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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610268227.3 (22)申请日 2016.04.27 (71)申请人 聊城大学 地址 252059 山东省聊城市东昌府区湖南 路1号 (72)发明人 秦秀秀孙爱玲李爱峰王延翠 柳仁民 (51)Int.Cl. C07D 471/14(2006.01) B01D 15/40(2006.01) B01D 11/02(2006.01) (54)发明名称 一种从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱和吴茱 萸次碱的临界流体色谱方法 (57)摘要 本发明属于化工与制药领域， 涉及一种从吴 茱。
2、萸提取物中分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱 的方法。 吴茱萸药材粉碎， 加入无水乙醇超声提 取， 将提取液过滤、 减压浓缩得浸膏。 将吴茱萸浸 膏用甲醇溶解， 经过滤后， 进行超临界流体色谱 分离， 色谱柱为SpherigelC18色谱柱， 流动相为 超临界流体， 改性剂为乙醇。 本发明纯化过程中 使用超临界二氧化碳， 不使用对环境有危害的有 机溶剂， 生产过程绿色环保， 所得产品无有害物 质残留。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 105859715 A 2016.08.17 CN 105859715 A 1.一种从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法， 其特征是， 步骤如下： 。
3、步骤1： 吴茱萸药材粉碎， 加入无水乙醇超声提取， 将提取液过滤、 减压浓缩得吴茱萸浸 膏； 步骤2： 将吴茱萸浸膏用甲醇溶解， 经过滤后， 进行超临界流体色谱分离， 色谱柱为 SpherigelC18色谱柱、 KromasilNH2色谱柱和二醇基色谱柱， 流动相为超临界流体， 改性剂为 有机溶剂； 分离过程由紫外检测器检测， 根据检测信号收集目标组分馏分。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤1中无水乙醇超声提取乙醇与药材的比 例是5： 120： 1， 最优为15： 1； 提取的次数为3次， 超声时间为0.5-2小时。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤2中过滤所用。
4、滤膜为0.45 m滤膜。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤2中色谱柱的种类为SpherigelC18色谱 柱、 KromasilNH2色谱柱和二醇基色谱柱， 最优为SpherigelC18色谱柱。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤2中改性剂的种类为甲醇、 乙醇、 异丙醇 和乙腈， 最优为乙醇。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤2中改性剂乙醇的比例为4%9%， 最优为 5%。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳， 超临 界二氧化碳的压力为1014MPa， 最优为14MPa； 超临界二氧化碳的流速为1-10。
5、倍柱体积/分 钟， 最优为4倍柱体积/分钟。 8.根据权利要求1所述的方法， 其特征是， 步骤2中色谱柱温度为3050 C， 最优为30 C。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105859715 A 2 一种从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱的临界流体 色谱方法 技术领域 0001 本发明属于化工与制药领域， 具体是涉及一种从吴茱萸提取物中分离纯化吴茱萸 碱和吴茱萸次碱的方法。 背景技术 0002 吴茱萸FructusEvodiae为芸香科植物吴茱萸(Evodiarutaecarpa(Juss.) Benth).、 石虎(Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.。
6、officinalis(Dode)Huang)或 疏毛吴茱萸(Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.var.bodinieri(Dode)Huang未成熟 的果实。 具有散寒止痛、 降逆止呕、 助阳止泻等功效， 其中所含的吴茱萸碱和吴茱萸次碱等 生物碱类成分具有健胃、 止痛、 止干呕、 保护心脏和降血压等功效。 0003 目前， 对吴茱萸中生物碱类成分的分离纯化主要采用硅胶柱层析法、 高速逆流色 谱法或大孔树脂分离纯化法。 硅胶柱层析法工艺成熟， 但操作繁琐； 高速逆流色谱法选择溶 剂体系时较困难， 分离规模难以扩大； 大孔树脂分离纯化法需对大孔树脂进行预处理， 操作 复杂。
7、。 此外， 硅胶柱层析法、 高速逆流色谱法和大孔树脂分离纯化法均需要消耗大量的有机 溶剂， 有机溶剂回收成本高， 回收再利用较困难， 产品中有机试剂残留严重。 发明内容 0004 本发明的目的在于克服现有技术的不足， 提供一种操作简便、 分离量大、 综合成本 低、 绿色环保的快速纯化制备吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法， 通过一步分离纯化即可从吴 茱萸提取物中得到高纯度吴茱萸碱和吴茱萸次碱单体化合物。 0005 本发明的方案如下： 一种从吴茱萸中分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法， 步骤如下： 步骤1： 吴茱萸药材粉碎， 加入无水乙醇超声提取， 将提取液过滤、 减压浓缩得吴茱萸浸 膏。 0006 步。
8、骤2： 将吴茱萸浸膏用甲醇溶解， 经过滤后， 进行超临界流体色谱分离， 色谱柱为 SpherigelC18色谱柱、 KromasilNH2色谱柱和二醇基色谱柱， 流动相为超临界流体， 改性剂为 有机溶剂。 分离过程由紫外检测器检测， 根据检测信号收集目标组分馏分。 0007 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤1中无水乙醇超声提取乙醇与药材的比例是 5： 120： 1， 最优为15： 1； 提取的次数为3次， 超声时间为0.5-2小时。 0008 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤2中过滤所用滤膜为0.45 m滤膜。 0009 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤2中色谱柱的种类为Sp。
9、herigelC18色谱柱、 KromasilNH2色谱柱和二醇基色谱柱， 最优为SpherigelC18色谱柱。 0010 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤2中改性剂的种类为甲醇、 乙醇、 异丙醇和乙 腈， 最优为乙醇。 0011 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤2中改性剂乙醇的比例为4%9%， 最优为5%。 说明书 1/3 页 3 CN 105859715 A 3 0012 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤2中超临界流体为超临界二氧化碳， 超临界 二氧化碳的压力为1014MPa， 最优为14MPa； 超临界二氧化碳的流速为1-10倍柱体积/分钟， 最优为4倍柱体积/分钟。。
10、 0013 前面所述的方法， 优选的方案是， 步骤2中色谱柱温度为3050 C， 最优为30 C。 0014 本发明一种从吴茱萸提取物中分离纯化吴茱萸碱和吴茱萸次碱的方法， 具有如下 优势： （1） 所得到的吴茱萸提取物中有效成分含量高 （从图1可以看出） 。 0015 （2） 不需要像已有技术一样对样品进行多次分离纯化， 只需要一个分离步骤即可 得到两种高纯度化合物， 经过一步分离纯化就可以得到吴茱萸碱和吴茱萸次碱。 0016 （3） 纯化过程中使用超临界二氧化碳， 不使用对环境有危害的有机溶剂， 生产过程 绿色环保， 所得产品无有害物质残留。 0017 （4） 二氧化碳回收利用容易， 能耗。
11、低， 生产成本低。 0018 （5） 方法操作简单， 易于自动化控制， 效率高， 工艺周期短。 附图说明 0019 图1是实施例1超临界流体色谱图。 具体实施方式 0020 下面结合实施例和附图详细说明本发明的技术方案， 但保护范围不被此限制。 实 施例中所用设备或原材料皆可从市场获得。 所用试剂均为分析纯， 购自天津试剂四厂， 所用 二氧化碳为高纯二氧化碳。 0021 实施例1 称取吴茱萸100克， 用粉碎机粉碎， 放入玻璃容器中， 加入1500ml无水乙醇超声提取0.5 小时， 提取3次， 将提取液过滤、 减压浓缩得浸膏。 0022 将吴茱萸浸膏用甲醇溶解， 经过滤后， 进行超临界流体色谱。
12、分离， 色谱柱为 SpherigelC18色谱柱， 色谱柱温度为30 C。 流动相为超临界二氧化碳， 流速为4倍柱体积/分 钟， 压力为14MPa。 改性剂为乙醇， 其比例为5%。 分离过程由紫外检测器检测， 检测波长为 225nm， 根据检测信号收集目标组分馏分， 分别得到吴茱萸碱和吴茱萸次碱。 0023 实施例2 称取吴茱萸100克， 用粉碎机粉碎， 放入玻璃容器中， 加入1000ml无水乙醇超声提取1小 时， 提取3次， 将提取液过滤、 减压浓缩得浸膏。 0024 将吴茱萸浸膏用甲醇溶解， 经过滤后， 进行超临界流体色谱分离， 色谱柱为 SpherigelC18色谱柱， 色谱柱温度为40。
13、 C。 流动相为超临界二氧化碳， 流速为2倍柱体积/分 钟， 压力为12MPa。 改性剂为乙醇， 其比例为6%。 分离过程由紫外检测器检测， 检测波长为 225nm， 根据检测信号收集目标组分馏分， 分别得到吴茱萸碱和吴茱萸次碱。 0025 实施例3 称取吴茱萸100克， 用粉碎机粉碎， 放入玻璃容器中， 加入2000ml无水乙醇超声提取2小 时， 提取3次， 将提取液过滤、 减压浓缩得浸膏。 0026 将吴茱萸浸膏用甲醇溶解， 经过滤后， 进行超临界流体色谱分离， 色谱柱为 说明书 2/3 页 4 CN 105859715 A 4 SpherigelC18色谱柱， 色谱柱温度为50 C。 流动相为超临界二氧化碳， 流速为5倍柱体积/分 钟， 压力为10MPa。 改性剂为乙醇， 其比例为4%。 分离过程由紫外检测器检测， 检测波长为 225nm， 根据检测信号收集目标组分馏分， 分别得到吴茱萸碱和吴茱萸次碱。 0027 经HPLC面积归一化法分析测试， 实施例1-3所得到的各个组分的纯度很高， 均在 98%以上。 0028 经NMR、 MS鉴定， 图1中A为吴茱萸碱， B为吴茱萸次碱， 其化学结构如下： 说明书 3/3 页 5 CN 105859715 A 5 图1 说明书附图 1/1 页 6 CN 105859715 A 6 。