一种海替生型二萜生物碱及其制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102127016 B (45)授权公告日 2012.08.08 CN 102127016 B *CN102127016B* (21)申请号 201010614670.4 (22)申请日 2010.12.30 C07D 221/22(2006.01) (73)专利权人成都大学地址 610106 四川省成都市外东十陵镇 (72)发明人苟小军陈封政李书华刘嵬宋芹颜军 (74)专利代理机构成都科奥专利事务所 ( 普通合伙 ) 51101 代理人王蔚 CN 1147766 A,1997.04.16, 说明书第 2-25 页 . 张思佳等 . 附子的化学成。

2、分研究 . 药学与临床研究 .2010, 第 18 卷 ( 第 3 期 ), 第 262-264 页 . Azucena Gonzlez-Coloma, et al. Antifeedant C20 Diterpene Alkaloids. CHEMISTRY & BIODIVERSITY .2004, 第 1 卷第 1327-1335 页 . (54) 发明名称一种海替生型二萜生物碱及其制备方法 (57) 摘要本发明公开了一种海替生型二萜生物碱及其制备方法，该二萜生物碱型以毛茛科乌头属植物附子为原料，经酸水提取、碱化、有机溶剂萃取和硅胶短柱层析、洗脱而制得，经色谱方法。

3、鉴定该化合物是一种新型的海替生型二萜生物碱 carmichaeline A。动物实验表明，该新化合物对多种致炎剂引起的小鼠炎症模型具有一定的抗炎活性。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员冯清伟权利要求书 1 页说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书 1 页说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种海替生型二萜生物碱，其结构式 (I) 如下： 2. 如权利要求 1 所述海替生型二萜生物碱的制备方法，其特征在于包括如下步骤： (1) 取附子的干粉用 pH 1-2 的酸性水溶液冷浸 1 天，然后过滤得酸水提取液；。

4、(2) 用弱碱碱化酸水提取液至 pH 9-10，再用有机溶剂萃取 2-3 次，将萃取液水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩萃取液得总生物碱部分； (3) 将步骤 (2) 制得的总生物碱部分通过层析硅胶短柱层析，分别以不同比例的洗脱有机溶剂梯度洗脱，得到该化合物；步骤 (1) 所述酸性水溶液的酸化剂是盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、丁酸、醋酸中的一种或它们的混合物；步骤 (2) 所述弱碱是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氨水中的一种或它们的混合物，所述萃取有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚或正丁醇；步骤 (3) 所述洗脱有机溶剂是石油醚 - 丙。

5、酮体系、乙酸乙酯 - 丙酮体系、氯仿 - 丙酮体系、氯仿 - 甲醇体系中的一种。权利要求书 CN 102127016 B 2 1/3 页 3 一种海替生型二萜生物碱及其制备方法技术领域 0001 本发明涉及一种从毛茛科乌头属植物附子中提取、分离的海替生型二萜生物碱及其具体制备方法。背景技术 0002 乌头主产于四川等地，其子根称为附子，是常用中药。现代药理学研究表明其主要活性成分为 C19型二萜生物碱，具有抗炎、镇痛等多种活性，其含有的 3- 去氧乌头碱已开发成我国的原创新药。附子目前主要用于祛风湿等方面的疾病，具有镇痛、抗炎作用。 0003 目前。

6、还未见有从毛茛科乌头属植物附子中提取、分离出的如结构式 (I) 所示的二萜生物碱的报道。发明内容 0004 本发明的目的在于提供一种结构式 (I) 所示海替生型二萜生物碱、及其制备结构式 (I) 所示海替生型二萜生物碱的方法。 0005 本发明提供了如下结构式 (I) 所示海替生型二萜生物碱： 0006 0007 本发明同时提供了结构式 (I) 所示海替生型二萜生物碱的制备方法，该方法包括如下步骤： 0008 (1) 取附子的干粉用 pH 1-2 的酸性水溶液冷浸 1 天，然后过滤得酸水提取液； 0009 (2) 用弱碱碱化酸水提取液至 pH 9-10，再用有机溶剂萃取。

7、 2-3 次，将萃取液水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩萃取液得总生物碱部分， 0010 (3) 将步骤 (2) 制得的总生物碱部分通过层析硅胶短柱层析，分别以不同比例的洗脱有机溶剂梯度洗脱，得到该化合物； 0011 步骤 (1) 所述酸性水溶液的酸化剂是盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、丁酸、醋酸中的一种或它们的混合物； 0012 步骤 (2) 所述弱碱是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氨水中的一种或它们的混合说明书 CN 102127016 B 3 2/3 页 4 物，所述萃取有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚或正丁醇； 0013 步骤 (3。

8、) 所述洗脱有机溶剂是石油醚 - 丙酮体系、乙酸乙酯 - 丙酮体系、氯仿 - 丙酮体系、氯仿 - 甲醇体系中的一种。 0014 结构式 (I) 所示海替生型二萜生物碱为白色无定形粉末，分子式为 C22H29NO3，其核磁数据如下： 0015 (400MHz for 1H-NMR， 100MHz for 13C-NMR， CDCl3， in ppm， J in Hz) 0016 0017 0018 下面用实验结果来说明本发明的效果： 0019 实验动物：小鼠，每只 25 克左右，雌雄各半，由四川乐山长征制药厂实验动物中心提供； 0020 药品及试剂：消炎痛、。

9、二甲苯，四川长征化学试剂厂提供。 0021 实验方法：将小鼠 80 只分为四组，每组雌雄各半，分别腹腔注射等量生理盐水、本发明化合物 0.4mg/kg、 0.2mg/kg 及皮下注射消炎痛 20mg/kg。给药 30min 后于每只小鼠左侧耳壳均匀滴涂二甲苯 0.03ml，右侧耳壳作对照。2h 后剪下耳壳，用直径 8mm 打孔器取下耳片，称重。以左右耳重量差 ( 单位为 mg) 为肿胀度。实验结果如下表： 0022 说明书 CN 102127016 B 4 3/3 页 5 0023 给药组与对照组比较 P 0.01，表明目标化合物能显著抑制小鼠耳壳二甲苯致肿，。

10、具有抗炎作用。 0024 下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明的内容并不仅限于此。具体实施方式 0025 实施例 1 0026 取干燥的附子，粉碎，用pH 2的盐酸水溶液冷浸1天，重复提取三次，合并提取液，滤去沉淀，然后加氨水碱化酸水提取液至 pH 9，再用乙酸乙酯萃取三次，将萃取液用水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩制得生物总碱提取物，将生物总碱经硅胶 H 短柱层析，分别以不同比例的石油醚 - 丙酮梯度洗脱，得本发明化合物。 0027 实施例 2 0028 取干燥的附子，粉碎，用pH 1的硫酸水溶液冷浸1天，重复提取三次，合并提取液，滤去沉淀，然后加氢氧化钠碱化酸水提取液至 pH 10，再用氯仿萃取三次，将萃取液用水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩制得生物总碱提取物，将生物总碱经硅胶 H 短柱层析，分别以不同比例的乙酸乙酯 - 丙酮梯度洗脱，得本发明化合物。说明书 CN 102127016 B 5 。

摘要
申请专利号：	CN201010614670.4	申请日：	20101230
公开号：	CN102127016B	公开日：	20120808
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	C07D221/22	主分类号：	C07D221/22
申请人：	成都大学
发明人：	苟小军,陈封政,李书华,刘嵬,宋芹,颜军
地址：	610106 四川省成都市外东十陵镇
优先权：	CN201010614670A
专利代理机构：	成都科奥专利事务所(普通合伙)	代理人：	王蔚
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内容摘要

本发明公开了一种海替生型二萜生物碱及其制备方法，该二萜生物碱型以毛茛科乌头属植物附子为原料，经酸水提取、碱化、有机溶剂萃取和硅胶短柱层析、洗脱而制得，经色谱方法鉴定该化合物是一种新型的海替生型二萜生物碱carmichaeline?A。动物实验表明，该新化合物对多种致炎剂引起的小鼠炎症模型具有一定的抗炎活性。

权利要求书

1.一种海替生型二萜生物碱，其结构式(I)如下： 2.如权利要求1所述海替生型二萜生物碱的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取附子的干粉用pH 1-2的酸性水溶液冷浸1天，然后过滤得酸水提取液；(2)用弱碱碱化酸水提取液至pH 9-10，再用有机溶剂萃取2-3次，将萃取液水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩萃取液得总生物碱部分；(3)将步骤(2)制得的总生物碱部分通过层析硅胶短柱层析，分别以不同比例的洗脱有机溶剂梯度洗脱，得到该化合物；步骤(1)所述酸性水溶液的酸化剂是盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、丁酸、醋酸中的一种或它们的混合物；步骤(2)所述弱碱是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氨水中的一种或它们的混合物，所述萃取有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚或正丁醇；步骤(3)所述洗脱有机溶剂是石油醚-丙酮体系、乙酸乙酯-丙酮体系、氯仿-丙酮体系、氯仿-甲醇体系中的一种。

说明书

技术领域

本发明涉及一种从毛茛科乌头属植物附子中提取、分离的海替生型二萜生物碱及其具体制备方法。

背景技术

乌头主产于四川等地，其子根称为附子，是常用中药。现代药理学研究表明其主要活性成分为C19型二萜生物碱，具有抗炎、镇痛等多种活性，其含有的3-去氧乌头碱已开发成我国的原创新药。附子目前主要用于祛风湿等方面的疾病，具有镇痛、抗炎作用。

目前还未见有从毛茛科乌头属植物附子中提取、分离出的如结构式(I)所示的二萜生物碱的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结构式(I)所示海替生型二萜生物碱、及其制备结构式(I)所示海替生型二萜生物碱的方法。

本发明提供了如下结构式(I)所示海替生型二萜生物碱：

本发明同时提供了结构式(I)所示海替生型二萜生物碱的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1)取附子的干粉用pH 1-2的酸性水溶液冷浸1天，然后过滤得酸水提取液；

(2)用弱碱碱化酸水提取液至pH 9-10，再用有机溶剂萃取2-3次，将萃取液水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩萃取液得总生物碱部分，

(3)将步骤(2)制得的总生物碱部分通过层析硅胶短柱层析，分别以不同比例的洗脱有机溶剂梯度洗脱，得到该化合物；

步骤(1)所述酸性水溶液的酸化剂是盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、甲酸、丁酸、醋酸中的一种或它们的混合物；

步骤(2)所述弱碱是氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氨水中的一种或它们的混合物，所述萃取有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚或正丁醇；

步骤(3)所述洗脱有机溶剂是石油醚-丙酮体系、乙酸乙酯-丙酮体系、氯仿-丙酮体系、氯仿-甲醇体系中的一种。

结构式(I)所示海替生型二萜生物碱为白色无定形粉末，分子式为 C22H29NO3，其核磁数据如下：

(400MHz for 1H-NMR，100MHz for 13C-NMR，CDCl3，δin ppm，J in Hz)

下面用实验结果来说明本发明的效果：

实验动物：小鼠，每只25克左右，雌雄各半，由四川乐山长征制药厂实验动物中心提供；

药品及试剂：消炎痛、二甲苯，四川长征化学试剂厂提供。

实验方法：将小鼠80只分为四组，每组雌雄各半，分别腹腔注射等量生理盐水、本发明化合物0.4mg/kg、0.2mg/kg及皮下注射消炎痛20mg/kg。给药30min后于每只小鼠左侧耳壳均匀滴涂二甲苯0.03ml，右侧耳壳作对照。2h后剪下耳壳，用直径8mm打孔器取下耳片，称重。以左右耳重量差 (单位为mg)为肿胀度。实验结果如下表：

给药组与对照组比较P＜0.01，表明目标化合物能显著抑制小鼠耳壳二甲苯致肿，具有抗炎作用。

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明的内容并不仅限于此。

具体实施方式

实施例1

取干燥的附子，粉碎，用pH 2的盐酸水溶液冷浸1天，重复提取三次，合并提取液，滤去沉淀，然后加氨水碱化酸水提取液至pH 9，再用乙酸乙酯萃取三次，将萃取液用水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩制得生物总碱提取物，将生物总碱经硅胶H短柱层析，分别以不同比例的石油醚-丙酮梯度洗脱，得本发明化合物。

实施例2

取干燥的附子，粉碎，用pH 1的硫酸水溶液冷浸1天，重复提取三次，合并提取液，滤去沉淀，然后加氢氧化钠碱化酸水提取液至pH 10，再用氯仿萃取三次，将萃取液用水洗至中性，并用无水硫酸钠干燥，然后减压浓缩制得生物总碱提取物，将生物总碱经硅胶H短柱层析，分别以不同比例的乙酸乙酯-丙酮梯度洗脱，得本发明化合物。