一种富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102101893 B (45)授权公告日 2012.08.22 CN 102101893 B *CN102101893B* (21)申请号 201010623139.3 (22)申请日 2010.12.20 C08B 37/00(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 17/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) (73)专利权人 大兴安岭林格贝有机食品有限责 任公司 地址 165012 黑龙江省大兴安岭地区松岭区 绿水路 1 号 (72)发明人 姚德坤 姚德利 闫峰 黄运生。

2、 姚航 郑君 US 4957907 A,1990.09.18, 全文 . CN 101665478 A,2010.03.10, 全文 . CN 1663956 A,2005.09.07, 全文 . CN 1490298 A,2004.04.21, 全文 . CN 1424330 A,2003.06.18, 全文 . CN 1418892 A,2003.05.21, 全文 . 孙达远等 . 芦荟冷冻粉中多糖和甙的纯化、 分离和鉴定 .海南大学学报自然科学版 .2002, 第 20 卷 ( 第 2 期 ),116-119. 董银卯等 . 芦荟多糖、 芦荟油、 芦荟素的提取 及应用 .天然产物研究与。

3、开发 .2002, 第 14 卷 ( 第 2 期 ),80-82. (54) 发明名称 一种富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法 (57) 摘要 本发明属于天然有机化学领域， 涉及一种芦 荟多糖的纯化方法， 特别是涉及一种利用高速逆 流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的制备方 法。其特点是 ： 采用高速逆流色谱分离法从天然 植物芦荟浸提液经过两次纯化得到 95以上纯 度的芦荟多糖。本法适用于以各种含芦荟多糖的 天然植物， 天然植物的提取物为原料制备高纯度 的芦荟多糖。适用于采用各种型号的逆流色谱仪 分离制备芦荟多糖， 用高速逆流色谱法制备芦荟 多糖可连续、 高效、 快速的液液分配色谱分离， 具 有分离。

4、量大、 样品无损失、 回收率高、 分离环境缓 和、 节约溶剂等特点。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 张娜 权利要求书 2 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 2 页 说明书 3 页 1/2 页 2 1. 一种利用高速逆流色谱法富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法， 其步骤如下 ： (1) 将芦荟鲜叶切成小块后用水提取， 粗滤后离心， 取上清液 ； (2) 在上清液中加入乙醇， 析出粗芦荟多糖 ； (3) 芦荟多糖的初步纯化 ： 将粗提物用高速逆流色谱分离法进行初步分离， 收集含芦 荟多糖的组分， 蒸干溶剂 ； (4) 芦荟多糖的精。

5、制 ： 再将 (3) 所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度 95以上 的芦荟多糖纯品， 其中， 步骤 (3) 中采用高速逆流色谱分离法对芦荟多糖进行初步纯化时， 使用的溶剂体系选自下列一号溶剂体系、 二号溶剂体系和三号溶剂体系中的任意一种， 所 述一号、 二号和三号溶剂体系的组成和各个成分的体积比如下 ： 一号溶剂体系 ： A1+B1+C1 A1 选自 ： 乙酸乙酯、 乙酸丙酯、 乙酸异丙酯、 乙酸正丁酯 B1 选自 ： 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇 C1 ： 水 其中 A1、 B1、 C1 的体积比为 0.5-2 2-10 2-10 ； 二号溶剂体系 ： A2+B2+C2+D2 A2 选自 。

6、： 乙酸乙酯、 乙酸丙酯、 乙酸异丙酯、 乙酸正丁酯 B2 和 C2 选自 ： 甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇 D2 ： 水 其中 A2、 B2、 C2、 D2 的体积比为 0.5-5 10-100 0.5-5 10-100 ； 三号溶剂体系 ： A3+B3 A3 选自 ： 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇 B3 ： 水 其中 A3、 B3 的体积比为 1-100 1-100 ； 其中步骤 (4) 中采用高速逆流色谱分离法对芦荟多糖进行精制时， 使用的溶剂体系选 自下列四号溶剂体系、 五号溶剂体系和六号溶剂体系中的任意一种， 所述四号、 五号和六号 溶剂体系的组。

7、成和各个成分的体积比如下 ： 四号溶剂体系 ： A4+B4+C4 A4 选自 ： 氯仿、 二氯甲烷、 四氯化碳 B4 选自 ： 甲醇、 乙醇、 丙醇、 丙酮 C4 ： 水 其中 A4、 B4、 C4 的体积比为 2-15 2-25 1-5 ； 五号溶剂体系 ： A5+B5+C5+D5 A5 选自 ： 氯仿、 二氯甲烷、 四氯化碳 B5 和 C5 选自 ： 甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇 D5 ： 水 A5、 B5、 C5、 D5 的体积比为 2-10 0.5-5 2-10 1-10 ； 六号溶剂体系 ： A6+B6+C6+D6+E6 A6、 C6 选自 ：。

8、 氯仿、 二氯甲烷、 四氯化碳 B6、 D6 选自 ： 甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇 权 利 要 求 书 CN 102101893 B 2 2/2 页 3 E6 ： 水 其中 A6、 B6、 C6、 D6、 E6 的体积比为 0.5-2 0.5-2 1-10 2-10 1-10 ； 上述一号至六号溶剂体系在使用时按照所述各自的体积比均匀混合， 在分液漏斗中 分层后， 将上相作为固定相、 下相作为流动相， 且高速逆流色谱分离法中流动相的流速为 2.0ml/min。 2. 根据权利要求 1 所述的一种利用高速逆流色谱法富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法， 其特征在。

9、于 ： 步骤(3)中所述一号、 二号、 三号溶剂体系分别为乙酸乙酯-正丁醇-水体系、 乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-水体系和正丁醇-水体系， 步骤(4)中所述四号、 五号、 六号溶剂 体系分别为 ： 氯仿 - 甲醇 - 水体系、 氯仿 - 异丙醇 - 甲醇 - 水体系和二氯甲烷 - 异丙醇 - 氯 仿 - 甲醇 - 水体系。 权 利 要 求 书 CN 102101893 B 3 1/3 页 4 一种富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法 技术领域 ： 0001 本发明属于天然有机化学领域， 涉及一种芦荟多糖的纯化方法， 特别是涉及一种 利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法。 背景技术 ： 000。

10、2 芦荟 ： 拉丁学名 Aloe， 别称卢会、 讷会、 象胆、 奴会、 劳伟 ； 为百合科常绿、 多肉质的 草本植物。叶簇生， 呈座状或生于茎顶， 叶常披针形或叶短宽， 边缘有尖齿状刺。花序为伞 形、 总状、 穗状、 圆锥形等， 色呈红、 黄或具赤色斑点， 花瓣六片、 雌蕊六枚。花被基部多连合 成筒状。主要成分含有芦荟大黄素 (Aloeemodin)、 芦荟大黄素甙 (Aloin， Barbaloin)， 芦 荟大黄素甙的异构体异芦荟大黄素甙 (Isobarbaloin)、 高塔尔芦荟素 (Homonataloin)、 大 黄酚 (Chrysophanol)、 大黄酚葡萄糖甙 (Chrysop。

11、hanol glucoside)、 蒽酚 (Anthranol) 等 蒽类及其甙类以及槲皮素 (Quercetin)、 莰非醇 (Camherenol)、 芦丁 (Rutin) 等黄酮类和 葡萄糖 (Glucose)、 甘露糖 (mannose)、 阿拉伯糖 (Ala-binose)、 鼠李糖 (Rhamnose)、 蔗糖 (Susrose)、 木糖(Xylose)、 果糖(Fructose)、 葡萄糖醛酸(Glucuronic acid)等糖类物质， 亦含有精氨酸、 天冬酰胺、 谷氨酸等八种人体必需氨基酸以及胆固醇 (Cholesterol)、 菜油 甾醇 (Campesterol)、 谷甾。

12、醇 (Sitoterol)。 0003 芦荟多糖是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质， 可增强人体对疾病 的抵抗力， 治愈皮肤炎、 慢性肾炎、 膀胱炎、 支气管炎等慢性病症， 并对人体的皮肤有良好的 营养、 滋润、 增白作用。这已经引起了医学界的极大重视， 且其药效在理论和实际中都得到 了广泛验证。近年来， 人们发现芦荟多糖是天然植物芦荟中最主要的成分之一， 由于芦荟 易于栽种， 来源方便广泛， 从中提取芦荟多糖已取得了可喜进展。名称为 “从芦荟提取芦荟 多糖的方法” 的专利申请中便公开了将芦荟经水提醇沉得芦荟多糖的工艺流程。上述专利 文献中的芦荟多糖提取工艺主要是经过溶剂萃取， 吸附。

13、树脂柱进行纯化等工艺步骤提取而 成， 其分离效果远远不如高速逆流色谱分离法的分离效果。 发明内容 ： 0004 本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、 提取纯度低等缺点， 提供一种 利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法。为实现上述目的， 本发明采用 的技术方案是 ： 0005 一种利用高速逆流色谱分离法富集纯化芦荟中芦荟多糖的方法。 0006 其步骤如下 ： 0007 (1) 将芦荟鲜叶切成小块后用水提取， 粗滤后离心， 取上清液 ； 0008 (2) 在上清液中加入乙醇， 析出粗芦荟多糖 ； 0009 (3) 芦荟多糖的初步纯化 ： 将粗提物用高速逆流色谱分离法进行初步分。

14、离， 收集 含芦荟多糖的组分， 蒸干溶剂 ； 0010 (4) 芦荟多糖的精制 ： 再将 (3) 所得组分用高速逆流色谱分离法制成高纯度 95 说 明 书 CN 102101893 B 4 2/3 页 5 以上的芦荟多糖纯品。 0011 高速逆流色谱法对芦荟多糖进行初步纯化， 可选用的溶剂体系主要有三个。均 以上相为固定相， 下相为流动相。一号溶剂体系由三个组分构成， A1 组分可选用乙酸 乙酯、 乙酸丙酯、 乙酸异丙酯、 乙酸正丁酯等脂肪脂类。B1 组分可选用正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇等脂肪醇。C1 组分为水， 优选乙酸乙酯 - 正丁醇 - 水体系。A1、 B1、 C1 体积比为 0.5-2。

15、 2-10 2-10 ； 二号溶剂体系由四个组分构成， A2 组分可选用乙酸乙酯、 乙酸丙酯、 乙酸异丙酯、 乙酸正丁酯等脂肪脂类。B2、 C2 组分可选用甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 丙酮、 正 丁醇、 异丁醇、 叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮。D2 组分为水， 优选乙酸乙酯 - 正丁醇 - 甲醇 - 水 体系。A2、 B2、 C2、 D2 体积比为 0.5-5 10-100 0.5-5 10-100 ； 三号溶剂体系由两个 组分构成， A3 组分可选用正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇等脂肪醇。B3 组分为水， 优选正丁醇 - 水 体系。A3、 B3 体积比为 1-100 1-100。 0012 高速。

16、逆流色谱分离法对芦荟多糖精制溶剂体系主要有三个。均以上相为固定相， 下相为流动相。四号溶剂体系由三个组分构成， A4 组分可选用氯仿、 二氯甲烷、 四氯化碳 等卤代烃。B4 组分可选用甲醇、 乙醇、 丙醇、 丙酮等脂肪醇或脂肪酮。C4 组分为水， 优选 氯仿 - 甲醇 - 水体系。A4、 B4、 C4 体积比为 2-15 2-25 1-15 ； 五号溶剂体系由四个 组分构成， A5 组分可选用氯仿、 二氯甲烷、 四氯化碳等卤代烃。B5、 C5 组分可选用甲醇、 乙 醇、 丙醇、 异丙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮。D5 组分为水， 优选氯 仿 - 异丙醇 - 甲醇 -。

17、 水体系。A5、 B5、 C5、 D5 体积比为 2-10 0.5-5 2-10 1-10。六 号溶剂体系由五个组分构成， A6、 C6 组分可选用氯仿、 二氯甲烷、 四氯化碳等卤代烃。B6、 D6 组分可选用甲醇、 乙醇、 丙醇、 异丙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丁醇、 叔丁醇等脂肪醇或脂肪酮。 E6 组分为水， 优选二氯甲烷 - 异丙醇 - 氯仿 - 甲醇 - 水体系。A6、 B6、 C6、 D6、 E6 体积比为 0.5-2 0.5-2 1-10 2-10 1-10。 0013 实验适用于室温为 15-30下进行。 0014 用本法制备的芦荟多糖纯度可达到 95以上， 本法适用于以各种含芦。

18、荟多糖的天 然植物， 天然植物的提取物为原料制备高纯度的芦荟多糖 ； 适用于采用各种型号的逆流色 谱仪分离制备芦荟多糖， 用高速逆流色谱法制备芦荟多糖可连续、 高效、 快速的液液分配色 谱分离， 具有分离量大、 样品无损失、 回收率高、 分离环境缓和、 节约溶剂等特点。 具体实施方式 ： 0015 实施例 1 ： 0016 采用乙酸乙酯 - 正丁醇 - 水和氯仿 - 甲醇 - 异丙醇 - 水两溶剂体系制备纯度高于 95的芦荟多糖 ： 使用半制备型高速逆流色谱仪， 配有 NS-1007 泵， 20ml 进样阀， 聚四氟乙 烯柱， 柱的容积为 240ml， 8823A-UV 紫外检测器 Yokog。

19、awa 3057 便携式记录仪 ； 进样前， 先 用固定相充满整个柱子， 调整主机转速为 800rpm， 以 2.0ml/min 的流速将流动相泵入柱内， 待整个体系建立动态平衡后， 由进样阀进样， 然后根据检测器紫外图谱， 接收目标成分 ； 芦 荟多糖的制备分两步进行 ： (1) 将体积比为 1 2 3 的乙酸乙酯 - 正丁醇 - 水混溶于分 液漏斗中， 摇匀后静止分层， 取其上层溶液 ( 上相 ) 为固定相， 下层溶液 ( 下相 ) 为流动相。 用 1 1 的上相和下相混合液 20ml 溶解取得的粗提取物 100mg 进行分离， 收集含芦荟多糖 的组分， 蒸干。(2) 将体积比为 5 6 。

20、0.5 4 的氯仿 - 甲醇 - 异丙醇 - 水混溶于分液 说 明 书 CN 102101893 B 5 3/3 页 6 漏斗中， 摇匀后静止分层， 取其上层溶液 ( 上相 ) 为固定相， 下层溶液 ( 下相 ) 为流动相， 用 1 1 的上相和下相混合液 2ml 溶解 (1) 所得样品进行分离， 收集含芦荟多糖的组分峰， 冷 冻干燥， 得芦荟多糖固体， 经 HPLC 分析， 其纯度达到 95.4。 0017 实施例 2 ： 0018 采用乙酸乙酯 - 异丁醇 - 丙酮 - 水和氯仿 - 甲醇 - 水两溶剂体系制备纯度高于 95的芦荟多糖 ： 使用半制备型高速逆流色谱仪， 配有 NS-1007。

21、 泵， 20ml 进样阀， 聚四氟乙 烯柱， 柱的容积为240ml， 8823A-UV紫外检测器Yokogawa 3057便携式记录仪， 进样前， 先用 固定相充满整个柱子， 调整主机转速为 800rpm， 以 2.0ml/min 的流速将流动相泵入柱内， 待 整个体系建立动态平衡后， 由进样阀进样， 然后根据检测器紫外图谱， 接收目标成分 ； 芦荟 多糖的制备分两步进行 ： (1) 将体积比为 5 40 1 60 的乙酸乙酯 - 异丁醇 - 丙酮 - 水 混溶于分液漏斗中， 摇匀后静止分层， 取其上层溶液(上相)为固定相， 下层溶液(下相)为 流动相， 用 1 1 的上相和下相混合液 20m。

22、l 溶解取得的粗提取物 200mg 进行分离， 收集含 芦荟多糖的组分， 蒸干。(2) 将体积比为 7 13 8 的氯仿 - 甲醇 - 水混溶于分液漏斗中， 摇匀后静止分层， 取其上层溶液(上相)为固定相， 下层溶液(下相)为流动相， 用11的 上相和下相混合液 2ml 溶解 (1) 所得样品进行分离， 收集含芦荟多糖的组分峰， 冷冻干燥， 得芦荟多糖固体， 经 HPLC 分析， 其纯度达到 96.0。 0019 实施例 3 ： 0020 采用正丁醇 - 水和二氯甲烷 - 异丙醇 - 氯仿 - 甲醇 - 水两溶剂体系制备纯度高 于 95的芦荟多糖 ： 使用半制备型高速逆流色谱仪， 配有 NS-。

23、1007 泵， 20ml 进样阀， 聚四氟 乙烯柱， 柱的容积为240ml， 8823A-UV紫外检测器Yokogawa 3057便携式记录仪， 进样前， 先 用固定相充满整个柱子， 调整主机转速为 800rpm， 以 2.0ml/min 的流速将流动相泵入柱内， 待整个体系建立动态平衡后， 由进样阀进样， 然后根据检测器紫外图谱， 接收目标成分。芦 荟多糖的制备分两步进行 ： (1) 将体积比为 45 53 的正丁醇 - 水混溶于分液漏斗中， 摇匀 后静止分层， 取其上层溶液 ( 上相 ) 为固定相， 下层溶液 ( 下相 ) 为流动相， 用 1 1 的上 相和下相混合液20ml溶解取得的粗提取物150mg进行分离， 收集含芦荟多糖的组分， 蒸干。 (2) 将体积比为 1 1 4 7 5 的二氯甲烷 - 异丙醇 - 氯仿 - 甲醇 - 水混溶于分液漏 斗中， 摇匀后静止分层， 取其上层溶液 ( 上相 ) 为固定相， 下层溶液 ( 下相 ) 为流动相， 用 1 1 的上相和下相混合液 2ml 溶解 (1) 所得样品进行分离， 收集含芦荟多糖的组分峰， 冷 冻干燥。得芦荟多糖固体， 经 HPLC 分析， 其纯度达到 96.5。 说 明 书 CN 102101893 B 6 。