一种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610792583.5 (22)申请日 2016.08.31 (71)申请人 山东省葡萄研究院 地址 250100 山东省济南市山大南路1-27 号 (72)发明人 高德艳胡文效任继波梁红敏 魏彦锋汤晓宏张晶莹 (74)专利代理机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 代理人 王茜 (51)Int.Cl. C12P 17/16(2006.01) C12P 17/18(2006.01) C07D 311/62(2006.01) C07G 99/00(2009.01) (。

2、54)发明名称 一种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离 方法 (57)摘要 本发明属于葡萄籽综合利用的技术领域， 具 体涉及一种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分 离方法。 该种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分 离方法， 包括以下步骤：（1） 低温干燥粉碎；（2） 脱 脂；（3） 酶处理；（4） 原花青素提取；（5） 低温浓缩； （6） 原花青素高聚体降解；（7） 纯化；（8） 低温浓 缩、 干燥。 该提取分离方法明显提高了葡萄籽原 花青素的得率以及提取液中低聚体原花青素的 含量， 同时低温提取分离很好保留了原花青素的 生物活性， 通过柱层析分级纯化得到高纯度原花 青素低聚体。 权利要求书2页 说明书。

3、7页 CN 106381319 A 2017.02.08 CN 106381319 A 1.一种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 包括以下步骤： （1） 低温干燥粉碎： 首先将葡萄籽进行低温干燥； 然后粉碎得到40-60目葡萄籽粉； （2） 脱脂： 对所得葡萄籽粉通过超临界二氧化碳萃取葡萄籽油进行低温去除油脂， 得到 脱脂葡萄籽粉； （3） 酶处理： 采用纤维素酶、 -葡萄糖苷酶对所得脱脂葡萄籽粉进行生物酶处理： 取脱 脂葡萄籽粉以固液比1:20加入蒸馏水； 以脱脂葡萄籽粉为底物， 分别加入20U/mL纤维素酶 和10U/mL -葡萄糖苷酶， 酶解条件为： pH值4.4、 酶解温度47.。

4、8、 酶解时间为2h； （4） 原花青素提取： 采用体积分数为70%的乙醇对经过生物酶处理的脱脂葡萄籽粉进行 提取得到原花青素提取液； 提取液中原花青素平均聚合度为310， 低聚体含量为4060%； （5） 低温浓缩： 在40、 真空度0.08Mpa的条件下对所得原花青素提取液进行浓缩， 离心 取上清液获得原花青素水溶液； （6） 原花青素高聚体降解： 采用复合酸对所得原花青素水溶液进行降解， 得到原花青素 低聚体混合物溶液， 其中复合酸由草酸、 冰乙酸和亚硫酸复配而成； （7） 纯化： 首先对降解后所得的原花青素低聚体混合物溶液进行大孔树脂吸附、 水洗除 杂； 然后采用乙醇进行梯度洗脱， 依。

5、次分别得到不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液； （8） 低温浓缩、 干燥： 对上述不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液进行低温浓缩， 获 得原花青素低聚体水溶液； 通过冷冻干燥得到成品。 2.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （1） 中葡萄籽在温度为3050， 真空度0.06Mpa0.09MPa的条件下进行低温干燥。 3.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （2） 中超临界二氧化碳萃取的萃取压力为32.30MPa， 萃取温度为41.5， 萃取时间为 75min； 最终油脂得率为16.0%， 残油得率。

6、0.2%0.5%。 4.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （3） 中采用pH缓冲液NaH2PO4。 5.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （4） 提取固液比为1:10， 温度为70， 采用盐酸调节pH值为 3.0， 提取时间为2小时的条件 下进行提取3次。 6.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （6） 降解在50的条件下反应30分钟， 其中所述草酸浓度为20g/L； 所述复合酸按照体积 比草酸： 冰乙酸： 亚硫酸为1:1:1； 所述复合酸与原花青。

7、素水溶液体积比为5:1。 7.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （7） 纯化中采用大孔树脂HPD100进行吸附， 其中吸附的进样浓度为8g/L， 进样速度为2bv/ h， 水洗速度为2bv/h， 吸附2h； 乙醇梯度洗脱具体为： 乙醇体积分数为0-10%时， 洗脱出聚合 度为1.47的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为10-20%时， 洗脱出聚合度为1.78的原花青素 低聚体； 乙醇体积分数为20-30%时， 洗脱出聚合度为2.53的原花青素低聚体； 乙醇体积分数 为30-40%时， 洗脱出聚合度为2.78的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为40-。

8、50%时， 洗脱出聚 合度为3.545的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为50-60%时， 洗脱出聚合度为4.40的原花青 素低聚体。 8.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 权利要求书 1/2 页 2 CN 106381319 A 2 骤 （1） 中葡萄籽采用未发酵白葡萄籽。 9.根据权利要求1所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 其特征在于， 所述步 骤 （8） 低温浓缩、 干燥中在40、 真空度0.09Mpa条件下进行低温浓缩； 冷冻干燥条件为真空 度1.1pa， 预冻初始温度为-36， 加热温度-10。 权利要求书 2/2 页 3 CN 。

9、106381319 A 3 一种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法 技术领域 0001 本发明属于葡萄籽综合利用的技术领域， 具体涉及一种葡萄籽原花青素低聚体高 效提取分离方法。 背景技术 0002 葡萄籽原花青素具有C6-C3-C6结构， 是以黄烷-3-醇为基本组成单位通过C4-C8或 C4-C6缩合而成的多酚类化合物， 其中低聚体原花青素为n25， 高聚体原花青素为n5。 0003 原花青素生化活性表现在具有抗氧化活性和清除超氧阴离子、 羟自由基等自由基 的作用， 具体表现为保护心血管系统、 降血脂、 降血糖、 抗辐射等。 自由基是机体氧化反应中 产生的有害化合物， 具有强氧化性， 可损。

10、害机体的组织和细胞， 进而引起慢性疾病及衰老效 应。 研究表明原花青素是有效的自由基清除剂， 特别是低聚体原花青素对自由基和活性氧 清除能力远高于其他抗氧化剂(如VE和VC)， 能预防因人体血液中低密度脂蛋白氧化而引起 的动脉硬化。 原花青素抗氧化活性受聚合度的影响， 低聚体活性高， 聚合度越高抗氧化活性 越低。 人们随着对原花青素的深入认识和对不同聚合度原花青素生物活性的发现， 开始对 低聚体原花青素进行研究与分离。 0004 近年来， 分离低聚体原花青素方法很多， 如通过高压微滤膜技术纯化葡萄籽原花 青素低聚体， 效率高、 工艺简单， 但难以工业化生产且生产成本较高， 浓缩后的高聚体原花 。

11、青素容易降低微滤膜的通透性； 或是通过超临界CO2萃取技术添加甲醇或乙醇等夹带剂分 离葡萄籽原花青素低聚体， 甲醇效果较好， 萃取物中单体及二聚体含量高， 但总提取率较低 且一部分低聚体原花青素与高聚体仍留在葡萄籽中， 造成资源浪费， 利用率不高。 现有技术 多侧重于原花青素提取或高聚体降解工艺研究， 对于低聚体的制备、 分离纯化方法没有明 确的表述甚至结论牵强。 0005 因此到目前为止还没有非常有效的方法能够将葡萄籽中的低聚体原花青素进行 初步分离与鉴定。 葡萄籽约占酿酒葡萄重量5， 是葡萄产业产生的较大量的资源性副产 物， 酿酒葡萄产量近100万吨， 每年仅葡萄酒生产产生的葡萄籽达数万吨。

12、。 葡萄籽含有丰富 的多酚类物质， 其中原花青素约占葡萄籽5左右， 故研究原花青素低聚体的有效分离及纯 化不仅具有重要的理论价值， 同时对于延长葡萄产业链、 环境保护、 资源有效利用也有重要 意义。 发明内容 0006 本发明的目的在于针对上述存在的缺陷而提供一种葡萄籽原花青素低聚体高效 提取分离方法， 该提取分离方法明显提高了葡萄籽原花青素的得率以及提取液中低聚体原 花青素的含量， 同时低温提取分离很好保留了原花青素的生物活性， 通过柱层析分级纯化 得到高纯度原花青素低聚体。 0007 本发明的技术方案为： 一种葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 包括以下 步骤： 说明书 1/7 页 4。

13、 CN 106381319 A 4 0008 (1)低温干燥粉碎： 首先将葡萄籽进行低温干燥； 然后粉碎得到40-60目葡萄籽粉； 0009 (2)脱脂： 对所得葡萄籽粉通过超临界二氧化碳萃取葡萄籽油进行低温去除油脂， 得到脱脂葡萄籽粉； 0010 (3)酶处理： 采用纤维素酶、 -葡萄糖苷酶对所得脱脂葡萄籽粉进行生物酶处理： 取脱脂葡萄籽粉以固液比1:20加入蒸馏水； 以脱脂葡萄籽粉为底物， 分别加入20U/mL纤维 素酶和10U/mL -葡萄糖苷酶， 酶解条件为： pH值4.4、 酶解温度47.8、 酶解时间为2h； 0011 (4)原花青素提取： 采用体积分数为70的乙醇对经过生物酶处理。

14、的脱脂葡萄籽 粉进行提取得到原花青素提取液； 提取液中原花青素平均聚合度为310， 低聚体含量为40 60； 0012 (5)低温浓缩： 在40、 真空度0.08Mpa的条件下对所得原花青素提取液进行浓缩， 离心取上清液获得原花青素水溶液； 0013 (6)原花青素高聚体降解： 采用复合酸对所得原花青素水溶液进行降解， 得到原花 青素低聚体混合物溶液， 其中复合酸由草酸、 冰乙酸和亚硫酸复配而成； 0014 (7)纯化： 首先对降解后所得的原花青素低聚体混合物溶液进行大孔树脂吸附、 水 洗除杂； 然后采用乙醇进行梯度洗脱， 依次分别得到不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶 液； 0015 (8)低。

15、温浓缩、 干燥： 对上述不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液进行低温浓 缩， 获得原花青素低聚体水溶液； 通过冷冻干燥得到成品。 0016 所述步骤(1)中葡萄籽在温度为3050， 真空度0.06Mpa0.09MPa的条件下进 行低温干燥。 0017 所述步骤(2)中超临界二氧化碳萃取的萃取压力为32.30MPa， 萃取温度为41.5， 萃取时间为75min； 最终油脂得率为16.0， 残油得率0.20.5。 0018 所述步骤(3)中采用pH缓冲液NaH2PO4。 0019 所述步骤(4)提取固液比为1:10， 温度为70， 采用盐酸调节pH值为3.0， 提取时间 为2小时的条件下进行提取3次。

16、。 0020 所述步骤(6)降解在50的条件下反应30分钟， 其中所述草酸浓度为20g/L； 0021 所述复合酸按照体积比草酸： 冰乙酸： 亚硫酸为1:1:1； 所述复合酸与原花青素水 溶液体积比为5:1。 0022 所述步骤(7)纯化中采用大孔树脂HPD100进行吸附， 其中吸附的进样浓度为8g/L， 进样速度为2bv/h， 水洗速度为2bv/h， 吸附2h； 乙醇梯度洗脱具体为： 乙醇体积分数为0- 10时， 洗脱出聚合度为1.47的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为10-20时， 洗脱出聚合 度为1.78的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为20-30时， 洗脱出聚合度为2.53的原花青素 。

17、低聚体； 乙醇体积分数为30-40时， 洗脱出聚合度为2.78的原花青素低聚体； 乙醇体积分 数为40-50时， 洗脱出聚合度为3.545的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为50-60时， 洗 脱出聚合度为4.40的原花青素低聚体。 0023 所述步骤(1)中葡萄籽采用未发酵白葡萄籽。 0024 所述步骤(8)低温浓缩、 干燥中在40、 真空度0.09Mpa条件下进行低温浓缩； 冷冻 干燥条件为真空度1.1pa， 预冻初始温度为-36， 加热温度-10。 0025 本发明的有益效果为： 本发明所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法以未 说明书 2/7 页 5 CN 106381319 A 5 。

18、发酵白葡萄籽为原料， 干燥粉碎后经超临界CO2流体萃取法去除油脂， 利用生物酶法处理葡 萄籽粉， 采用酸式溶剂法提取目标物质， 提取液经酸性试剂水解获得高含量原花青素低聚 体， 经大孔树脂柱层析分离原花青素低聚体， 干燥得样品。 0026 将溶剂提取法酸式降解法柱层析分级法协同结合分离提取原花青素低聚体， 该工艺可大大提高提取液中原花青素特别是低聚体原花青素的含量， 且在酸性条件中原花 青素性质较稳定， 提取液中原花青素含量同比增加1015， 原花青素提取液中平均聚 合度降低23个单位。 0027 采用纤维素酶破坏细胞壁， 促进葡萄籽中原花青素的溶出； 采用 -葡萄糖苷酶处 理葡萄籽粉不仅可以。

19、破坏植物细胞壁， 也可以使得花色苷(原花青素与多糖结合)分解为游 离的原花青素。 纤维素酶最大限度作用于细胞壁纤维素 1， 4-葡萄糖苷键， 破坏细胞壁， 减小传质阻力， 加速原花青素的溶出效率。 -葡萄糖苷酶在自然条件下原花青素呈游离态 的极少， 主要以糖苷形式存在， 原花青素常与一个或多个葡萄糖、 鼠李糖、 半乳糖、 阿拉伯糖 等通过糖苷键形成花色苷存在。 通过添加 -葡萄糖苷酶， 酶解后可增加原花青素提取率。 该 酶是一种内切酶， 专一作用 -葡聚糖的1,3及1,4-糖苷键。 0028 下面对纤维素酶与 -葡萄糖苷酶的协同配合使用过程中用量搭配进行实验测试， 结果见表1。 0029 表1。

20、 0030 0031 通过表1可以得出： 增加纤维素酶和 -葡萄糖苷酶的量可有效增加原花青素的溶 出， 当纤维素酶添加量超过20U/mL及 -葡萄糖苷酶添加量超过10U/mL， 原花青素提取量不 在继续增加， 说明在该酶浓度范围下酶解效率最高， 因此选择纤维素酶添加量为20U/mL， - 葡萄糖苷酶添加量为10U/mL。 0032 下面通过实验， 对比单一酸降解与复合酸降解， 详细请见如下表2， 其中酸解温度 为50、 降解时间为30min。 0033 表2 说明书 3/7 页 6 CN 106381319 A 6 0034 0035 0036 由表2中不同酸试剂对原花青素提取液中高聚体进行降。

21、解实验， 结果证实添加由 草酸、 冰乙酸和亚硫酸复配而成的复合酸更能有效降解高聚体， 而且增加亚硫酸不仅可降 解原花青素为低聚体原花青素， 还可大大降低在反应过程中原花青素的氧化， 提高其抗氧 化活性， 本发明可明显提高葡萄籽原花青素的得率， 提高提取液中低聚体原花青素的含量， 同时低温提取分离很好保留了原花青素的生物活性， 通过柱层析分级纯化得到高纯度原花 青素低聚体， 所得到的原花青素低聚体可用于食品添加剂、 化妆品及医药等领域。 具体实施方式 0037 下面通过实施例对本发明进行详细的说明。 0038 实施例1 0039 所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 包括以下步骤： 004。

22、0 (1)低温干燥粉碎： 首先将葡萄籽在温度为30， 真空度0.06Mpa的条件下进行低 温干燥； 然后粉碎得到40目葡萄籽粉， 其中葡萄籽采用未发酵白葡萄籽； 0041 (2)脱脂： 对所得葡萄籽粉通过超临界二氧化碳萃取葡萄籽油进行低温去除油脂， 得到脱脂葡萄籽粉， 其中超临界二氧化碳萃取的萃取压力为32.30MPa， 萃取温度为41.5； 萃取时间为75min； 最终油脂得率为16.0， 残油得率0.20.5。 0042 (3)酶处理： 采用纤维素酶、 -葡萄糖苷酶对所得脱脂葡萄籽粉进行生物酶处理： 取脱脂葡萄籽粉以固液比1:20加入蒸馏水； 以脱脂葡萄籽粉为底物， 分别加入20U/mL纤。

23、维 素酶和10U/mL -葡萄糖苷酶， 酶解条件为： 采用pH缓冲液NaH2PO4调节pH值为4.4、 酶解温度 说明书 4/7 页 7 CN 106381319 A 7 47.8、 酶解时间为2h； 0043 (4)原花青素提取： 采用体积分数为70的乙醇对经过生物酶处理的脱脂葡萄籽 粉进行提取得到原花青素提取液； 提取液中原花青素平均聚合度为310， 低聚体含量为40 60； 其中提取固液比为1:10， 温度为70， 采用盐酸调节pH值为3.0， 提取时间为2小时 的条件下进行提取3次； 0044 (5)低温浓缩： 在40、 真空度0.08Mpa的条件下对所得原花青素提取液进行浓缩， 离心。

24、取上清液获得原花青素水溶液； 0045 (6)原花青素高聚体降解： 采用复合酸对所得原花青素水溶液在50的条件下进 行降解反应30分钟， 得到原花青素低聚体混合物溶液， 其中复合酸由草酸、 冰乙酸和亚硫酸 按照体积比1:1:1复配而成； 所述草酸浓度为20g/L； 所述复合酸与原花青素水溶液体积比 为5:1； 0046 (7)纯化： 首先对降解后所得的原花青素低聚体混合物溶液采用大孔树脂HPD100 进行吸附、 水洗除杂， 其中吸附的进样浓度为8g/L， 进样速度为2bv/h， 水洗速度为2bv/h， 吸 附2h； 然后采用乙醇进行梯度洗脱， 依次分别得到不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液， 。

25、具体为： 乙醇体积分数为0-10时， 洗脱出聚合度为1.47的原花青素低聚体； 乙醇体积分数 为10-20时， 洗脱出聚合度为1.78的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为20-30时， 洗脱出 聚合度为2.53的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为30-40时， 洗脱出聚合度为2.78的原花 青素低聚体； 乙醇体积分数为40-50时， 洗脱出聚合度为3.545的原花青素低聚体； 乙醇体 积分数为50-60时， 洗脱出聚合度为4.40的原花青素低聚体； 0047 (8)低温浓缩、 干燥： 对上述不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液在40、 真空 度0.09Mpa条件下进行低温浓缩， 获得原花青素低聚体水。

26、溶液； 通过冷冻干燥得到成品， 其 中冷冻干燥条件为真空度1.1pa， 预冻初始温度为-36， 加热温度-10。 0048 实施例2 0049 所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 包括以下步骤： 0050 (1)低温干燥粉碎： 首先将葡萄籽在温度为50， 真空度0.09MPa的条件下进行低 温干燥； 然后粉碎得到60目葡萄籽粉， 其中葡萄籽采用未发酵白葡萄籽； 0051 (2)脱脂： 对所得葡萄籽粉通过超临界二氧化碳萃取葡萄籽油进行低温去除油脂， 得到脱脂葡萄籽粉， 其中超临界二氧化碳萃取的萃取压力为32.30MPa， 萃取温度为41.5； 萃取时间为75min； 最终油脂得率为16.。

27、0， 残油得率0.20.5。 0052 (3)酶处理： 采用纤维素酶、 -葡萄糖苷酶对所得脱脂葡萄籽粉进行生物酶处理： 取脱脂葡萄籽粉以固液比1:20加入蒸馏水； 以脱脂葡萄籽粉为底物， 分别加入20U/mL纤维 素酶和10U/mL -葡萄糖苷酶， 酶解条件为： 采用pH缓冲液NaH2PO4调节pH值为4.4、 酶解温度 47.8、 酶解时间为2h； 0053 (4)原花青素提取： 采用体积分数为70的乙醇对经过生物酶处理的脱脂葡萄籽 粉进行提取得到原花青素提取液； 提取液中原花青素平均聚合度为310， 低聚体含量为40 60； 其中提取固液比为1:10， 温度为70， 采用盐酸调节pH值为3。

28、.0， 提取时间为2小时 的条件下进行提取3次； 0054 (5)低温浓缩： 在40、 真空度0.08Mpa的条件下对所得原花青素提取液进行浓缩， 离心取上清液获得原花青素水溶液； 说明书 5/7 页 8 CN 106381319 A 8 0055 (6)原花青素高聚体降解： 采用复合酸对所得原花青素水溶液在50的条件下进 行降解反应30分钟， 得到原花青素低聚体混合物溶液， 其中复合酸由草酸、 冰乙酸和亚硫酸 按照体积比1:1:1复配而成； 所述草酸浓度为20g/L； 所述复合酸与原花青素水溶液体积比 为5:1； 0056 (7)纯化： 首先对降解后所得的原花青素低聚体混合物溶液采用大孔树脂。

29、HPD100 进行吸附、 水洗除杂， 其中吸附的进样浓度为8g/L， 进样速度为2bv/h， 水洗速度为2bv/h， 吸 附2h； 然后采用乙醇进行梯度洗脱， 依次分别得到不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液， 具体为： 乙醇体积分数为0-10时， 洗脱出聚合度为1.47的原花青素低聚体； 乙醇体积分数 为10-20时， 洗脱出聚合度为1.78的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为20-30时， 洗脱出 聚合度为2.53的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为30-40时， 洗脱出聚合度为2.78的原花 青素低聚体； 乙醇体积分数为40-50时， 洗脱出聚合度为3.545的原花青素低聚体； 乙醇体 积分数。

30、为50-60时， 洗脱出聚合度为4.40的原花青素低聚体； 0057 (8)低温浓缩、 干燥： 对上述不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液在40、 真空 度0.09Mpa条件下进行低温浓缩， 获得原花青素低聚体水溶液； 通过冷冻干燥得到成品， 其 中冷冻干燥条件为真空度1.1pa， 预冻初始温度为-36， 加热温度-10。 0058 实施例3 0059 所述葡萄籽原花青素低聚体高效提取分离方法， 包括以下步骤： 0060 (1)低温干燥粉碎： 首先将葡萄籽在温度为45， 真空度0.07MPa的条件下进行低 温干燥； 然后粉碎得到40-60目葡萄籽粉， 其中葡萄籽采用未发酵白葡萄籽； 0061 (。

31、2)脱脂： 对所得葡萄籽粉通过超临界二氧化碳萃取葡萄籽油进行低温去除油脂， 得到脱脂葡萄籽粉， 其中超临界二氧化碳萃取的萃取压力为32.30MPa， 萃取温度为41.5； 萃取时间为75min； 最终油脂得率为16.0， 残油得率0.20.5。 0062 (3)酶处理： 采用纤维素酶、 -葡萄糖苷酶对所得脱脂葡萄籽粉进行生物酶处理： 取脱脂葡萄籽粉以固液比1:20加入蒸馏水； 以脱脂葡萄籽粉为底物， 分别加入20U/mL纤维 素酶和10U/mL -葡萄糖苷酶， 酶解条件为： 采用pH缓冲液NaH2PO4调节pH值为4.4、 酶解温度 47.8、 酶解时间为2h； 0063 (4)原花青素提取：。

32、 采用体积分数为70的乙醇对经过生物酶处理的脱脂葡萄籽 粉进行提取得到原花青素提取液； 提取液中原花青素平均聚合度为310， 低聚体含量为40 60； 其中提取固液比为1:10， 温度为70， 采用盐酸调节pH值为3.0， 提取时间为2小时 的条件下进行提取3次； 0064 (5)低温浓缩： 在40、 真空度0.08Mpa的条件下对所得原花青素提取液进行浓缩， 离心取上清液获得原花青素水溶液； 0065 (6)原花青素高聚体降解： 采用复合酸对所得原花青素水溶液在50的条件下进 行降解反应30分钟， 得到原花青素低聚体混合物溶液， 其中复合酸由草酸、 冰乙酸和亚硫酸 按照体积比1:1:1复配而。

33、成； 所述草酸浓度为20g/L； 所述复合酸与原花青素水溶液体积比 为5:1； 0066 (7)纯化： 首先对降解后所得的原花青素低聚体混合物溶液采用大孔树脂HPD100 进行吸附、 水洗除杂， 其中吸附的进样浓度为8g/L， 进样速度为2bv/h， 水洗速度为2bv/h， 吸 附2h； 然后采用乙醇进行梯度洗脱， 依次分别得到不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液， 说明书 6/7 页 9 CN 106381319 A 9 具体为： 乙醇体积分数为0-10时， 洗脱出聚合度为1.47的原花青素低聚体； 乙醇体积分数 为10-20时， 洗脱出聚合度为1.78的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为20-。

34、30时， 洗脱出 聚合度为2.53的原花青素低聚体； 乙醇体积分数为30-40时， 洗脱出聚合度为2.78的原花 青素低聚体； 乙醇体积分数为40-50时， 洗脱出聚合度为3.545的原花青素低聚体； 乙醇体 积分数为50-60时， 洗脱出聚合度为4.40的原花青素低聚体； 0067 (8)低温浓缩、 干燥： 对上述不同聚合度的低聚体原花青素乙醇溶液在40、 真空 度0.09Mpa条件下进行低温浓缩， 获得原花青素低聚体水溶液； 通过冷冻干燥得到成品， 其 中冷冻干燥条件为真空度1.1pa， 预冻初始温度为-36， 加热温度-10。 说明书 7/7 页 10 CN 106381319 A 10 。