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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611266869.6 (22)申请日 2016.12.31 (71)申请人 成都育芽科技有限公司 地址 610041 四川省成都市高新区天府大 道中段1388号1栋8层866号 (72)发明人 向红先 (51)Int.Cl. C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称 一种多功能干细胞培养方法及所用培养基 (57)摘要 本发明属于生物医学技术领域。 本发明提供 了一种多功能干细胞培养基， 包括DMEM/F12培养 基和添加剂， 添加剂为： 0.005-0.0。
2、09mg/L丙酮 酸钠、 0.1-0.3mg/L尼克酰胺、 10-15mg/L成纤 维细胞生长因子和0.2-0.3mg/L碳酸氢钠。 本发 明所提供的培养基所用添加剂成分简单、 价格低 廉， 易于推广使用； 利用本发明培养人多功能干 细胞， 可以获得十分优秀的稳定的生长效果。 权利要求书1页 说明书3页 附图3页 CN 106591295 A 2017.04.26 CN 106591295 A 1.一种多功能干细胞培养基， 包括DMEM/F12培养基和添加剂， 其特征在于： 所述添加剂 为： 0.005-0.009 mg/L丙酮酸钠、 0.1-0.3 mg/L尼克酰胺、 10-15 mg/L成。
3、纤维细胞生长因子 和0.2-0.3 mg/L碳酸氢钠。 2.根据权利要求1所述的培养基， 其特征在于， 所述添加剂为： 0.006-0.008 mg/L丙酮 酸钠、 0.2-0.3 mg/L尼克酰胺、 12-15 mg/L成纤维细胞生长因子和0.25-0.3 mg/L碳酸氢 钠。 3.根据权利要求1所述的培养基， 其特征在于， 所述添加剂为： 0.0074 mg/L丙酮酸钠、 0.27 mg/L尼克酰胺、 13.6 mg/L成纤维细胞生长因子和0.28 mg/L碳酸氢钠。 4.根据权利要求1所述的培养基， 其特征在于， 所述培养基在使用前配置， 于0-8下保 存。 5.利用权利要求1-4任一项。
4、所述培养基培养多功能干细胞的方法， 其特征在于， 所述方 法包括： 接种多功能干细胞后， 加入所述培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为37， 5%的CO2氛围； 当多功能干细胞汇合度到70%以上时， 进行消化处理。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 消化处理时， 利用0 .5mM EDTA进行。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106591295 A 2 一种多功能干细胞培养方法及所用培养基 技术领域 0001 本发明属于生物医学技术领域， 具体涉及一种多功能干细胞培养方法及所用培养 基。 背景技术 0002 目前， 对于干细胞的培养还存在着干细胞生长过程不稳定和所。
5、用培养基成分过于 复杂的缺点。 0003 在避免使用血清的情况下， 一些用于替代血清的添加剂的成分过于复杂， 常常导 致培养基成本过于高昂而无法得到广泛应用。 对于人多功能干细胞而言， 中国专利CN 103952374 B提供了一种无动物制品的培养基， 并取得了良好的效果， 其比Stemcell公司的 TeSR-E8培养基和Life公司的E8培养基在培养hES/iPS时可稳定的获得更多的干细胞。 0004 然而， 其虽然避免了动物制品的使用， 但所用的添加剂成分还是较多， 且所用添加 剂的价格大多较为高昂。 0005 因此， 如果能在其基础上开发添加剂更少且较为便宜的培养基则是本领域梦寐以 求。
6、的， 如还能获得更好的干细胞生长效果， 则更佳。 发明内容 0006 针对现有技术的缺点， 本发明的目的之一在于一种多功能干细胞培养基， 包括 DMEM/F12培养基和添加剂， 其特征在于： 所述添加剂为： 0.005-0.009 mg/L丙酮酸钠、 0.1-0.3 mg/L尼克酰胺、 10-15 mg/L成纤 维细胞生长因子和0.2-0.3 mg/L碳酸氢钠。 0007 如本发明的实施例所示， 本发明在培养人的IPS细胞系HIPS时， 可以很稳定的获得 良好的培养效果， 培养4天后， 细胞数目可以达到3-3.5106个。 可以为多功能干细胞的后 续研究提供基础。 相对于CN 10395237。
7、4 B而言， 利用本发明培养多功能干细胞， 可获得更加 有效的生长效率， 这一点是十分可喜的。 0008 优选的， 所述添加剂为： 0.006-0.008 mg/L丙酮酸钠、 0.2-0.3 mg/L尼克酰胺、 12- 15 mg/L成纤维细胞生长因子和0.25-0.3 mg/L碳酸氢钠。 0009 作为本发明最好的方案， 所述添加剂为： 0.0074 mg/L丙酮酸钠、 0.27 mg/L尼克酰 胺、 13.6 mg/L成纤维细胞生长因子和0.28 mg/L碳酸氢钠。 0010 所述培养基在使用前配置， 于0-8下保存。 0011 本发明的另外一个目的在于提供利用上述培养基培养多功能干细胞的。
8、方法， 该方 法包括： 接种多功能干细胞后， 加入所述培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为37， 5%的CO2氛围； 当多功能干细胞汇合度到70%以上时， 进行消化处理。 0012 优选的， 消化处理时， 利用0.5mM EDTA进行。 0013 本发明的有益效果： 说明书 1/3 页 3 CN 106591295 A 3 1、 本发明所提供的培养基所用添加剂成分简单、 价格低廉， 易于推广使用； 2、 利用本发明培养人多功能干细胞， 可以获得十分优秀的稳定的生长效果。 附图说明 0014 图1为本发明实施例1的干细胞增值曲线图。 0015 图2为本发明实施例2的干细胞增值曲线图。
9、。 0016 图3为本发明实施例3的干细胞增值曲线图。 0017 图4为本发明实施例4的干细胞增值曲线图。 0018 图5为本发明实施例5的干细胞增值曲线图。 具体实施方式 0019 下面通过实施例对本发明进行具体描述， 有必要在此指出的是以下实施例只是用 于对本发明进行进一步的说明， 不能理解为对本发明保护范围的限制， 该领域的技术熟练 人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整， 仍属于本发明的保护范围。 0020 实施例1 1.1 配置培养基： 基础培养基： DMEM/F12培养基 添加剂为： 0.005 mg/L丙酮酸钠、 0.1 mg/L尼克酰胺、 10 mg/L成纤维细胞生。
10、长因子和 0.2 mg/L碳酸氢钠。 0021 1.2 复苏人的IPS细胞系HIPS， 接种至Matrigel培养皿里， 加入配置好的培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为37， 5%的CO2氛围。 当多功能干细胞汇合度到70% 时， 进行消化处理， 进行传代培养， 连续培养40代。 绘制增值曲线， 如图1所示。 0022 实施例2 1.1 配置培养基： 基础培养基： DMEM/F12培养基 添加剂为： 0.009 mg/L丙酮酸钠、 0.3 mg/L尼克酰胺、 15 mg/L成纤维细胞生长因子和 0.3 mg/L碳酸氢钠。 0023 1.2 复苏人的IPS细胞系HIPS， 接种至。
11、Matrigel培养皿里， 加入配置好的培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为37， 5%的CO2氛围。 当多功能干细胞汇合度到70% 时， 进行消化处理， 进行传代培养， 连续培养40代。 绘制增值曲线， 如图2所示。 0024 实施例3 1.1 配置培养基： 基础培养基： DMEM/F12培养基 添加剂为： 0.006 mg/L丙酮酸钠、 0.2 mg/L尼克酰胺、 12 mg/L成纤维细胞生长因子和 0.25 mg/L碳酸氢钠。 0025 1.2 复苏人的IPS细胞系HIPS， 接种至Matrigel培养皿里， 加入配置好的培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为3。
12、7， 5%的CO2氛围。 当多功能干细胞汇合度到70% 时， 进行消化处理， 进行传代培养， 连续培养40代。 绘制增值曲线， 如图3所示。 0026 实施例4 说明书 2/3 页 4 CN 106591295 A 4 1.1 配置培养基： 基础培养基： DMEM/F12培养基 添加剂为： 0.008 mg/L丙酮酸钠、 0.3 mg/L尼克酰胺、 15 mg/L成纤维细胞生长因子和 0.3 mg/L碳酸氢钠。 0027 1.2 复苏人的IPS细胞系HIPS， 接种至Matrigel培养皿里， 加入配置好的培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为37， 5%的CO2氛围。 当多功能干。
13、细胞汇合度到70% 时， 进行消化处理， 进行传代培养， 连续培养40代。 绘制增值曲线， 如图4所示。 0028 实施例5 1.1 配置培养基： 基础培养基： DMEM/F12培养基 添加剂为： 0.0074 mg/L丙酮酸钠、 0.27 mg/L尼克酰胺、 13.6 mg/L成纤维细胞生长因 子和0.28 mg/L碳酸氢钠。 0029 1.2 复苏人的IPS细胞系HIPS， 接种至Matrigel培养皿里， 加入配置好的培养基， 每天进行换液培养， 培养条件为： 温度为37， 5%的CO2氛围。 当多功能干细胞汇合度到70% 时， 进行消化处理， 进行传代培养， 连续培养40代。 绘制增值曲线， 如图5所示。 说明书 3/3 页 5 CN 106591295 A 5 图1 图2 说明书附图 1/3 页 6 CN 106591295 A 6 图3 图4 说明书附图 2/3 页 7 CN 106591295 A 7 图5 说明书附图 3/3 页 8 CN 106591295 A 8 。