19/02(2006.01) (54)发明名称 一种植物源。

2、多糖及含该植物源多糖的化妆 品 (57)摘要 本发明公开了一种植物源多糖及含该植物 源多糖的化妆品。 已知阳性对照熊果苷广泛用于 美白化妆品中， 是源于绿色植物的天然活性物 质， 集 “绿色植物、 安全可靠” 和 “高效脱色” 三者 合谐统一于一体的皮肤脱色组份， 它能迅速渗入 肌肤， 有效地抑制皮肤中的酪氨酸酶的活性， 阻 断黑色素的形成， 加速黑色素的分解与排泄， 从 而减少皮肤色素沉积， 祛除色斑和雀斑， 是当今 流行的最为安全有效的美白原料。 研究发现， 本 发明提供的酶解多肽1、 酶解多肽2、 酶解多肽4和 纯化多糖1、 纯化多糖3、 纯化多糖4具有比熊果苷 更优异的酪氨酸酶抑制活性。

3、， 在美白化妆品中具 有极为广阔的应用前景。 权利要求书1页 说明书9页 附图1页 CN 109096408 A 2018.12.28 CN 109096408 A 1.一种多糖， 其特征在于， 通过如下步骤制备得到： 步骤S1， 粗多糖的提取： 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 以浸提温度90、 浸提时间3h、 浸提次数3次为工艺参 数的水提法提取； 提取液离心， 收集上清液， 浓缩至1/5体积， 以Sevag法除蛋白， 3000r/min 离心10min去除中间有机相与水相交界处乳化层， 合并上清液， 加入4倍体积的无水乙醇沉 淀多糖， 静置， 3000r/min离心10min离心收集沉淀， 。

4、收集的沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥 得麦胚粗多糖冻干粉； 步骤S2， 粗多糖的纯化： 准确称取100mg上述麦胚粗多糖冻干粉充分溶解于10mL无菌水中， 将配好的粗多糖溶 液全部滴加上样至DEAE-Sepharose Fast Flow(3.6cm20cm)纤维素阴离子交换层析柱 中， 依次用0， 0.1， 0.2， 0.3， 0.5mol/L的NaCl溶液分别洗脱8个柱体积， 收集0.5mol/L的NaCl 溶液洗脱液， 冷冻干燥； 称取0.5mol/L NaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至SephacrylS-200 HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱，。

5、 收集第4-5个柱体积洗脱液， 冷冻干燥即得。 2.根据权利要求1所述的多糖， 其特征在于： 步骤S1提取的固液比为1:8。 3.根据权利要求1所述的多糖， 其特征在于： 提取液离心条件为5000r/min离心10min。 4.根据权利要求1所述的多糖， 其特征在于： 步骤S1静置条件为4条件下静置24h。 5.根据权利要求1所述的多糖， 其特征在于： 阴离子交换层析柱洗脱流速为1mL/min。 6.根据权利要求1所述的多糖， 其特征在于： 凝胶柱洗脱流速为0.4mL/min。 7.权利要求1-6任一所述多糖用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 8.一种美白霜， 其特征在于： 含有权利要求1-6任一所述。

6、的多糖。 9.一种美白水， 其特征在于： 含有权利要求1-6任一所述的多糖。 10.一种美白面膜， 其特征在于： 含有权利要求1-6任一所述的多糖。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109096408 A 2 一种植物源多糖及含该植物源多糖的化妆品 技术领域 0001 本发明属于多肽和多糖化学领域， 涉及植物源多肽、 植物源多糖及在化妆品中的 应用。 背景技术 0002 皮肤的颜色与皮肤中存在的色素的种类和数量有关， 黑素对皮肤颜色影响最大。 黑素在表皮基底部的黑素细胞中形成。 其过程为黑素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下 生成多巴、 多巴醌最终形成黑素。 黑素转移至基底细胞中， 随着表皮细。

7、胞的移行被带到表皮 全层， 最后随角化细胞的脱落而脱失。 酪氨酸酶是黑素生成的关键酶， 控制着黑素的形成过 程， 其活性程度对色素的沉积起主要作用(裘炳毅， 化妆品化学与工艺技术大全， 中国轻工 业出版社， 1997： 884-888)。 市场上许多美白、 祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用。 0003 天然产物是指动物、 植物提取物(简称植提)或昆虫、 海洋生物和微生物体内的组 成成分或其代谢产物， 其中主要包括蛋白质、 多肽、 氨基酸、 核酸、 各种酶类、 单糖、 寡糖、 多 糖、 糖蛋白、 树脂、 胶体物、 木质素、 维生素、 脂肪、 油脂、 蜡、 生物碱、 挥发油、 黄酮、 糖苷类。

8、、 萜 类、 苯丙素类、 有机酸、 酚类、 醌类、 内酯、 甾体化合物、 鞣酸类、 抗生素类等。 研究发现， 包括 多肽和多糖在内的这些天然存在的化学成分对人体的副作用较小。 0004 从多肽和多糖等天然化学成分中筛选得到的酪氨酸酶抑制剂不仅可以用于制备 美白化妆品， 美白效果好， 而且安全性高， 一直是各大研究机构的追逐的研究热点。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供一种植物源多肽、 植物源多糖及在化妆品中的应用。 0006 本发明目的是通过如下技术方案实现的： 0007 酶解多肽1： 0008 一种多肽， 通过如下步骤制备得到： 0009 步骤S1， 酶解： 0010 将脱脂小麦胚芽。

9、粉碎成胚芽粉， 取10g胚芽粉置于50mL超纯水中， 加入木瓜蛋白酶 和风味蛋白酶复配比为2:1的复合蛋白酶进行酶解， 复合蛋白酶的添加量为底物胚芽粉重 量的0.38， 酶解条件为： pH值， 7.0； 酶解温度， 42； 酶解时间， 10小时； 0011 酶解结束后， 沸水浴使复合蛋白酶灭活， 冷却至常温； 0012 冷却后， 10000rpm离心20分钟， 收集上清液， 冷冻干燥得麦胚多肽冻干粉； 0013 步骤S2， 纯化： 0014 将冻干粉用超纯水溶解， 然后依次用截留分子量为10000u、 7000u的超滤膜对所得 到的酶解多肽进行分离， 将超滤所得分子量介于10000u7000u。

10、的组分冷冻干燥即得。 0015 优选地， 木瓜蛋白酶酶活为50104U/g。 0016 优选地， 风味蛋白酶酶活为2104U/g。 0017 优选地， 步骤S2中1g冻干粉加10mL超纯水。 说明书 1/9 页 3 CN 109096408 A 3 0018 优选地， 灭活方法为沸水浴10分钟。 0019 优选地， 将超滤所得组分冷冻干燥至含水量5。 0020 上述多肽用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 0021 一种美白霜， 含有上述的多肽。 0022 一种美白水， 含有上述的多肽。 0023 一种美白面膜， 含有上述的多肽。 0024 酶解多肽2： 0025 一种多肽， 通过如下步骤制备得到： 0。

11、026 步骤S1， 酶解： 0027 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 取10g胚芽粉置于50mL超纯水中， 加入木瓜蛋白酶 和风味蛋白酶复配比为2:1的复合蛋白酶进行酶解， 复合蛋白酶的添加量为底物胚芽粉重 量的0.38， 酶解条件为： pH值， 7.0； 酶解温度， 42； 酶解时间， 10小时； 0028 酶解结束后， 沸水浴使复合蛋白酶灭活， 冷却至常温； 0029 冷却后， 10000rpm离心20分钟， 收集上清液， 冷冻干燥得麦胚多肽冻干粉； 0030 步骤S2， 纯化： 0031 将冻干粉用超纯水溶解， 然后依次用截留分子量为7000u、 5000u的超滤膜对所得 到的酶解多肽进行。

12、分离， 将超滤所得分子量介于7000u5000u的组分冷冻干燥即得。 0032 优选地， 木瓜蛋白酶酶活为50104U/g。 0033 优选地， 风味蛋白酶酶活为2104U/g。 0034 优选地， 步骤S2中1g冻干粉加10mL超纯水。 0035 优选地， 灭活方法为沸水浴10分钟。 0036 优选地， 将超滤所得组分冷冻干燥至含水量5。 0037 上述多肽用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 0038 一种美白霜， 含有上述的多肽。 0039 一种美白水， 含有上述的多肽。 0040 一种美白面膜， 含有上述的多肽。 0041 酶解多肽4： 0042 一种多肽， 通过如下步骤制备得到： 0043 步。

13、骤S1， 酶解： 0044 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 取10g胚芽粉置于50mL超纯水中， 加入木瓜蛋白酶 和风味蛋白酶复配比为2:1的复合蛋白酶进行酶解， 复合蛋白酶的添加量为底物胚芽粉重 量的0.38， 酶解条件为： pH值， 7.0； 酶解温度， 42； 酶解时间， 10小时； 0045 酶解结束后， 沸水浴使复合蛋白酶灭活， 冷却至常温； 0046 冷却后， 10000rpm离心20分钟， 收集上清液， 冷冻干燥得麦胚多肽冻干粉； 0047 步骤S2， 纯化： 0048 将冻干粉用超纯水溶解， 然后依次用截留分子量为3000u、 1000u的超滤膜对所得 到的酶解多肽进行分离， 将。

14、超滤所得分子量介于3000u1000u的组分冷冻干燥即得。 0049 优选地， 木瓜蛋白酶酶活为50104U/g。 0050 优选地， 风味蛋白酶酶活为2104U/g。 说明书 2/9 页 4 CN 109096408 A 4 0051 优选地， 步骤S2中1g冻干粉加10mL超纯水。 0052 优选地， 灭活方法为沸水浴10分钟。 0053 优选地， 将超滤所得组分冷冻干燥至含水量5。 0054 上述多肽用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 0055 一种美白霜， 含有上述的多肽。 0056 一种美白水， 含有上述的多肽。 0057 一种美白面膜， 含有上述的多肽。 0058 纯化多糖1： 0059 。

15、一种多糖， 通过如下步骤制备得到： 0060 步骤S1， 粗多糖的提取： 0061 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 以浸提温度90、 浸提时间3h、 浸提次数3次为工 艺参数的水提法提取； 提取液离心， 收集上清液， 浓缩至1/5体积， 以Sevag法除蛋白， 3000r/ min离心10min去除中间有机相与水相交界处乳化层， 合并上清液， 加入4倍体积的无水乙醇 沉淀多糖， 静置， 3000r/min离心10min离心收集沉淀， 收集的沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干 燥得麦胚粗多糖冻干粉； 0062 步骤S2， 粗多糖的纯化： 0063 称取100mg上述麦胚粗多糖冻干粉充分溶解于10mL无菌水。

16、中， 将配好的粗多糖溶 液全部滴加上样至DEAE-Sepharose Fast Flow(3.6cm20cm)纤维素阴离子交换层析柱 中， 依次用0， 0.1mol/L的NaCl溶液分别洗脱8个柱体积， 收集0.1mol/L的NaCl溶液洗脱液， 冷冻干燥； 称取0.1mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至SephacrylS- 200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 收集第3-4个柱体积洗脱液， 冷冻干燥即得。 0064 优选地， 步骤S1提取的固液比为1:8。 0065 优选地， 提取液离心条件为5000r/min离心10min。 0066 。

17、优选地， 步骤S1静置条件为4条件下静置24h。 0067 优选地， 阴离子交换层析柱洗脱流速为1mL/min。 0068 优选地， 凝胶柱洗脱流速为0.4mL/min。 0069 上述多糖用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 0070 一种美白霜， 含有上述的多糖。 0071 一种美白水， 含有上述的多糖。 0072 一种美白面膜， 含有上述的多糖。 0073 纯化多糖3： 0074 一种多糖， 通过如下步骤制备得到： 0075 步骤S1， 粗多糖的提取： 0076 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 以浸提温度90、 浸提时间3h、 浸提次数3次为工 艺参数的水提法提取； 提取液离心， 收集上清液， 浓缩。

18、至1/5体积， 以Sevag法除蛋白， 3000r/ min离心10min去除中间有机相与水相交界处乳化层， 合并上清液， 加入4倍体积的无水乙醇 沉淀多糖， 静置， 3000r/min离心10min离心收集沉淀， 收集的沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干 燥得麦胚粗多糖冻干粉； 0077 步骤S2， 粗多糖的纯化： 说明书 3/9 页 5 CN 109096408 A 5 0078 称取100mg上述麦胚粗多糖冻干粉充分溶解于10mL无菌水中， 将配好的粗多糖溶 液全部滴加上样至DEAE-Sepharose Fast Flow(3.6cm20cm)纤维素阴离子交换层析柱 中， 依次用0， 0.1， 。

19、0.2， 0.3mol/L的NaCl溶液分别洗脱8个柱体积， 收集0.3mol/L的NaCl溶液 洗脱液， 冷冻干燥； 0079 称取0.3mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至SephacrylS- 200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 收集第5-6个柱体积洗脱液， 冷冻干燥即得。 0080 优选地， 步骤S1提取的固液比为1:8。 0081 优选地， 提取液离心条件为5000r/min离心10min。 0082 优选地， 步骤S1静置条件为4条件下静置24h。 0083 优选地， 阴离子交换层析柱洗脱流速为1mL/min。 0084 优选地。

20、， 凝胶柱洗脱流速为0.4mL/min。 0085 上述多糖用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 0086 一种美白霜， 含有上述的多糖。 0087 一种美白水， 含有上述的多糖。 0088 一种美白面膜， 含有上述的多糖。 0089 纯化多糖4： 0090 一种多糖， 通过如下步骤制备得到： 0091 步骤S1， 粗多糖的提取： 0092 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 以浸提温度90、 浸提时间3h、 浸提次数3次为工 艺参数的水提法提取； 提取液离心， 收集上清液， 浓缩至1/5体积， 以Sevag法除蛋白， 3000r/ min离心10min去除中间有机相与水相交界处乳化层， 合并上清液， 加入4。

21、倍体积的无水乙醇 沉淀多糖， 静置， 3000r/min离心10min离心收集沉淀， 收集的沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干 燥得麦胚粗多糖冻干粉； 0093 步骤S2， 粗多糖的纯化： 0094 准确称取100mg上述麦胚粗多糖冻干粉充分溶解于10mL无菌水中， 将配好的粗多 糖溶液全部滴加上样至DEAE-Sepharose Fast Flow(3.6cm20cm)纤维素阴离子交换层析 柱中， 依次用0， 0.1， 0.2， 0.3， 0.5mol/L的NaCl溶液分别洗脱8个柱体积， 收集0.5mol/L的 NaCl溶液洗脱液， 冷冻干燥； 0095 称取0.5mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉。

22、20mg溶于4mL超纯水， 上样至SephacrylS- 200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 收集第4-5个柱体积洗脱液， 冷冻干燥即得。 0096 优选地， 步骤S1提取的固液比为1:8。 0097 优选地， 提取液离心条件为5000r/min离心10min。 0098 优选地， 步骤S1静置条件为4条件下静置24h。 0099 优选地， 阴离子交换层析柱洗脱流速为1mL/min。 0100 优选地， 凝胶柱洗脱流速为0.4mL/min。 0101 上述多糖用作酪氨酸酶抑制剂的用途。 0102 一种美白霜， 含有上述的多糖。 0103 一种美白水， 含有上述的多糖。 0。

23、104 一种美白面膜， 含有上述的多糖。 说明书 4/9 页 6 CN 109096408 A 6 0105 有益效果： 0106 已知阳性对照熊果苷广泛用于美白化妆品中， 是源于绿色植物的天然活性物质， 集 “绿色植物、 安全可靠” 和 “高效脱色” 三者合谐统一于一体的皮肤脱色组份， 它能迅速渗 入肌肤， 有效地抑制皮肤中的酪氨酸酶的活性， 阻断黑色素的形成， 加速黑色素的分解与排 泄， 从而减少皮肤色素沉积， 祛除色斑和雀斑， 是当今流行的最为安全有效的美白原料。 研 究发现， 本发明提供的酶解多肽1、 酶解多肽2、 酶解多肽4和纯化多糖1、 纯化多糖3、 纯化多 糖4具有比熊果苷更优异。

24、的酪氨酸酶抑制活性， 在美白化妆品中具有极为广阔的应用前景。 附图说明 0107 图1为各样品对酪氨酸酶抑制作用的IC50值。 具体实施方式 0108 下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容， 但并不以此限定本发明的保 护范围。 0109 实施例1： 麦胚多肽的制备 0110 一、 实验材料 0111 脱脂小麦胚芽购于山东广明实业有限公司。 0112 木瓜蛋白酶(50104U/g)、 风味蛋白酶(2104U/g)购自美国Sigma公司。 0113 二、 实验方法 0114 1、 酶解方法 0115 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 取10g胚芽粉置于50mL超纯水中， 加入木瓜蛋白酶 和风味。

25、蛋白酶复配比(重量比)为2:1的复合蛋白酶进行酶解， 复合蛋白酶的添加量为底物 胚芽粉重量的0.38， 酶解条件为： pH值， 7.0； 酶解温度， 42； 酶解时间， 10小时； 0116 酶解结束后， 沸水浴10分钟使复合蛋白酶灭活， 冷却至常温； 0117 冷却后， 10000rpm离心20分钟， 收集上清液， 冷冻干燥得麦胚多肽冻干粉。 0118 2、 纯化方法 0119 将冻干粉用超纯水溶解(1g冻干粉加10mL超纯水)， 然后依次用截留分子量为 10000u、 7000u、 5000u、 3000u以及1000u的超滤膜对所得到的酶解多肽进行分离， 将超滤所 得组分冷冻干燥(含水量。

26、5)即得不同分子量大小的酶解多肽。 0120 超滤过程中控制CO2的压力使其小于0.25MPa。 0121 三、 实验结果 0122 收集得到如下分子量范围的酶解多肽： 0123 酶解多肽1， 分子量介于10000u和7000u之间； 0124 酶解多肽2， 分子量介于7000u和5000u之间； 0125 酶解多肽3， 分子量介于5000u和3000u之间； 0126 酶解多肽4， 分子量介于3000u和1000u之间。 0127 实施例2： 麦胚多糖的制备 0128 一、 实验材料 0129 脱脂小麦胚芽购于山东广明实业有限公司。 说明书 5/9 页 7 CN 109096408 A 7 。

27、0130 二、 实验方法和结果 0131 1、 粗多糖的提取 0132 将脱脂小麦胚芽粉碎成胚芽粉， 以固液比1:8、 浸提温度90、 浸提时间3h、 浸提次 数3次为工艺参数的水提法提取； 提取液5000r/min离心10min， 收集上清液， 浓缩至1/5体 积， 以Sevag法除蛋白， 3000r/min离心10min去除中间有机相与水相交界处乳化层， 合并上 清液， 加入4倍体积的无水乙醇沉淀多糖， 4条件下静置24h， 3000r/min离心10min离心收 集沉淀， 收集的沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥得麦胚粗多糖冻干粉。 0133 2、 粗多糖的纯化 0134 准确称取100mg上。

28、述麦胚粗多糖冻干粉充分溶解于10mL无菌水中， 将配好的粗多 糖溶液全部滴加上样至DEAE-Sepharose Fast Flow(3.6cm20cm)纤维素阴离子交换层析 柱中， 依次用0， 0.1， 0.2， 0.3， 0.5mol/L的NaCl溶液分别洗脱8个柱体积， 流速1mL/min， 分别 收集0.1， 0.2， 0.3， 0.5mol/L的NaCl溶液洗脱液， 冷冻干燥得到不同多糖组分。 0135 分别称取0 .1mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至 SephacrylS-200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 流速0.4mL/m。

29、in， 收集第3-4个柱 体积洗脱液， 冷冻干燥得到纯化多糖1； 0136 分别称取0 .2mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至 SephacrylS-200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 流速0.4mL/min， 收集第2-3个柱 体积洗脱液， 冷冻干燥得到纯化多糖2； 0137 分别称取0 .3mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至 SephacrylS-200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 流速0.4mL/min， 收集第5-6个柱 体积洗脱液， 冷冻干燥得到纯化多糖3； 0138 分别。

30、称取0 .5mol/LNaCl溶液洗脱液冻干粉20mg溶于4mL超纯水， 上样至 SephacrylS-200HR凝胶柱(1.6cm70cm)中， 蒸馏水洗脱， 流速0.4mL/min， 收集第4-5个柱 体积洗脱液， 冷冻干燥得到纯化多糖4。 0139 实施例3： 麦胚多肽和麦胚多糖对酪氨酸酶的抑制作用 0140 一、 实验材料 0141 L-酪氨酸(Sigma公司)； 熊果苷(上海源叶生物)； 95乙醇， 二甲基亚砜(DMSO)， 磷 酸， 磷酸氢二钠， 磷酸二氢钠， 浓盐酸， 均为市售分析纯； 实验用水为去离子水。 0142 新鲜马铃薯， 购自南京市华润苏果超市。 0143 麦胚的酶解多。

31、肽1-4按照实施例1方法制备。 0144 麦胚的纯化多糖1-4按照实施例2方法制备。 0145 二、 实验方法 0146 1、 试剂配制 0147 磷酸钠缓冲液(1/15M， pH6.8)： 精确称取1.0002g磷酸二氢钠， 1.1865g磷酸氢二 钠， 加入少量去离子水溶解后， 定容至500mL， 4冰箱保存备用。 0148 L-酪氨酸溶液(7.5mmol/L)： 精确称取L-酪氨酸0.2725g， 先加入数滴浓盐酸， 加去 离子水约50mL， 微热完全溶解后， 用氢氧化钠溶液调pH至7.0， 加去离子水定容至200mL。 0149 受试液： 精确称取麦胚的酶解多肽1-4、 纯化多糖1-4。

32、各0.1g， 分别溶于20mL去离子 水， 得到5mg/mL的待测液， 再对倍稀释到2.5、 1.25、 0.625、 0.3125mg/mL和0.15625mg/mL。 说明书 6/9 页 8 CN 109096408 A 8 0150 阳性对照： 精确称取0.1g熊果苷， 溶于20mL的去离子水中， 得到5mg/mL的阳性对照 母液， 再对倍稀释到2.5、 1.2500、 0.6250、 0.3125mg/mL和0.15625mg/mL。 0151 2、 酪氨酸酶液的制备 0152 以新鲜完好的马铃薯制取酪氨酸酶液， 具体操作为： 0153 将马铃薯洗净， 于4预冷4h左右。 去皮， 切成。

33、约111cm3丁状， 于-20冷冻过 夜。 称重， 按1:1(w:v)的比例加入4预冷的磷酸钠缓冲液， 用组织捣碎机制成匀浆， 3层纱 布过滤， 滤液于4000r/min离心10min， 上清即为酪氨酸酶粗酶液， 4保存， 2h内用完。 0154 3、 样品对酪氨酸酶活性的抑制 0155 总反应体系为5mL， 设计如表1。 其中， 用分光光度计测量吸光值时，“受试液” 、“标 准对照” 、“阳性对照” 分别以 “阴性对照1” 、“阴性对照2” 和 “阴性对照3” 调零。 0156 表1试验体系设计 0157 0158 在此体系中， 受试液(包括阳性对照熊果苷)的终浓度(mg/mL)梯度为0.0。

34、15625、 0.03125、 0.0625、 0.125、 0.25和0.5。 0159 实验时， 向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、 不同浓度梯度的受试液(包括阳性对 照)和酶液， 于30水浴10min。 然后加入底物L-酪氨酸， 立即开始计时。 测定反应20min时 475nm波长下的吸光值。 测定时以相应的阴性对照为参比， 用下列公式计算受试液(包括阳 性对照)对酪氨酸酶的抑制率， 并依据浓度-酶抑制率曲线估算半数抑制浓度(IC50)的近似 值。 0160 抑制率()(A-B)A100 0161 其中，“A” 为标准对照的吸光值，“B” 为受试液(或阳性对照)的吸光值。 每个实验做 3个平。

35、行。 抑制率高表明其对酪氨酸酶活性的抑制强度高。 0162 三、 实验结果 0163 阳性对照及酶解多肽1-4、 纯化多糖1-4对酪氨酸酶抑制作用的IC50值见表2和图 1。 0164 表2对酪氨酸酶抑制作用的IC50值 说明书 7/9 页 9 CN 109096408 A 9 0165 0166 已知阳性对照熊果苷广泛用于美白化妆品中， 是源于绿色植物的天然活性物质， 集 “绿色植物、 安全可靠” 和 “高效脱色” 三者合谐统一于一体的皮肤脱色组份， 它能迅速渗 入肌肤， 在不影响细胞增殖浓度的同时， 能有效地抑制皮肤中的酪氨酸酶的活性， 阻断黑色 素的形成， 通过自身与酪氨酶直接结合， 加。

36、速黑色素的分解与排泄， 从而减少皮肤色素沉 积， 祛除色斑和雀斑， 而且对黑色素细胞不产生毒害性、 刺激性、 致敏性等副作用， 同时还有 杀菌、 消炎的作用。 它是当今流行的最为安全有效的美白原料， 也是二十一世纪的理想皮肤 美白祛斑活性剂。 研究发现， 实施例1提供的酶解多肽1、 酶解多肽2、 酶解多肽4和实施例2提 供的纯化多糖1、 纯化多糖3、 纯化多糖4具有比熊果苷更优异的酪氨酸酶抑制活性， 在美白 化妆品中具有极为广阔的应用前景。 0167 实施例4： 一种美白霜 0168 由如下重量百分含量的成分制成： 实施例1制备的酶解多肽1、 酶解多肽2、 酶解多 肽4或实施例2制备的纯化多糖。

37、1、 纯化多糖3、 纯化多糖4， 0.1； 角鲨烷， 10； 丙二醇， 3； 十八烷基硫酸钠， 4； 月桂醇PCA酯， 3； 透明质酸， 4； 椰油， 7； 余量为水。 0169 实施例5： 一种美白水 0170 由如下重量份的成分制成： 实施例1制备的酶解多肽1、 酶解多肽2、 酶解多肽4或实 施例2制备的纯化多糖1、 纯化多糖3、 纯化多糖4， 0.5份； 甘油， 20份； 三乙醇胺， 5份； 乳酸钠， 5份； 羟甲基纤维素5份； 去离子水75份。 0171 实施例6： 一种美白面膜 0172 由如下重量百分含量的成分制成： 牡丹籽油， 10； 油溶性维生素E， 3； 乳化剂， 5； 有机保加利亚玫瑰纯露， 5； 实施例1制备的酶解多肽1、 酶解多肽2、 酶解多肽4或实施 例2制备的纯化多糖1、 纯化多糖3、 纯化多糖4， 0.8； 甘油， 10； 低分子玻尿酸， 3； 芦荟 说明书 8/9 页 10 CN 109096408 A 10 胶， 12； 抗菌剂， 0.2， 余量为去离子水。 0173 上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容， 但本领域技术人员应当知 道， 不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。 说明书 9/9 页 11 CN 109096408 A 11 图1 说明书附图 1/1 页 12 CN 109096408 A 12 。