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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611227655.8 (22)申请日 2016.12.27 (71)申请人 浙江海洋大学 地址 316022 浙江省舟山市定海区临城街 道海大南路1号 (72)发明人 金火喜徐红萍杨立业 欧阳小琨 (74)专利代理机构 杭州杭诚专利事务所有限公 司 33109 代理人 尉伟敏 (51)Int.Cl. C12P 21/06(2006.01) C12P 21/02(2006.01) C07K 1/34(2006.01) C12R 1/10(2006.01) C12R 1/11。
2、(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽 的方法 (57)摘要 本发明涉及一种微生物发酵法制备的海参 胶原蛋白肽的方法， 将东海乌参浸泡打浆、 酶解， 过滤后接种发酵种子， 发酵后进行冷冻干燥或喷 雾干燥得到海参胶原蛋白肽。 本发明的制备方法 生产周期短， 得率高， 产品纯度高， 具有显著的抗 氧化性， 可溶性好， 吸收性高， 无异味和苦味； 使 海参得到充分的高值化加工利用。 权利要求书1页 说明书4页 CN 106591408 A 2017.04.26 CN 106591408 A 1.一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋。
3、白肽的方法， 其特征在于， 包括如下工艺步骤： a.选取富含胶原蛋白的东海乌参为原料， 清水浸泡脱除盐分， 洗净后浸入浸泡液50- 60min， 捞出沥干水分， 使用打浆机进行打浆处理， 加入35-40倍体积的纯净水后采用胶体磨 进行研磨细化处理， 得浆状物； b.将步骤a得到的浆状物加热至中心温度达到130-145， 保持10min， 冷却到20-25， 加入蛋白酶进行酶解， 过120目滤网， 得到胶原蛋白滤液； c.在步骤b得到的胶原蛋白滤液中， 按重量百分数0.5-3加入葡萄糖或蔗糖， 调节pH 到6-7， 得初始发酵液； d.将步骤c得到的初始发酵液放入空消发酵罐进行实消， 空消和实消。
4、的条件均为121 、 20min， 待罐温降至37， 接入发酵种子， 接种量是初始发酵液体积百分数的2-4.5， 接 种混合液在37和100-300rpm搅拌转速的条件下密封发酵2-5天， 发酵液滤去残渣， 得发酵 滤液； e.在步骤d得到的发酵滤液中加入15-20海藻糖、 0.3-0.8麦芽糊精与3-5甘油， - 50预冻2-6h， 然后在-70冷阱温度和150Pa真空度的条件下冷冻干燥12-20h， 直接得 到海参胶原蛋白肽； 或者， 步骤d得到的发酵滤液采用孔径为0.1-0.5 m的管式膜脱除大分 子， 然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级， 截留液采用纳滤膜浓缩脱盐， 然后在 。
5、175-185进风温度、 75-85出风温度和0.35-0.45MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥， 得到 海参胶原蛋白肽。 2.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 其特征在 于， 步骤a中浸泡液由以下重量份的原料组成： 山楂20-25份、 野菊花1-5份、 广藿香30-40份、 壳聚糖15-18份、 海藻酸钠12-15份与水200-350份， 东海乌参与浸泡液的质量比为1:10。 3.根据权利要求1所述的一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 其特征在 于， 步骤d中发酵种子为就地堆肥地芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌或巨大芽孢杆菌。 4.根据权利要求3所述的一种微生。
6、物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 其特征在 于， 发酵种子培养基的原料按以下重量份数计： 3大豆蛋白胨、 5富硒酵母、 6天冬酰 胺、 5.5蛋氨酸、 0.5牛肉粉、 0.5葡萄糖、 0.1氯化钠、 0.01磷酸二氢钾， 其余为蒸 馏水， 121高温灭菌20min， 冷却后备用。 5.根据权利要求4所述的一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 其特征在 于， 将就地堆肥地芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌或巨大芽孢杆菌接种于发酵种子培养基中， 摇床 180r/min， 培养48h， 发酵液中芽孢杆菌108cfu/mL。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106591408 A 2 一种微生物发。
7、酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种胶原蛋白肽的制备， 尤其涉及一种微生物发酵法制备的海参胶原 蛋白肽的方法。 背景技术 0002 胶原多肽是胶原或明胶经蛋白酶等降解处理后制得的介于蛋白质和氨基酸之间 的产物， 一般将由2到10个氨基酸通过肽键形成的直链肽称为寡肽或小肽； 由肽键结合起来 的多于10个氨基酸的聚合体则称为多肽。 近年来， 很多学者对肽的消化吸收机制进行了研 究， 认为肽甚至相当量的蛋白质在动物体内可以被完整吸收并被机体利用， 如口服疫苗和 酶法治疗疾病。 肽的转运系统和游离氨基酸相比转运速度更快。 许多试验表明， 肽的添加还 可以提高氨基酸的吸收速。
8、度。 此外肽还能促进蛋白质沉积率， 因为肽能直接用于人体蛋白 质的合成。 长期食用经过添加胶原蛋白肽的食品有助于改善皮肤弹性， 延缓衰老， 增强免疫 力， 同时食用方便， 适合于大众人群。 0003 海参是重要的海洋食物和药物资源。 全世界有1000多种海参， 其中40多种可供食 用。 近年来， 我国海参养殖业发展极快， 海参年产量已超过6万吨。 因此， 亟待进一步开发海 参的高值化加工技术。 海参体壁含有结构独特的活性物质如海参胶原蛋白、 海参多糖、 海参 皂苷等。 药理实验证明， 海参具有抗肿瘤、 提高免疫功能、 降血脂、 抗凝血、 抗动脉粥样硬化 等多种生理活性。 目前， 国内外对海参活。
9、性成分的研究和开发主要集中在海参多糖和海参 皂苷等方面。 0004 海参胶原蛋白含量占海参体壁粗蛋白的60以上， 有关海参胶原蛋白类型和理化 性质的研究已有报道(Comp Biochem Physiol， 1995， 112A： 463-478； Food Chemistry andToxicology， 2002， 67(4)： 1319-132； 水产学报， 2006， 4： 549-553)， 中国发明专利CN 101215315A也公开了一种在低温下(0-25)利用胃蛋白酶促溶提取海参胶原蛋白的方法。 与胶原蛋白相比， 胶原蛋白肽具有更易吸收和高生理活性等特点。 有关海参多肽的研究已 。
10、有报道， 目前已公开的发明专利有CN 1858222A和CN 101191139A。 这些研究中所述的海参 多肽是一种至少包括海参皂苷、 蛋白多肽和胶原多肽等活性物质的混合物。 有关海参胶原 蛋白活性肽尚未见报道。 发明内容 0005 本发明提供了一种提高纯度与提取率， 去除苦腥味、 提高口感、 利于人体吸收的微 生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法。 0006 本发明通过以下技术方案： 一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 包括如下工艺步骤： a.选取富含胶原蛋白的东海乌参为原料， 清水浸泡脱除盐分， 洗净后浸入浸泡液50- 60min， 捞出沥干水分， 使用打浆机进行打浆处理， 加。
11、入35-40倍体积的纯净水后采用胶体磨 进行研磨细化处理， 得浆状物； 说明书 1/4 页 3 CN 106591408 A 3 b.将步骤a得到的浆状物加热至中心温度达到130-145， 保持10min， 冷却到20-25， 加入蛋白酶进行酶解， 过120目滤网， 得到胶原蛋白滤液； c.在步骤b得到的胶原蛋白滤液中， 按重量百分数0.5-3加入葡萄糖或蔗糖， 调节pH 到6-7， 得初始发酵液； d.将步骤c得到的初始发酵液放入空消发酵罐进行实消， 空消和实消的条件均为121 、 20min， 待罐温降至37， 接入发酵种子， 接种量是初始发酵液体积百分数的2-4.5， 接 种混合液在37。
12、和100-300rpm搅拌转速的条件下密封发酵2-5天， 发酵液滤去残渣， 得发酵 滤液； e.在步骤d得到的发酵滤液中加入15-20海藻糖、 0.3-0.8麦芽糊精与3-5甘油， - 50预冻2-6h， 然后在-70冷阱温度和150Pa真空度的条件下冷冻干燥12-20h， 直接得 到海参胶原蛋白肽； 或者， 步骤d得到的发酵滤液采用孔径为0.1-0.5 m的管式膜脱除大分 子， 然后采用截留分子量为3kDa的超滤膜截留分级， 截留液采用纳滤膜浓缩脱盐， 然后在 175-185进风温度、 75-85出风温度和0.35-0.45MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥， 得到 海参胶原蛋白肽。 0007 。
13、作为优选， 步骤a中浸泡液由以下重量份的原料组成： 山楂20-25份、 野菊花1-5份、 广藿香30-40份、 壳聚糖15-18份、 海藻酸钠12-15份与水200-350份， 东海乌参与浸泡液的质 量比为1:10。 0008 作为优选， 步骤d中发酵种子为就地堆肥地芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌或巨大芽孢杆 菌。 0009 作为优选， 发酵种子培养基的原料按以下重量份数计： 3大豆蛋白胨、 5富硒酵 母、 6天冬酰胺、 5.5蛋氨酸、 0.5牛肉粉、 0.5葡萄糖、 0.1氯化钠、 0.01磷酸二氢 钾， 其余为蒸馏水， 121高温灭菌20min， 冷却后备用。 0010 作为优选， 将就地堆肥地。
14、芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌或巨大芽孢杆菌接种于发酵种 子培养基中， 摇床180r/min， 培养48h， 发酵液中芽孢杆菌108cfu/mL。 0011 本发明的有益效果是： 本发明的制备方法生产周期短， 得率高， 产品纯度高， 具有 显著的抗氧化性， 可溶性好， 吸收性高， 无异味和苦味； 使海参得到充分的高值化加工利用。 具体实施方式 0012 为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案， 但这些阐述并不对本发明做 任何形式上的限定。 除另有说明， 否则本发明所用的所有科学和技术术语具有本发明所属 和相关领域的一般技术人员通常所理解的含义。 0013 下面结合具体实施例对本发明做出进一步详。
15、细的阐述， 但应当明白， 实施例不应 理解为对本发明保护范围的限制。 0014 实施例1 一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 包括如下工艺步骤： a .选取富含胶原蛋白的东海乌参为原料， 清水浸泡脱除盐分， 洗净后浸入浸泡液 50min， 捞出沥干水分， 使用打浆机进行打浆处理， 加入35倍体积的纯净水后采用胶体磨进 行研磨细化处理， 得浆状物； 浸泡液由以下重量份的原料组成： 山楂20份、 野菊花1份、 广藿 香30份、 壳聚糖15份、 海藻酸钠12份与水200份， 东海乌参与浸泡液的质量比为1:10； 说明书 2/4 页 4 CN 106591408 A 4 b.将步骤a得到的浆。
16、状物加热至中心温度达到130， 保持10min， 冷却到20， 加入蛋 白酶进行酶解， 过120目滤网， 得到胶原蛋白滤液； c.在步骤b得到的胶原蛋白滤液中， 按重量百分数0.5加入葡萄糖， 调节pH到6， 得初 始发酵液； d.将步骤c得到的初始发酵液放入空消发酵罐进行实消， 空消和实消的条件均为121 、 20min， 待罐温降至37， 接入发酵种子， 接种量是初始发酵液体积百分数的2， 接种混 合液在37和100rpm搅拌转速的条件下密封发酵2天， 发酵液滤去残渣， 得发酵滤液； 发酵 种子为就地堆肥地芽孢杆菌； 发酵种子培养基的原料按以下重量份数计： 3大豆蛋白胨、 5富硒酵母、 6。
17、天冬酰胺、 5.5蛋氨酸、 0.5牛肉粉、 0.5葡萄糖、 0.1氯化钠、 0.01磷酸二氢钾， 其余为蒸馏水， 121高温灭菌20min， 冷却后备用； 将就地堆肥地芽孢杆菌接种于发酵种子培养基中， 摇床180r/min， 培养48h， 发酵液中 芽孢杆菌108cfu/mL； e.在步骤d得到的发酵滤液中加入15海藻糖、 0.3麦芽糊精与3甘油， -50预冻 2h， 然后在-70冷阱温度和150Pa真空度的条件下冷冻干燥12h， 直接得到海参胶原蛋白 肽。 0015 实施例2 一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 包括如下工艺步骤： a .选取富含胶原蛋白的东海乌参为原料， 清水浸泡。
18、脱除盐分， 洗净后浸入浸泡液 55min， 捞出沥干水分， 使用打浆机进行打浆处理， 加入38倍体积的纯净水后采用胶体磨进 行研磨细化处理， 得浆状物； 浸泡液由以下重量份的原料组成： 山楂22份、 野菊花3份、 广藿 香36份、 壳聚糖17份、 海藻酸钠13份与水250份， 东海乌参与浸泡液的质量比为1:10； b.将步骤a得到的浆状物加热至中心温度达到142， 保持10min， 冷却到22， 加入蛋 白酶进行酶解， 过120目滤网， 得到胶原蛋白滤液； c.在步骤b得到的胶原蛋白滤液中， 按重量百分数2加入蔗糖， 调节pH到6.5， 得初始 发酵液； d.将步骤c得到的初始发酵液放入空消发。
19、酵罐进行实消， 空消和实消的条件均为121 、 20min， 待罐温降至37， 接入发酵种子， 接种量是初始发酵液体积百分数的3.2， 接种 混合液在37和200rpm搅拌转速的条件下密封发酵3天， 发酵液滤去残渣， 得发酵滤液； 发 酵种子为地衣芽孢杆菌； 发酵种子培养基的原料按以下重量份数计： 3大豆蛋白胨、 5富 硒酵母、 6天冬酰胺、 5.5蛋氨酸、 0.5牛肉粉、 0.5葡萄糖、 0.1氯化钠、 0.01磷酸 二氢钾， 其余为蒸馏水， 121高温灭菌20min， 冷却后备用； 将地衣芽孢杆菌于发酵种子培养基中， 摇床180r/min， 培养48h， 发酵液中芽孢杆菌 108cfu/m。
20、L； e.步骤d得到的发酵滤液采用孔径为0.1-0.5 m的管式膜脱除大分子， 然后采用截留分 子量为3kDa的超滤膜截留分级， 截留液采用纳滤膜浓缩脱盐， 然后在175进风温度、 75 出风温度和0.35MPa喷雾压力的条件下喷雾干燥， 得到海参胶原蛋白肽。 0016 实施例3 一种微生物发酵法制备的海参胶原蛋白肽的方法， 包括如下工艺步骤： a .选取富含胶原蛋白的东海乌参为原料， 清水浸泡脱除盐分， 洗净后浸入浸泡液 说明书 3/4 页 5 CN 106591408 A 5 60min， 捞出沥干水分， 使用打浆机进行打浆处理， 加入40倍体积的纯净水后采用胶体磨进 行研磨细化处理， 得。
21、浆状物； 浸泡液由以下重量份的原料组成： 山楂25份、 野菊花5份、 广藿 香40份、 壳聚糖18份、 海藻酸钠15份与水350份， 东海乌参与浸泡液的质量比为1:10； b.将步骤a得到的浆状物加热至中心温度达到145， 保持10min， 冷却到25， 加入蛋 白酶进行酶解， 过120目滤网， 得到胶原蛋白滤液； c.在步骤b得到的胶原蛋白滤液中， 按重量百分数3加入葡萄糖， 调节pH到7， 得初始 发酵液； d.将步骤c得到的初始发酵液放入空消发酵罐进行实消， 空消和实消的条件均为121 、 20min， 待罐温降至37， 接入发酵种子， 接种量是初始发酵液体积百分数的4.5， 接种 混合。
22、液在37和300rpm搅拌转速的条件下密封发酵5天， 发酵液滤去残渣， 得发酵滤液； 发 酵种子为巨大芽孢杆菌； 发酵种子培养基的原料按以下重量份数计： 3大豆蛋白胨、 5富 硒酵母、 6天冬酰胺、 5.5蛋氨酸、 0.5牛肉粉、 0.5葡萄糖、 0.1氯化钠、 0.01磷酸 二氢钾， 其余为蒸馏水， 121高温灭菌20min， 冷却后备用； 将巨大芽孢杆菌接种于发酵种子培养基中， 摇床180r/min， 培养48h， 发酵液中芽孢杆 菌108cfu/mL； e.在步骤d得到的发酵滤液中加入20海藻糖、 0.8麦芽糊精与5甘油， -50预冻 6h， 然后在-70冷阱温度和150Pa真空度的条件下冷冻干燥20h， 直接得到海参胶原蛋白 肽。 0017 本发明中所用原料、 设备， 若无特别说明， 均为本领域的常用原料、 设备； 本发明中 所用方法， 若无特别说明， 均为本领域的常规方法。 0018 以上所述， 仅是本发明的较佳实施例， 并非对本发明作任何限制， 凡是根据本发明 技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、 变更以及等效变换， 均仍属于本发明技术方 案的保护范围。 说明书 4/4 页 6 CN 106591408 A 6 。