发明背景
发明领域
本发明涉及新型化合物，涉及包含所述化合物的药物组合物，涉及用 于制备所述化合物的方法并且涉及所述化合物在治疗中的用途。更具体地， 本发明涉及可用于过度增殖疾病的治疗和预防的某些4-取代的1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶。
现有技术的状况的描述
蛋白激酶是使其他蛋白磷酸化的激酶。这些蛋白的磷酸化作用通常在 蛋白中产生功能性变化。大多数激酶作用于丝氨酸和苏氨酸或酪氨酸，并 且一些激酶作用于所有三个。通过这些功能性变化，激酶可以调节许多细 胞途径。蛋白激酶抑制剂是抑制这些蛋白激酶的化合物，并且因此可以用 于影响细胞途径。
细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1)(“CHK1”)是丝氨酸/苏氨酸 激酶。CHK1调节细胞周期进程(cell-cycle progression)并且是细胞内DNA损 伤响应(DNA-damage response)的主要因素。CHK1抑制剂已经显示使肿瘤细 胞对多种基因毒性剂(genotoxic agent)例如化学疗法和辐射敏感。(Tse， Archie N.等人，“Targeting Checkpoint Kinase 1 in Cancer Therapeutics(癌症疗 法中靶向细胞周期检测点激酶1).”，Clin.Cancer Res.13(7)(2007) 1955-1960)。已经观察到，许多肿瘤缺乏G1 DNA损伤检测点途径，导致对S 和G2检测点的依赖以便修复DNA损伤以及存活。(Janetka，James W.等人， “Inhibitors of checkpoint kinases：From discovery to the clinic(细胞周期检测点 激酶的抑制剂：从发现到临床).”Drug Discovery & Development第10卷，第 4期(2007)473-486)。S和G2检测点通过CHK1来调节。CHK1的抑制已经显 示取消S和G2检测点，从而削弱了DNA修复并且导致增加的肿瘤细胞死亡。 然而非癌细胞具有起作用的G1检测点，这允许DNA修复和存活。
细胞周期检测点激酶2(“CHK2”)也是丝氨酸/苏氨酸激酶。CHK2的功能 对由DNA损伤介导细胞周期阻滞(cell cycle arrest)和细胞凋亡是重要的。 (Ahn，Jinwoo等人，“The Chk2 protein kinase(Chk2蛋白激酶)”.DNA Repair 3 (2004)1039-1047)。CHK2响应于基因毒性损伤(genotoxic insult)而被激活， 并且沿着若干途径传播检测点信号，这最终导致G1、S和G2/M期中的细胞周 期阻滞、DNA修复的激活和凋亡性细胞死亡(apoptotic cell death)。(Bartek，Jiri 等人，“CHK2 Kinase--A Busy Messenger(CHK2激酶--忙碌的信使)”，Nature Reviews Molecular Cell Biology第2(12)卷(2001)877-886)。癌细胞经常缺乏 一个或多个基因组完整性检测点(genome-integrity checkpoint)，因此CHK2 的抑制可以使肿瘤细胞选择性地对抗癌疗法更敏感，抗癌疗法例如γ辐射或 损伤DNA的药物。正常的细胞将仍然激活其他检测点并且修复，而失去了 检测点的癌细胞将更可能死亡。已经证明，CHK2的基于肽的抑制剂废除了 G2检测点并且使缺乏p53的癌细胞对DNA损伤剂敏感。(Pommier，Yves，等人， “Targeting Chk2 Kinase：Molecular Interaction Maps and Therapeutic Rationale(靶向Chk2激酶：分子间相互作用图和治疗基本原理).”Current Pharmaceutical Design第11卷，第22期(2005)2855-2872)。
CHK1和/或CHK2抑制剂是已知的，参见，例如，国际公布第WO 2007/090493号、国际公布第WO 2007/090494号、国际公布第WO 2006/106326号、国际公布第WO 2005/103036号和国际公布第WO 03/028724 号。
某些吡唑并吡啶是已知的，但不作为CHK1/2抑制剂，参见，例如，国 际公布第WO 2007/103308号、国际公布第WO 2007/073199号、国际公布第 WO 2007/059219号、国际公布第2006/130673号、国际公布第WO 2006/077319号和国际公布第WO 2005/051304号。
发明概述
在一个方面，本发明涉及是CHK1和/或CHK2的抑制剂的化合物。因此， 本发明的化合物可用于可以通过对CHK1和/或CHK2蛋白激酶的抑制来治 疗的疾病和病状的治疗。
更具体地，本发明的一个方面提供式I的化合物以及其立体异构体和药 学上可接受的盐：
其中G、R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、R9、m、n和p是如本文中所定 义的。
更具体地，本发明的一个方面提供式I的化合物以及其立体异构体和药 学上可接受的盐：
其中G、R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、m、n和p是如本文中所定义的。
本发明的另一个方面提供预防或治疗通过CHK1和/或CHK2调节的疾 病或病症的方法，所述方法包括对需要这样的治疗的哺乳动物施用有效量 的本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐。这样的疾病和病 症的例子包括但不限于过度增殖病症(例如癌症)、神经退行性变、心脏肥大、 疼痛、偏头痛和神经外伤性疾病。
本发明的另一个方面提供预防或治疗癌症的方法，所述方法包括对需 要这样的治疗的哺乳动物施用单独的或与一种或多种具有抗癌性质的另外 的化合物结合的有效量的本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受 的盐。
本发明的另一个方面提供一种治疗哺乳动物中的过度增殖疾病的方 法，所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物。
本发明的另一个方面提供用于疗法的本发明的化合物。
本发明的另一个方面提供用于治疗过度增殖疾病的本发明的化合物。
本发明的另一个方面提供本发明的化合物在制造在经历癌症疗法的患 者的治疗中用作CHK1和/或CHK2抑制剂的药物中的用途。
本发明的另一个方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含本发 明的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的另一个方面提供用于治疗过度增殖疾病的药物组合物，所述 药物组合物包含本发明的化合物。
本发明的另一个方面提供用于癌症的治疗的药物组合物，所述药物组 合物包含本发明的化合物。
本发明的另一个方面包括制备本发明的化合物的方法、分离本发明的 化合物的方法和提纯本发明的化合物的方法。
发明详述
现在将详细地参考本发明的某些实施方案，本发明的例子以所附的结 构和式来阐释。虽然将与所列举的实施方案结合描述本发明，但是应当理 解，它们不意在将本发明限制于那些实施方案。相反地，本发明意在覆盖 所有替换方式、修改和等效物，这些替换方式、修改和等效物可以被包括 在由权利要求界限的本发明的范围内。本领域的技术人员将认识到可以用 于本发明的实施的与本文所描述的方法和材料相似或等效的许多方法和材 料。本发明不以任何方式被限制于所描述的方法和材料。在所并入的文献 和相似的材料中的一个或多个不同于本申请或与本申请矛盾的情况，以本 申请为准，所述情况包括但不限于被定义的术语、术语用法、所描述的技 术或类似物。
定义
术语“烷基”包括碳原子的直链的或支链的基团。一些烷基部分已经被缩 写，例如，甲基(“Me”)、乙基(“Et”)、丙基(“Pr”)和丁基(“Bu”)，并且进一步 的缩写用于指代化合物的具体的异构体，例如，1-丙基或正丙基(“n-Pr”)、 2-丙基或异丙基(“i-Pr”)、1-丁基或正丁基(“n-Bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基 (“i-Bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-Bu”)、1，1-二甲基乙基或叔丁基(“t-Bu”)以 及类似物。缩写有时与元素缩写和化学结构结合使用，例如甲醇(“MeOH”) 或乙醇(“EtOH”)。
在整个本申请中使用的另外的缩写包括苄基(“Bn”)和苯基(“Ph”)。
术语“杂芳基”包括含有选自由氧、氮和硫组成的组的一个、两个或三个 杂原子的5元至6元芳环。
术语“杂环”包括含有选自由氧、氮和硫组成的组的一个、两个或三个杂 原子的5元至6元环。
术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗的、预防的(prophylactic)、 减轻的或预防性的措施。对于本发明的目的来说，有益的或期望的临床结 果包括但不限于症状减轻、疾病的程度的减小、疾病的稳定的(即不恶化的) 状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或减轻，以及缓解(无论部 分的还是总体的)，无论是可察觉的还是无法察觉的。“治疗”还可以意为与 如果不接受治疗的预期的存活相比的延长的存活。需要治疗的那些包括已 经有病状或病症的那些以及倾向于具有病状或病症的那些或其中病状或病 症将被预防的那些。
短语“治疗有效量”或“有效量”意指当被施用于需要这样的治疗的哺乳 动物时对以下足够的本发明的化合物的量：(i)治疗或预防特定的疾病、病 状或病症，(ii)减少、改善或消除特定的疾病、病状或病症的一个或多个症 状，或(iii)预防或延迟本文所描述的特定的疾病、病状或病症的一个或多个 症状的发作。将相应于这样的量的化合物的量将根据诸如特定的化合物、 疾病病状以及其严重性、需要治疗的哺乳动物的特性(例如重量)的因素而变 化，但是仍然可以由本领域的技术人员常规地测定。
术语“癌症”和“癌的”是指或描述哺乳动物中的通常以不受调节的细胞 生长为特征的生理状况。“肿瘤”包含一个或多个癌细胞。癌症的例子包括但 不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这样的癌 症的更特定的例子包括扁平细胞癌(例如上皮扁平细胞癌)、肺癌(包括小细 胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC”)、肺的腺癌和肺的鳞状癌)、腹膜癌、肝 细胞癌、胃癌(gastric cancer)或胃癌(stomach cancer)(包括胃肠癌)、胰腺癌、 成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、 结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液管癌、肾癌(kidney cancer)或肾癌(renal cancer)、前列腺癌、外阴癌(vulval cancer)、甲状腺癌、 肝癌(hepatic carcinoma)、肛门癌(anal carcinoma)、阴茎癌、皮肤癌(包括黑 素瘤)、以及头脖癌。
短语“药学上可接受的”表示物质或组合物必须与构成制剂的其他成分 和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或在毒理学上相容。
如本文所使用的短语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的药学 上可接受的有机盐或无机盐。
本发明的化合物还包括这样的化合物的其他盐，该其他盐不一定是药 学上可接受的盐，并且可以用作用于制备和/或提纯本发明的化合物和/或用 于分离本发明的化合物的对映体的中间体。
术语“哺乳动物”意指患有本文所描述的疾病或处于发展本文所描述的 疾病的风险的温血动物并且包括但不限于豚鼠、犬、猫、大鼠、小鼠、仓 鼠和灵长类，包括人类。
CHK1/2抑制剂化合物
本发明提供是可用于通过CHK1和/或CHK2调节的疾病、病状和/或病症 的治疗的CHK1和/或CHK2抑制剂的某些4-取代的1H-吡唑并[3，4-b]吡啶。
已经令人惊讶地发现，在3位和/或5位具有特定的取代基的4-取代的1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶是CHK1和/或CHK2的抑制剂。此外，已经发现，相对于 某些其他蛋白激酶，这些化合物中的一些对CHK1是选择性的。
因此，本发明提供式I的化合物以及其立体异构体和药学上可接受的盐：
其中：
G是任选地被1-3个独立的R4基团取代的苯基，
或当m是0时，G可以另外地是不存在的或是C1-C4烷基；
R1选自氢、卤素、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中所述杂芳基、苯基或-O- 苯基可以任选地用一个或两个Rb基团取代；
R2选自氢、CH3、CH2CH3、CF3、任选地用一个或两个Rc基团取代的C2-C4烯基、NHRa或-ORf，条件是当R1是氢时，则R2是-ORf；
R3选自氢或C1-C4烷基；
每个R4独立地选自卤素、CF3、OCF3和CN；
R5和R6独立地选自氢或CH3；
R7和R8独立地选自氢或C1-C6烷基；
R9是氢或CH3；
Ra是氢或任选地用氧代基团(oxo group)取代的五元至六元杂环；
Rb是卤素；
Rc是OH、OCH3、氧代或5元至6元杂芳基；
Re是任选地用OH或5-6元杂环取代的C1-C4烷基；
Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷基；
m、n和p独立地是0或1；
或R5是氢，R6和R7与它们所连接的原子一起形成任选地被取代的、具有 一个环氮原子的5-6元杂环，并且R8选自由氢或任选地用OH或O(C1-C3烷基) 取代的C1-C4烷基组成的组，使得式I的化合物具有式II的结构：
其中Rc和Rd独立地选自氢或C1-C4烷基；并且
r是1或2。
因此，本发明提供式I的化合物以及其立体异构体和药学上可接受的盐：
其中：
G是任选地被1-3个独立的R4基团取代的苯基，
或当m是0时，G可以另外地是不存在的或是C1-C4烷基；
R1选自氢、卤素、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中所述杂芳基、苯基或-O- 苯基可以任选地用一个或两个Rb基团取代；
R2选自氢、CH3或-ORf，条件是当R1是氢时，则R2是-ORf；
R3选自氢或C1-C4烷基；
每个R4独立地选自卤素、CF3、OCF3和CN；
R5和R6独立地选自氢或CH3；
R7和R8独立地选自氢或C1-C6烷基；
Rb是卤素；
Re是任选地用OH或5-6元杂环取代的C1-C4烷基；
Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷基；
m、n和p独立地是0或1；
或R5是氢，R6和R7与它们所连接的原子一起形成任选地被取代的、具有 一个环氮原子的5-6元杂环，并且R8选自由氢或任选地用OH或O(C1-C3烷基) 取代的C1-C4烷基组成的组，使得式I的化合物具有式II的结构：
其中Rc和Rd独立地选自氢或C1-C4烷基；并且
r是1或2。
在某些实施方案中，G是任选地被一个至三个R4基团取代的苯基。在某 些实施方案中，G是被一个R4基团取代的苯基。在某些实施方案中，G是被 氯取代的苯基。在特定的实施方案中，G是4-氯苯基。
关于式I的G基团，例子包括任选地用独立地选自卤素、CF3、OCF3和 CN的一个或多个R4基团取代的苯基。
在某些实施方案中，m是0并且G是任选地被1-3个独立的R4基团取代的 苯基、不存在的或C1-C4烷基。
在某些实施方案中，m是0并且G是不存在的，条件是当G是不存在的时， R2是-ORf。
在某些实施方案中，R1选自氢、卤素、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中所述杂 芳基、苯基或-O-苯基可以任选地用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1选自氢、Br、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中所述杂 芳基、苯基或-O-苯基可以任选地用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1选自氢、卤素、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、苯基或-O-苯基，其中所述苯基或-O-苯基可以 任选地用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1选自氢、Br、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、苯基或-O-苯基，其中所述苯基或-O-苯基可以 任选地用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1选自氢、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、 -ORe、C3-C6环烷基、苯基或-O-苯基，其中所述苯基或-O-苯基可以任选地 用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1选自卤素、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、 -ORe、C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中所述杂芳基、 苯基或-O-苯基可以任选地用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1选自CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、 C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中所述杂芳基、苯基或 -O-苯基可以任选地用一个或两个Rb基团取代。
在某些实施方案中，R1是CN。
在某些实施方案中，R1是C1-C4烷基。
在某些实施方案中，R1是任选地用卤素取代的C1-C4烷基。在某些实施 方案中，R1是CF3。
在某些实施方案中，R1是-ORe。在某些实施方案中，Re是任选地用OH 或5-6元杂环取代的C1-C4烷基。
在某些实施方案中，Re是任选地用5-6元杂环取代的C1-C4烷基。在某些 实施方案中，Re是吗啉基。
在某些实施方案中，R1是C3-C6环烷基。
在某些实施方案中，R1是环丙基。
在某些实施方案中，R1是任选地用一个或两个Rb基团取代的苯基。在 某些实施方案中，Rb是卤素。
在某些实施方案中，R1是苯基。在某些实施方案中，R2是氢或甲基。
在某些实施方案中，R1是用一个Rb基团取代的苯基。在某些实施方案 中，Rb是卤素。在某些实施方案中，R1是用F取代的苯基。
在某些实施方案中，R1是在3-苯基位上被至少一个Rb基团取代的苯基。 在某些实施方案中，R1是3-氟苯基。
在某些实施方案中，R1是任选地用一个或两个Rb基团取代的-O-苯基(苯 氧基)。在某些实施方案中，R1是用一个Rb基团取代的-O-苯基。在某些实施 方案中，R1是3-氟苯氧基。
在某些实施方案中，R1是卤素。
在某些实施方案中，R1是Br。
在某些实施方案中，R1是Cl。
在某些实施方案中，R1是I。
在某些实施方案中，R1是C1-C4烷基。在某些实施方案中，R1是甲基。
在某些实施方案中，R1是氢，条件是当R1是氢时，则R2是-ORf；
在某些实施方案中，R1是氢，条件是当R1是氢时，则R2是-ORf并且Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C2-C4烷基。
在某些实施方案中，R2选自氢、CH3、CH2CH3、CF3、任选地用一个或 两个Rc基团取代的C2-C4烯基、NHRa或-ORf，条件是当R1是氢时，则R2是-ORf；
在某些实施方案中，R2是氢。
在某些实施方案中，R2选自CH3、CH2CH3和CF3。
在某些实施方案中，R2是任选地用一个或两个Rc基团取代的C2-C4烯基。 在某些实施方案中，Rc是OH、OCH3、氧代或5元至6元杂芳基。在某些实施 方案中，Rc是含有一个或两个氮杂原子的5元至6元杂芳基。在某些实施方 案中，Rc是5元至6元杂芳基，其中杂芳基选自吡唑和吡啶。在某些实施方 案中，R2选自-CH＝CHC(＝O)OCH3、2-(吡啶-3-基)乙烯基和2-(1H-吡唑-4-基) 乙烯基。
在某些实施方案中，R2是NHRa。在某些实施方案中，Ra是氢或任选地 用氧代基团取代的五元至六元杂环。在某些实施方案中，Ra是具有一个氮 杂原子的五元至六元杂环。在某些实施方案中，Ra是五元至六元杂环，其 中杂环是吡咯烷。在某些实施方案中，R2选自NH2和-NH-4-吡咯烷-2-酮。
在某些实施方案中，R2是-ORf。
在某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷 基。
在某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C2-C4烷 基。
在某些实施方案中，Rf是C1-C4烷基。在某些实施方案中，R2是-OCH3。
在某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷 基。在某些实施方案中，Rf是用一个OH基团取代的C1-C4烷基。
在某些实施方案中，R2是-OCH2CH2OH。
在某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷 基。在某些实施方案中，Rf是用两个OH基团取代的C1-C4烷基。
在某些实施方案中，R2是-OCH2CH(OH)CH2OH。
在某些实施方案中，R3是氢。
在某些实施方案中，m是0或1。在某些实施方案中，m是0。在某些实 施方案中，m是1。
在某些实施方案中，R4是卤素。在一个另外的实施方案中，R4是Cl。
在某些实施方案中，n是0或1。在某些实施方案中，n是0。在某些实施 方案中，n是1。
在某些实施方案中，p是0或1。在某些实施方案中，p是0。在某些实施 方案中，p是1。
在某些实施方案中，R5和R6独立地选自氢或CH3；
在某些实施方案中，R5和R6是氢。
在某些实施方案中，R7和R8独立地选自氢或C1-C6烷基；
在某些实施方案中，R7和R8是氢。
在某些实施方案中，R7是C1-C6烷基。在一个另外的实施方案中，R7是 C3烷基。在一个另外的实施方案中，R7是异丙基。在某些实施方案中，R8是氢。
在某些实施方案中，R8是氢。
在某些实施方案中，R9是氢或CH3。
在某些实施方案中，R9是氢。
在某些实施方案中，R9是CH3。
在某些实施方案中，R5是氢，R6和R7与它们所连接的原子一起形成任选 地被取代的、具有一个环氮原子的5-6元杂环，并且R8选自由氢或任选地用 OH或O(C1-C3烷基)取代的C1-C4烷基组成的组，使得式I的化合物具有式II的 结构：
II
其中R1、R2、R3、Rc、Rd、G、m、n和r是如本文中所定义的。
在式II的某些实施方案中，r是1。
在式II的某些实施方案中，R8是氢。
在式II的某些实施方案中，Rc是氢。
在式II的某些实施方案中，Rd是氢。
在式II的某些实施方案中，Rc和Rd是氢。
在式II的某些实施方案中，Rc是甲基。
在式II的某些实施方案中，Rd是甲基。
在式II的某些实施方案中，Rc和Rd是甲基。
在某些实施方案中，r是1(具有式IIa的结构)：
其中R1、R2、R3、Rc、Rd、G、m和n是如本文中所定义的。
在式IIa的某些实施方案中，R8是氢。
在式IIa的某些实施方案中，Rc是氢。
在式IIa的某些实施方案中，Rd是氢。
在式IIa的某些实施方案中，Rc和Rd是氢。
在式IIa的某些实施方案中，Rc是甲基。
在式IIa的某些实施方案中，Rd是甲基。
在式IIa的某些实施方案中，Rc和Rd是甲基。
在式IIa的某些实施方案中，n是0，提供了式IIa1的化合物：
其中R1、R2、R3、Rc、Rd、G和m是如本文中所定义的。
在式IIa1的某些实施方案中，R8是氢。
在式IIa1的某些实施方案中，Rc是氢。
在式IIa1的某些实施方案中，Rd是氢。
在式IIa1的某些实施方案中，Rc和Rd是氢。
在式IIa1的某些实施方案中，Rc是甲基。
在式IIa1的某些实施方案中，Rd是甲基。
在式IIa1的某些实施方案中，Rc和Rd是甲基。
在某些实施方案中，r是2(具有式IIb的结构)：
其中R1、R2、R3、Rc、Rd、G、m和n是如本文中所定义的。
在式IIb的某些实施方案中，n是0，提供了式IIb1的结构：
其中R1、R2、R3、Rc、Rd、G和m是如本文中所定义的。
在某些实施方案中，式I具有式III的结构：
其中R2a是氢或甲基，并且R1、R3、R5、R6、R7、R8、G、m和p是如本 文中所定义的。
在式III的某些实施方案中，R2a是氢。
在式III的某些实施方案中，R2a是甲基。
在式III的某些实施方案中，R1是苯基。
在式III的某些实施方案中，R1是用一个Rb基团取代的苯基。在式III的某 些实施方案中，Rb是卤素。在式III的某些实施方案中，R1是用F取代的苯基。
在式III的某些实施方案中，R1是在3-苯基位上被至少一个Rb基团取代的 苯基。在式III的某些实施方案中，R1是3-氟苯基。
在式III的某些实施方案中，R1是任选地用一个或两个Rb基团取代的-O- 苯基(苯氧基)。在式III的某些实施方案中，R1是被一个Rb基团取代的-O-苯 基。在式III的某些实施方案中，R1是3-氟苯氧基。
在式III的某些实施方案中，R1是CN。
在式III的某些实施方案中，R1是CF3。
在式III的某些实施方案中，R1是Br。
在某些实施方案中，式I具有式IV的结构：
其中R1a是氢、卤素或任选地用卤素取代的C1-C4烷基(例如CF3)，R2b是 -ORf，R3、R7、R8、Rf、G和m是如本文中所定义的。
在式IV的某些实施方案中，R2a是-ORf。在某些实施方案中，Rf是任选 地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷基。
在式IV的某些实施方案中，R2a是-ORf。在某些实施方案中，Rf是任选 地用一个或多个OH基团取代的C2-C4烷基。
在式IV的某些实施方案中，R2a是-OCH2CH2OH。
在式IV的某些实施方案中，R2a是-OCH2CH(OH)CH2OH。
在式IV的某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的 C1-C4烷基。在式IV的某些实施方案中，Rf是用一个OH基团取代的C1-C4烷基。 在式IV的某些实施方案中，R2a是-OCH2CH2OH。
在式IV的某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的 C1-C4烷基。在式IV的某些实施方案中，Rf是用两个OH基团取代的C1-C4烷基。 在式IV的某些实施方案中，R2a是-OCH2CH(OH)CH2OH。
在某些实施方案中，m是0并且G是G1，使得式I的化合物具有式V的结 构：
其中G1是不存在的或是C1-C4烷基，并且R1、R2、R3、R5、R6、R7、R8、 n和p是如以上定义的。
在式V的某些实施方案中，R2是-ORf。在某些实施方案中，Rf是任选地 用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷基。
在式V的某些实施方案中，R2是-ORf。在某些实施方案中，Rf是任选地 用一个或多个OH基团取代的C2-C4烷基。
在式V的某些实施方案中，Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的 C1-C4烷基。
在式IV的某些实施方案中，Rf是用两个OH基团取代的C1-C4烷基。
在式IV的某些实施方案中，R2b是-OCH2CH(OH)CH2OH。
在某些实施方案中，m和n是0，R5是氢，R6和R7与它们所连接的原子一 起形成任选地被取代的、具有一个环氮原子的5-6元杂环，R8选自由氢或任 选地用OH或O(C1-C3烷基)取代的C1-C4烷基组成的组，并且G是G1，使得式I 的化合物具有式VI的结构：
其中G1是不存在的或是C1-C4烷基，并且R1、R2、R3、Rc、Rd和r是如本 文中所定义的。
在某些实施方案中，m和n是0，r是1，R5是氢，R6和R7与它们所连接的 原子一起形成任选地被取代的、具有一个环氮原子的5元杂环，R8选自由氢 或任选地用OH或O(C1-C3烷基)取代的C1-C4烷基组成的组，并且G是G1，使 得式I的化合物具有式VIa的结构：
其中G1是不存在的或是C1-C4烷基，并且R1、R2、R3、Rc和Rd是如本文 中所定义的。
在某些实施方案中，m和n是0，r是2，R5是氢，R6和R7与它们所连接的 原子一起形成任选地被取代的、具有一个环氮原子的6元杂环，R8选自由氢 或任选地用OH或O(C1-C3烷基)取代的C1-C4烷基组成的组，并且G是G1，使 得式I的化合物具有式VIb的结构：
其中G1是不存在的或是C1-C4烷基，并且R1、R2、R3、Rc和Rd是如本文 中所定义的。
应理解，本发明的某些化合物可以含有不对称中心或手性中心，并且 因此以不同的立体异构形成存在。预期本发明的化合物的所有立体异构形 式形成本发明的一部分，所述立体异构形式包括但不限于非对映体、对映 体和阻转异构体以及其混合物例如外消旋混合物。
在本文所示的结构中，如果任何特定的手性原子的立体化学未具体说 明，那么所有的立体异构体都被设想并且被包括为本发明的化合物。如果 通过代表特定的构型的实楔形或虚线具体说明了立体化学，那么立体异构 体是如所具体说明的和所定义的。
应进一步理解，本发明的化合物可以以未溶剂化的形式以及与药学上 可接受的溶剂例如水、乙醇以及类似物一起的溶剂化的形式存在，并且预 期本发明包括溶剂化的和未溶剂化的形式两者。
化合物的合成
本发明的化合物可以通过包括类似于化学领域中所熟知的那些方法的 工艺合成路线尤其是根据本文所含有的说明书来合成。起始材料通常可从 商业来源例如Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)、Alfa Aesar(Ward Hill，MA)或 TCI(Portland，OR)获得，或使用为本领域的技术人员所熟知的方法容易地制 备(例如，通过通常在Louis F.Fieser和Mary Fieser，Reagents for Organic Synthesis(用于有机合成的试剂)，第1-19卷，Wiley，N.Y.(1967-1999版本)或 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie，4，Aufl.编辑，Springer-Verlag， Berlin(包括增刊，也可通过Beilstein在线数据库获得)中所描述的方法来制 备)。
为了阐述性的目的，方案1-5和方案A-H示出用于制备本发明的化合物 以及关键的中间体的一般方法。对于单个反应步骤的更详细的描述，参见 下面的实施例部分。本领域的技术人员将理解，可以使用其他的合成路线 合成本发明的化合物。虽然在这些方案中描绘了并且在下面讨论了具体的 起始材料和试剂，但是可以容易地替换其他起始材料和试剂，以提供多种 衍生物和/或反应条件。此外，可以根据本公开内容使用本领域的技术人员 所熟知的常规的化学进一步改性通过下面所描述的方法制备的化合物中的 许多。
方案1
方案1示出了制备化合物8的方法，其中R11是卤素、CN、CF3、烷基、 环烷基、芳基、杂芳基或ORg，Rg是烷基、芳基或杂芳基，R12是W-Y，并且 W是O、CH2、NH或与Y的直接的键，并且Y是C1-C6烷基、C1-C6烯基(其中 当Y是烯基时，W是与Y的直接的键)、C3-C6环烷基、芳基、5元或6元杂环 或5元或6元杂芳基，其中芳基、杂环或杂芳基可以进一步任选地用选自卤 素、OH、CF3、CN或氧代(仅在杂环上)的一个至三个取代基取代；并且烷 基、烯基和环烷基可以任选地用选自芳基、杂环、杂芳基、卤素、OH、CF3、 CN或氧代的一个至三个取代基取代；并且R3是如本文所定义的。化合物1 的制备可以如文献(WO 2007/103308)中所描述的进行，其中PG1是诸如对甲 氧基苄基(“PMB”)或其他适当地被取代的苄基的保护基。使用Br2、I2或N- 氯代琥珀酰亚胺(“NCS”)卤化化合物1提供化合物2，其中X是Cl、Br或I。将2 转化为三氟甲磺酸盐(triflate)，然后用适当地被取代的哌嗪进行SNAr反应， 得到了化合物3，其中PG2是保护基，例如叔丁氧基羰基(“Boc”)、苄氧基羰 基(“Cbz”)、苄基或其他适当地被取代的苄基。标准偶联反应(例如，Suzuki 偶联、醚形成等等，如方案2中详细描述的)提供化合物4a-f。在标准条件下 除去保护基(例如，三氟乙酸(“TFA”)以除去PMB或Boc基团)提供化合物5。5 的进一步加工(elaboration)可以根据需要如方案3、4和5所示的进行，以提供 化合物6。然后使化合物6脱保护以得到化合物7，然后用合适的酸在偶联试 剂(例如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯，“HBTU”)的存在 下进行酰化，以得到化合物8，其中R17和R18独立地选自氢；任选地用卤素、 氧代、OH、OCH3、CF3、NH2、NH(C1-C6烷基)、N(C1-C6烷基)2、C3-C6环烷 基、4元-6元杂环、C4-C6芳基、5-6元杂芳基取代的C1-C6烷基，并且环烷基、 杂环、芳基和杂芳基进一步任选地用选自卤素、C1-C3烷基、OH、O(C1-C3烷基)、CF3、CN、环丙基甲基或氧代(仅在环烷基或杂环上)的一个至三个取 代基取代；-O-(C1-C6烷基)，其中烷基任选地用卤素、氧代、OH、O(C1-C3烷基)、CF3、NH2、NH(C1-C6烷基)、N(C1-C6烷基)2、C3-C6环烷基、4元-6元 杂环、C4-C6芳基、5-6元杂芳基取代，并且环烷基、杂环、芳基和杂芳基进 一步任选地用选自卤素、C1-C3烷基、OH、O(C1-C3烷基)、CF3、CN、环丙 基甲基或氧代(仅在环烷基或杂环上)的一个至三个取代基取代；C3-C6环烷 基、4元-6元杂环、C4-C6芳基、5-6元杂芳基，其中环烷基、杂环、芳基和 杂芳基进一步任选地用选自卤素、C1-C3烷基、OH、O(C1-C3烷基)、CF3、 CN、NH2、NH(C1-C6烷基)、N(C1-C6烷基)2、环丙基、环丙基甲基或氧代(仅 在环烷基或杂环上)的一个至三个取代基取代；或-CH(CH3)CH(OH)苯基；并 且R5、R6、G、m、n和p是如本文所定义的。
在本发明的另一个实施方案中，提供了一种用于制备式I的化合物的方 法，所述方法包括：
(a)在偶联试剂的存在下用式A的化合物酰化式7的化合物：
其中R1选自氢、卤素、CN、任选地用卤素取代的C1-C4烷基、-ORe、C3-C6环烷基、5元或6元杂芳基、苯基或-O-苯基，其中杂芳基、苯基或-O-苯基可 以任选地用一个或两个Rb基团取代；
R2选自氢、CH3或-ORf，条件是当R1是氢时，则R2是-ORf；
R3选自H或C1-C3烷基；
Re是任选地用OH或5-6元杂环取代的C1-C4烷基；
Rf是任选地用一个或多个OH基团取代的C1-C4烷基；
其中G是任选地被1-3个独立的R4基团取代的苯基，或
当m是0时，G可以另外地是不存在的或是C1-C4烷基；
每个R4独立地选自卤素、CF3、OCF3和CN；
R5和R6独立地选自氢或CH3；
R7和R8独立地选自氢或C1-C6烷基；
m、n和p独立地是0或1；
(b)后面是任选对R1加工；以及
(c)后面是任选脱保护以提供式I的化合物。
方案2
方案2示出了引入R11以制备化合物4a-f的方法，其中X是Cl、Br或I，PG1 和PG2在方案1中定义并且R3是如本文所定义的。可以使用包括Pd(0)催化的 Suzuki偶联的多种Pd(0)或Cu(I)催化的反应，以得到4a，其中Ar＝芳基或杂芳 基。任选地，Cu(I)催化的醚形成得到4b，其中Rg＝烷基、芳基或杂芳基。可 以使用钯催化的反应和Zn(CN)2实现氰化，以得到4c。当X＝I时，用Cu(I)I和 2，2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯处理得到4d。可以使用钯介导的偶联反应以 合适的烷基锌卤化物(RhZnQ)实现3向4e的转化，其中Rh是烷基并且Q是卤 素。可以通过标准锂交换反应(例如，t-BuLi在合适的溶剂中，溶剂例如四 氢呋喃，“THF”)并且以合适的亲电子试剂(例如，N-氟-N-(苯磺酰基)苯磺酰 胺)捕集(trapping)来进行化合物3向化合物4f的转化，以得到化合物4f。具体 的实施例在实验部分中详细描述。
方案3
方案3示出了用于引入R12基团以提供化合物6的方法，其中R12是W-Y， 并且W是O、CH2、NH或与Y的直接的键，并且Y是C1-C6烷基、C1-C6烯基(其 中当Y是烯基时，W是与Y的直接的键)、C3-C6环烷基、芳基、5元或6元杂 环或5元或6元杂芳基，其中芳基、杂环或杂芳基可以进一步任选地用选自 卤素、OH、CF3、CN或氧代(仅在杂环上)的一个至三个取代基取代；并且 烷基、烯基和环烷基可以任选地用选自芳基、杂环、杂芳基、卤素、OH、 CF3、CN或氧代的一个至三个取代基取代；PG2在方案1中定义并且R11和R3是如本文所定义的。化合物5在标准条件下的卤化得到化合物5d，其中X是 卤素。可以通过保护吡咯N-H，然后进行合适的偶联反应来把化合物5d转化 为化合物6。这些偶联反应包括但不限于Negishi偶联、Heck偶联、Suzuki偶 联或可以用于引入多种R12基团的多种过渡金属介导的偶联方法(包括Cu、Pd 和Ni)。具体的偶联程序在实施例部分中详细描述。然后脱保护得到化合物6。
方案4
方案4示出了引入R12a基团以提供化合物6的另一种方法，其中R12a是 NH-Y，并且Y是C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、5元或6元杂环或5元或6 元杂芳基，其中芳基、杂环或杂芳基可以进一步任选地用选自卤素、OH、 CF3、CN或氧代(仅在杂环上)的一个至三个取代基取代；并且烷基和环烷基 可以任选地用选自芳基、杂环、杂芳基、卤素、OH、CF3、CN或氧代的一 个至三个取代基取代；PG2在方案1中定义并且R11和R3是如本文所定义的。 碘化5，然后进行N-H保护(例如PMB)，其中PG是如上文所定义的，以氨基 甲酸叔丁酯进行Cu(I)催化的偶联反应以及脱保护Boc基团得到3-氨基中间 体。然后可以在过渡金属催化的偶联反应、还原性胺化或烷基化反应中使 用3-氨基化合物以引入R12a，然后脱保护以得到化合物6。
方案5
方案5示出了引入R12b基团以提供化合物6的又一种方法，其中R12b是任 选地用选自卤素、OH、CF3、CN、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、芳基、5元或6 元杂环或5元或6元杂芳基的一个至三个取代基取代的C1-C6烯基，其中烷基、 环烷基、芳基、杂环或杂芳基可以任选地用选自卤素、OH、CF3、CN或氧 代(仅在烷基、环烷基或杂环上)的一个至三个取代基取代，PG2在方案1中定 义并且R11和R3是如本文所定义的。可以使用钯介导的偶联然后进行氧化断 裂反应(使用例如但不限于臭氧分解或OsO4/NaIO4的条件)以得到醛来把化 合物5a转化为3-甲酰基中间体5b，其中Z是B(OH)2或Sn(Bu)3并且Rn是H、烷 基或芳基。然后可以通过多种取代反应将甲酰基取代进一步加工成R12b以提 供化合物6，多种取代反应例如但不限于Wittig、Horner-Emmons或 Emmons-Wadsworth。
如在方案1-5中和在实施例中所阐释的式I的化合物的合成中使用的氨 基酸是可商购获得的或可以根据本文公开的方法制备。例如，在某些实施 方案中，用于制备式I的化合物的氨基酸包括具有式1A的β-苯基甘氨酸氨基 酸、具有式2A的γ-苯基甘氨酸氨基酸、具有式3A的β-苯基丙氨酸氨基酸和 具有式4A的γ-苯基丙氨酸氨基酸：
其中R17、R18、G、R5和R6是如上文所定义的。
在方案A-H中示出了制备式1A-4A的氨基酸的方法。
方案A
方案A阐释了制备任选地被取代的式1A的β-苯基甘氨酸氨基酸14和15 的方法，其中t是0至4，PG是胺保护基，R17是胺保护基或如上文所定义的， 并且R18和R4是如上文所定义的。根据方案A，使用标准条件，例如在催化 量的酸例如浓H2SO4或偶联剂例如二环己基碳二亚胺(“DCC”)/4-二甲氨基吡 啶(“DMAP”)的存在下用合适的醇(例如MeOH)处理；或任选地通过在碱例如 NEt3/DMAP的存在下，在合适的温度(例如，-20℃至100℃)下用合适的亲电 子试剂(例如MeI、EtBr、BnBr)处理，把酸9转化为酯10，其中R′是烷基。酯 的合适的选择通过合成结束时重整酸所需的条件来确定，且许多合适的例 子和条件被列在Greene和Wuts的‘Protective Groups in Organic Synthesis(有机 合成中的保护基)’，Wiley-Interscience，第3版，第5章中。可以通过在碱例 如NaOEt的存在下，在合适的温度(例如-20℃至室温)下用合适的醛(例如甲 醛)处理进行引入羟甲基以提供化合物11。可以通过在过量的碱例如NEt3、 N，N-二异丙基乙胺(“DIEA”)或1，8-二氮杂二环十一碳-7-烯(“DBU”)的存在 下，在合适的温度(例如-20℃至室温)下用例如甲磺酰氯处理来实现化合物 11的醇基的活化以形成离去基团(例如甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、卤化物)。在 许多情况下，烯烃12可以从该程序中直接被分离。在其它情况下，可能需 要加热(30℃至100℃)或另外的碱(例如DBU，在卤化物的情况下)来完成消 除，以提供化合物12。可以在合适的溶剂例如THF中，在合适的温度(例如 -20℃至回流)下用期望的伯胺(例如，乙胺)处理活化的烯烃12，以生成氨基 酯中间体。在化合物12具有多电子(electron rich)芳环或缺电子(electron poor)/ 体积大的(bulky)伯胺的情况下，可能需要加热(例如，在密封管中30℃-240℃) 或微波化学。可以使用二碳酸二叔丁酯(“Boc2O”)在标准条件下实现氨基的 保护(例如作为Boc-基团)，以提供化合物13，其中Pg是胺保护基。可以使用 任选的保护基，并且许多合适的例子被列在Greene和Wuts的‘Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)’，Wiley-Interscience，第3 版，第7章中。可以使用适合于酯的条件(例如，含水LiOH用于甲酯，氢化 用于苄酯，酸用于叔丁酯)实现酯13的皂化以形成被保护的氨基酸14。
任选地，可以在合适的溶剂例如THF中，在合适的温度(例如-20℃至回 流)下用仲胺(例如，二乙胺)处理活化的烯烃12，以生成氨基酯中间体(未示 出)。在化合物12具有多电子芳环或缺电子/体积大的仲胺的情况下，可能需 要加热(例如，在密封管中30℃-240℃)或微波化学。可以使用适合于酯的条 件(例如，含水LiOH用于甲酯，氢化用于苄酯，酸用于叔丁酯等等)实现酯 的皂化以形成氨基酸15。
方案B
方案B示出了制备任选地被取代的式2A的γ-苯基甘氨酸氨基酸19的方 法，其中t是0至4，并且R4、R5和R6是如本文所定义的。可以在碱例如DBU 的存在下，在合适的温度(例如0℃至室温)下用被取代的硝基甲烷衍生物(例 如硝基乙烷)处理起始的不饱和酯12(其中R′是烷基)(可以根据方案A来制 备)，以得到同系加合物16。可以使用标准条件(例如氢化、Zn/酸等等)在合 适的温度(例如室温至回流)下还原化合物16的硝基，并且可以环化所得到的 中间体以得到内酰胺中间体17。可以在标准条件下使用Boc2O实现胺的保护 (例如带有Boc-基团)以提供化合物18。可以使用任选的保护基，并且许多合 适的例子被列在Greene和Wuts的‘Protective Groups in Organic Synthesis(有机 合成中的保护基)’，Wiley-Interscience，第3版，第7章中。在合适的温度(例 如0℃至100℃)下用含水碱例如LiOH或KOH处理化合物18实现内酰胺的开 环，以得到适当地被取代的被保护的氨基酸化合物19。
在方案B的一个替换形式中，在化合物18和19中，Boc可以用如上文所 定义的R17替换。
方案C
方案C示出了形成γ-氨基酸23和24的单一对映体的代表性的方法，其中t 是0至4，PG是胺保护基，例如Boc，并且R4、R5和R6是如本文所定义的。在 一个可能的方法中，使外消旋氨基酸经受使用手性固定相的手性色谱分离。 任选地，可以制备可以通过常规的色谱技术或结晶技术分离的非对映体混 合物。例如，在碱性胺(例如Hunig碱(Hunig’s base))存在下在-20℃至50℃下 活化化合物19(例如，COCl2、碱)并且引入手性助剂(例如Evans噁唑烷酮)得 到化合物21和22的非对映体混合物，其中R*是手性助剂(例如Evans噁唑烷 酮)。可以使用标准条件(例如柱色谱法、HPLC、SFC等等)分离该混合物， 以得到单独的非对映体。可以通过手性助剂的分解(cleavage)(在Evans助剂的 情况下，通过在-15℃至室温下使用(例如)LiOH/HOOH)把这些单独的非对映 体转化为期望的酸，以得到化合物23和24。可能需要保持低温，以便预防 最近被分离的手性中心的外消旋作用。
方案D
方案D示出了制备任选地被取代的式3A的β-苯基丙氨酸氨基酸28、29 和30的方法，其中t是0至4，PG是胺保护基，R17和R18是如方案A中所定义的， 并且R4是如本文所定义的。可以在合适的碱例如哌啶的存在下，在合适的 温度(例如室温至回流)下用式CN-CH2CO2R″′(其中R″′是烷基(例如2-氰基乙 酸乙酯))的氰基乙酸酯处理适当地被取代的醛25，以得到不饱和酯26。可以 以许多方式实现烯烃和化合物26的腈基的还原，以提供化合物27。例如， 可以用已知实现1，4-还原的任何试剂例如NaBH4，来还原烯烃。可以使用诸 如LiAlH4或NaBH4的试剂，在诸如BF3OEt2或TFA的路易斯酸的存在下还原 腈。可以使用许多任选的还原剂，诸如列在Hudlicky的‘Reductions in Organic Chemistry(有机化学中的还原)’，ACS专题论文，第2版，第18章中的那些。 如果期望，可以在本阶段使用标准条件(例如使用合适的醛、路易斯酸和还 原剂的还原性胺化)单烷基化或双烷基化伯胺27，以提供通向化合物28和29 的中间体(未示出)。为了制备伯胺和仲胺，可以使用任何数量的保护基(例 如，Greene和Wuts的‘Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保 护基)’Wiley-Interscience，第3版，第7章)实现保护，例如在0℃至室温下使 用Boc酐保护为Boc-基团。可以使用含水碱例如LiOH或KOH或在上述的 ‘Protecting Groups(保护基)’正文中所列出的任选的试剂中的任一种(例如，氢 化用于苄酯)来实现酯基的分解，以形成氨基酸28、29或30。
方案E
方案E示出了制备任选地被取代的式4A的α-苯基丙氨酸氨基酸34的方 法，其中t是0至4，PG是胺保护基，并且R4是如本文所定义的。可以在室温 到回流的范围内的温度下使用例如LiAlH4把适当地被取代的酸31还原为苄 醇32。可以使用例如PBr3、MsCl/NEt3等等把化合物32的醇基活化为离去基 团(例如，卤化物、甲磺酸盐等等)。在强碱例如二异丙基氨基锂(“LDA”)或 n-BuLi的存在下使用被保护的甘氨酸衍生物例如2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸 乙酯置换该离去基团，提供氨基酯中间体33，其中R′是烷基。合适的保护基 列于Greene和Wuts的‘Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保 护基)’，Wiley-Interscience中。可以在本阶段改变胺保护基，例如以引入Boc- 基团。酯33的随后在合适的温度(例如0℃至回流)下的脱保护(例如使用3N HCl、LiOH、氢化用于苄酯，等等)提供所期望的N-被保护的氨基酸34。
方案F
可以使用诸如方案F中所示的程序的程序制备β-氨基酸的任何一个对映 体。可以用亚胺或亚胺离子(iminium ion)合成子(例如，通过在路易斯酸(例 如TiCl4)和适当地被取代的烷氧基六亚甲基四胺(alkoxymethanamine)或 N-(烷氧基甲基)酰胺/氨基甲酸酯的存在下，在-100℃至50℃原位制备的)处 理具有带有对在氨基酸的β位生成期望的化学合适的立体化学的合适的手 性助剂(R*)的2-苯乙酸酯35(其中t是0至4，R*是合适的手性助剂(例如Evans 助剂或磺内酰胺)，且R4是如上文所定义的)，以制备化合物36，其中R17是 胺保护基或如上文所定义的。不对称加成可能需要路易斯酸(例如TiCl4)、胺 碱(例如Hunig碱)和较低的温度(例如-100℃至0℃)的存在，以生成最佳水平 的立体化学诱导(stereochemical induction)。如果非对映体选择性低于所需要 的，那么可以在本阶段通过(例如)色谱法或结晶分离单独的非对映体。然后 使用已知分解所选择的助剂的方法(例如，对于Evans助剂，LiOH/H2O2，在 -50℃至50℃)分解手性助剂导致在β位具有所期望的立体化学的所期望的N- 被保护的β-氨基酸37。此外，如果R17也是保护基(例如，2，4-二甲氧基苄基)， 那么可以在Boc-基团的存在下除去R17(例如、氢化或DDQ等等)，以得到Boc- 氨基酸38，Boc-氨基酸38在除去Boc-基团时将提供伯胺(未示出)，该伯胺可 以通过烷基化、酰化或还原性胺化(在与嘧啶-哌嗪单元偶联之前或之后)来 进一步官能化。任选地，化合物37的Boc基团可以被加工为R18，R18如上文 所定义的。
方案G
方案G示出了制备用于制备式VI的化合物的任选地被取代的氨基酸44 的方法，其中R19和R20独立地选自氢、卤素、任选地用选自卤素、OH、CF3、 CN或氧代的一个至三个取代基取代的C1-C4烷基，Rk是甲基或乙基，PG是胺 保护基，并且R8、G1和r是如上文所定义的。可以使用例如LiBEt3H把适当地 被取代的内酰胺39还原为缩醛胺。然后可以用氢化钠和诸如 (EtO)2P(O)CH2CO2Et的试剂处理缩醛胺，以提供不饱和酯40。除去保护基PG 并且用碱(例如Et3N)处理，提供环化的化合物41。对胺的随后的保护得到化 合物42。可以使用合适的碱(例如LiHMDS)和卤代烷进行任选的将G1基团引 入到化合物42上，以提供化合物43。然后可以在43上直接进行酯水解，以 直接地得到相应的酸，或者可以任选地使化合物43脱保护，然后进行R8引 入和酯水解，以得到化合物44。
方案H
方案H示出了制备用于制备式V的化合物的任选地被取代的氨基酸48的 方法，其中R17、R18和G1是如上文所定义的。可以通过可商购获得的或由相 应的氨基酸制备的氨基酸甲酯的还原性胺化、烷基化或过渡金属催化的偶 联反应引入R17，以得到化合物46。可以以相似的方式引入R18并且然后进行 水解以得到任选地被取代的氨基酸48。
在制备式I的化合物时，对中间体的远处(remote)的官能度(例如伯胺或 仲胺等等)的保护可能是必要的。对这样的保护的需要将根据远处的官能度 的性质和制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基(NH-Pg)包括乙酰基、 三氟乙酰基、BOC、CBz和9-芴基亚甲基氧基羰基(“Fmoc”)。对这样的保护 的需要由本领域的技术人员容易地确定。对于保护基和它们的使用的一般 描述，参见T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中 的保护基)，John Wiley & Sons，New York，1991。
分离的方法
把反应产物互相分离和/或与起始材料分离可以是有利的。每个步骤或 一系列步骤的所期望的产物通过本领域中普通的技术来分离和/或提纯(然 后分离)为所期望的均匀度。通常，这样的分离涉及多相萃取、从溶剂或溶 剂混合物的结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可以涉及任何数量的方法， 所述方法包括，例如：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高压、中压和 低压液相色谱方法和装置；小规模分析；模拟移动床(SMB)和制备薄层或厚 层色谱法以及小规模薄层和快速色谱法的技术。本领域的技术人员将应用 最可能实现所期望的分离的技术。
非对映体混合物可以基于它们的物理化学差异，通过本领域的技术人 员所熟知的方法例如通过色谱法和/或分步结晶来分离为它们的单个非对映 体。可以通过以下方式来分离对映体：通过与合适的光学活性化合物(例如 手性助剂，例如手性醇或Mosher酰基氯(Mosher’s acid chloride))反应来将对 映体混合物转化为非对映体混合物，分离非对映体以及把单个非对映体转 化(例如水解)为相应的纯的对映体。还可以通过使用手性HPLC柱来分离对 映体。
可以通过使用这样的方法拆分外消旋混合物来获得基本上不含有其立 体异构体的单一立体异构体例如对映体，所述方法例如使用光学活性拆分 剂形成非对映体(Eliel，E.和Wilen，S.“Stereochemistry of Organic Compounds，(有机化合物的立体化学)”，John Wiley & Sons，Inc.，New York， 1994；Lochmuller，C.H.，(1975)J.Chromatogr.，113(3)：283-302)。可以通过任 何合适的方法来分离和离析本发明的手性化合物的外消旋混合物，所述方 法包括：(1)与手性化合物形成离子的非对映体的盐并且通过分步结晶或其 他方法分离，(2)与手性衍生化试剂形成非对映体的化合物，分离非对映体， 并且转化为纯的立体异构体，以及(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或 富集的立体异构体。参见：“Drug Stereochemistry，Analytical Methods and Pharmacology(药物立体化学、分析方法和药理学)”，Irving W.Wainer编辑， Marcel Dekker，Inc.，New York(1993)。
在方法(1)中，可以通过对映体纯的手性碱例如马钱子碱、奎宁、麻黄 素、士的宁、α-甲基-β-苯乙胺(安非他明)以及类似物与带有酸性官能度的不 对称化合物例如羧酸和磺酸的反应来形成非对映体的盐。可以诱导非对映 体的盐以通过分步结晶或离子色谱法分离。对于氨基化合物的光学异构体 的分离，手性羧酸或磺酸例如樟脑磺酸、酒石酸、扁桃酸或乳酸的加入可 以导致形成非对映体的盐。
任选地，对于方法(2)，将被拆分的底物与手性化合物的一种对映体反 应以形成非对映体对(E.和Wilen，S.“Stereochemistry of Organic Compounds(有机化合物的立体化学)”，John Wiley & Sons，Inc.，1994，第322 页)。可以通过使不对称化合物与对映体纯的手性衍生化试剂例如薄荷基衍 生物反应来形成非对映体的化合物，然后分离非对映体并且水解以获得纯 的或富集的对映体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物的手性酯， 例如薄荷酯(menthyl ester)，例如在碱的存在下的(-)氯甲酸薄荷酯或Mosher 酯、乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基酯(Jacob III.J.Org.Chem.，(1982) 47：4165)；以及分析1H NMR光谱以分析两种阻转异构体的对映体或非对映 体的存在。可以通过正相和反相色谱法分离和离析阻转异构体的化合物的 稳定的非对映体，然后进行用于分离阻转异构体的萘基异喹啉的方法(WO 96/15111)。
对于方法(3)，可以通过使用手性固定相的色谱法来分离两种对映体的 外消旋混合物(W.J.Lough编辑，Chapman and Hall，New York，“Chiral Liquid Chromatography(手性液相色谱法)”(1989)；Okamoto，J.of Chromatogr.， 513：375-378(1990))。可以通过用于区别其他手性分子与不对称碳原子的方 法来区别富集的或提纯的对映体，所述方法例如旋光性和圆二色性。
施用和药物制剂
可以通过适合于待治疗的病状的任何便利的途径来施用本发明的化合 物。合适的途径包括口服的、胃肠外的(包括皮下的、肌肉内的、静脉内的、 动脉内的、皮内的、鞘内的和硬膜外的)、透皮的、直肠的、鼻的、局部的(包 括颊的和舌下的)、阴道的、腹膜内的、肺内的和鼻内的。
可以以任何便利的施用形式来施用化合物，例如片剂、粉末、胶囊、 溶液、分散体、悬浮液、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等 等。这样的组合物可以含有药物制剂中常规的组分，例如稀释剂、载体、 pH调节剂、增甜剂、膨胀剂(bulking agent)和另外的活性剂。如果期望胃肠 外施用，那么组合物将是无菌的并且以适合于注射或输注的溶液或悬浮液 形式。
典型的制剂通过混合本发明的化合物和载体或赋形剂来制备。合适的 载体和赋形剂是本领域的技术人员所熟知的并且在例如Howard C.Ansel等 人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(药物剂型和药物 递送系统)，(第8版，2004)；Alfonso R.Gennaro等人，Remington：The Science and Practice of Pharmacy(雷明顿：药学的科学和实践)，(第20版，2000)；以 及Raymond C.Rowe，Handbook of Pharmaceutical Excipients(药物赋形剂手 册)，(第5版，2005)中详细描述。制剂还可以包括一种或多种缓冲剂、稳定 剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、 不透明剂(opaquing agent)、助流剂、加工助剂、着色剂、增甜剂、芳香剂、 调味剂、稀释剂和其他已知的添加剂，以提供药物(即本发明的化合物或其 药物组合物)的极好外观或在药物产品(即药物)的制造中提供帮助。
本发明的一个实施方案包括一种包含本发明的化合物或其立体异构体 或药学上可接受的盐的药物组合物。在一个另外的实施方案中，本发明提 供一种包含本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐连同药学 上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
用本发明的化合物治疗的方法
本发明包括通过施用本发明的一种或多种化合物或其立体异构体或药 学上可接受的盐来治疗或预防疾病或病状的方法。在一个实施方案中，用 以可检出地抑制CHK1活性的量的本发明的化合物或其立体异构体或药学 上可接受的盐以及药学上可接受的载体、佐剂或媒介物来治疗人类患者。
在本发明的另一个实施方案中，提供了一种治疗哺乳动物中的过度增 殖疾病的方法，该方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物 或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，一种治疗或预防在需要这样的治疗的哺乳动物 中的癌症(包括下文所指出的病状)的方法，其中所述方法包括对所述哺乳动 物施用治疗有效量本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐。
因为CHK1抑制剂的加强许多抗癌剂的活性的能力，预期的是，可以通 过本发明的组合物和方法治疗许多肿瘤类型。这些病状包括但不限于：心 脏的：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹 肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺的：支气管癌(扁平细胞、未分化的小 细胞、未分化的大细胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、 淋巴瘤、软骨瘤错构瘤(chondromatous hamartoma)、间皮瘤；胃肠的：食管 (鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、 胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、舒血管肠肽 瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂 肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、 平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌、维尔姆斯氏肿瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、 白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉 瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间 质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝细胞癌)、 胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；骨：成骨肉瘤(骨 肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维性组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋 巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤(malignant giant cell tumor chordoma)、骨软骨性外生骨疣(osteochronfroma)(骨软骨性外生骨 疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤(chondromyxofibroma)、 骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄色瘤、 畸形性骨炎)、脑脊膜(脑脊膜瘤、脑脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神经胶质 瘤病)、脑(星形细胞瘤、神经管母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细 胞瘤[松果体瘤]、多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiform)、少突神经胶 质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑脊 膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科学的：子宫(子宫内膜癌)、宫颈(宫颈癌、 肿瘤前宫颈非典型增生(pre-tumor cervical dysplasia))、卵巢(卵巢癌[浆液性 囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌]、粒-膜细胞肿瘤(granulosa-thecal cell tumor)、支持-间质细胞瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、 上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡 萄状肉瘤[胚胎性横纹肌肉瘤]、输卵管(癌)；血液学的：血液(骨髓性白血病 [急性的和慢性的]、急性淋巴母细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨 髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、霍奇金病、非霍奇 金淋巴瘤[恶性淋巴瘤；皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、 卡波西氏肉瘤、发育异常痣(moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤 纤维瘤、瘢痕疙瘩、牛皮癣；乳房：浸润性乳腺癌(invasive breast carcinomas)(浸润性导管癌和浸润性小叶癌)，等等；以及肾上腺：神经母细 胞瘤。术语过度增殖疾病包括上面提到的病状。如本文提供的术语“癌细胞” 包括被上面提到的病状中的任何一个侵袭的细胞。
本发明的另一个实施方案提供本发明的化合物或其立体异构体或药学 上可接受的盐在制造用于癌症的治疗的药物中的用途。
在另一个实施方案中，提供了一种治疗或预防通过CHK1和/或CHK2 调节的疾病或病症的方法，该方法包括对需要这样的治疗的哺乳动物施用 有效量的本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，提供了一种预防或治疗癌症的方法，该方法包 括对需要这样的治疗的哺乳动物施用单独的或与一种或多种具有抗癌性质 的另外的化合物结合的有效量的本发明的化合物。
预期在CHK1抑制剂触发CHK1依赖的细胞周期检测点时，CHK1抑制剂 加强很多抗癌剂的活性。
本发明涉及用于哺乳动物中的过度增殖疾病的治疗的组合物，所述组 合物包含与抗肿瘤剂结合的治疗有效量的本发明的化合物或其立体异构体 或药学上可接受的盐，所述抗肿瘤剂选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代 谢物(anti-metabolite)、反义DNA或反义RNA、嵌入抗生素(intercalating antibiotic)、生长因子抑制剂、信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制 剂、类视黄醇受体调节剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物反 应修饰剂、抗激素、血管生成抑制剂、抗雄激素、靶向抗体、HMG-CoA还 原酶抑制剂和含异戊二烯基的蛋白转移酶抑制剂。
本发明还涉及用于治疗哺乳动物中的过度增殖病症的方法，该方法包 括对所述哺乳动物施用与抗肿瘤剂结合的治疗有效量的本发明的化合物或 其立体异构体或药学上可接受的盐，所述抗肿瘤剂选自有丝分裂抑制剂、 烷化剂、抗代谢物、反义DNA或反义RNA、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、 信号转导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、类视黄醇受体调节剂、蛋 白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物反应修饰剂、抗激素、血管生成 抑制剂、抗雄激素、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和含异戊二烯基的 蛋白转移酶抑制剂。
另一个实施方案提供用于疗法的本发明的化合物。
另一个实施方案提供用于治疗过度增殖疾病的本发明的化合物。在一 个另外的实施方案中，所述过度增殖疾病是癌症，包括上文所提出的病状。
本发明还涉及用于抑制哺乳动物中的异常的细胞生长的药物组合物， 所述药物组合物包含与适量的化学治疗剂结合的适量的本发明的化合物或 其立体异构体或药学上可接受的盐，其中化合物、立体异构体或盐和化学 治疗剂的量是共同对抑制异常的细胞生长有效的。许多化学治疗剂是本领 域已知的。在某些实施方案中，化学治疗剂选自有丝分裂抑制剂、烷化剂、 抗代谢物、反义DNA或反义RNA、嵌入抗生素、生长因子抑制剂、信号转 导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、类视黄醇受体调节剂、蛋白酶体 抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物反应修饰剂、抗激素、血管生成抑制剂、 抗雄激素、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和/或含异戊二烯基的蛋白转 移酶抑制剂。
本发明涉及用于抑制哺乳动物中的异常的细胞生长或用于治疗过度增 殖病症的方法，所述方法包括对哺乳动物施用与放射疗法结合的适量的本 发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中与放射疗法结合 的化合物或盐的量是对抑制哺乳动物中的异常的细胞生长或治疗过度增殖 病症有效的。用于施用放射疗法的技术是本领域已知的，并且这些技术可 以用于本文所描述的组合治疗。本发明的化合物在这一组合治疗中的施用 可以如本文所描述的来确定。
据信，本发明的化合物可以使异常的细胞对用辐射以便杀死和/或抑制 这样的细胞的生长的治疗更敏感。因此本发明进一步涉及用于使哺乳动物 中的异常的细胞对用辐射治疗敏感的方法，所述方法包括对哺乳动物施用 适量的本发明的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，所述量是对 使异常的细胞对辐射治疗敏感有效的。在本方法中使用的化合物、立体异 构体或盐的量可以根据如本文所描述的用于确定这样的化合物的有效量的 手段或通过本领域的技术人员所知的方法来确定。
本发明的另一个实施方案提供本发明的化合物或其立体异构体或药学 上可接受的盐在制造用于治疗过度增殖疾病的药物中的用途。在一个另外 的实施方案中，所述过度增殖疾病可以是癌症，包括上文所提出的病状。
另一个实施方案提供本发明的化合物在制造在经历癌症疗法的患者的 治疗中用作CHK1和/或CHK2抑制剂的药物中的用途。
在另一个实施方案中，提供用于治疗过度增殖疾病的药物组合物，所 述药物组合物包含本发明的化合物。
在另一个实施方案中，提供用于癌症的治疗的药物组合物，所述药物 组合物包含本发明的化合物。
组合治疗
可以采用单独的或与其他用于治疗的治疗剂结合的本发明的化合物以 及其立体异构体和药学上可接受的盐。可以使用与一种或多种另外的药物 结合的本发明的化合物，所述另外的药物包括以不同的作用机理起作用的 化合物。药物组合制剂或剂量方案的第二化合物优选具有与本发明的化合 物互补的活性，使得它们不会不利地互相影响。这样的分子以对预期的目 标有效的量的组合合适地存在。这些化合物可以在单一的药物组合物中一 起施用，或可以分离地施用，并且当分离地施用时，施用可以同时发生或 以任何顺序相继地发生。这样的相继施用可以有短的时间间隔或长的时间 间隔。
实施例
为了阐述本发明，包括了以下的实施例。然而，应当理解，这些实施 例并不限制本发明并且仅意在提出实施本发明的方法。本领域的技术人员 将认识到，所描述的化学反应可以容易地被修改以制备本发明的许多其他 的化合物，并且用于制备本发明的化合物的任选的方法被认为在本发明的 范围内。例如，可以通过对本领域的技术人员来说明显的修改来成功地进 行根据本发明的未被举例说明的化合物的合成，例如，通过适当地保护干 扰基团、通过利用除了所描述的那些试剂之外的本领域中已知的其他合适 的试剂、和/或通过进行反应条件的常规修改。任选地，本文公开的或本领 域已知的其他反应将被认为具有用于制备本发明的其他化合物的适用性。
在下面所描述的实施例中，除非另外指出，否则所有温度都以摄氏度 给出。试剂从商业供应者例如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI购买，并且没 有进一步的提纯就使用，除非另外指出。
下面阐述的反应通常在氮气或氩气的正压力下或用干燥管(除非另有说 明)在无水溶剂中进行，并且反应烧瓶通常配有用于通过注射器引入底物和 试剂的橡胶隔片。玻璃器皿被烘箱干燥和/或加热干燥。
柱色谱法在具有硅胶柱的Biotage系统(制造商：Dyax Corporation)或在 二氧化硅SepPak筒(Waters)上或在使用C18H柱的Biotage SP4系统上进行(除 非另有说明)。1H NMR光谱在以400MHz操作的Varian仪器上记录。1H NMR 光谱使用TMS作为参考标准以CDCl3、d6-DMSO、CH3OD或d6-丙酮溶液获 得(以ppm报告)。当报告峰多重性时，使用以下缩写：s(单峰)、d(双峰)、t(三 重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双二重峰)、dt(双三重峰)。偶 合常数当给出时，以赫兹(Hz)报告。
实施例A
CHK1酶测定
以3倍连续稀释把化合物稀释在二甲亚砜(“DMSO”)中并且然后加入反 应中以得到1％DMSO的最终浓度。在酶测定中，使用从杆状病毒提纯的在 羧基末端具有10个另外的组氨酸残基的人类CHK1激酶域氨基酸1至273，来 测试化合物。底物是来自Invitrogen的荧光Omnia肽S/T11。测定含有在25μL 反应体积中的25mM HEPES pH 7.4、10mM MgCl2、1mM DTT、0.01％ Triton-X100、0.5nM CHK1酶、2uM S/T 11肽底物、60M ATP、测试化合 物1％DMSO。测定在室温下在白色384井聚丙烯板(可从Naperville，IL的 Nunc，Inc获得)中进行，在Envision平板读数器(Waltham，MA的PerkinElmer， Inc.)，激发340nM，发射495nM中每50秒收集数据，收集45分钟。把来自 每个井的所收集的数据拟合成直线，并且使用所得到的比率计算对照的百 分比。使用四参数拟合从对照的百分比对化合物浓度的图确定每种测试化 合物的IC50值。
实施例1-38的化合物在上述测定中被测试并且发现具有小于10uM的 IC50。
实施例B
(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸
把2-(4-氯苯基)乙酸甲酯(36.7g，199mmol)和多聚甲醛(6.27g，209mmol) 溶解/悬浮在DMSO(400mL)中并且用NaOMe(537mg，9.94mmol)处理。允 许混合物在室温下搅拌2小时，以根据粗物质的薄层色谱法(“TLC”)分析来确 定完成。把反应倒入冰冻水(700mL；白色乳状液)中并且通过加入1M HCl 溶液来中和。用乙酸乙酯(3×)萃取水层，并且结合有机物。把有机层用水 (2×)、盐水(1×)洗涤，分离，在MgSO4上干燥，过滤并且在真空中浓缩，以 得到油状的粗产物。把残留物装载到具有硅胶的大烧结过滤器(large fritted filtered)上并且用9∶1的己烷∶乙酸乙酯洗脱，直到收集起始材料/烯烃。然后 用1∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱塞子，直到纯的所期望的产物被完全洗脱。浓缩的 纯的部分产生油状的2-(4-氯苯基)-3-羟基丙酸甲酯(39.4g，92％)。
把2-(4-氯苯基)-3-羟基丙酸甲酯(39.4g，184mmol)溶解在二氯甲烷 (“DCM”；500mL)中并且用三乙胺(“TEA”；64.0mL，459mmol)处理。把溶 液冷却至0℃并且用MsCl(15.6mL，202mmol)缓慢地处理，然后允许搅拌30 分钟以通过TLC分析确定完成。用1N HCl溶液来分配溶液，并且用DCM萃 取水层一次。把所结合的有机层用1N HCl溶液再次洗涤，分离，用稀NaHCO3溶液洗涤，并且分离。把有机层在MgSO4上干燥，过滤，并且在真空中浓 缩以得到油。把残留物装载到具有硅胶塞子的大烧结过滤器上并且用9∶1的 己烷∶乙酸乙酯洗脱，通过TLC分析确定得到纯的所期望的产物。浓缩的纯 的部分产生油状的2-(4-氯苯基)丙烯酸甲酯(30.8g，85％)。把该2-(4-氯苯基) 丙烯酸甲酯(500mg，2.54mmol)作为在THF(1.35mL)中的溶液在0℃加入 i-PrNH2(217μL，2.54mmol)在THF(5.0mL)中的搅拌溶液中。允许反应在室 温下搅拌过夜，以通过LCMS分析确定完成。通过吸管把Boc2O(584μL，2.54 mmol)加入搅拌的胺中。允许反应搅拌过夜，以通过混合物的LCMS和TLC 分析确定完成。在真空中浓缩溶液，以得到油状的3-(叔丁氧基羰基(异丙基) 氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸甲酯(854mg，94％)。LC/MS(APCI+)m/z 256.1 [M-Boc]+。
在室温下，把3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸甲酯(133 g，374mmol)溶解在THF(1.0L)中，并且用三甲基硅醇钾(“KOTMS”；56.0g， 392mmol)处理。允许混合物搅拌过夜，以通过粗物质的LCMS分析确定完 成。在真空中浓缩混合物，以得到湿泡沫，允许湿泡沫在真空下干燥过夜， 以得到固体状的3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸钾(148.7 g，105％)。LC/MS(APCI+)m/z 242.1[M-Boc-K]+。
在室温下，把3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸钾(77.2 g，203mmol)溶解在THF(515mL)中，并且用新戊酰氯(26.3mL，213mmol) 处理。允许混合物搅拌3小时，以形成混合酐。在单独的烧瓶中把(S)-4-苄基 噁唑烷-2-酮(46.1g，260mmol)溶解在THF(600mL)中，并且冷却至-78℃。 溶液用n-BuLi(102mL的2.50M在己烷中的溶液，254mmol)处理，并且允许 搅拌一小时。把所制备的酐溶液通过套管加入到搅拌的Li-噁唑烷酮中，并 且允许混合物升温至室温，过夜。通过加入饱和氯化铵溶液来骤冷混合物， 并且然后使混合物在较多的水和乙酸乙酯之间分配。萃取水层若干次，并 且结合有机物。把有机层用水洗涤，然后用盐水洗涤，分离，在MgSO4上 干燥，过滤，并且在真空中浓缩。通过色谱法(用4∶1己烷∶乙酸乙酯洗脱硅胶) 提纯/分离残留物(非对映体)，以得到完全地分离的粘性油状的非对映体： (R)-3-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基 甲酸叔丁酯(12.16g，基于1/2的酸外消旋物(acid racemate)的24％)和 (S)-3-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基 甲酸叔丁酯(39.14g，基于1/2的酸外消旋物的77％)。LC/MS(APCI+)m/z 401.2[M-Boc]+。
在室温下把LiOH-H2O(168mg，4.00mmol)加入THF(30mL)和水(15mL) 的搅拌溶液，直到其被溶解。混合物用过氧化氢(658μL的35％wt.水溶液， 8.00mmol)处理，并且允许其在室温下搅拌10分钟。在冰浴中把反应冷却至 0℃，并且在10分钟内通过加料漏斗逐滴加入作为THF(15mL)中的溶液的 (S)-3-((S)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基 甲酸叔丁酯(1.00g，2.00mmol)。允许混合物在室温下搅拌过夜，以通过粗物 质的LCMS分析确定完成。把反应冷却至0℃，并且然后在10分钟时间内通 过加料漏斗用1M Na2SO3(9.00mL)溶液处理。在加入完成之后，允许混合物 升温至室温，持续10分钟。把混合物浓缩以除去THF，并且然后用水稀释。 用乙酸乙酯(废的)洗涤水层两次。用乙酸乙酯来分配水层，并且然后在同时 搅拌下逐滴加入1M HCl，直到获得约2至约3的pH。用乙酸乙酯萃取水层两 次，并且结合有机物。把有机物用盐水洗涤，分离，在MgSO4上干燥，过 滤，并且在真空中浓缩。在高真空下干燥油产物一小时，以得到粘性油/泡 沫状的(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(685mg，100％)。 LC/MS(APCI+)m/z 242.1[M-Boc]+。
实施例C
(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸
在甲苯(100mL)中结合2-(4-氯苯基)乙酸(20.00g，117.2mmol)和(R)-4- 苄基噁唑烷-2-酮(10.39g，58.62mmol)。加入三乙胺(32.68mL，234.5mmol)， 并且将溶液加热至80℃。逐滴加入在甲苯(25mL)中的新戊酰氯(14.42mL， 117.2mmol)的溶液。在加入之后，将混合物加热至回流，持续16小时。把 反应冷却，并且用2N HCl(2×)、水、5％Na2CO3(2×)、饱和NaCl洗涤，在Na2SO4 上干燥，并且在真空中浓缩至固体。使粗物质固体经受SiO2色谱法，用4∶1 己烷/乙酸乙酯洗脱。回收固体状的(R)-4-苄基-3-(2-(4-氯苯基)乙酰基)噁唑烷 -2-酮(30.7g，80％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.34-7.26(m，7H)，7.16-7.11 (m，2H)，4.71-4.64(m，1H)，4.35-4.16(m，4H)，3.26(dd，J1＝2.9，J2＝13.2，1H)， 2.76(dd，J1＝9.3，J2＝13.2，1H)。
把2-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(12.33g，66.57mmol)溶解在Et2O(60mL) 中并且冷却至-78℃。用二异丁基氢化铝(“DIBAL-H”；45.27mL，67.90mmol； 1.5M在甲苯中)逐滴处理悬浮液，并且在-78℃搅拌混合物2小时。允许混合 物在浴中升温至环境温度并且搅拌过夜。通过加入对甲苯磺酸水合物(0.075 g)在MeOH(75mL)中的溶液来骤冷反应。在环境温度下搅拌混合物16小时。 在真空中将悬浮液浓缩至固体。把该固体再悬浮在罗谢尔盐(0.5N)和乙酸乙 酯的混合物中。分离各层，并且用二氯甲烷(2×)洗涤水层。把结合的有机层 用饱和NaCl洗涤，在Na2SO4上干燥并且在真空中浓缩以提供油。把氯化钛 (IV)的溶液(10.0mL，10.0mmol；1M在甲苯中)冷却至0℃并且用溶解在二 氯甲烷(20mL)中的(R)-4-苄基-3-(2-(4-氯苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(3.00g， 9.10mmol)的溶液处理。5分钟之后，加入二异丙基乙胺(1.74mL，10.0mmol)。 在0℃把所得到的溶液搅拌1小时，然后冷却至-20℃。加入溶解在二氯甲烷 (20mL)中的2-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.55g，13.65mmol)的溶液，并 且在-20℃搅拌混合物75分钟。把混合物用饱和NH4Cl(约100mL)骤冷，并且 用水稀释以溶解固体。在分离之后，用二氯甲烷(3×)洗涤水层。把结合的有 机物用水(2×)洗涤，在Na2SO4上干燥并且在真空中浓缩。使回收的油经受 SiO2色谱法，用8∶1己烷/乙酸乙酯洗脱。回收粘性泡沫状的(S)-2-((S)-2-((R)-4- 苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-氯苯基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 (1.55g，40％)。MS(APCI+)[M+Na]521.1。
把氢氧化锂水合物(0.0471g，1.12mmol)加入THF/水(3∶1，19mL)的溶 液中，并且搅拌直到溶解。把混合物冷却至0℃并且用30％过氧化氢(0.231 mL，2.24mmol)处理并且搅拌10分钟。加入(S)-2-((S)-2-((R)-4-苄基-2-氧代 噁唑烷-3-基)-1-(4-氯苯基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.280g，0.561 mmol)在THF(2mL)中的溶液。在0℃把反应搅拌30分钟。TLC未显示很多进 展(progress)，因此允许反应升温至环境温度并且搅拌过夜。通过加入1.5M Na2SO3(1mL)骤冷反应并且搅拌15分钟。用Et2O稀释反应混合物并且分离反 应混合物。用Et2O洗涤(2×)含水部分，然后用3N HCl将含水部分调节至1的 pH。用乙酸乙酯萃取(3×)含水部分。把结合的有机层用水(2×)、饱和NaCl 洗涤，在Na2SO4上干燥并且在真空中浓缩至粘稠油，粘稠油缓慢地固化以 得到泡沫状的(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸 (0.55g，72％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.30(d，2H)，7.21(d，2H)， 4.53-4.40(m，1H)，4.37-4.27(m，1H)，3.34-3.22(m，1H)，2.98-2.90(m，1H)， 2.02-1.90(m，1H)，1.83-1.74(m，1H)，1.64-1.53(m，2H)，1.50(s，9H)。
实施例D
(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸
把5，5-二甲基吡咯烷-2-酮(0.108g，0.953mmol；可以如Ganem，B.和 Osby，JO；Tet Lett 26：6413(1985)中所描述的来制备)溶解在THF(3mL)中并 且冷却至-20℃。把溶液用六甲基二硅基胺基锂(lithium hexamethyldisilazide)(“LHMDS”；1.05mL，1.05mmol)处理，并且在-20℃搅 拌30分钟。加入二碳酸二叔丁酯(0.250g，1.14mmol)，并且允许反应混合物 升温至环境温度。在环境温度下把反应搅拌两小时，并且然后用饱和NH4Cl 骤冷，用乙酸乙酯稀释并且分离。把有机层用饱和NH4Cl、饱和NaHCO3、 饱和NaCl洗涤，在Na2SO4上干燥并且在真空中浓缩至油。使粗产物经受SiO2色谱法，并用4∶1己烷/乙酸乙酯洗脱。回收固体状的2，2-二甲基-5-氧代吡咯 烷-1-羧酸叔丁酯(在4∶1己烷/乙酸乙酯中，0.11的Rf)(0.087g，43％)。1H NMR (CDCl3，400MHz)δ2.48(t，J＝7.8，2H)，1.85(t，2H)，1.54(s，9H)，1.47(s，6H)。
把2，2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.17g，5.49mmol)溶解在 Et2O(15mL)中并且冷却至-78℃。用DIBAL-H(3.73mL，5.60mmol)处理溶 液。在-78℃把混合物搅拌2小时并且然后升温至环境温度，过夜。通过加入 对甲苯磺酸水合物(0.012g)在甲醇(12mL)中的溶液的一部分(7mL)来骤冷 反应。在环境温度下搅拌混合物60小时。把悬浮液在真空中浓缩并且再悬 浮在罗谢尔盐(0.5N)和乙酸乙酯的混合物中。在分离之后，用乙酸乙酯(2×) 洗涤含水部分。然后把结合的有机物用饱和NaCl洗涤，在Na2SO4上干燥并 且在真空中浓缩至油(92％)。把氯化钛(IV)(3.71mL，3.71mmol)在甲苯中的 溶液冷却至0℃并且用溶解在二氯甲烷(7mL)中的(R)-4-苄基-3-(2-(4-氯苯基) 乙酰基)噁唑烷-2-酮(1.11g，3.38mmol)的溶液处理。5分钟之后，加入二异 丙基乙胺(0.647mL，3.71mmol)。在0℃把所得到的溶液搅拌1小时，并且然 后冷却至-20℃。加入5-羟基-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.09g，5.06 mmol)在二氯甲烷(7mL)中的溶液，并且在-20℃搅拌混合物75分钟。把反应 用饱和NH4Cl(约4mL)骤冷，并且用水稀释以溶解固体。在分离之后，用二 氯甲烷(3×)洗涤含水部分。把结合的有机物用水(2×)洗涤，在Na2SO4上干燥 并且在真空中浓缩。使粗产物经受SiO2色谱法，并用9∶1己烷/乙酸乙酯洗脱 以生产(S)-5-((S)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-氯苯基)-2-氧代乙 基)-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸酯叔丁酯(1.62g，61％)。MS(ESI+)[M+H] 526.7/528.8。
使用(S)-5-((S)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-氯苯基)-2-氧代乙 基)-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯，根据实施例C所描述的程序来制备 (S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.33-7.21(m，4H)，4.60-4.51(m，1H)，4.39-4.32(m， 1H)，2.04-1.92(m，2H)，1.78-1.68(m，2H)，1.51(s，9H)，1.22(s，6H)。
实施例E
3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苄基)丙酸
把纯的SOCl2(25.7g，216.7mmol)逐滴加入甲醇(100mL)的-60℃溶液 中。当加入完成后，以几部分加入3-(4-氯苯基)丙酸(10.0g，54.1mmol)。当 加入完成后，除去冷却浴，并且使反应混合物缓慢地升温至室温并且搅拌 过夜。然后把反应浓缩至干燥，并且把所得到的残留物溶解在DCM(100mL) 中，用饱和NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且浓缩以得到油状的3-(4- 氯苯基)丙酸甲酯(10.48g，97％)。
把BuLi(5.2mL，1.6M在己烷中)加入二异丙胺(0.91g，9.0mmol)在 THF(40mL)中的0℃溶液中。然后在0℃把反应混合物搅拌30分钟，并且然 后冷却至-78℃。缓慢地加入3-(4-氯苯基)丙酸甲酯(1.5g，7.5mmol)在THF(8 mL)中的溶液，并且在-78℃把反应混合物搅拌40分钟。然后加入2-溴乙酸叔 丁酯(4.4g，22.7mmol)在THF(5mL)中的溶液。然后在-78℃把反应搅拌30 分钟，并且然后升温至室温并且搅拌过夜。然后把反应用饱和NH4Cl骤冷并 且浓缩以除去THF。然后用EtOAc萃取反应，并且把结合的萃取物干燥 (Na2SO4)，过滤，浓缩并且在真空中干燥以得到油状的1-甲基-2-(4-氯苄基) 琥珀酸4-叔丁酯(1.91g，81％)。
把TFA(15mL)在0℃逐滴加入1-甲基-2-(4-氯苄基)琥珀酸4-叔丁酯(1.91 g，6.1mmol)在DCM(30mL)中的溶液中。然后使反应混合物升温至室温并 且搅拌5小时。然后把反应浓缩至干燥以得到糖浆状的3-(4-氯苄基)-4-甲氧 基-4-氧代丁酸(1.55g，95％)，3-(4-氯苄基)-4-甲氧基-4-氧代丁酸不经进一步 提纯就被使用。
把叠氮化磷酸二苯酯(2.1g，76mmol)加入3-(4-氯苄基)-4-甲氧基-4-氧代 丁酸(1.6g，6.4mmol)和TEA(0.97g，9.58mmol)在t-BuOH(40mL)中的溶液 中。然后把反应混合物加热至回流并且搅拌6小时。然后把反应冷却至室温 并且浓缩为油。通过柱色谱法(9∶1至5∶1的己烷∶EtOAc)提纯得到3-(叔丁氧基 羰基氨基)-2-(4-氯苄基)丙酸甲酯(0.64g，31％)。
把LiOH-H2O(0.09g，2.1mmol)加入3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苄基) 丙酸甲酯(0.64g，1.9mmol)在2∶1的THF∶H2O(20mL)中的溶液中。然后在室 温下把反应搅拌3小时，并且然后用H2O(50mL)稀释并且用乙醚(50mL)洗 涤。接着把水层用固体KHSO4酸化，用固体NaCl饱和，并且用DCM萃取。 把结合的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩，并且在真空中干燥以得到 固体状的3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苄基)丙酸(0.523g，85％)。检测到MS ESI(-)m/z 312。
实施例F
5-甲氧基-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
把5，5-二甲基吡咯烷-2-酮(0.108g，0.953mmol，如Ganem，B.等人，Tet Lett 26：6413(1985)中所描述的来制备)溶解在THF(3mL)中并且冷却至 -20℃。把溶液用LHMDS(1.05mL，1.05mmol)处理，并且在-20℃搅拌30分 钟。加入二碳酸二叔丁酯(0.250g，1.14mmol)，并且允许反应混合物升温至 环境温度。在环境温度下把反应搅拌两小时，并且然后用饱和NH4Cl骤冷， 用乙酸乙酯稀释并且分离。把有机层用饱和NH4Cl、饱和NaHCO3、饱和NaCl 洗涤，在Na2SO4上干燥并且在真空中浓缩为油。使粗产物经受SiO2色谱法， 并用4∶1己烷/乙酸乙酯洗脱。回收固体状的2，2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯(在4∶1己烷/乙酸乙酯中，0.11的Rf)(43％)。1H NMR(CDCl3，400MHz) δ2.48(t，J＝7.8，2H)，1.85(t，2H)，1.54(s，9H)，1.47(s，6H)。
把DIBAL-H(73.65mL，110.5mmol，1.5M在甲苯中)分部分加入2，2- 二甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(23.10g，108.3mmol)在被冷却至-78℃ 的干燥Et2O(200mL)中的溶液中。在-78℃把反应搅拌1小时，并且然后允 许升温至室温并且搅拌过夜。把反应用NH4OH(50mL)骤冷，并且搅拌20 分钟。然后用EtOAc(200mL)稀释反应，加入0.5M罗谢尔盐(100mL)，并 且分离各层。把有机部分用0.5M罗谢尔盐(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤， 干燥(MgSO4)并且浓缩为油。把油加入对甲苯磺酸一水合物(2.06g，10.8 mmol)在MeOH(200mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌过夜。然后把反应 浓缩，加入EtOAc(200mL)中，用饱和Na2CO3(2×100mL)、盐水(50mL)洗 涤，干燥(MgSO4)并且浓缩以得到油状的5-甲氧基-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯(24.07g，收率96.9％)。
实施例G
(S)-2-(4-溴苯基)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)乙酸
在甲苯(30mL)和三乙胺(10.2mL，73.0mmol)中结合2-(4-溴苯基)乙酸 (7.85g，36.5mmol)和(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮(3.23g，18.3mmol)。然后把溶 液加热至80℃，并且缓慢地加入新戊酰氯(4.49mL，36.5mmol)在甲苯(7.5 mL)中的溶液。把反应加热至110℃并且搅拌过夜。然后把反应冷却，并且 把甲苯溶液用2N HCl、水、5％Na2CO3、盐水洗涤，并且然后在Na2SO4上干燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱法提纯残留物，以得到固体状的(R)-4- 苄基-3-(2-(4-溴苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(5.65g，83％)。
在-78℃把在甲苯中的TiCl4(3.52mL，3.52mmol)加入(R)-4-苄基-3-(2-(4- 溴苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(1.26g，3.35mmol)在DCM(30mL)中的溶液中。 然后把DIEA(0.64mL，3.69mmol)加入冷的搅拌溶液中。在-78℃搅拌反应 15分钟，然后加入5-甲氧基-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.00g，4.36 mmol，参见实施例F)在DCM(10mL)中的溶液。然后使反应升温至-10℃并 且搅拌2小时。用饱和NH4Cl溶液(20mL)骤冷反应，并且把有机部分分离， 在硫酸钠上干燥，过滤并且浓缩。通过柱色谱法提纯所得到的残留物，以 得到固体状的(S)-5-((R)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-溴苯基)-2- 氧代乙基)-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.63g，85％)。
把30％H2O2(0.67mL，7.0mmol)加入LiOH-H2O(0.24g，5.60mmol)在 THF/水(2∶1，93mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌溶液10分钟。然后把 溶液冷却至0℃并且用(S)-5-((R)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-溴 苯基)-2-氧代乙基)-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.60g，2.80mmol)在 THF(10mL)中的溶液处理。在0℃把反应搅拌2小时，并且允许升温至室温 并且搅拌过夜。然后把反应冷却至0℃，并且用1M Na2SO3(10mL)处理并 且搅拌10分钟。然后使反应升温至室温并且搅拌10分钟。接着把反应浓 缩并且用EtOAc(2×20mL)萃取。然后把水层用1N HCl酸化至约1至约2 的pH，并且用DCM(2×20mL)萃取。把结合的DCM部分在硫酸钠上干燥， 过滤，并且浓缩以得到固体状的(S)-2-(4-溴苯基)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰 基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)乙酸(1.01g，收率87％)。检测到MS ESI(+)m/z 412。
实施例H
(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)-2-(4-氯-3-氟苯基) 乙酸
在0℃把2-(4-氯-3-氟苯基)乙酸(1.00g，5.30mmol)溶解在THF(14mL) 中，并且用三乙胺(0.81mL，5.8mmol)处理。然后把新戊酰氯(0.69mL，5.6 mmol)加入溶液中，并且允许在0℃搅拌混合物一小时。在单独的烧瓶中， 在-78℃把(R)-4-苄基噁唑烷-2-酮(0.987g，5.57mmo1)溶解在THF(14mL)中， 并且用n-BuLi(2.54mL，5.83mmol)处理。在-78℃把上述的阴离子溶液搅拌 20分钟并且然后用套管引入酐中。然后允许在-78℃搅拌反应一小时，并且 然后升温至0℃，持续两小时。把混合物通过加入饱和NH4C1溶液(20mL)骤 冷，并且在真空中浓缩。然后把所得到的残留物在乙酸乙酯和水之间分配。 用乙酸乙酯萃取水层一次，并且把有机部分结合，用盐水洗涤，分离，在 MgSO4上干燥，过滤，并且在真空中浓缩。通过柱色谱法(3∶1己烷∶乙酸乙酯) 提纯所得到的残留物，以得到油状的(R)-4-苄基-3-(2-(4-氯-3-氟苯基)乙酰基) 噁唑烷-2-酮(0.95g，51％)，(R)-4-苄基-3-(2-(4-氯-3-氟苯基)乙酰基)噁唑烷-2- 酮刚静置就固化。
把在甲苯中的TiCl4(7.79mL，7.79mmo1)加入(R)-4-苄基-3-(2-(4-氯-3-氟 苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(2.58g，7.42mmo1)在DCM(60mL)中的溶液中。把 DIEA(1.42mL，8.16mmol)加入该搅拌的冷溶液中，然后加入5-甲氧基-2，2- 二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.21g，9.65mmo1)在DCM(20mL)中的溶液。 在-78℃把反应搅拌15分钟并且然后升温至-10℃并且搅拌3小时。用饱和 NH4C1溶液(20mL)骤冷反应，并且把有机层分离且在硫酸钠上干燥。在除 去溶剂之后，通过柱色谱法提纯所得到的残留物，以得到固体状的 (S)-5-((R)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-溴苯基)-2-氧代乙基)-2，2- 二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.62g，65％)。
把30％H2O2(0.159mL，1.65mmo1)加入LiOH-H2O(0.055g，1.32mmo1) 在2∶1的THF∶H2O(40mL)中的溶液中。把混合物搅拌20分钟并且然后冷却至 0℃。接着缓慢地加入(S)-5-((S)-2-((R)-4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-1-(4-氯-3- 氟苯基)-2-氧代乙基)-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.360g，0.660mmo1) 在THF(3mL)中的溶液。当加入完成后，允许反应升温至室温并且搅拌过夜。 然后把反应混合物再冷却至0℃，并且加入1M Na2SO3(4mL)。在0℃搅拌反 应10分钟并且然后升温至室温并且搅拌另外的10分钟。然后在真空中把反 应浓缩至除去THF，并且用EtOAc洗涤所得到的混合物。然后把有机部分在 硫酸钠上干燥，过滤并且浓缩以得到粉末状的(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰 基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)-2-(4-氯-3-氟苯基)乙酸钠盐(0.24g，94％)。检测 到MS ESI(+)m/z 386。
实施例I
5-环丙基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
把1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(10.00g，39.17mmol， 如在WO 2007/103308中所描述的来制备)在无水乙醇(220mL)中的溶液冷 却至0℃，用溴(2.15mL，43.09mmol)逐滴处理，并且在0℃搅拌30分钟。 然后除去冰浴，并且允许混合物升温至室温。30分钟之后，把水(150mL) 和浓HCl(10mL)加入浆料中，并且在室温下搅拌混合物10分钟。把所形成 的固体过滤，并且用水(3×20mL)洗涤，然后用EtOH(2×20mL)洗涤。把所 收集的固体与CH3CN一起研磨(triturate)，过滤，用另外的CH3CN(2×10mL) 洗涤，并且空气干燥以提供固体状的5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-醇(10.90g，收率83％)。LCMS(APCI+)m/z 333.9(M+H)+，保留时 间＝2.33分钟。
在室温下把5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(10.85g， 32.5mmol)在DMF(130mL)中的溶液逐滴加入氢化钠(60％在矿物油中，1.56 g，39mmol)在DMF(70mL)中的搅拌悬浮液中。当加入完成后，在40℃搅 拌混合物30分钟。把所得到的溶液冷却至室温并且用1，1，1-三氟-N-苯基 -N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(13.92g，38.96mmol)处理。1小时之后，在 搅拌下把固体哌嗪-1-羧酸叔丁酯(13.3g，71.43mmol)分2部分加入，并且 在80℃搅拌混合物1.5小时。允许所得到的混合物冷却至室温，过夜。然 后把用饱和NH4Cl溶液(100mL)、水(50mL)和EtOAc(250mL)加入反应混 合物中。分离各相，并且用EtOAc(2×50ml)萃取水层。把结合的有机相用 水(1×50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩。从沸腾的 EtOAc(～30mL)和己烷(～10mL)结晶所获得的残留物。把所形成的固体过 滤，用另外的己烷(2×10mL)洗涤，并且干燥以提供固体状的4-(5-溴-1-(4- 甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(14.8g，收率 91％)。LCMS(APCI+)m/z 504(M+H)+，保留时间＝4.56分钟。
把溴化环丙基锌(II)(cyclopropylzinc(II)bromide)(2.5mL，2.49mmol)在 N2下加入4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(500mg，0.995mmol)和Pd(PPh3)4(86mg，0.075mmol)在THF(5mL) 中的溶液中。把反应混合物在75℃(油浴)下在N2气氛下加热18小时。然后允 许反应混合物冷却至室温并且把其倒入饱和NH4Cl水溶液(50mL)中并且用 EtOAc(3×50mL)萃取。把结合的有机层干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中 浓缩。通过在Biotage SP4单元上的使用15％-90％CH3CN/水梯度(14CV)的 C-18反相色谱法(Biotage 25M+)提纯所获得的残留物。合并含有产物的部 分，并且除去溶剂。从CH3CN(3×20mL)蒸发残留物，并且把其干燥以提供 固体状的4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 羧酸叔丁酯(275mg，收率60％)。LCMS(APCI+)m/z 464.2(M+H)+，Rt＝4.32 分钟。
用25％TFA/CH2Cl2处理4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(275mg，0.593mmol)30分钟。然后在真空中 除去溶剂，并且从甲苯(3×10mL)蒸发残留物以提供粗物质5-环丙基-1-(4-甲 氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶TFA盐(220mg，收率102％)。 LCMS(APCI+)m/z 364.1(M+H)+，Rt＝2.61分钟。
把纯的TFA(10mL)加入5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶(215mg，0.592mmol)中，并且在回流下搅拌混合物2小时。 然后在减压下除去TFA，并且从CH2Cl2(2×50mL)蒸发油状残留物。把在乙 醚中的2M HCl(10mL)加入残留物中，并且超声处理几分钟以得到固体。 然后除去溶剂，并且从另外的在乙醚中的2M HCl(10mL)蒸发所获得的残留 物。与Et2O一起研磨所得到的残留物，并且把所形成的固体过滤，用乙醚(2×5 mL)洗涤，并且干燥以提供固体状的5-环丙基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶盐酸盐(183mg，收率95％)。LCMS(APCI+)m/z 244.1(M+H)+，保留时 间＝1.66分钟。
实施例J
5-环丙基-3-碘-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
在室温下搅拌5-环丙基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(2.3 g，7.27mmol，参见实施例I)、二碳酸二叔丁酯(3.17g，14.5mmol)和N-乙 基-N-异丙基丙-2-胺(5.1mL，29mmol)在CH2Cl2(100mL)中的混合物90分 钟。然后除去溶剂。把所获得的残留物溶解在THF/MeOH(10∶1，100mL) 中并且用在水(10mL)中的氢氧化锂水合物(916mg，21.8mmol)处理。18小 时之后，在真空中除去溶剂。把残留物溶解在EtOAc(150mL)中，并且用水 (2×30mL)洗涤有机层。分离各层，并且把有机层干燥(MgSO4)，过滤并且 在真空中浓缩。把残留物溶解在THF∶MeOH(100mL)中并且用在水(10mL) 中的LiOH·H2O(610mg，14.53mmol)再处理18小时。然后在真空中除去溶 剂，并且把残留物溶解在EtOAc(250mL)中。把所得到的有机层用水(2×50 mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩以提供固体状的粗物质 4-(5-环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.48g，收率 59％)。LCMS(APCI+)m/z 344.1(M+H)+。
用碘(2.13g，8.39mmol)处理4-(5-环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.44g，4.2mmol)和粉末状氢氧化钾(692mg，10.5mmol) 在DMF(20mL)中的混合物，并且在60℃加热混合物5小时。把混合物冷却 至室温，用EtOAc(200mL)稀释，并且用饱和Na2S2O3溶液(2×20mL)和水 (2×50mL)依次洗涤。把有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中 浓缩以提供固体状的粗物质4-(5-环丙基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-羧酸叔丁酯(2g，收率102％)。LCMS(APCI+)m/z 470.1(M+H)+。
在室温下搅拌4-(5-环丙基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(200mg，0.426mmol)和在二氧六环中的4M HCl(4mL)的混合物2 小时。然后在真空中除去溶剂，并且把残留物与CH3CN一起研磨。把所形 成的固体过滤，用Et2O洗涤，并且干燥以提供固体状的5-环丙基-3-碘-4-(哌 嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(179mg，收率95％)。1H NMR(400 MHz，d6-DMSO)δ9.47(br s，2H)，8.32(s，1H)，3.67-3.62(m，4H)，3.42-3.35(m， 4H)，2.09-2.03(m，1H)，1.07-1.01(m，2H)，0.80-0.76(m，2H)；LCMS(APCI+) m/z 370(M+H)+，保留时间＝1.87分钟。
实施例K
5-环丙基-3-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
在室温下搅拌5-环丙基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐 (2.30g，7.27mmol)、二碳酸二叔丁酯(3.17g，14.5mmol)和N-乙基-N-异丙 基丙-2-胺(5.08mL，29.1mmol)在CH2Cl2(100mL)中的混合物90分钟。除去 溶剂。把反应混合物溶解在THF/MeOH(10∶1，100mL)中，用氢氧化锂(0.916 g，21.8mmol)在水(10mL)中的溶液处理，并且在室温下搅拌过夜。浓缩反 应，并且把残留物溶解在EtOAc(150mL)中并且用水(2×30mL)洗涤。分离各 层，并且把有机层干燥(MgSO4)，过滤，并且浓缩以提供固体状的粗产物4-(5- 环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.48g，4.31mmol， 收率59％)。
用碘(2.13g，8.39mmol)处理4-(5-环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-羧酸叔丁酯(1.44g，4.19mmol)和粉末状氢氧化钾(0.692g，10.5mmol) 在DMF(20mL)中的混合物，并且在60℃加热混合物5小时。把混合物用 EtOAc(200mL)稀释，并且用饱和Na2S2O3溶液(2×20mL)和水(2×50mL)依次 洗涤。把有机层分离，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩以提供固体 状的粗物质4-(5-环丙基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (2.01g，4.28mmol，收率100％)。
在室温下把1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(0.734，4.69mmol)缓慢地加入4-(5- 环丙基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.00g，4.26 mmol)和碳酸钾(0.883g，6.39mmol)在DMF(30mL)中的搅拌混合物中，并 且然后搅拌反应2小时。把EtOAc(200mL)和水(100mL)加入混合物中，并且 分离各相。把有机悬浮液用水(3×50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且 在真空中浓缩，以提供油状的粗物质。通过用15％EtOAc/己烷洗脱的硅胶快 速色谱法(Biotage Flash 40M+)来提纯残留物，以提供固体状的4-(5-环丙基 -3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.44 g，收率57％)。
把4-(5-环丙基-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(0.35g，0.59mmol)、Cu(I)I(113mg，0.59mmol)、在Al2O3上 的KF(40％)(241mg，4.15mmol)、1，10-菲咯啉(107mg，0.59mmol)和 MeOH(1.2026mL，29.688mmol)放入甲苯(3mL)中，在氩气下脱气，并且然 后加热至110℃，过夜。然后把反应冷却至室温。加入EtOAc，并且把反应 通过硅藻土过滤并且用EtOAc洗涤。然后浓缩滤液，并且通过柱色谱法(1∶1 己烷∶EtOAc)提纯所得到的残留物，以得到产物4-(5-环丙基-3-甲氧基-1-(4- 甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.21g，收率 71％)。
把4-(5-环丙基-3-甲氧基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.300g，0.608mmol)放入DCM(5mL)中。然后加入 TFA(1.5mL)，并且在室温下搅拌反应1小时。然后把反应浓缩至干燥以得到 粗产物5-环丙基-3-甲氧基-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶(0.239g，定量)，其不经进一步的提纯就被用于下一步骤。
把5-环丙基-3-甲氧基-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶(239mg，0.6mmol放入纯的TFA中(5mL)并且加热至100℃，持续15小 时。然后把反应冷却至室温并且浓缩至干燥。把残留物溶解在最少的DCM 中并且加入到在乙醚中的1M HCl的搅拌溶液中。把所得到的黄色固体过滤， 用乙醚洗涤，并且干燥以得到固体状的5-环丙基-3-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(88mg，收率53％)。LCMS(APCI+)m/z 274 (M+H)+。
实施例L
5-环丙基-4-(哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
把4-(5-环丙基-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(300mg，0.5mmol)、2，2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯(0.23mL， 1.8mmol)和CuI(97mg，0.5mmol)放入DMF(5mL)中，并且加热至100℃， 持续1小时。然后把反应冷却至室温，并且加入EtOAc。把反应通过硅藻土 过滤。然后用盐水洗涤滤液。把有机部分干燥，过滤，并且浓缩以得到粗 产物，通过柱色谱法(3∶1己烷∶EtOAc)提纯粗产物以得到产物4-(5-环丙基 -1-(4-甲氧基苄基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(265mg，收率98％)。
在室温下把4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(270mg，0.5mmol)放入DCM(8mL)中。 然后加入TFA(1.5mL)，并且在室温下搅拌反应1小时，并且把反应浓缩至干 燥。然后使粗产物与甲苯(3×)共沸，并且然后在真空管线(vac line)上干燥1 小时以得到粗产物5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-3-(三氟甲 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.2g，收率91％)，其不经进一步的提纯就被使用。
把5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶(0.212g，0.491mmol)放入纯的TFA(3mL)中并且加热至100℃， 持续48小时。然后把反应冷却至室温并且浓缩至干燥。把所得到的残留物 溶解在最少的DCM中并且加入到在乙醚中的1M HCl的搅拌溶液中。把所得 到的固体过滤，用乙醚洗涤，并且干燥以得到固体状的5-环丙基-4-(哌嗪-1- 基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(92mg，收率60％)。LCMS (APCI+)m/z 312(M+H)+。
实施例M
5-环丙基-3-乙基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
把4-(5-环丙基-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(300mg，0.5mmol)、Cu(I)I(5mg，0.02mmol)、PdCl2(PPh3)2(18 mg，0.02mmol)和三乙胺(0.3mL，2.5mmol)放入THF(4mL)中，并且在氩 气下脱气。然后加入乙炔基三甲基硅烷(0.2mL，1.5mmol)，并且在室温下 搅拌反应过夜。然后把反应浓缩至干燥以得到粗产物4-(5-环丙基-1-(4-甲氧 基苄基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(280mg，收率98％)。
在0℃把4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-3-((三甲基甲硅烷基)乙炔 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(280mg，0.50mmol)放入 THF(8mL)中。然后加入TBAF(0.54mL，0.54mmol)，并且在室温下搅拌反 应30分钟。然后把反应倒入饱和Na2CO3中，并且用DCM萃取。把结合的 有机部分干燥，过滤，并且浓缩以得到粗产物，通过柱色谱法提纯粗产物 以得到4-(5-环丙基-3-乙炔基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯(250mg，收率96％)。
把4-(5-环丙基-3-乙炔基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.4mmol)放入MeOH(2mL)中。然后加入 Pd/C(175mg，0.08mmol)，并且在室温下搅拌反应1小时。然后把反应过滤， 并且浓缩以得到4-(5-环丙基-3-乙基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(150mg，收率74％)。
把4-(5-环丙基-3-乙基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-羧酸叔丁酯(0.21g，0.43mmol)放入DCM(5mL)中。然后加入TFA(1.5 mL)，并且在室温下搅拌反应1小时，并且把反应浓缩至干燥。然后使粗产 物与甲苯(3×)共沸，并且干燥以得到粗物质5-环丙基-3-乙基-1-(4-甲氧基苄 基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶(0.16g，收率96％)。
把5-环丙基-3-乙基-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶(200mg，0.5mmol)放入纯的TFA(5mL)中并且加热至80℃，持续15小 时。然后把反应冷却至室温并且然后浓缩至干燥。然后把粗残留物溶解在 最少的DCM中并且加入到在乙醚中的1M HCl的搅拌溶液中。把所得到的 固体过滤，用乙醚洗涤，并且干燥以得到固体状的5-环丙基-3-乙基-4-(哌嗪 -1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(110mg，收率79％)。LCMS(APCI+)m/z 272(M+H)+。
实施例N
2-(1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)乙酸
把5，5-二甲基吡咯烷-2-酮(33.9g，300.3mmol)在干燥THF(300mL)中的 溶液冷冻至-20℃，然后加入LHMDS(330.4mL，330.4mmol)(1M THF)。允 许在-20℃搅拌溶液30分钟，然后加入二碳酸二叔丁酯(72.1g，330.4mmol) 在THF(20mL)中的溶液。允许反应升温至室温并且搅拌15小时。把反应用 饱和NH4Cl(50mL)骤冷并且用EtOAc(100mL)稀释。分离各层。把有机部 分用饱和NH4Cl(50mL)、NaHCO3(50mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4) 并且浓缩为深色油。通过柱色谱法(10％在己烷中的EtOAc)提纯得到2，2-二 甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(38.2g，收率60％)。
把DIBAL-H(73.6mL，110.4mmol)(1.5M在甲苯中)分部分加入2，2-二 甲基-5-氧代吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(23.1g，108.3mmol)在被冷却至-78℃的干 燥Et2O(200mL)中的溶液中。在-78℃把反应搅拌1小时，允许升温至室温 并且搅拌15小时。把反应用NH4OH(50mL)骤冷，搅拌20分钟，并且然后 用EtOAc(200mL)和0.5M罗谢尔盐(100mL)稀释。分离各层。把有机部分 用0.5M罗谢尔盐(2×100mL)、盐水(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)并且浓缩 为油。把油加入对甲苯磺酸一水合物(2.0g，10.8mmol)在MeOH(200mL)中 的溶液中，并且在室温下搅拌15小时。把反应浓缩，加入EtOAc(200mL) 中，用饱和Na2CO3(2×100mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥(MgSO4)并且浓缩 为油5-甲氧基-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(24.1g，收率97％)。
把作为1M DCM溶液的TiCl4(1.9mL，1.9mmol)在0℃在N2下加入丙 二酸二甲酯(0.195mL，1.70mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，并且搅拌反 应10分钟。然后缓慢地加入DIEA(0.3mL，1.7mmol)，并且在0℃搅拌反 应另外的30分钟。然后缓慢地逐滴加入5-甲氧基-2，2-二甲基吡咯烷-1-羧酸 叔丁酯(325mg，1.4mmol)的DCM(2mL)溶液，并且在0℃搅拌反应10分 钟。然后加入饱和NH4Cl，并且然后把反应用DCM稀释并且用饱和NaHCO3洗涤。然后把有机部分干燥，过滤，并且浓缩以得到粗产物，通过柱色谱 法(500∶50-500∶90己烷∶EtOAc)提纯粗产物以得到2-(1-(叔丁氧基羰基)-5，5- 二甲基吡咯烷-2-基)丙二酸二甲酯(0.35g，75％)。
把2-(1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)丙二酸二甲酯(220mg， 0.7mmol)放入1∶1THF∶MeOH(3mL)中。然后加入KOH(0.8mL，1.7mmol)， 并且把反应加热至65℃，持续6小时。然后把反应冷却至室温并且浓缩以 除去THF和MeOH。然后把反应用6M HCl酸化并且然后加热至85℃过夜 以实现脱羧。然后把反应冷却至室温并且用固体NaOH碱化(basicify)直到 14的pH。然后加入THF(10mL)和Boc2O(5当量)。把反应在50℃搅拌20 小时并且然后冷却至室温。用DCM萃取反应，并且弃去有机部分。然后含 水部分用10％柠檬酸水溶液酸化至2的pH并且然后用DCM萃取。把结合 的有机部分干燥，过滤，并且浓缩以得到产物2-(1-(叔丁氧基羰基)-5，5-二甲 基吡咯烷-2-基)乙酸(130mg，收率75％)。
实施例O
(E)-5-环丙基-4-(哌嗪-1-基)-3-(2-(吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶
在室温下把1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(0.734mg，4.69mmol)缓慢地加入 4-(5-环丙基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.00g， 4.26mmol，参见实施例J)和碳酸钾(883mg，6.39mmol)在DMF(30mL)中的 搅拌混合物中。2小时之后，把EtOAc(200mL)和水(100mL)加入混合物中， 并且分离各相。把有机悬浮液用水(3×50mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤， 并且在真空中浓缩。通过用15％EtOAc/己烷洗脱的硅胶快速色谱法(Biotage Flash 40M+)来提纯所获得的残留物，以提供固体状的4-(5-环丙基-3-碘-1-(4- 甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.44g，收率 57％)。LCMS(APCI+)m/z 590.1(M+H)+。
在N2下吹扫装有4-(5-环丙基-3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.85mmol)、三乙胺(355μL，2.54mmol)、 Pd2dba3(19.4mg，0.021mmol)、三(邻甲苯基)膦(tri-o-tolylphosphine)(19.4mg， 0.064mmol)和DMF(7mL)的50mL圆底烧瓶(3循环)。加入3-乙烯基吡啶 (270.24mg，1.7mmol)，并且在100℃在N2气氛下搅拌混合物6小时。把反应 混合物冷却至室温，用温的EtOAc(100mL)稀释并且用水(2×30mL)洗涤。分 离各相，并且把有机层干燥(MgSO4)，过滤并且在真空中浓缩。通过用 25％EtOAc/己烷然后50％EtOAc/己烷洗脱的硅胶快速色谱法(Biotage Flash 40S+)来提纯残留物，以提供固体状的(E)-4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄 基)-3-(2-(吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (390mg，收率81％)。LCMS(APCI+)m/z 567.3(M+H)+。
在室温下搅拌(E)-4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-3-(2-(吡啶-3-基)乙烯 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(385mg，0.68mmol)在 25％TFA/CH2Cl2中的溶液。然后在真空中浓缩混合物，并且从甲苯(3×10mL) 蒸发残留物。把TFA(10mL)加入残留物中，并且在60℃搅拌混合物4小时。 然后在真空中除去溶剂，并且从甲苯(20mL)蒸发残留物。把残留物溶解在 CH2Cl2(2mL)中，并且加入Et2O中的2M HCl。在室温下搅拌混合物30分钟。 把所得到的固体过滤并且用另外的Et2O洗涤并且干燥以提供固体状的(E)-5- 环丙基-4-(哌嗪-1-基)-3-(2-(吡啶-3-基)乙烯基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐 (210mg，收率74％)。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ9.76(br s，2H)，9.24(s， 1H)，9.00(d，1H)，8.80(d，1H)，8.30(s，1H)，8.07(dd，1H)，7.93(d，1H)，7.59(d， 1H)，3.78-3.72(m，4H)，3.33-3.26(m，4H)，2.17-2.10(m，1H)，1.06-1.02(m，2H)， 0.83-0.79(m，2H)；LCMS(APCI+)m/z 347.1(M+H)+，保留时间＝2.09分钟。
实施例P
4-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氨基)吡咯烷-2-酮
在75℃(油浴)搅拌4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.55g，2.4780mmol，参见实施例9)、CuI(0.47g， 2.48mmol)、N1，N2-二甲基乙烷-1，2-二胺(0.53mL，4.96mmol)和氨基甲酸叔 丁酯(2.90g，24.78mmol)在二氧六环(50mL)中的混合物6小时。加入水(50 mL)和乙酸乙酯(50mL)，并且把有机层分离，用饱和氯化铵洗涤，干燥(硫 酸钠)并且在真空中浓缩。通过硅胶快速色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)提纯残 留物，以得到固体状的1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-3-胺(1.00g，97％)。把该固体溶解在DCM(20mL)中，并且加入 TFA(4.77mL，62.0mmol)。在室温下搅拌反应4小时。除去溶剂。把残留物 在饱和NaHCO3(30mL)和DCM(40mL)之间分配。把有机层分离，干燥(硫酸 钠)并且在真空中浓缩以得到固体状的1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(1.00g，97％)。LCMS(APCI+)m/z 415(M+H)+。
把TEA(0.34mL，2.41mmol)加入1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(1.00g，2.41mmol)和Boc2O(0.53g，2.41mmol) 在DCM(20mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌1小时。加入水(20mL)，并 且把有机层分离，干燥(硫酸钠)并且在真空中浓缩。通过硅胶快速色谱法提 纯残留物，以得到固体状的4-(3-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.00g，81％)。LCMS(APCI+)m/z 369(M+H)+。
把癸硼烷(0.014g，0.12mmol)加入4-(3-氨基-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基 -1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.20g，0.39mmol)和1-(4- 甲氧基苄基)吡咯烷-2，4-二酮(0.10g，0.47mmol)在MeOH(3mL)和DCM(0.5 mL)中的溶液中，并且在48℃(油浴)搅拌20小时。除去溶剂。把所得到的残 留物溶解在乙酸乙酯(20mL)中，用饱和NaHCO3(10mL)洗涤，干燥(硫酸钠)， 并且在真空中浓缩。通过硅胶快速色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)提纯残留物， 以得到固体状的4-(1-(4-甲氧基苄基)-3-(1-(4-甲氧基苄基)-5-氧代吡咯烷-3- 基氨基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.20g， 70％)。LCMS(APCI+)m/z 718(M+H)+。
把TFA(0.52mL，6.79mmol)加入4-(1-(4-甲氧基苄基)-3-(1-(4-甲氧基苄 基)-5-氧代吡咯烷-3-基氨基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(0.195g，0.27mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌1 小时。除去溶剂。把残留物溶解在TFA(4mL)中并且在100℃在密封管中加 热过夜。除去TFA。把残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的 HCl(1mL)。通过过滤收集所形成的固体，以得到固体状的4-(5-苯基-4-(哌嗪 -1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氨基)吡咯烷-2-酮盐酸盐(0.20g，收率 98％)。
实施例Q
(E)-3-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)丙烯酸甲酯
在室温下搅拌5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(8.8g， 25mmol，参见实施例1)、二碳酸二叔丁酯(6g，27.5mmol)和N-乙基-N-异 丙基丙-2-胺(18mL，100mmol)在THF(100mL)中的混合物90分钟。然后把 LiOH·H2O(25mmol)在水(4mL)中的溶液加入反应中。30分钟之后，在真空 中浓缩混合物。把所得到的残留物溶解在EtOAc(200mL)中并且用水(3×50 mL)洗涤。把有机相分离，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩。反应 并没有进行完全。因此，把粗产物溶解在THF(150mL)中，用在水(15mL) 中的LiOH·H2O(4.39g，4当量)再处理，并且在室温下搅拌18小时。然后 在真空中浓缩混合物，并且把残留物溶解在EtOAc(300mL)中并且用水 (2×50mL)洗涤。分离各相，并且把有机层干燥(MgSO4)，过滤并且在真空 中浓缩。把所获得的残留物从EtOAc结晶，以提供固体状的4-(5-苯基-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.75g，收率49％)。LCMS (APCI+)m/z 380.1(M+H)+，保留时间＝3.66分钟。
用碘(3.93g，15.5mmol)处理4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(3g，7.75mmol)和粉末状氢氧化钾(1.28g，19.4mmol)在 DMF(20mL)中的混合物，并且在60℃加热混合物。4小时之后，把混合物 冷却至室温并且用粉末状KOH(700mg，10.7mmol)和I2(1.97g，7.75mmol) 处理。在60℃搅拌混合物1小时。把混合物冷却至室温，用EtOAc(200mL) 稀释，并且用饱和Na2S2O3溶液(2×20mL)和水(2×50mL)依次洗涤。把有机 层分离，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩。把所获得的残留物从沸 腾的CH3CN结晶，以提供固体状的4-(3-碘-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.12g，收率79.7％)。LCMS(APCI+)m/z 506(M+H)+， 保留时间＝4.04分钟。
在室温下把1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(1mL，7.36mmol)缓慢地加入4-(3- 碘-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.1g，6.134mmol) 和K2CO3(1.27，9.2mmol)在DMF(30mL)中的搅拌混合物中。2小时之后， 把EtOAc(200mL)和水(100mL)加入混合物中，并且在加热下分离各相。在 加热下用水(3×50mL)洗涤所得到的有机悬浮液。在真空中浓缩最终有机相， 而不在MgSO4上干燥，以防止产物的损失。与CH3CN一起研磨残留物，并 且把所形成的固体过滤，用CH3CN(2×10mL)洗涤，并且在高真空下干燥， 以提供固体状的4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.65g，收率69％)。LCMS(APCI+)m/z 626.1(M+H)+， 保留时间＝4.96分钟。
在N2下吹扫装有4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.8mmol)、三(邻甲苯基)膦(18.25mg， 0.06mmol)、Pd2dba3(18.3mg，0.02mmol)、三乙胺(334μL，2.4mmol)和DMF(7 mL)的50mL圆底烧瓶(3循环)。接着，加入丙烯酸甲酯(216μL、2.4mmol)， 并且在100℃在N2气氛下搅拌混合物18小时。把反应混合物冷却至室温， 用EtOAc(50mL)稀释并且加入水(100mL)。分离各相，并且把有机层用水 (3×30mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩。把所获得的残 留物从CH3CN结晶，以提供固体状的(E)-4-(3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯 基)-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (390mg，84％收率)。LCMS(APCI+)m/z 584.2(M+H)+，保留时间＝4.96分 钟。
在室温下搅拌(E)-4-(3-(3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯基)-1-(4-甲氧基苄基)-5- 苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(380mg，0.65mmol)在 25％TFA/CH2Cl2中的溶液。接着，除去溶剂，并且从甲苯(2×30mL)蒸发残 留物。把纯的TFA(10mL)加入所得到的残留物中，并且在60℃加热4小时。 在真空中除去TFA，并且从甲苯(2×10mL)蒸发残留物。把在乙醚中的2M HCl(5mL)加入残留物中，并且超声处理混合物几分钟。把所形成的固体过 滤，用乙醚(3×10mL)洗涤，并且在高真空下干燥6小时以提供固体状的 (E)-3-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基)丙烯酸甲酯盐酸盐 (300mg，收率106％)。LCMS(APCI+)m/z 364.1(M+H)+，保留时间＝2.61 分钟。
实施例R
(Z)-3-(2-(1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶
把4-乙炔基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑(0.068g，0.32mmol)加入4-(3-碘 -1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.10g，0.16mmol)、Cu(I)I(0.0015g，0.008mmol)、PdCl2(PPh3)2(0.0056g， 0.008mmol)和TEA(0.11mL，0.80mmol)在THF(10mL)中的溶液中，并且在 40℃搅拌18小时。加入水(10mL)和乙酸乙酯(20mL)。把有机层分离，用盐 水洗涤，干燥(硫酸钠)并且在真空中浓缩。通过快速色谱法(己烷∶乙酸乙酯 ＝5∶1)提纯所获得的残留物，以得到固体状的4-(1-(4-甲氧基苄基)-3-((1-(4-甲 氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(0.134g，95％)。LCMS(APCI+)m/z 710(M+H)+。
使4-(1-(4-甲氧基苄基)-3-((1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)乙炔基)-5- 苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.12g，0.169mmol)、 喹啉(0.011g，0.085mmol)和林德拉催化剂(0.18g，0.085mmol)在MeOH(3 mL)和苯(3mL)中的溶液充满1个大气压的H2，并且在室温下搅拌6小时。 催化剂通过过滤来除去，并且用乙酸乙酯洗涤。在真空中浓缩滤液，并且 通过硅胶快速色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)提纯所获得的残留物，以得到固体 状的(Z)-4-(1-(4-甲氧基苄基)-3-(2-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-4-基)乙烯 基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.089g，74％)。
把在DCM(1mL)中的(Z)-4-(1-(4-甲氧基苄基)-3-(2-(1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑-4-基)乙烯基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(0.084g，0.12mmol)加入TFA(0.5mL)中，并且在室温下搅拌1小时。 除去溶剂。把残留物溶解在TFA(4mL)中并且在78℃(浴)在密封管中加热过 夜。除去溶剂。把残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的2N HCl(1mL)。通过过滤收集所形成的固体，以得到固体状的(Z)-3-(2-(1H-吡唑 -4-基)乙烯基)-5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(0.051g， 97％)。
实施例S
5-环丁基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶
在-78℃把在庚烷中的1.7M t-BuLi(1.23mL，2.09mmol)加入4-(5-溴 -1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.50g， 1.00mmol)在THF(5mL)中的溶液中。在-78℃搅拌反应30分钟，并且加入环 丁酮(0.23mL，2.99mmol)。允许反应混合物升温至室温并且搅拌1小时。加 入饱和NH4Cl(10mL)，用乙酸乙酯(30mL)萃取，用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)， 并且在真空中浓缩。把残留物悬浮在三乙基硅烷(2.31g，19.9mmol)中，并 且加入TFA(2mL)。1小时之后，除去溶剂，并且把残留物溶解在TFA(5mL) 中并且在68℃加热5小时。除去溶剂。把残留物溶解在DCM(10mL)中，并 且加入Boc2O(0.434g，1.99mmol)。在室温下搅拌反应1小时。除去溶剂。 把残留物溶解在THF(5mL)中，并且加入在水中的2N LiOH(5mL)。在室温 下搅拌2小时。加入乙酸乙酯(50mL)。把有机层分离，用盐水洗涤，干燥(硫 酸钠)并且在真空中浓缩。把所获得的残留物通过硅胶快速色谱法(己烷∶乙 酸乙酯＝1∶1)提纯，以得到固体。把固体溶解在EtOH(10mL)中，并且加入10％ Pd/C(0.11g，0.10mmol)。使混合物中充满50psi氢气，并且摇晃6小时。通 过过滤除去催化剂，并且在真空中浓缩。通过快速色谱法(己烷∶乙酸乙酯 ＝1∶1)提纯所获得的残留物，以得到固体状的4-(5-环丁基-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.14g，39％)。LCMS(APCI+)m/z 358(M+H)+。
把TFA(0.60mL，7.83mmol)加入4-(5-环丁基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.14g，0.39mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，并且 在室温下搅拌1小时。除去溶剂。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL) 中，并且加入在乙醚中的2N HCl(2mL)。通过过滤收集所形成的固体，以 得到5-环丁基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶盐酸盐(0.125g，97％)。
实施例1
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)-1-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
在0℃把溴(1.39mL，27.03mmol)在5分钟内逐滴加入1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(6.00g，23.50mmol，如WO 2007/103308中所 描述的制备)在无水乙醇(60mL)中的溶液中。在0℃搅拌反应1小时。然后加 入5％碳酸氢钠溶液(100mL)，并且浓缩混合物以得到浆料。接着用1N HCl 把pH调节至4的pH。把所得到的固体通过过滤收集并且干燥。然后把固体悬 浮在乙醚(50mL)中，搅拌10分钟，通过过滤收集，并且干燥，以得到5-溴-1-(4- 甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(6.8g，87％)。检测到MS ESI(+)m/z 334。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ12.68(s，1H)，8.34(s，1H)，8.13(s，1H)， 7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，5.47(s，2H)，3.70(s，3H)。
把在DMF(5mL)中的NaH(0.144g，3.59mmol)逐滴加入5-溴-1-(4-甲氧 基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(1.00g，2.99mmol)在二甲基甲酰胺 (“DMF”)(10mL)中的溶液中。然后把反应混合物升温至40℃并且搅拌30分 钟。在冷却至室温之后，加入1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰 胺(1.28g，3.59mmol)并且在室温下搅拌1小时。然后加入哌嗪-1-羧酸叔丁 酯(1.23g，6.58mmol)。把混合物升温至80℃并且搅拌1小时。然后把反应冷 却至室温，并且加入饱和氯化铵溶液(30mL)。把反应混合物用乙酸乙酯 (2×20mL)萃取并且在硫酸钠上干燥、过滤并且浓缩。通过柱色谱法(己烷∶ 乙酸乙酯，5∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.23g，82％)。检测到 MS ESI(+)m/z 504.3。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.42(s，1H)，8.28(s，1H)， 7.17(d，J＝8.8Hz，2H)，6.82(d，J＝8.8Hz，2H)，5.48(s，2H)，3.66(s，3H)，3.49(m， 8H)，1.40(s，9H)。
把4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(0.50g，0.995mmol)、苯基硼酸(0.182g，1.49mmol)、Pd(PPh3)4(0.115 g，0.0995mmol)和Cs2CO3(1.30g，3.98mmol)放入二氧六环：H2O(8mL，3∶1) 中。把溶液加热至80℃，持续6小时。然后加入乙醚(50mL)和H2O(20mL)。 把有机层分离，用盐水洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并且浓缩。通过柱色 谱法(DCM∶乙酸乙酯＝5∶1)提纯所得到的残留物，以得到泡沫固体状的 4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.442g，89％)。检测到MS ESI(+)m/z 500.4。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ 8.26(s，1H)，8.10(s，1H)，7.51(m，2H)，7.44(m，2H)，7.32(m，1H)，7.20(d， J＝8.4Hz，2H)，6.83(d，J＝8.4Hz，2H)，5.50(s，2H)，3.67(s，3H)，3.23(m，4H)， 3.20(m，4H)。
把4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(0.440g，0.881mmol)在DCM(5mL)中的溶液加入TFA(1mL)中并且 在室温下搅拌1小时。然后把反应浓缩至干燥并且在真空下干燥1小时。 然后加入TFA(3.39mL，44.0mmol)并且在65℃搅拌混合物4小时。然后把 反应浓缩至干燥，并且把所得到的残留物溶解在DCM(3mL)中。然后加入 在乙醚中的HCl(2mL，2N)和乙醚(10mL)，并且通过过滤收集所得到的固 体，以得到5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.29g， 75％)。检测到MS ESI(+)m/z 280.1。
把DIEA(0.111mL，0.636mmol)加入5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.070g，0.159mmol)、(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨 基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.0543g，0.159mmol，参见实施例B)和O-(苯并三唑 -1-基)-N，N，N，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(“TBTU”)(0.0613g，0.191mmol)在 DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌1小时。然后把混合物直接装 载到二氧化硅柱上，并且通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯，以得到固 体状的(S)-2-(4-氯苯基)-3-氧代-3-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-基)丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。然后把固体溶解在DCM(1mL)中， 并且加入TFA(0.2mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且浓缩至干燥。把 所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL， 2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到(S)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨 基)-1-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐 (0.044g，48％)。检测到MS ESI(+)m/z 503.4。
实施例2
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-(3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮
在80℃加热4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(0.30g，0.597mmol，参见实施例1)、3-氟苯基硼酸(0.125g， 0.896mmol)、Pd(PPh3)4(0.0690g，0.0597mmol)和Cs2CO3(0.778g，2.39mmol) 在二氧六环：H2O(8mL，3∶1)中的溶液6小时。然后加入乙醚(50mL)和H2O(20 mL)。把有机层分离，用盐水洗涤并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后， 通过柱色谱法(DCM∶乙酸乙酯，5∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的 4-(5-(3-氟苯基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(0.25g，81％)。检测到MS ESI(+)m/z 518.4。1H NMR(400Hz，DMSO-d6) δ8.31(s，1H)，8.16(s，1H)，7.51(m，1H)，7.39(m，2H)，7.23(d，J＝8.8Hz，2H)， 7.18(m，1H)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H)，5.53(s，2H)，3.70(s，3H)，3.29(m，4H)， 3.25(m，4H)。
把TFA(1mL)加入在DCM(5mL)中的4-(5-(3-氟苯基)-1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.25g，0.483mmol)中， 并且在室温下搅拌2小时。然后把反应浓缩至干燥并且在真空下干燥3小 时。然后加入TFA(1.86mL，24.2mmol)并且把混合物加热至65℃，持续3 小时。然后把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(2mL)中， 并且加入在乙醚中的HCl(2mL，2M)和乙醚(5mL)。通过过滤收集所得到 的固体，以得到5-(3-氟苯基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐 (0.17g，94％)。检测到MS ESI(+)m/z 298.1。
把DIEA(d 0.742；0.0790mL，0.454mmol)加入5-(3-氟苯基)-4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.070g，0.113mmol)、(S)-3-(叔丁氧基 羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.0388g，0.113mmol，参见实施例B) 和TBTU(0.0437g，0.136mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下 搅拌18小时。然后把混合物直接装载到二氧化硅柱上并且通过色谱法(己烷∶ 乙酸乙酯，1∶1)提纯，以得到固体状的(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-(5-(3-氟苯基)-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。把 固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.2mL)。把混合物在室温下搅拌 1小时并且然后浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并 且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到 (S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-(3-氟苯基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮二盐酸盐(0.022g，32％)。检测到MS APCI(+)m/z 521.4。
实施例3
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮
把DIEA(d 0.742；0.0410mL，0.235mmol)加入5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.0311g，0.0883mmol，参见实施例1)、 (S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸(0.020g， 0.0589mmol，参见实施例C)和TBTU(0.0227g，0.0706mmol)在DCM(1mL) 中的溶液中，并且在室温下搅拌1小时。把混合物直接装载到二氧化硅柱 上并且通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯，以得到固体状的 (S)-2-((S)-1-(4-氯苯基)-2-氧代-2-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-基)乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。然后把固体溶解在DCM(1mL)中，并且 加入TFA(0.2mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且浓缩至干燥。把所得 到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。 通过过滤收集所得到的固体，以得到(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-苯基-1H-吡唑 并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮二盐酸盐(0.008g， 24％)。检测到MS APCI(+)m/z 501.3。
实施例4
(S)-4-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-5-腈
在110℃把4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 羧酸叔丁酯(0.20g，0.398mmol，参见实施例1)、Zn(CN)2(0.0304g，0.259 mmol)、Zn粉(0.00625g，0.0955mmol)、Pd2dba3(0.00729g，0.00796mmol) 和1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁(“dppf”)(0.00883g，0.0159mmol)在二甲基乙酰 胺(“DMA”；5mL)中的溶液加热20小时。然后加入乙醚(50mL)和H2O(20 mL)。把有机层分离，用盐水洗涤并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后， 通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的 4-(5-氰基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.16g，89％)。检测到MS APCI(+)m/z 449.1。1H NMR(400Hz，DMSO-d6) δ8.47(s，1H)，7.20(d，J＝8.8Hz，2H)，6.86(d，J＝8.8Hz，2H)，5.51(s，2H)，3.88 (m，4H)，3.70(s，3H)，3.58(m，4H)。
把TFA(1mL)加入在DCM(5mL)中的4-(5-氰基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡 唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.158g，0.352mmol)中，并且在室 温下搅拌1小时。然后把反应浓缩至干燥并且在真空下干燥3小时。加入 TFA(1.1mL，14.7mmol)，并且把混合物在65℃加热2小时。把反应浓缩至 干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(3mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(2 mL，2M)和乙醚(5mL)。通过过滤收集所得到的固体，以得到4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-腈二盐酸盐(0.091g，70％)。检测到MS APCI(+) m/z 229.1。
把DIEA(d 0.742；0.102mL，0.585mmol)加入4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-5-腈二盐酸盐(0.0661g，0.219mmol)、(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙 基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.050g，0.146mmol，参见实施例B)和 TBTU(0.0564g，0.176mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌 18小时。把混合物直接装载到二氧化硅柱上并且通过色谱法(己烷∶乙酸乙 酯，1∶1)提纯，以得到固体状的(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-(5-氰基-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。把固体溶解在 DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.2mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且浓 缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的 HCl(1mL，2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到(S)-4-(4-(2-(4-氯苯 基)-3-(异丙基氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-腈二盐酸盐 (0.043g，56％)。检测到MS APCI(+)m/z 452.1。
实施例5
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(3-(2-羟基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮
把在DMF(5mL)中的NaH(0.188g，4.70mmol)逐滴加入DMF(10mL)中 的1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(1.00g，3.92mmol，如在WO 2007/103308所描述的制备)中。然后把反应混合物升温至40℃并且搅拌30分 钟。在冷却以室温之后，加入1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰 胺(1.68g，4.70mmol)并且在室温下搅拌1小时。然后加入哌嗪-1-羧酸叔丁 酯(1.61g，8.62mmol)。把反应混合物升温至80℃并且搅拌3小时。然后把反 应冷却至室温，并且加入NH4Cl的饱和溶液(30mL)。把混合物用乙酸乙酯 (2×30mL)萃取并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，用柱色谱法(己烷∶ 乙酸乙酯，5∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的4-(1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.64g，收率99％)。检测 到MS APCI(+)m/z 424.1。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.24(s，1H)，8.13(d， J＝5.2Hz，1H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.84(d，J＝8.4Hz，2H)，6.42(d，J＝5.2Hz， 1H)，5.49(s，2H)，3.69(s，3H)，3.64(m，4H)，3.53(m，4H)。
把TFA(6mL)加入在DCM(30mL)中的4-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.59g，3.754mmol)中，并且在室温下 搅拌1小时。然后把反应浓缩至干燥并且在真空下干燥3小时。加入TFA(8.68 mL，112.6mmol)，并且把混合物在65℃加热2小时。然后把反应浓缩至干 燥。把所得到的残留物加入TFA(10mL)、LiOH溶液(3.8mL，7.5mmol，2N) 和Boc2O(0.98g，4.50mmol)中，并且在室温下搅拌1小时。然后加入乙醚(20 mL)和水(10mL)。把有机层分离，用盐水洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在 除去溶剂之后，用柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)提纯所得到的残留物，以 得到固体状的4-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.55g， 48％)。检测到MS APCI(+)m/z 304.1。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.21(s， 1H)，8.08(d，J＝5.6Hz，1H)，6.37(d，J＝5.6Hz，1H)，3.60(m，4H)，3.54(m，4H)， 2.50(s，9H)。
把I2(0.920g，3.63mmol)加入在DMF(10mL)中的4-(1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.55g，1.81mmol)和KOH(0.305g，5.44 mmol)(用研钵和杵磨碎)中。把所得到的混合物升温至60℃并且搅拌2小时。 然后加入乙醚(20mL)和饱和Na2SO3(10mL)。把有机层分离，用盐水洗涤并 且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)提 纯所得到的残留物，以得到固体状的4-(3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-羧酸叔丁酯(0.45g，58％)。检测到MS APCI(+)m/z 430.0。1H NMR(400 Hz，DMSO-d6)δ8.31(d，J＝5.2Hz，1H)，6.63(d，J＝5.6Hz，1H)，3.63(m，4H)， 3.18(m，4H)，1.44(s，9H)。
把1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(0.219mL，1.61mmol)加入在DMF(10mL)中的 4-(3-碘-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.575g，1.34mmol) 和K2CO3(0.222g，1.61mmol)中。在室温下搅拌反应2小时。加入乙醚(30mL) 和水(10mL)。把有机层分离，用盐水洗涤并且在硫酸钠上干燥。在除去溶 剂之后，通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)提纯所得到的残留物，以得到固 体状的4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(0.59g，80％)。检测到MS APCI(+)m/z 549.7。1H NMR(400Hz，DMSO-d6) δ8.37(d，J＝5.2Hz，1H)，7.21(d，J＝8.4Hz，2H)，6.87(d，J＝8.4Hz，2H)，6.68(d， J＝5.2Hz，1H)，5.53(s，2H)，3.70(s，3H)，3.62(m，4H)，3.19(m，4H)，1.43(s， 9H)。
在120℃搅拌在甲苯(4mL)中的4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.12g，0.218mmol)、Cu(I)I(0.0416g， 0.218mmol)、1，10-菲咯啉(0.0394g，0.218mmol)、2-叔丁氧基乙醇(0.774g， 6.55mmol)和在Al2O3上的KF(40％；0.222g，1.53mmol)40小时。然后把反 应冷却至室温。然后加入乙酸乙酯(10mL)。通过硅藻土的垫过滤反应，并 且将其浓缩至干燥。通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)提纯所得到的残留物， 以得到固体状的4-(3-(2-叔丁氧基乙氧基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.080g，68％)。检测到MS APCI(+)m/z 540.5。
把TFA(1mL)加入在DCM(1mL)中的4-(3-(2-叔丁氧基乙氧基)-1-(4-甲 氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.080g，0.148 mmol)中，并且在室温下搅拌4小时。然后把反应浓缩至干燥并且在真空下 干燥3小时。然后加入TFA(2mL)，并且把混合物在100℃在密封管中加热 18小时。然后把反应冷却至室温并且浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解 在DCM(2mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通过过滤收集所 得到的固体，以得到2-(4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，2-b]吡啶-3-基氧基)乙醇 二盐酸盐(0.050g，100％)。
把DIEA(0.0815mL，0.468mmol)加入在DCM(1mL)中的2-(4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，2-b]吡啶-3-基氧基)乙醇二盐酸盐(0.0472g，0.140mmol)、 (S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.234mL、0.117mmol， 参见实施例B)和TBTU(0.0451g，0.140mmol)中，并且在室温下搅拌1小 时。把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1) 中。加入LiOH溶液(1mL，2M)并且搅拌10分钟。加入乙醚(20mL)。把有 机层分离，用盐水(5mL)洗涤并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过 色谱法(乙酸乙酯)提纯所得到的残留物，以得到固体状的(S)-2-(4-氯苯 基)-3-(4-(3-(2-羟基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙 基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。然后把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入 TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且然后浓缩至干燥。把所得 到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。 除去溶剂，并且把所得到的固体溶解在MeOH(2mL)中。加入LiOH溶液(2 mL，2M)并且搅拌10分钟。然后加入DCM(20mL)和水(10mL)。把有机层 分离，在硫酸钠上干燥并且浓缩，以得到固体状的(S)-2-(4-氯苯 基)-1-(4-(3-(2-羟基乙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基 氨基)丙-1-酮(0.018g，32％)。检测到MS APCI(+)m/z 487.3。
实施例6
(S)-2-(4-氯苯基)-2-((S)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)-1-(4-(5-苯基-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮
把DIEA(0.0475mL，0.273mmol)加入5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.030g，0.0681mmol，参见实施例1)、(S)-2-((S)-1-(叔 丁氧基羰基)-5，5-二甲基吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸(0.0251g，00.0681 mmol，参见实施例D)和TBTU(0.0263g，0.0818mmol)在DCM(1mL)中的溶 液中，并且在室温下搅拌16小时。把混合物直接装载到二氧化硅柱上并且 通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯，以得到固体状的(S)-5-((S)-1-(4-氯苯 基)-2-氧代-2-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙基)-2，2-二 甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.2 mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且然后浓缩至干燥。把所得到的残留 物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通过过滤 收集所得到的固体，以得到(S)-2-(4-氯苯基)-2-((S)-5，5-二甲基吡咯烷-2- 基)-1-(4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮(0.019，46％)。 检测到MS APCI(+)m/z 529.3。
实施例7
(2S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(3-(2，3-二羟基丙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮
在120℃搅拌4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-羧酸叔丁酯(0.12g，0.218mmol，参见实施例5)、Cu(I)I(0.0416g，0.218 mmol)、1，10-菲咯啉(0.0393g，0.218mmol)、(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4- 基)甲醇(0.812mL，6.55mmol)和在Al2O3上的KF(40％；0.222g，1.53mmol) 在甲苯(4mL)中的混合物75小时。然后加入乙酸乙酯(10mL)，并且通过硅 藻土的垫过滤反应。然后把滤液浓缩至干燥。通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯， 1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的4-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环 -4-基)甲氧基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔 丁酯(0.068g，56％)。检测到MS APCI(+)m/z 554.4。
把TFA(1mL)加入在DCM(1mL)中的4-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4- 基)甲氧基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁 酯(0.068g，0.123mmol)中，并且在室温下搅拌2小时。然后把反应浓缩至 干燥并且在真空下干燥1小时。加入TFA(2mL)，并且把混合物在100℃在 密封管中加热20小时。把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在 DCM(1mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通过过滤收集所得到 的固体，以得到3-(4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙-1，2-二 醇二盐酸盐(0.042g，70％)。检测到MS APCI(+)m/z 294.2。
把DIEA(0.0514mL，0.295mmol)加入在DCM(1mL)中的3-(4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙-1，2-二醇二盐酸盐(0.030g，0.0737 mmol)、(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.0252g， 0.0737mmol，参见实施例B)和TBTU(0.0284g，0.0885mmol)中，并且在室 温下搅拌2小时。把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在 THF∶MeOH(2mL，1∶1)中，并且加入LiOH溶液(1mL，2M)。搅拌溶液30 分钟，然后加入乙醚(20mL)。把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在 硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱法(乙酸乙酯∶MeOH，20∶1)提 纯所得到的残留物，以得到固体状的(2S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-(3-(2，3-二羟基丙 氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲酸 叔丁酯。然后把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.4mL)。把混合 物在室温下搅拌1小时并且然后浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在 DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的2N HCl(1mL)。通过过滤收集所得 到的固体，以得到(2S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(3-(2，3-二羟基丙氧基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮二盐酸盐(0.014g，33％)。 检测到MS APCI(+)m/z 517.2。
实施例8
(2R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-(2，3-二羟基丙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
把DIEA(0.0514mL，0.295mmol)加入在DCM(1mL)中的3-(4-(哌嗪-1- 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙-1，2-二醇二盐酸盐(0.030g，0.0737 mmol，参见实施例7)、(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸(0.022g， 0.074mmol)和TBTU(0.0284g，0.0885mmol)中，并且在室温下搅拌1小时。 把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中， 并且加入LiOH溶液(1mL，2M)。搅拌溶液30分钟。然后加入乙醚(20mL)。 把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之 后，通过柱色谱法(乙酸乙酯∶MeOH，20∶1)提纯所得到的残留物，以得到固 体状的(2R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-(2，3-二羟基丙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-基)-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1mL) 中，并且加入TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且然后浓缩至 干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的 HCl(1mL，2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到(2R)-2-氨基-3-(4-氯 苯基)-1-(4-(3-(2，3-二羟基丙氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙 -1-酮(0.010g，25％)。检测到MS APCI(+)m/z 475.2。
实施例9
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)-1-(4-(3-甲氢基-5-苯基-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
把TFA(3mL)加入在DCM(10mL)中的4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.7g，3.40mmol，参见实施例 1)中，并且在室温下搅拌2小时。把反应浓缩至干燥并且在真空下干燥3小时。 然后加入TFA(13.1mL，170mmol)并且把混合物在65℃加热1小时。然后把 反应浓缩至干燥。把所得到的残留物加入TFA(10mL)、LiOH水溶液(6.81 mL、2M)和Boc2O(2.23g，10.2mmol)中，并且在室温下搅拌3天。然后加入 乙醚(50mL)。把有机层分离，用盐水洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去 溶剂之后，通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得 到固体状的4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.1g， 85％)。检测到MS APCI(+)m/z 380.1。
把I2(0.421g，1.66mmol)加入4-(5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(0.63g，0.830mmol)和KOH(0.140g，2.49mmol)(用研钵和杵 磨碎)在DMF(10mL)中的溶液中。把所得到的混合物加热至60℃，持续3小 时。加入乙醚(20mL)和饱和Na2SO3(10mL)。把有机层分离，用盐水洗涤， 并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1) 提纯所得到的残留物，以得到固体状的4-(3-碘-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.40g，95％)。检测到MS APCI(+)m/z 506.2。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.30(s，1H)，7.60(m，3H)，7.49(m，2H)，3.63(m， 4H)，2.95(m，4H)，1.51(s，9H)。
把1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(0.128mL，0.938mmol)加入在DMF(10mL)中 的4-(3-碘-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.395g， 0.782mmol)和K2CO3(0.130g，0.938mmol)中。在室温下搅拌反应2小时。然 后加入乙醚(30mL)和水(10mL)。把有机层分离，用盐水洗涤，并且在硫酸 钠上干燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)提纯所得 到的残留物，以得到固体状的4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.33g，68％)。1H NMR(400Hz，CD2Cl2) δ8.23(s，1H)，7.44(m，3H)，7.33(d，J＝8.8Hz，2H)，7.26(m，2H)，6.84(d，J＝8.8 Hz，2H)，5.59(s，2H)，3.76(s，3H)，3.55(m，4H)，2.86(m，4H)，1.40(s，9H)。
在110℃搅拌在甲苯(4mL)中的4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡 唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.12g，0.192mmol)、Cu(I)I(0.0365 g，0.192mmol)、1，10-菲咯啉(0.0346g，0.192mmol)、甲醇(0.389mL，9.59 mmol)和在Al2O3上的KF(40％；0.195g，1.34mmol)20小时。把反应冷却至 室温。然后加入乙酸乙酯(10mL)，并且通过硅藻土的垫过滤反应混合物。 把滤液浓缩至干燥。通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留 物，以得到固体状的4-(3-甲氧基-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.098g，96％)。检测到MS APCI(+)m/z 530.4。 1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.06(s，1H)，7.46(m，2H)，7.33(m，3H)，7.20(d， J＝8.8Hz，2H)，6.87(d，J＝8.8Hz，2H)，5.38(s，2H)，3.98(s，3H)，3.71(s，3H)， 3.29(m，4H)，2.94(m，4H)，1.37(s，9H)。
把TFA(0.5mL)加入在DCM(2mL)中的4-(3-甲氧基-1-(4-甲氧基苄 基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.098g，0.185 mmol)中，并且在室温下搅拌2小时。然后把反应混合物浓缩至干燥。把所 得到的残留物溶解在TFA(2.85mL，37.01mmol)中，并且在100℃在密封管 中加热5小时。再次把反应混合物浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在 DCM(0.5mL)中，然后加入在乙醚中的HCl(2mL，2N)。通过过滤收集所得 到的固体，以得到3-甲氧基-5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 (0.068g，96％)。检测到MS APCI(+)m/z 310.1。
把DIEA(0.0558mL，0.320mmol)加入在DCM(1mL)中的3-甲氧基-5- 苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.034g，0.080mmol)、 2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(0.0308g， 0.0961mmol)和(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.0274 g，0.080mmol，参见实施例B)中，并且在室温下搅拌1小时。把反应浓缩 至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并且加入LiOH 水溶液(1mL，2M)。搅拌30分钟，并且然后加入乙醚(20mL)。把有机层分 离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过柱 色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的(S)-2-(4- 氯苯基)-3-(4-(3-甲氧基-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧 代丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。然后把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加 入TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌2小时并且浓缩至干燥。把所得到 的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通 过过滤收集所得到的固体，以得到(S)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)-1-(4-(3- 甲氧基-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐 (0.029g，60％)。检测到MS APCI(+)m/z 533.3。
实施例10
((R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-甲氧基-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
把DIEA(0.0558mL，0.320mmol)加入在DCM(1mL)中的3-甲氧基-5- 苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.034g，0.080mmol，参 见实施例9)、(R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸(0.024g，0.080 mmol)和TBTU(0.0308g，0.0961mmol)中，并且在室温下搅拌1小时。然后 把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中， 并且加入LiOH水溶液(1mL，2M)。搅拌20分钟，并且然后加入乙醚(20mL)。 把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之 后，通过色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状 的(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-甲氧基-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-基)-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1mL)中，并且 加入TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌2小时并且然后浓缩至干燥。把 所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL， 2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3- 甲氧基-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮(0.036g，79％)。 检测到MS APCI(+)m/z 491.3。
实施例11
(S)-1-(4-(5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-3-(异 丙基氨基)丙-1-酮
把TFA(0.5mL)加入4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[0.5，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.10g，0.20mmol，参见实施例1)在DCM(2mL) 中的溶液中，并且在室温下搅拌1小时。然后把反应混合物浓缩至干燥。 把所得到的残留物溶解在TFA(3.067mL，39.81mmol)中，并且在60℃加热 3小时。把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并 且加入在乙醚中的HCl(2mL，2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到 5-溴-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.050g，70％)。检测到 MS APCI(+)m/z 282.0。
把DIEA(0.0687mL，0.394mmol)加入在DCM(1mL)中的5-溴-4-(哌嗪 -1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.050g，0.0986mmol)、2-(1H-苯并 [d][1，2，3]三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(0.0380g，0.118mmol)和 (S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.0337g，0.0986mmol， 参见实施例B)中，并且在室温下搅拌16小时。把反应浓缩至干燥。把所得 到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并且加入LiOH溶液(1mL， 2M)。搅拌溶液30分钟，并且然后加入乙醚(20mL)。把有机层分离，用盐 水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱法(己 烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的(S)-3-(4-(5-溴-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲 酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.4mL)。把混合物 在室温下搅拌1小时。再次把反应混合物浓缩至干燥。把所得到的残留物 溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通过过滤收 集所得到的固体，以得到(S)-1-(4-(5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮二盐酸盐(0.030g，53％)。检测到 MS APCI(+)m/z 507.2。
实施例12
(R)-2-氨基-1-(4-(5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-氯苯 基)丙-1-酮
把DIEA(0.0687mL，0.394mmol)加入5-溴-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.050g，0.0986mmol，参见实施例11)、(R)-2-(叔丁氧 基羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸(0.0295g，0.099mmol)和TBTU(0.0380g， 0.118mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌16小时。把反应 浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并且加 入LiOH水溶液(1mL，2M)。搅拌溶液30分钟，并且然后加入乙醚(20mL)。 把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之 后，通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体 状的(R)-1-(4-(5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-氯苯基)-1-氧 代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.4 mL)。把混合物在室温下搅拌1小时，并且把反应浓缩至干燥。把所得到的 残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。通过 过滤收集所得到的固体，以得到(R)-2-氨基-1-(4-(5-溴-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-基)-3-(4-氯苯基)丙-1-酮二盐酸盐(0.015g，29％)。检测到MS APCI(+)m/z 463.1。
实施例13
(S)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨基)-1-(4-(5-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
在0℃把在乙醇(5mL)中的碘(0.547g，2.16mmol)在5分钟内逐滴加入 1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(0.50g，1.96mmol，如在WO 2007/103308中所描述的相似地制备)在无水乙醇(20mL)的溶液中。在0℃搅 拌反应3小时，然后加入5％碳酸氢钠(20mL)。浓缩混合物以得到浆料。然 后用饱和KHSO4把pH调节至4的pH。使用过滤收集所得到的固体并且干燥， 以得到5-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(0.70g，94％)。检 测到MS APCI(+)m/z 382.0。
把在DMF(5mL)中的氢化钠(0.0881g，2.20mmol)逐滴加入在DMF(5mL) 中的5-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(0.70g，1.84mmol) 中。然后把反应混合物升温至40℃并且搅拌30分钟。在冷却至室温之后， 加入1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺酰基)甲磺酰胺(0.787g，2.20mmol) 并且在室温下搅拌1小时。然后加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.787g，4.22mmol) 并且把混合物在80℃搅拌1小时。加入饱和NH4Cl(20mL)，并且把反应用 乙酸乙酯萃取并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱法(己烷∶ 乙酸乙酯，5∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的4-(5-碘-1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.94g，93％)。检测到 MS ESI(+)m/z 550.3。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.64(s，1H)，8.31(s，1H)， 7.20(d，J＝7.6Hz，2H)，6.82(d，J＝7.6Hz，2H)，5.52(s，2H)，3.69(s，3H)，3.56(m， 4H)，3.46(m，4H)，1.44(s，9H)。
在100℃加热4-(5-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(0.150g，0.273mmol)、Cu(I)I(0.0520g，0.273mmol)和2，2-二 氟-2(氟磺酰基)乙酸甲酯(0.122mL，0.956mmol)在DMF(3mL)中的溶液1小 时。把反应冷却至室温。加入乙酸乙酯(10mL)，并且通过硅藻土的垫过滤 反应混合物。把滤液用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。 在除去溶剂之后，通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，3∶1)提纯所得到的残留物， 以得到固体状的4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.114g，85％)。检测到MS APCI(+)m/z 492.3。1H NMR(400Hz，DMSO-d6)δ8.59(s，1H)，8.41(s，1H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H)， 6.82(d，J＝8.4Hz，2H)，5.55(s，2H)，3.70(s，3H)，3.52(m，8H)，1.43(s，9H)。
把TFA(0.5mL)加入4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b] 吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.114g，0.232mmol)在DCM(2mL)中的溶液 中，并且在室温下搅拌1小时。然后把反应浓缩至干燥。把所得到的残留 物溶解在TFA(1.79mL，23.2mmol)中，并且在65℃加热2小时。再次把反 应混合物浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加 入在乙醚中的HCl(2mL，2N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到4-(哌 嗪-1-基)-5-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.075g，94％)。检测 到MS APCI(+)m/z 272.0。
把DIEA(0.0607mL，0.349mmol)加入4-(哌嗪-1-基)-5-(三氟甲基)-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.030g，0.0872mmol)、2-(1H-苯并[d][1，2，3]三 唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(0.0336g，0.105mmol)和(S)-3-(叔丁氧 基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.0298g，0.0872mmol，参见实施例 B)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌2小时。然后把反应浓缩 至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并且加入LiOH 水溶液(1mL，2M)。搅拌溶液30分钟，并且然后加入乙醚(20mL)。把有机 层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通 过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得到固体状的 (S)-2-(4-氯苯基)-3-氧代-3-(4-(5-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-基)丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加 入TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且然后浓缩至干燥。把所 得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。 通过过滤收集所得到的固体，以得到(S)-2-(4-氯苯基)-3-(异丙基氨 基)-1-(4-(5-(三氟甲基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸 盐(0.027g，54％)。检测到MS APCI(+)m/z 495.3。
实施例14
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-(3-氟苯氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮
在106℃搅拌4-(5-碘-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-羧酸叔丁酯(0.100g，0.182mmol，参见实施例13)、Cu(I)Cl(0.00901g， 0.0910mmol)、2，2，6，6-四甲基-3，5-庚二酮 (2，2，6，6-tetramethylheptane-3，5-dione)(0.00950mL，0.0455mmol)、 Cs2CO3(0.119g，0.364mmol)和3-氟苯酚(0.165mL，1.82mmol)在NMP(2mL) 中的溶液20小时。然后把反应冷却至室温，并且加入H2O(5mL)。然后把反 应混合物用乙酸乙酯(15mL)萃取，用盐水洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在 除去溶剂之后，通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，2.5∶1)提纯所得到的残留物， 以得到固体状的4-(5-(3-氟苯氧基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.020g，21％)。检测到MS APCI(+)m/z 534.4。
把TFA(0.5mL)加入在DCM(2mL)中的4-(5-(3-氟苯氧基)-1-(4-甲氧基苄 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.020g，0.0375mmol) 中，并且在室温下搅拌1小时。把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解 在TFA(1mL)中，并且在65℃加热2小时。把反应浓缩至干燥。把所得到的 残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。把反 应浓缩至干燥，以得到固体状的5-(3-氟苯氧基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.014g，99％)。检测到MS APCI(+)m/z 314.1。
把DIEA(0.0271mL，0.155mmol)加入在DCM(1mL)中的5-(3-氟苯氧 基)-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(0.015g，0.0388mmol)、 2-(1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(0.0150g， 0.0466mmol)和(S)-3-(叔丁氧基羰基(异丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸 (0.0337g，0.0388mmol，参见实施例B)中，并且在室温下搅拌30分钟。然后 把反应浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并 且加入LiOH水溶液(1mL，2M)。搅拌反应30分钟，并且然后加入乙醚(20 mL)。把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去 溶剂之后，通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)提纯所得到的残留物，以得 到固体状的(S)-2-(4-氯苯基)-3-(4-(5-(3-氟苯氧基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4- 基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基(异丙基)氨基甲酸叔丁酯。把固体溶解在DCM(1 mL)中，并且加入TFA(0.4mL)。把反应在室温下搅拌30分钟并且浓缩至干 燥。把残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。 通过过滤收集所得到的固体，以得到(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-(3-氟苯氧 基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(异丙基氨基)丙-1-酮(0.006g， 25％)。检测到MS APCI(+)m/z 537.3。
实施例15
(R)-2-氨基-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-((R)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H-吡 唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮
在110℃搅拌在甲苯(4mL)中的4-(3-碘-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡 唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.15g，0.24mmol，参见实施例9)、 Cu(I)I(0 0.046g，0.24mmol)、1，10-菲咯啉(0.043g，0.24mmol)、(R)-(2，2- 二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲醇(0.95g，7.2)和在Al2O3上的KF(40％；0.24g， 1.68mmol)60小时。然后加入乙酸乙酯(10mL)，并且通过硅藻土的垫过滤反 应混合物。然后把反应浓缩至干燥，并且通过柱色谱法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1) 提纯残留物，以得到固体状的(R)-4-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲氧 基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.14g，93％)。检 测到MS APCI(+)m/z 630.2。
把TFA(1mL)加入(R)-4-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲氧 基)-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 (0.14g，0.22mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌所得到的 溶液4小时。然后把反应浓缩至干燥并且在真空下干燥1小时。接着加入 TFA(2mL)，并且把混合物在100℃在密封管中搅拌18小时。然后浓缩反应 至干燥，并且把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中。然后加入在乙醚中 的HCl(2mL，2N)和乙醚(3mL)，并且通过过滤收集所得到的固体，以得到 固体状的(S)-3-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙 -1，2-二醇二盐酸盐(0.105，96％)。检测到MS APCI(+)m/z 370.2。
把DIEA(0.055mL，0.32mmol)加入(S)-3-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑 并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙-1，2-二醇二盐酸盐(0.050g，0.079mmol)、(R)-2-(叔 丁氧基羰基氨基)-3-(4-氯苯基)丙酸(0.024g，0.079mmol)和TBTU(0.031g， 0.095mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌1小时。然后把反 应浓缩至干燥，并且把残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并且加入 LiOH水溶液(1mL，2M)。然后搅拌反应另外的10分钟。加入乙酸乙酯(20 mL)，并且把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在 除去溶剂之后，通过柱色谱法(乙酸乙酯∶MeOH，20∶1)提纯所得到的残留物， 以得到固体状的(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯。然后把 固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌1 小时并且浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入 在乙醚中的HCl(1mL，1N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到(R)-2-氨 基-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡 啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二盐酸盐(0.018g，36％)。检测到MS APCI(+)m/z 551.2。
实施例16
1-(4-(3-((R)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮
把DIEA(0.055mL，0.32mmol)加入(S)-3-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑 并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙-1，2-二醇二盐酸盐(0.050g，0.079mmol，参见实 施例15)、(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)乙酸(0.018g，0.079mmol)和 TBTU(0.031g，0.095mmol)在DCM(1mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌1 小时。然后把反应浓缩至干燥，并且把残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1) 中，并且加入LiOH水溶液(1mL，2M)。搅拌混合物10分钟。然后加入乙酸 乙酯(20mL)，并且把有机层分离，用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干 燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱法(乙酸乙酯∶MeOH，20∶1)提纯所得到的 残留物，以得到固体状的(R)-3-(4-氯苯基)-1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)-5- 苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯。 然后把固体溶解在DCM(1mL)中，并且加入TFA(0.4mL)。把混合物在室温 下搅拌1小时并且浓缩至干燥。把所得到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中， 并且加入在乙醚中的HCl(1mL，1N)。通过过滤收集所得到的固体，以得到 1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮二盐酸盐(0.019g，36％)。检测到MS APCI(+)m/z 481.2。
实施例17
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮
把DIEA(0.055mL，0.32mmol)加入(S)-3-(5-苯基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑 并[3，4-b]吡啶-3-基氧基)丙-1，2-二醇二盐酸盐(0.050g，0.079mmol，参见实 施例15)、(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸(0.027 g，0.079mmol，参见实施例C)和TBTU(0.031g，0.095mmol)在DCM(1mL) 中的溶液中，并且在室温下搅拌1小时。然后把反应浓缩至干燥。把所得到 的残留物溶解在THF/MeOH(2mL，1∶1)中，并且加入LiOH水溶液(1mL，2 M)。搅拌混合物10分钟。然后加入乙酸乙酯(20mL)，并且把有机层分离， 用盐水(10mL)洗涤，并且在硫酸钠上干燥。在除去溶剂之后，通过柱色谱 法(乙酸乙酯∶MeOH，20∶1)提纯残留物，以得到固体状的(R)-3-(4-氯苯 基)-1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪 -1-基)-1-氧代丙-2-基氨基甲酸叔丁酯。然后把固体溶解在DCM(1mL)中，并 且加入TFA(0.4mL)。把混合物在室温下搅拌1小时并且浓缩至干燥。把所得 到的残留物溶解在DCM(0.5mL)中，并且加入在乙醚中的HCl(1mL，2N)。 然后除去溶剂。把残留物溶解在MeOH(3mL)中，并且加入LiOH水溶液(3 mL，2N)。把混合物搅拌5分钟，并且然后用DCM(20mL)萃取并且在硫酸 钠上干燥。除去溶剂提供固体状的(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(3-((S)-2，3-二羟基丙 氧基)-5-苯基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙 酮(0.011g，收率24％)。检测到MS APCI(+)m/z 591.2。
实施例18
(S)-1-(4-(5-氯-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯 基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮
在室温下把NCS(1.57g，11.8mmol)以一部分加入1-(4-甲氧基苄基)-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(3.00g，11.8mmol)在DMF(30mL)中的溶液中。把混 合物在60℃搅拌1小时并且然后冷却至室温。18小时之后，把另一批NCS(0.5 当量)加入反应混合物中并且在室温下搅拌另外的48小时。把反应混合物倒 入水(150mL)中并且用EtOAc(3×50mL)萃取。把结合的有机层用水(50mL) 洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩。通过用2％MeOH/CH2Cl2洗脱的硅胶快速色谱法(Biotage Flash 40M+)来提纯粗物质，以提供5-氯 -1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(466mg，1.61mmol，收率 13.7％)。LCMS(APCI+)m/z 290(M+H)+。
在室温下把5-氯-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-醇(450mg， 1.55mmol)在DMF(5mL)中的溶液逐滴加入氢化钠(60％在矿物油中的分散 体，74.5mg，1.86mmol)在DMF(5mL)中的悬浮液中。在40℃搅拌混合物30 分钟。把所得到的溶液冷却至室温并且用1，1，1-三氟-N-苯基-N-(三氟甲基磺 酰基)甲磺酰胺(666mg，1.86mmol)处理。在室温下搅拌反应混合物1小时。 然后，把固体哌嗪-1-羧酸叔丁酯(636mg，3.42mmol)分2部分加入，并且在 80℃搅拌混合物1.5小时。然后允许混合物冷却至室温，持续18小时。加入 饱和NH4Cl溶液(30mL)和水(15mL)，并且用EtOAc(100mL)萃取混合物。把 有机层用半饱和盐水(2×2mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓 缩。在高真空下干燥18小时之后，通过用15％-20％EtOAc/己烷(不连续梯度) 洗脱的硅胶快速色谱法(Biotage Flash 40S+)来提纯所得到的残留物，以提供 固体状的4-(5-氯-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(433mg，0.946mmol，收率60.9％)。LCMS(APCI+)m/z 458.1，460 (M+H)+。
把25％TFA/CH2Cl2(10mL)加入4-(5-氯-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(430mg，0.939mmol)中，并且在室温下 搅拌溶液。30分钟之后，在减压下除去溶剂。把所得到的残留物从甲苯(3×10 mL)蒸发并且在高真空下干燥18小时，以提供5-氯-1-(4-甲氧基苄基)-4-(哌嗪 -1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶2，2，2-三氟乙酸盐。把纯的TFA(10mL)加入该材 料中，并且在回流下搅拌混合物90分钟。在减压下除去TFA，并且从 CH2Cl2(2×10mL)蒸发残留物。把残留物再溶解在CH2Cl2中，并且加入在乙 醚中的2M HCl(6mL)。在真空中浓缩所得到的悬浮液。把所获得的残留物 用在乙醚中的2M HCl再处理一次(5mL)，并且使其经受超声处理2分钟。然 后在真空中除去溶剂，并且与Et2O一起研磨所得到的残留物。把所形成的固 体过滤，用乙醚(2×5mL)洗涤并且在高真空下干燥，以提供固体状的5-氯 -4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(280mg，0.901mmol，收率 62.0％)。LCMS(APCI+)m/z 238.0(M+H)+。
在室温下搅拌5-氯-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(75 mg，0.205mmol)、2-(3H-[1，2，3]三唑[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲六 氟磷酸盐(V)(“HATU”；78.0mg，0.205mmol)、N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(143 μL，0.821mmol)、和(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基) 乙酸(83.7mg，0.246mmol，参见实施例C)在CH2Cl2(5mL)中的溶液1小时。 除去溶剂，并且把所得到的残留物再溶解在EtOAc(20mL)中并且用水洗涤。 把有机相在MgSO4上干燥，过滤，并且在真空中浓缩。通过在Biotage SP4 单元上使用10-90％CH3CN/水梯度的C-18反相柱色谱法(Biotage C-18 12M+) 来提纯所获得的粗物质。合并含有产物的部分，并且除去溶剂，并且从 CH3CN(3×10mL)蒸发。使用EtOAc(约5mL至约10mL)把残留物转移至25 mL圆底烧瓶。把残留物在真空中浓缩并且在高真空下干燥小时，以提供固 体状的(S)-2-((S)-2-(4-(5-氯-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-(4-氯苯 基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(95mg，0.170mmol，收率82.7％)。 LCMS(APCI+)m/z 459.1[(M-Boc)+H]+。
把在二氧六环(2mL)中的4N HCl加入(S)-2-((S)-2-(4-(5-氯-1H-吡唑并 [3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-1-(4-氯苯基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 (90mg，0.16mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液中。在室温下搅拌混合物30 分钟。30分钟之后，在真空中除去溶剂，并且与乙醚一起研磨所得到的残 留物。把固体材料过滤，用另外的乙醚(2×2mL)洗涤并且干燥，以提供膏状 固体状的(S)-1-(4-(5-氯-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯 基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮二盐酸盐(71mg，0.13mmol，收率83％)。LCMS (APCI+)m/z 459.1，461.1[(M+H]+.NMR(400Hz，DMSO-d6)δ9.61(br s，1H)， 9.08(br s，1H)，8.30(s，1H)，8.19(s，1H)，7.49(d，2H)，7.44(d，2H)，4.53(d，1H)， 4.03-3.96(m，1H)，3.79-3.70(m，3H)，3.69-3.57(m，3H)，3.51-3.45(m，1H)， 3.21-3.14(m，2H)，3.09-3.00(m，1H)，1.97-1.89(m，1H)，1.78-1.71(m，1H)， 1.63-1.52(m，2H)。
实施例19
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮
在氮气气氛下把氯化甲基锌(II)(在THF中的2M溶液，1244μL，2.488 mmol)加入4-(5-溴-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯(500mg，0.995mmol)和Pd(PPh3)4(86.25mg，0.07464mmol)在THF(5 mL)中的溶液中。在75℃搅拌反应混合物1.5小时并且允许其冷却至室温。把 反应混合物倒入饱和NH4Cl水溶液(50mL)中并且用EtOAc(3×50mL)萃取。 把结合的有机层干燥(MgSO4)，过滤，并且在真空中浓缩。通过用2％ MeOH/CH2Cl2洗脱的硅胶快速色谱法(Biotage Flash 40S+)来提纯所得到的 残留物，以提供固体状的4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶 -4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(470mg，0.806mmol，收率81.0％)。LCMS(APCI+) m/z 438.2(M+H)+。
在室温下搅拌在25％TFA/CH2Cl2(25mL)中的4-(1-(4-甲氧基苄基)-5-甲 基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(465mg，1.06mmol)2小 时。除去溶剂，并且从甲苯(3×20mL；60℃水浴)蒸发所获得的胶质。把纯 的TFA加入残留物中并且在回流下搅拌3小时。接着，在减压下除去TFA， 并且从CH2Cl2(2×10mL)蒸发所得到的残留物。把残留物再悬浮在CH2Cl2(2 mL)中，并且加入在乙醚中的2M HCl(5mL)。在真空中浓缩所得到的悬浮液， 并且在高真空下干燥4小时之后，从沸腾的EtOH结晶残留物，以提供粉末状 的5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(175mg，0.603 mmol，收率56.7％)。LCMS(APCI+)m/z 218.1(M+H)+。
在室温下搅拌5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶二盐酸盐(75 mg，0.194mmol)、二异丙基乙胺(135μL，0.775mmol)、HATU(73.7mg， 0.194mmol)和(S)-2-((S)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-氯苯基)乙酸 (79.0mg，0.233mmol，参见实施例C)在DMF(5mL)中的溶液18小时。在 真空中浓缩反应混合物。把所得到的残留物再溶解在THF(5mL)中并且用 LiOH的水溶液(2mL，0.5M)处理30分钟。接着，除去溶剂，并且把所得到 的残留物悬浮在EtOAc(50mL)中并且用水(2×10mL)洗涤。在真空中浓缩已 干燥(MgSO4)的有机相，并且在高真空下干燥之后通过在Biotage SP4单元 上使用5％-80％CH3CN/水的梯度的反相色谱法(Biotage，C-1812M+)来提纯 所得到的残留物，以提供固体状的(S)-2-((S)-1-(4-氯苯基)-2-(4-(5-甲基-1H- 吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(70 mg，0.130mmol，收率67.0％)。LCMS(APCI+)m/z 539.2，541.2(M+H)+。
把在二氧六环(5mL)中的4N HCl加入(S)-2-((S)-1-(4-氯苯基)-2-(4-(5-甲 基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯 (68mg，0.13mmol)中，并且在室温下搅拌混合物。30分钟之后，在减压下 除去溶剂，并且与乙醚一起研磨所得到的残留物。把固体材料过滤，用另 外的乙醚(2×2mL)洗涤并且在高真空下干燥24小时，以提供固体状的 (S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((S)- 吡咯烷-2-基)乙酮二盐酸盐(62mg，0.12mmol，收率96％)。LCMS(APCI+)m/z 439.1(M+H)+.NMR(400Hz，DMSO-d6)δ9.98(brs，1H)，9.06(s，1H)，8.23(s， 1H)，7.49(d，2H)，7.43(d，2H)，4.56(d，1H)，4.03-3.96(m，2H)，3.93-3.87(m， 3H)，3.71-3.65(m，1H)，3.64-3.57(m，2H)，3.50-3.46(m，1H)，3.19-3.13(m，2H)， 2.31(s，3H)，1.97-1.89(m，1H)，1.78-1.70(m，1H)，1.63-1.52(m，2H)。
实施例20
(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-环丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1- 基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮
在氮气下把溴化环丙基锌(II)(2.5mL，2.49mmol)加入4-(5-溴-1-(4-甲氧 基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.995 mmol，参见实施例1)和Pd(PPh3)4(86mg，0.075mmol)在THF(5mL)中的溶液 中，并且在氮气气氛下把反应混合物加热至75℃(油浴)，持续18小时。然后 允许反应混合物冷却至室温，并且将其倒入饱和NH4Cl水溶液(50mL)中并 且用EtOAc(3×50mL)萃取。通过在Biotage SP4单元上使用15％-90％CH3CN/ 水的梯度的C-18反相快速色谱法(Biotage 25M+)来提纯粗产物，以提供固体 状的4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-羧酸 叔丁酯(275mg，0.59mmol，收率59.6％)。LCMS(APCI+)m/z 464.2(M+H)。
通过使用4-(5-环丙基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌 嗪-1-羧酸叔丁酯如在实施例19中所描述的制备(S)-2-(4-氯苯基)-1-(4-(5-环 丙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((S)-吡咯烷-2-基)乙酮二盐酸 盐，以提供固体(51mg，收率60％)。LCMS(APCI+)m/z 465.1(M+H)+。NMR (400Hz，DMSO-d6)δ9.99(br s，0.6H)，9.06(br s，1H)，8.13(s，1H)，7.50(d， 2H)，7.45(d，2H0，4.56(d，1H)，4.03-3.89(m，6H)，3.67-3.61(m，2H)，3.44-3.38 (m，1H)，3.18-3.14(m 2H)，2.06-1.91(m，2H)，1.78-1.71(m，1H)，1.61-1.53(m， 2H)，0.95(d，2H)，0.67(d，2H)。
还可以根据以上描述的方法制备表1所示的实施例21-38。
表1
虽然已经结合所列举的实施方案描述了本发明，但是应当理解，它们 不意在将本发明限制于那些实施方案。相反，本发明意在覆盖可以被包括 在如由权利要求界定的本发明的范围内的所有的替换方式、修改和等效物。 因此，上述的说明书被认为仅阐述本发明的原理。
词“包括(comprise)”、“包括(comprising)、”“包括(include)、”“包括 (including)、”和“包括(includes)”当在本说明书和在下面的权利要求中使用 时，意在指明所陈述的特征、整数、组分或步骤的存在，但是它们不排除 一个或多个其他特征、整数、组分、步骤或其组的存在或增加。