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1、(10)授权公告号 CN 101698539 B (45)授权公告日 2011.07.27 CN 101698539 B *CN101698539B* (21)申请号 200910235414.1 (22)申请日 2009.10.13 C12N 1/10(2006.01) C12R 1/39(2006.01) C12R 1/38(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/865(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (73)专利权人 王颖 地址 100080 北京市海淀区北四环西路 9 号 银谷大厦 615 室 (72)发明人 王颖 (74)专利。
2、代理机构 北京科龙寰宇知识产权代理 有限责任公司 11139 代理人 孙皓晨 费碧华 (54) 发明名称 净化水体的微生态制剂及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了净化水体的微生态制剂及其 制备方法。包括以下重量份的各组分组成 ： 光合 细菌固体菌剂 13 17 份， 枯草芽孢杆菌固体菌 剂 12.5 16.5 份， 酿酒酵母菌固体菌剂 10.5 13.3 份， 反硝化细菌固体菌剂 33 37 份和微生 物絮凝剂 0.3 0.7 份。本发明微生态制剂可以 增加水体透明度和溶氧， 降解吸收和转化水产养 殖环境中的有机污染物及水体中的亚硝酸盐、 硫 化物、 氮、 磷等有害物质， 整个养殖周期不。
3、用换水， 能够有效地降低水体的氨氮亚酸盐等有害物质的 含量， 降低饵料系数， 减少生产成本， 迅速优化养 殖环境， 增强养殖鱼类抗病能力， 促进养殖对象的 快速生长。 (51)Int.Cl. 审查员 温媚 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 9 页 CN 101698539 B1/1 页 2 1. 一种净化水体的微生态制剂， 包括以下重量份的各组分组成 ： 光合细菌固体菌剂 13 17 份， 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 固体菌剂 12.5 16.5 份， 酿酒酵母菌 (Saccharomyces cerevisiae) 。
4、固体菌剂 10.5 13.3 份， 反硝化细菌固体菌剂 33 37 份 和微生物絮凝剂 0.3 0.7 份 ； 其制备方法包括 ： (1)、 将光合细菌固体菌剂， 枯草芽孢杆菌固体菌剂， 酿酒酵母菌固体 菌剂、 反硝化细菌固体菌剂与粉碎的有机混合物按比例混合均匀， 得到混配物 ； 所述的有机 混合物由以下重量份的组分组成 ： 沸石粉30-50份、 豆粕35-40份和果渣5-15份 ； 所加入有 机混合物的重量占混配物总重量的 10-35 ； (2)、 将步骤 (1) 所得到的混配物挤压造粒， 得到活菌原菌柱状颗粒 ； 将微生物絮凝剂 圆盘造粒， 得到球形颗粒 ； 将活菌原菌柱状颗粒和球形颗粒混。
5、合、 搅拌均匀， 即得。 2. 按照权利要求 1 所述的微生态制剂， 其特征在于， 各组分的重量份是 ： 光合细菌 固体菌剂 15.5 份， 枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis) 固体菌剂 12.5 份， 酿酒酵母菌 (Saccharomyces cerevisiae) 固体菌剂 12 份， 反硝化细菌固体菌剂 36 份， 微生物絮凝剂 0.4 份。 3. 按照权利要求 1 或 2 所述的微生态制剂， 其特征在于 ： 所述的光合细菌选自沼 泽红假单胞菌 (Rhodopseudomonas palustris)、 荚膜红假单胞菌 (Rhodopseudomonas capsulat。
6、us) 或者球形红假单胞菌 (Rhodopseudomonas sphaeroides) 中的任意一种。 4. 按照权利要求 1 或 2 所述的微生态制剂， 其特征在于 ： 所述的反硝化细菌选自反硝 化假单孢杆菌(Pseudomonas stutzeri)、 反硝化硫杆菌(Thiobacillus denitrificans)或 者荧光假单孢菌 (Pseudomonasfluorescence) 中的任意一种。 5. 按照权利要求 1 或 2 所述的微生态制剂， 其特征在于 ： 所述的微生物絮凝剂是采用 红球菌属微生物 (Rhodococcus erythropolis) 制备得到的固体菌剂。。
7、 6. 按照权利要求 1 所述的微生态制剂， 其特征在于 ： 步骤 (1) 所加入有机混合物的重 量占混配物总重量的 23.6。 7. 按照权利要求 1 所述的微生态制剂， 其特征在于 ： 步骤 (2) 中所述活菌原菌柱状颗 粒的直径为 0.3cm， 长为 0.9 1.2cm ； 所述的球形颗粒的直径为 0.07cm。 8. 权利要求 1 或 2 所述的微生态制剂在净化水体、 促进水产养殖对象生长中的应用。 权 利 要 求 书 CN 101698539 B1/9 页 3 净化水体的微生态制剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种水体净化剂， 尤其涉及一种净化水体的微生态制剂及其制备方。
8、 法， 本发明还涉及该微生态制剂在净化水产养殖水体、 水体修复、 水体环境改良等领域中的 应用， 属于水体净化领域。 背景技术 0002 目前， 水体环境的日益恶化和污染问题严重困扰着我国的水资源环境， 氮、 磷引起 的水体富营养化使养殖水体的有害物质积累， 危害了养殖水体环境 ； 工业区排放的有机废 水含有酚、 氰等有毒物质加剧了水体环境的污染程度等等。国家随着微生物水处理技术的 兴起和发展， 开发和利用新型的微生物制剂治理水体环境的污染已受到了人们的普遍关 注。 发明内容 0003 本发明的目的之一是克服现有技术的不足， 提供一种有效净化水体、 增强水产对 象抗病能力的微生态制剂 ； 00。
9、04 本发明的目的之二是提供一种制备上述微生态制剂的方法 ； 0005 本发明的目的之三是将上述微生态制剂水体的净化和修复、 水体环境改良等领 域 ； 0006 本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的 ： 0007 一种净化水体、 增强水产养殖对象抗病能力的微生态制剂， 包括以下重量份的各 组分组成 ： 光合细菌固体菌剂 13 17 份， 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) 固体菌剂 12.516.5份， 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)固体菌剂10.513.3份， 反硝 化细菌固体菌剂 33 37 份和微生物絮凝剂 0.3 0.7 份 ； 。
10、0008 优选的， 各组分的重量份是 ： 光合细菌固体菌剂 15.5 份， 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)固体菌剂12.5份， 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)固体菌剂12份， 反 硝化细菌固体菌剂 36 份， 微生物絮凝剂 0.4 份 ； 0009 所述的光合细菌选自沼泽红假单胞菌 (Rhodopseudomonaspalustris)、 荚膜红 假单胞菌 (Rhodopseudomonas capsulatus) 或者球形红假单胞菌 (Rhodopseudomonas sphaeroides) 中的任意一种 ； 0010 所述的反硝化细菌。
11、选自反硝化假单孢杆菌 (Pseudomonasstutzeri)、 反硝化硫杆 菌(Thiobacillus denitrificans)或者荧光假单孢菌(Pseudomonas fluorescence)中的 任意一种 ； 0011 微生物絮凝剂 (Microbial Flocculant， MBF) 是某些种类的微生物在一定的培养 条件下， 生长代谢至一定阶段产生的具有絮凝活性的物质， 通过微生物发酵、 提取、 精制而 得到的一种高效、 无毒的水处理材料， 一般由多糖、 蛋白质、 纤维素、 糖蛋白和聚氨基酸等高 分子物质组成， 分子中含有多种官能团， 能使水中胶体悬浮物相互凝聚。 说 明 。
12、书 CN 101698539 B2/9 页 4 0012 为了达到更好的效果， 本发明所述的微生物絮凝剂优选为采用红球菌属微生物 (Rhodococcus etythropolis) 制备得到得到的絮凝剂， 例如， 将购买得到的红平红球菌菌 株接种到种子培养上培养得到种子培养物 ； 将种子培养物接种到发酵罐中的发酵培养基中 发酵， 发酵完成后加入填充剂或粉碎的吸附剂， 得到固体菌剂， 即得。 0013 更优选的， 本发明采用红平红球菌 (Rhodococcus erythropolis)S-1 菌株制 成的絮凝剂 NOC-1， 该絮凝剂 NOC-1 可通过商业途径购买得到 ( 例如 ： 保定新。
13、金染料化 工有限公司， 商品名称 ： 微生物絮凝剂 NOC-1， 规格 ： 分子量 70-100 万 )， 也可按照文献 所公开的方法制备得到 (Kurane R， et al.Culture Conditions for Production of MicrobialFlocculant by Rhodacus ErgthropolisJ.Agric.Biol.Chem， 1986， 50(9) ： 2309-2313.) 0014 本发明所述的枯草芽孢杆菌固体菌剂、 酿酒酵母菌固体菌剂、 反硝化细菌固体菌 剂或光合细菌固体菌剂可按照以下常规方法制备得到固体菌剂 ： 将所述的菌种接种到种子 。
14、培养上培养得到种子培养物 ； 将种子培养物接种到发酵罐中的发酵培养基中发酵， 发酵完 成后的发酵液吸附于由有机混合物组成的吸附剂上， 即得到相应的固体菌剂。 0015 其中， 所述的光合细菌固体菌剂可参考以下方法制备得到 ： 0016 沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)(广东省微生物研究所菌种保藏 管理中心， 商品编号 ： GIM1.167) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将沼泽红 假单胞菌菌种接种于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株加矿物油后 4冰箱内储存， 使 用前取出活化两次， 将活化后的菌株转入 500 毫升玻璃瓶光照液体培养， 。
15、培养温度为 30， 培养 96 小时。之后转入 5L 玻璃瓶光照培养 96 小时作为二级种子液。在 1 吨的发酵罐中 加入培养基， 其组成为 ： 醋酸钠 1.145 千克、 蛋白胨 0.055 千克、 碳酸氢钠 0.6 千克、 硫代硫 酸钠 0.4 千克、 氯化钠 0.3 千克、 硫酸镁 0.1 千克、 磷酸二氢钾 0.05 千克。用过滤的 0.1N 磷酸调 pH 值 7.0。光照 30001x。从种子罐向生产罐接种， 接种量为 50kg， 开始发酵。发酵 条件 ： 培养温度为 30， 接种 20 小时后每隔 4 小时取样一次， 观察菌体生长状况、 是否有污 染， 液体发酵完成后， 向发酵菌液。
16、中加入常规吸附剂和填充剂黄原胶， 得沼泽红假单胞菌菌 剂。 0017 所述的枯草芽孢杆菌固体菌剂可参考以下方法制备得到 ： 0018 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(中国农业微生物菌种保藏管理中心， 商品编 号 ： ACCC01031) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将枯草芽孢杆菌菌种接种 于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株 4冰箱内储存， 使用前取出活化两次， 将活化后 的菌株转250毫升茄瓶营养琼脂培养， 培养温度为24， 48小时生长良好时用灭水菌洗下， 作为种子罐的接种物。在 1 吨的发酵罐中加入培养基， 其组成为 ： 玉米粉 3、 豆饼粉 3。
17、、 麸皮粉 3、 K2HPO4 2.15、 KH2PO40.8、 MgSO4 0.075、 花生油 0.3。起始 pH7.5。从 种子罐向生产罐接种， 开始发酵。发酵条件 ： 培养温度为 37， 通风量为 1 1.1， 罐压为 0.05mpa/cm2， 搅拌速度为220rpm， 接种20小时后每隔4小时取样一次， 观察菌体生长状况、 是否有污染， 待发现孢子生成达 90以上后， 液体发酵完成， 向发酵菌液中加入常规吸附剂 和填充剂黄原胶， 得枯草芽孢杆菌菌剂。 0019 所述的酿酒酵母菌固体菌剂可参考以下方法制备得到 ： 0020 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)。
18、(广东省微生物研究所菌种保藏管理中 说 明 书 CN 101698539 B3/9 页 5 心， 商品编号 ： GIM 2.39) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将啤酒酵母菌菌 种接种于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株加矿物油后 4冰箱内储存， 使用前取出活 化两次， 将活化后的菌株转入250毫升茄子瓶中培养， 培养温度为28-30， 培养48小时， 菌 株生长良好时用灭菌生理盐水将其洗下， 洗脱物即为种子罐的接种物。在 1 吨的发酵罐中 加入培养基， 麦芽汁， 10 15 波林， 调 pH 至 6.4。从种子罐向生产罐接种， 接种量为 50kg， 开始发酵。发酵条件 ：。
19、 培养温度为 28， 罐压为 0.05mpa/cm2， 搅拌速度为 220rpm， 通风比 1 1.1， 接种 20 小时后每隔 4 小时取样一次， 观察菌体生长状况、 是否有污染， 液体发酵完 成后， 向发酵菌液中加入常规吸附剂和填充剂黄原胶， 得啤酒酵母菌菌剂。 0021 所述的反硝化细菌固体菌剂可参考以下方法制备得到 ： 0022 反硝化细菌 (Pseudomonas stutzeri)( 中国工业微生物菌种保藏管理中心， 商品 编号 ： CICC 23621) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将反硝化细菌菌种接种 于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株加矿物油后 4冰箱。
20、内储存， 使用前取出活化两 次， 将活化后的菌株转入 250 毫升茄子瓶中培养， 培养温度为 37， 36 小时生长良好时用 灭菌水洗下， 作为种子罐的接种物。在 1 吨的发酵罐中加入培养基， 其组成为 ： 2.0kg KNO3、 2.0kg NaNO3、 0.03kg MgSO47H2O、 0.5kg K2HPO4、 10kg 酒石酸钾钠、 1.0kg KH2PO4、 0.5kg FeCl26H2O、 0.2kg CaCl22H2O、 0.1L 浓度为 0.2g/L 的刃天青溶液、 0.5kg L- 半胱氨酸， pH 值为 7-7.5。从种子罐向生产罐接种， 接种量为 5， 开始发酵。发酵条。
21、件 ： 培养温度为 37， 通风量为11.1， 罐压为0.05mpa/cm2， 搅拌速度为220rpm， 液体发酵完成， 将发酵液 吸附于由有机混合物 ( 例如 ： 沸石粉 30-50 份、 豆粕 35-40 份和果渣 5-15 份 ) 组成的吸附 剂上， 低温烘干得反硝化细菌固体菌剂。 0023 所述的微生物絮凝剂可参考以下方法制备得到 ： 0024 红平红球菌 (Rhodococcus erythropolis)( 中国普通微生物菌种保藏管理中 心， 商品编号 ： CGMCC 4.1491) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将红平红 球菌菌种接种于培养基中培养， 将培养基斜。
22、面种子菌株 4冰箱内储存， 使用前取出活 化两次， 将活化后的菌株转入 250 毫升茄子瓶中培养， 培养温度为 37， 36 小时生长良 好时用灭菌水洗下， 作为种子罐的接种物。在 1 吨的发酵罐中加入培养基， 其组成为 ： 2.43kgK2HPO4、 14.0kgNa2HPO412H2O、 2.0kgNH4Cl、 0.35kg CaCl26H2O、 0.001kgCaCl22H2O、 0.001kgFeCl36H2O、 0.004kgMnCl24H2O、 葡萄糖 10kg。从种子罐向生产罐接种， 接种量为 5， 开始发酵。发酵条件 ： 培养温度为 37， 罐压为 0.05mpa/cm2， 搅。
23、拌速度为 220rpm， 液 体发酵完成， 将发酵液吸附于由有机混合物 ( 例如 ： 沸石粉 30-50 份、 豆粕 35-40 份和果渣 5-15 份 ) 组成的吸附剂上， 低温烘干得红平红球菌固体菌剂， 得微生物絮凝剂。 0025 本发明所用到的所有微生物菌种 ( 可购自于广东省微生物研究所菌种保藏管理 中心、 中国农业微生物菌种保藏管理中心、 中国普通微生物菌种保藏管理中心、 中国工业微 生物菌种保藏管理中心 ) 和其它原料均可从市场购买得到， 其规格符合国家行业标准。 0026 本发明的另外一个目的是提供一种制备上述净化水体的微生态制剂的方法 ； 0027 本发明的另外一个目的是通过以。
24、下技术方案来是实现的 ： 0028 一种制备上述净化水体的微生态制剂的方法， 包括以下步骤 ： 0029 (1) 按所述重量份称取各组分 ； 0030 (2) 将光合细菌固体菌剂， 枯草芽孢杆菌固体菌剂， 酿酒酵母菌固体菌剂、 反硝化 说 明 书 CN 101698539 B4/9 页 6 细菌固体菌剂与粉碎的有机混合物按比例混合均匀， 得到混配物 ； 0031 (3) 将步骤 (2) 所得到的混配物挤压造粒， 得到活菌原菌柱状颗粒 ； 将微生物絮凝 剂圆盘造粒， 得到球形颗粒 ； 将活菌原菌柱状颗粒和球形颗粒混合， 搅拌均匀， 即得。 0032 其中， 步骤 (2) 中所述的有机混合物优选由。
25、以下重量份的组分组成 ： 沸石粉 30-50 份、 豆粕35-40份和果渣5-15份 ； 所加入有机混合物的量可视情况而定， 所加入有机混合物 的重量占混配物总重量的 10-35， 优选为 23.6 ； 0033 步骤 (3) 中所述活菌原菌柱状颗粒的直径优选为 0.3cm， 长度优选为 0.9 1.2cm ； 所述的球形颗粒的直径优选为 0.07cm。 0034 本发明微生态制剂的使用方法和用量 ： 0035 1、 直接抛撒， 每千克可用于5-6亩水面(1米水深)， 高密度养殖塘， 当底质、 水质较 差时可适当增加用量。 0036 2、 养殖初期使用一次， 养殖全程每 1-2 月使用一次。 。
26、0037 本发明微生态制剂中的光合细菌、 枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis) 适应性强， 能忍耐高深度的有机废水和较强的分解转化能力， 对酚、 氰等毒物有较强的忍受和分解能 力， 可达到改善水体环境， 恢复水体生态平衡的效果。 微生物絮凝剂能使水中胶体悬浮物相 互凝聚， 能够有效净化水体、 改善水质， 抑制有害微生物的繁殖。 0038 本发明微生态制剂充分利用相关菌株的厌氧、 好氧特性， 在增强养殖水体的水质 净化方面及水产对象的抗病能力发挥协同作用， 可以增加水体透明度和溶氧， 降解吸收和 转化水产养殖环境中的有机污染物 ( 残饵、 粪便和生物死体 ) 及水体中的亚硝酸盐、 。
27、硫化 物、 氮、 磷等有害物质， 整个养殖周期不用换水， 能够有效地降低水体的氨氮亚酸盐等有害 物质的含量， 降低饵料系数， 减少生产成本， 可以迅速优化养殖环境， 增强养殖鱼类抗病能 力， 促进养殖对象的快速生长。 0039 具体的， 本发明微生态制剂的主要优点和效果包括以下几个方面 ： 0040 1、 可以减少对水环境和周围土质环境的污染， 防止其它化学药品的滥用， 能忍耐 高深度的有机废水和较强的分解转化能力， 对酚、 氰等毒物有一定有忍受和分解能力， 恢复 水体生态平衡。 0041 2、 有效地改善了渔业水质环境， 治理水体的富营养化， 消除水体的氨氮污染， 降解 水体中的亚硝酸盐、 。
28、硫化物等有毒物质。减少排放换水次数， 减少了用药和污染， 提高了养 殖水产品本身的价值， 节约了水资源。 0042 3、 在水体中可大量繁殖， 有效抑制有害菌及藻类的生长， 在净化水质的同时又创 建了良好的水体生态环境。同时可以充当饵料、 作为饲料添加剂预防疾病的功能。对打造 “绿色渔业” 和 “可持续发展渔业” 奠定了良好的技术基础。 0043 4、 本发明微生态制剂采用微生物絮凝剂， 避免了化学絮凝剂如聚丙烯酰胺的毒性 危害， 同时保证了微生态制剂的颗粒状态， 不易被滤食性鱼类吞食， 增强了净化水体的作 用。 具体实施方式 0044 下面结合具体实施例来进一步描述本发明， 本发明的优点和特。
29、点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的， 并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术 说 明 书 CN 101698539 B5/9 页 7 人员应该理解的是， 在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式 进行修改或替换， 但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。 0045 实施例 1 材料的制备 0046 (1) 沼泽红假单胞菌 (Rhodopseudomonas palustris) 菌剂的制备 ： 0047 按供应商提供的配方配制培养基， 将沼泽红假单胞菌菌种接种于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株加矿物油后 4冰箱内储存， 使用前取出活化两次， 将活。
30、化后的菌株 转入 500 毫升玻璃瓶光照液体培养， 培养温度为 30， 培养 96 小时。之后转入 5L 玻璃瓶光 照培养 96 小时作为二级种子液。在 1 吨的发酵罐中加入培养基， 其组成为 ： 醋酸钠 1.145 千克、 蛋白胨 0.055 千克、 碳酸氢钠 0.6 千克、 硫代硫酸钠 0.4 千克、 氯化钠 0.3 千克、 硫酸 镁 0.1 千克、 磷酸二氢钾 0.05 千克。用过滤的 0.1N 磷酸调 pH 值 7.0。光照 30001x。从种 子罐向生产罐接种， 接种量为 50kg， 开始发酵。发酵条件 ： 培养温度为 30， 接种 20 小时后 每隔 4 小时取样一次， 观察菌体生。
31、长状况、 是否有污染， 液体发酵完成后， 向发酵菌液中加 入吸附剂和填充剂黄原胶， 得沼泽红假单胞菌菌剂。 0048 (2) 枯草芽孢杆菌固体菌剂制备 ： 0049 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(中国农业微生物菌种保藏管理中心， 商品编 号 ： ACCC01031) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将枯草芽孢杆菌菌种接种 于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株 4冰箱内储存， 使用前取出活化两次， 将活化后 的菌株转250毫升茄瓶营养琼脂培养， 培养温度为24， 48小时生长良好时用灭水菌洗下， 作为种子罐的接种物。 在1吨的发酵罐中加入培养基， 其组成为。
32、 ： 玉米粉3、 豆饼粉3、 麸 皮粉 3、 K2HPO4 2.15、 KH2PO40.8、 MgSO40.075、 花生油 0.3。起始 pH7.5。从种子罐 向生产罐接种， 开始发酵。 发酵条件 ： 培养温度为37， 通风量为11.1， 罐压为0.05mpa/ cm2， 搅拌速度为220rpm， 接种20小时后每隔4小时取样一次， 观察菌体生长状况、 是否有污 染， 待发现孢子生成达 90以上后， 液体发酵完成， 向发酵菌液中加入吸附剂和填充剂黄原 胶， 得枯草芽孢杆菌菌剂。 0050 (3) 酿酒酵母菌固体菌剂制备 ： 0051 酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisia。
33、e)(广东省微生物研究所菌种保藏管理中 心， 商品编号 ： GIM 2.39) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将啤酒酵母菌菌 种接种于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株加矿物油后 4冰箱内储存， 使用前取出活 化两次， 将活化后的菌株转入250毫升茄子瓶中培养， 培养温度为28-30， 培养48小时， 菌 株生长良好时用灭菌生理盐水将其洗下， 洗脱物即为种子罐的接种物。在 1 吨的发酵罐中 加入培养基， 麦芽汁， 10 15 波林， 调 pH 至 6.4。从种子罐向生产罐接种， 接种量为 50kg， 开始发酵。发酵条件 ： 培养温度为 28， 罐压为 0.05mpa/cm2。
34、， 搅拌速度为 220rpm， 通风比 1 1.1， 接种 20 小时后每隔 4 小时取样一次， 观察菌体生长状况、 是否有污染， 液体发酵完 成后， 向发酵菌液中加入吸附剂和填充剂黄原胶， 得啤酒酵母菌菌剂。 0052 (4) 反硝化细菌固体菌剂制备 ： 0053 反硝化细菌 (Pseudomonas stutzeri)( 中国工业微生物菌种保藏管理中心， 商品 编号 ： CICC 23621) 菌剂的制备 ： 按供应商提供的配方配制培养基， 将反硝化细菌菌种接种 于培养基中培养， 将培养基斜面种子菌株加矿物油后 4冰箱内储存， 使用前取出活化两 次， 将活化后的菌株转入 250 毫升茄子瓶。
35、中培养， 培养温度为 37， 36 小时生长良好时用 说 明 书 CN 101698539 B6/9 页 8 灭菌水洗下， 作为种子罐的接种物。在 1 吨的发酵罐中加入培养基， 其组成为 ： 2.0kg KNO3、 2.0kg NaNO3、 0.03kg MgSO47H2O、 0.5kg K2HPO4、 10kg 酒石酸钾钠、 1.0kg KH2PO4、 0.5kg FeCl26H2O、 0.2kg CaCl22H2O、 0.1L 浓度为 0.2g/L 的刃天青溶液、 0.5kg L- 半胱氨酸， pH 值为 7-7.5。从种子罐向生产罐接种， 接种量为 5， 开始发酵。发酵条件 ： 培养温度。
36、为 37， 通风量为11.1， 罐压为0.05mpa/cm2， 搅拌速度为220rpm， 液体发酵完成， 将发酵液 吸附于由有机混合物组成的吸附剂上， 低温烘干得反硝化细菌固体菌剂。 0054 (5)、 微生物絮凝剂购自河北保定新金染料化工有限公司， 商品名称 ： 微生物絮凝 剂 NOC-1， 规格 ： 分子量 70-100 万 ( 固体 )。 0055 实施例 2 微生态制剂的制备 0056 (1) 按以下重量称取各组分 ： 0057 枯草芽孢杆菌固体菌剂 ： 125g 0058 酿酒酵母菌固体菌剂 ： 120g 0059 反硝化细菌固体菌剂 ： 360g 0060 光合细菌固体菌剂 ： 1。
37、55g 0061 微生物絮凝剂 ： 4.0g 0062 (2) 将光合细菌固体菌剂， 枯草芽孢杆菌固体菌剂， 酿酒酵母菌固体菌剂和反硝 化细菌固体菌剂与粉碎的有机混合物 ( 由以下重量份的组分组成 ： 沸石粉 30-50 份、 豆粕 35-40 份、 果渣 5-15 份 )307g 按比例混合均匀后挤压造粒， 得到活菌原菌柱状颗粒， 颗粒的 直径为 0.3cm， 长为 0.9 1.2cm ； 将微生物絮凝剂圆盘造粒， 得到白色球形颗粒， 球形颗粒 的直径优选为 0.07cm ； 将活菌原菌柱状颗粒和球形颗粒混合， 搅拌均匀， 即得。 0063 实施例 3 微生态制剂的制备 0064 (1) 按。
38、以下重量称取各组分 ： 0065 枯草芽孢杆菌固体菌剂 ： 125g 0066 酿酒酵母菌固体菌剂 ： 105g 0067 反硝化细菌固体菌剂 ： 330g 0068 光合细菌固体菌剂 ： 130g 0069 微生物絮凝剂 ： 3.0g 0070 (2) 将光合细菌固体菌剂， 枯草芽孢杆菌固体菌剂， 酿酒酵母菌固体菌剂和反硝 化细菌固体菌剂与粉碎的有机混合物 ( 由以下重量份的组分组成 ： 沸石粉 30-50 份、 豆粕 35-40 份、 果渣 5-15 份 )235.5g 按比例混合均匀后挤压造粒， 得到活菌原菌柱状颗粒， 颗粒 的直径为 0.3cm， 长为 0.9 1.2cm ； 将微生物。
39、絮凝剂圆盘造粒， 得到白色球形颗粒， 球形颗 粒的直径优选为 0.07cm ； 将活菌原菌柱状颗粒和球形颗粒混合， 搅拌均匀， 即得。 0071 实施例 4 微生态制剂的制备 0072 (1) 按以下重量称取各组分 ： 0073 枯草芽孢杆菌固体菌剂 ： 165g 0074 酿酒酵母菌固体菌剂 ： 133g 0075 反硝化细菌固体菌剂 ： 370g 0076 光合细菌固体菌剂 ： 170g 0077 微生物絮凝剂 ： 7.0g 说 明 书 CN 101698539 B7/9 页 9 0078 (2) 将光合细菌固体菌剂， 枯草芽孢杆菌固体菌剂， 酿酒酵母菌固体菌剂和反硝 化细菌固体菌剂与粉碎。
40、的有机混合物 ( 由以下重量份的组分组成 ： 沸石粉 30-50 份、 豆粕 35-40 份、 果渣 5-15 份 )155g 按比例混合均匀后挤压造粒， 得到活菌原菌柱状颗粒， 颗粒的 直径为 0.3cm， 长为 0.9 1.2cm ； 将微生物絮凝剂圆盘造粒， 得到白色球形颗粒， 球形颗粒 的直径优选为 0.07cm ； 将活菌原菌柱状颗粒和球形颗粒混合， 搅拌均匀， 即得。 0079 试验例 1 本发明微生态制剂的应用效果试验 0080 北京市朝阳区水产养殖服务中心水产科技园工厂化养殖车间是利用水处理设备， 循环使用水体， 进行罗非鱼、 蓝鲨， 彩虹鲷的越冬养殖， 车间分为养殖车间和水处。
41、理车间两 个部分， 其中养殖车间面积 1400 平方米， 水处理车间面积 400 平方米。 0081 养殖车间共有 40 个池子， 每个池子为 2.8 米 ( 宽 )8.0 米 ( 长 )1.8 米 ( 深 )， 平均蓄水 35.8 吨。水处理车间占地面积 500 平方米。 0082 所有鱼池共蓄水 1432 吨， 水处理车间内各个生物过滤池中共蓄水 800 吨， 调节池 中蓄水约 30 吨， 共计有水体 2262 吨。车间循环使用两台 10 千瓦的水泵， 每小时循环水流 量为 150 吨， 每天为 3600 吨， 即每天循环 1.6 次。车间内有热水井一眼， 用来调节水温在 22 度左右。 。
42、0083 工厂化车间 9 月 20 日开始试验， 捕捞室外池塘饲养的罗非鱼、 蓝鲨、 彩虹鲷， 投入 工厂化车间饲养， 直到翌年 5 月份。车间共投入 12391 公斤鱼。 0084 本次实验为本发明微生态制剂 ( 实施例 2-4 所制备的微生态制剂 ) 在工厂化养 殖条件下对鱼类生长和水质的影响， 10 月 9 日起， 以 10 号池为对照组 ( 不采用任何水体净 化措施 )， 以 18 号， 19 号池为试验组， 展开试验。试验内容为， 将本发明微生态制剂分别在 9:00， 10:30， 13:00， 16:00 投入 1kg 于 18 号和 19 号池 ； 10 号池不采用任何水体净化措。
43、施。 10 号池， 18 号池， 19 号池均投喂自制膨化颗粒饲料， 每个池子每天的投喂量为 50 公斤。 0085 实验开始后， 对于水质进行连续的监测。监测的项目包括 pH 值、 温度、 氨一氮、 亚 硝酸 - 氮。 0086 二、 实验开始时的基本数据 ： 0087 试验以18号池、 19号池为实验组， 10号池为对照组、 三个鱼池的基本情况如下 ： 水 质检验从 10 月 9 日连续做到 12 月 7 日， 共 60 天。实验期间水温在 21.5 至 23.0 之间。 0088 在 11 月 9 日和 12 月 9 日和第二年 1 月 9 日分别取样， 得到的鱼类生长情况见表 1 ： 。
44、0089 表 1 生长情况 0090 10 月 9 日 11-9 12-9 1-9 品种 个体重量 (g) 个体重量 (g) 个体重量 (g) 个体重量 (g) 罗非 44 95 156 215 蓝鲨 125 180 202 240 罗非 80 275 365 445 说 明 书 CN 101698539 B8/9 页 10 蓝鲨 140 230 285 376 罗非 80 115 250 321 蓝鲨 140 195 225 268 0091 从 10 月 9 日到第二年 1 月 9 日之间， 10 号池死亡罗非鱼 50 条， 蓝鲨 38 条。19 号 池死亡罗非鱼 32 条， 蓝鲨 18 。
45、条。18 号池死亡罗非鱼 35 条， 蓝鲨 21 条。 0092 三、 试验结果与分析 0093 1、 实验开始时， 试验组的氨氮含量比对照组低一些， 但是在第 18 天以后， 试验组 的氨氮反而高出对照组， 且在第 36 天前后， 达到高峰。 0094 2. 试验组和对照组水质中亚硝酸 - 氮含量的变化规律 ： 0095 无论是对照组， 还是试验组， 亚硝酸 - 氮的变化都没有什么确定的规律。和氨氮的 变化规律之间， 也看不出有什么一致的趋势。 0096 3. 试验组和对照组生长变化规律 ： 0097 从鱼类生长的情况来看， 试验组的生长明显好于对照组， 且添加本发明微生态制 剂的量愈多， 。
46、生长情况也愈好。另外， 从实验期间鱼类死亡数量来看， 试验组鱼的死亡数量 也比对照组鱼的死亡数量明显要低。 0098 试验例 2 本发明微生态制剂的应用效果试验 0099 一、 试验概况 0100 本试验在大兴区开展渔业养殖水体水质净化技术的试验示范项目。主要是在不 换水的前提下， 通过本发明微生态制剂降解吸收和转化水产养殖环境中的有机污染物 ( 残 饵、 粪便和生物死体 ) 及氮、 磷等。并形成本身 ( 有益微生物 ) 的优势种群， 从而有效抑制 有害微生物和藻类的生长繁殖。 达到优化养殖环境， 增强养殖鱼类抗病能力， 促进快速生长 等综合效果进行试验。 0101 二、 试验材料与方法 01。
47、02 1、 试验水体 ： 塘鱼及养殖用水。 0103 2、 试验对象 ： 本发明微生态制剂 ( 实施例 2-4 所制备 )。 0104 3、 试验地点 ： 大兴区青云店镇曹村渔场。 0105 4、 试验分组 ： 选取该场水面面积同为 12 亩、 水深同为 2 米的相邻四个池塘， CK 作 为对照池 ( 不采用任何水体净化措施 )、 K1 池用健水宝、 K2 池用本发明的微生态制剂、 K3 池 用光合细菌。 0106 试验期间每间隔 15 天测定四个组的透明度、 氨氮， 溶氧、 亚硝酸盐、 pH 值和水温等 指标并记录结果。试验期间抽查鱼的生长情况， 结束时计算平均尾重、 总重及饵料系数。 01。
48、07 7、 检测方法 ： 水质检测以实验室为主配合使用水质分析盒。首次施用时间 4 月 15 日， 截止到 10 月 31 日， 共施用 13 次， 。测试结果见附表。 0108 三、 试验结果与分析 0109 1、 养殖池塘试验结果与分析 0110 从试验数据可以得出， K2 池与 K1 和 K3 池相比， 氨氮平均降低 37， 亚硝酸盐平均 降低 46， DO 增加 16.4， 透明度提高 20， pH 值无明显差异， 充分证明本发明微生态制 说 明 书 CN 101698539 B9/9 页 11 剂对改善水质效果明显， 且整体效果要明显优于现有的水体净化剂。 0111 根据出塘情况， 。
49、K1 和 K3 池的饵料系数为 2.24， K2 池的饵料系数为 1.93， 饵料系数 降低了 13.8。K1 和 K3 池的成品率为 87， 试验池 (K2 池 ) 成品率为 96， 鱼产品质量 提高了 9。 0112 四、 试验结论 0113 通过试验可以看出本发明微生态制剂综合效果显著， 主要表现在以下几个方面 ： 0114 1、 形成优势种群， 抑制有害菌的繁殖。 0115 2、 吸收利用水体中氨氮等有害物质， 改善养殖环境。 0116 3、 提高鱼类免疫力， 减少鱼病发生。 0117 4、 促进消化吸收， 增加可利用饵料数量。 0118 试验结果证明 ： 本发明微生态制剂可以增加水体透明度和溶氧， 整个养殖周期不 用换水， 特别是水温 25以上时能够有效地降低水体的氨氮亚酸盐等有害物质的含量， 降 低饵料系数， 减少生产成本， 提高经济效益。最主要的作用在于可以有效改善水质， 节约用 水， 使用后无药物残留， 有利于环境保护， 符合现代水产业无公害、 绿色、 健康养殖发展的需 要。 说 明 书 。