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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611240825.6 (22)申请日 2016.12.29 (71)申请人 绍兴国家黄酒工程技术研究中心有 限公司 地址 312000 浙江省绍兴市绍兴袍江斗门 镇洋江东路19号2幢 (72)发明人 傅建伟邹慧君谢广发钱斌 (74)专利代理机构 绍兴市越兴专利事务所(普 通合伙) 33220 代理人 陈小秋 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/04(2006.01) C12G 3/02(2006.01) C12R 1/25(2006。
2、.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的 制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种应用于黄酒酿造的乳酸菌 直投菌粉的制备方法， 属于黄酒酿造技术领域， 包括以下步骤：（1） 将现有黄酒生产工艺中的浸 米工序所得的米浆水进行分离纯化得到乳酸菌； （2） 将乳酸菌进行高密度培养后， 进行离心分离， 得到菌泥；（3） 将菌泥与膳食纤维混合， 进行吸水 处理；（4） 将吸水处理后的菌泥与冻干保护剂进 行均匀混合， 最后进行冻干， 得成品。 本发明从传 统黄酒酿造过程中的米浆水中分离筛选出对黄 酒发酵有益的乳酸菌， 并经过发酵罐高密度培 养，。
3、 然后制备成直投菌粉加入到黄酒发酵醪中， 代替原有的浸米工艺。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106754526 A 2017.05.31 CN 106754526 A 1.一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 其特征在于包括以下步骤： （1） 将现有黄酒生产工艺中的浸米工序所得的米浆水进行分离纯化得到乳酸菌； （2） 将乳酸菌进行高密度培养后， 进行离心分离， 得到菌泥； （3） 将菌泥与膳食纤维混合， 进行吸水处理； （4） 将吸水处理后的菌泥与冻干保护剂进行均匀混合， 最后进行冻干， 得成品。 2.如权利要求1所述的一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 其特征在 。
4、于： 所述乳酸菌为植物乳杆菌或希氏乳杆菌。 3.如权利要求1所述的一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 其特征在 于： 所述步骤 （2） 中， 高密度培养的培养温度为30， 高密度培养的接种量为2%， 培养过程中 采用10%NaOH溶液或20%Ca(OH)2溶液作为乳酸菌培养中和剂， 维持培养液的pH为6.0-6.2， 收获时间为10-15h； 进行离心分离时， 选择10000-15000g离心20-50min为离心分离条件。 4.如权利要求1所述的一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 其特征在 于： 所述步骤 （3） 中， 菌泥与膳食纤维之间的质量比为1:1-3。 5.如。
5、权利要求4所述的一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 其特征在 于： 所述步骤 （3） 中， 膳食纤维粉碎至150目。 6.如权利要求1所述的一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 其特征在 于： 所述步骤 （4） 中， 冻干保护剂包括维生素E、 甘露醇、 -环糊精、 麦芽糖， 且维生素E、 甘露 醇、 -环糊精、 麦芽糖分两次或多次添加， 与菌泥混合制成菌悬液， 同时， 菌泥、 维生素E、 甘 露醇、 -环糊精、 麦芽糖之间的质量比为100:10-20:2-4:8-12:15-25； 然后在超低温环境下 进行预冻100-200min， 最后转入冻干机进行冻干， 得到成品。 。
6、权利要求书 1/1 页 2 CN 106754526 A 2 一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 属于黄酒酿造技术领 域。 0002 背景技术 0003 黄酒主要是以谷物 （南方主要是以糯米， 北方是黍米和玉米） 为原料， 以麦曲为糖化剂， 以黄酒酵母或活性干酵母为发酵剂， 经浸米、 蒸煮、 糖化、 发酵、 压榨、 过滤、 煎酒、 贮存、 勾兑 而成的一种低酒度的发酵原酒。 按照生产工艺可以分为传统黄酒和机械化黄酒生产工艺， 而传统黄酒工艺的特色在于 “冬浆冬水” 和 “长时间浸米” 。 0004 传统黄酒。
7、在酿造过程中需要相当长时间的浸米 （浸米时间长达16-20天） ， 目的是 为了利用生酸细菌 （乳酸菌） 的代谢作用得到高酸度的浸米浆水， 并按照一定的比例加入到 黄酒发酵醪中以保证黄酒发酵的顺利进行。 但是浸米工艺却存在着一些不足之处， 如浸米 过程劳动强度大、 占地广、 成本高， 浸米浆水处理成本高 （米浆废水的BOD5最高可达到25000 mg/L， CODCr达到60000 mg/L） ， 浸米浆水大量使用会造成氨基酸含量较高而使黄酒口感粗 糙， 浸米浆水质量不能控制而导致黄酒发酵及黄酒品质的不稳定等， 所以需要改进或摒弃 传统黄酒酿造过程中长时间的浸米工艺。 0005 发明内容 00。
8、06 本发明的目的是提供一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 将通过 该方法所制得的乳酸菌直投菌粉加入到黄酒发酵醪中， 可代替原有的浸米工艺。 0007 为达到上述目的， 本发明所采用的技术方案为： 一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 包括以下步骤： （1） 将现有黄酒生产工艺中的浸米工序所得的米浆水进行分离纯化得到乳酸菌； （2） 将乳酸菌进行高密度培养后， 进行离心分离， 得到菌泥； （3） 将菌泥与膳食纤维混合， 进行吸水处理； （4） 将吸水处理后的菌泥与冻干保护剂进行均匀混合， 最后进行冻干， 得成品 （即乳酸 菌直投菌粉） 。 0008 作为上述方案的进一步设。
9、置， 所述乳酸菌为植物乳杆菌或希氏乳杆菌。 0009 所述步骤 （2） 中， 高密度培养的培养温度为30， 高密度培养的接种量为2%， 培养 过程中采用10%NaOH溶液或20%Ca(OH)2溶液作为乳酸菌培养中和剂， 维持培养液的pH为 6.0-6.2， 收获时间为10-15h； 进行离心分离时， 选择10000-15000g （离心力） 离心20-50min 为离心分离条件。 0010 所述步骤 （3） 中， 菌泥与膳食纤维之间的质量比为1:1-3。 说明书 1/3 页 3 CN 106754526 A 3 0011 所述步骤 （3） 中， 膳食纤维粉碎至150目。 0012 所述步骤 （。
10、4） 中， 冻干保护剂包括维生素E、 甘露醇、 -环糊精、 麦芽糖， 且维生素E、 甘露醇、 -环糊精、 麦芽糖分两次或多次添加， 与菌泥混合制成菌悬液， 同时， 菌泥、 维生素 E、 甘露醇、 -环糊精、 麦芽糖之间的质量比为100:10-20:2-4:8-12:15-25； 然后在超低温环 境下进行预冻100-200min， 最后转入冻干机进行冻干， 得到成品。 0013 本发明从传统黄酒酿造过程中的米浆水中分离筛选出对黄酒发酵有益的乳酸菌， 并经过发酵罐高密度培养， 然后制备成直投菌粉加入到黄酒发酵醪中， 代替原有的浸米工 艺。 0014 由于乳酸菌多为兼性厌氧菌， 在生长过程中不形成芽。
11、孢， 导致其自身抗性较差。 对 于氧气十分敏感导致其在运输和储藏过程中保持活性较困难， 乳酸菌这一自身的特性使得 其应用受到了限制。 本发明采用筛选的优质乳酸菌种进行液体高密度培养后， 经过菌体细 胞分离， 与保护剂介质混溶制备高浓度菌悬液， 再经冷冻干燥， 无菌包装后制成的一系列高 浓度和标准化的直投式乳酸菌菌粉， 应用于生产中。 0015 具体实施方式 0016 下面通过具体实施例对本发明作进一步说明， 但本发明并不受以下实施例所限 定。 0017 实施例1 一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 包括以下步骤： （1） 将现有黄酒生产工艺中的浸米工序所得的米浆水进行分离纯化得到植。
12、物乳杆菌。 0018 （2） 将分离纯化得到的植物乳杆菌进行高密度培养， 培养温度为30， 高密度培养 的接种量为2%， 培养过程中采用浓度为20%的 Ca(OH)2溶液作为乳酸菌培养中和剂， 维持培 养液的pH为6.1-6.2， 收获时间为13.5h， 培养结束后选择15000g离心30min为离心分离条 件， 得到菌泥。 0019 （3） 将菌泥与粉碎至150目的膳食纤维混合均匀， 进行吸水处理100min。 其中， 菌泥 与膳食纤维之间的质量比为1:1。 膳食纤维会吸收菌泥中的水分， 使混合物的水分含量在 25%以下， 且水分在体系中均匀扩散， 有利于实现快速冷冻干燥。 即， 膳食纤维作。
13、为一种脱水 剂， 降低菌泥的含水率。 0020 （4） 将吸水处理后的菌泥与冻干保护剂进行均匀混合， 然后进行预冻， 最后进行冻 干， 得成品。 具体如下： 冻干保护剂分两次混合添加： 首先将维生素E及甘露醇与菌泥混合， 搅拌30min， 然后将 -环糊精、 麦芽糖依次加入， 搅拌混合30min， 接着将混合物移入冻干瓶中,使菌泥与冻干保 护剂充分混匀制成菌悬液， 菌体浓度达到109 cfu/mL以上； 其中， 菌泥、 维生素E、 甘露醇、 - 环糊精、 麦芽糖之间的质量比为100:10:3:10:25； 然后将制备好的植物乳杆菌的菌悬液置 于-76超低温冰箱预冻100min； 预冻后,迅速转。
14、移至真空冻干机样品架， 冻干48h， 得到乳 酸菌直投菌粉。 0021 实施例2 一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 包括以下步骤： 说明书 2/3 页 4 CN 106754526 A 4 （1） 将现有黄酒生产工艺中的浸米工序所得的米浆水进行分离纯化得到希氏乳杆菌。 0022 （2） 将分离纯化得到的希氏乳杆菌进行高密度培养， 培养温度为30， 高密度培养 的接种量为2%， 培养过程中采用浓度为10%的NaOH溶液作为乳酸菌培养中和剂， 维持培养液 的pH为6.1-6.2， 收获时间为13.5h， 培养结束后选择12000g离心25min为离心分离条件， 得 到菌泥。 0023。
15、 （3） 将菌泥与粉碎至150目的膳食纤维混合均匀， 进行吸水处理80min。 其中， 菌泥 与膳食纤维之间的质量比为1:1.5。 膳食纤维会吸收菌泥中的水分， 使混合物的水分含量在 25%以下， 且水分在体系中均匀扩散， 有利于实现快速冷冻干燥。 即， 膳食纤维作为一种脱水 剂， 降低菌泥的含水率。 0024 （4） 将吸水处理后的菌泥与冻干保护剂进行均匀混合， 然后进行预冻， 最后进行冻 干， 得成品。 具体如下： 冻干保护剂分两次混合添加： 首先将维生素E及甘露醇与菌泥混合， 搅拌30min， 然后将 -环糊精、 麦芽糖依次加入， 搅拌混合30min， 接着将混合物移入冻干瓶中,使菌泥与。
16、冻干保 护剂充分混匀制成菌悬液， 菌体浓度达到109 cfu/mL以上； 其中， 菌泥、 维生素E、 甘露醇、 - 环糊精、 麦芽糖之间的质量比为100:20:4:8:20； 然后将制备好的希氏乳杆菌的菌悬液置 于-76超低温冰箱预冻150min； 预冻后,迅速转移至真空冻干机样品架， 冻干48h， 得到乳 酸菌直投菌粉。 0025 实施例3 一种应用于黄酒酿造的乳酸菌直投菌粉的制备方法， 包括以下步骤： （1） 将现有黄酒生产工艺中的浸米工序所得的米浆水进行分离纯化得到植物乳杆菌。 0026 （2） 将分离纯化得到的植物乳杆菌进行高密度培养， 培养温度为30， 高密度培养 的接种量为2%， 。
17、培养过程中采用浓度为10%的NaOH溶液作为乳酸菌培养中和剂， 维持培养液 的pH为6.1-6.2， 收获时间为13.5h， 培养结束后选择10000g离心50min为离心分离条件， 得 到菌泥。 0027 （3） 将菌泥与粉碎至150目的膳食纤维混合均匀， 进行吸水处理80min。 其中， 菌泥 与膳食纤维之间的质量比为1:2。 膳食纤维会吸收菌泥中的水分， 使混合物的水分含量在 25%以下， 且水分在体系中均匀扩散， 有利于实现快速冷冻干燥。 即， 膳食纤维作为一种脱水 剂， 降低菌泥的含水率。 0028 （4） 将吸水处理后的菌泥与冻干保护剂进行均匀混合， 然后进行预冻， 最后进行冻 干。
18、， 得成品。 具体如下： 冻干保护剂分两次混合添加： 首先向菌泥内依次加入 -环糊精、 麦芽糖， 搅拌30min， 然 后加入维生素E及甘露醇， 搅拌混合30min， 接着将混合物移入冻干瓶中,使菌泥与冻干保护 剂充分混匀制成菌悬液， 菌体浓度达到109 cfu/mL以上； 其中， 菌泥、 维生素E、 甘露醇、 -环 糊精、 麦芽糖之间的质量比为100:20:4:8:20； 然后将制备好的植物乳杆菌的菌悬液置于- 76超低温冰箱预冻200min； 预冻后,迅速转移至真空冻干机样品架， 冻干48h， 得到乳酸菌 直投菌粉。 0029 上述实施例仅用于解释说明本发明的发明构思， 而非对本发明权利保护的限定， 凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动， 均应落入本发明的保护范围。 说明书 3/3 页 5 CN 106754526 A 5 。