南天竹火焰的组培方法.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 102273403 B (45)授权公告日 2013.03.06 CN 102273403 B *CN102273403B* (21)申请号 201010195249.4 (22)申请日 2010.06.08 C12N 5/04(2006.01) A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 上海上房园艺有限公司 地址 201114 上海市闵行区浦江镇浦江村 (72)发明人 陈建华 黄建荣 沈勤 (74)专利代理机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 31225 代理人 林君如 CN 101044841 A,2007.10.03, 宋刚等 . 火焰南天竹的组织。

2、培养和规模化生 产. 植物生理学通讯 .2010,第46卷(第2期), 李慧 . 彩叶树种火焰南天竹的离体快繁研 究 .江苏农业科学 .2010,( 第 1 期 ), (54) 发明名称 南天竹火焰的组培方法 (57) 摘要 本发明涉及南天竹火焰的组培方法， 该方法 以南天竹火焰新萌发的小芽为基础， 步骤包括无 菌材料的获得、 芽的分化和增殖、 不定芽壮苗培 养、 生根培养及炼苗与移栽， 最终得到性状完好的 南天竹火焰植株。 与现有技术相比， 本发明的移栽 成活率可高达 95， 大大提高繁殖速度和苗木的 整齐度， 更好地保持原有的母本性状。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 王。

3、颖 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种用于南天竹火焰组织培养的培养基， 其特征在于， 包括小芽诱导培养基、 不定芽增殖培养基、 壮苗培养基和生根培养基， 其中， 所述的小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0 5.0mg/L+NAA0.1 0.5mg/L+IBA1.0 5.0mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所 述的不定芽增殖培养基的成分为 1/2MS+6-BA1.0 3.0mg/L+NAA0.1 0.3mg/L+IBA0.1 0.5mg/L+ 蔗糖 3。

4、0g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5 2.0mg/ L+NAA0.1 0.2mg/L+IBA0.3 0.5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的生根培养基的成 分为 1/2MS+NAA0.1 1.0mg/L+IBA3.0 8.0mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L。 2. 根据权利要求 1 所述的培养基， 其特征在于， 所述的小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L ； 所述的不定芽增殖培养 基的成分为 1/2MS+6-BA2.0mg/L。

5、+NAA0.2mg/L+IBA0.3mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的 壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0.3mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L ； 所述的生根培养基的成分为 1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 6g/L。 权 利 要 求 书 CN 102273403 B 2 1/4 页 3 南天竹火焰的组培方法 技术领域 0001 本发明涉及一种植株的组织培养方法， 尤其是涉及南天竹 火焰 的组织培养方 法。 背景技术 0002 南天竹火焰为常绿小灌木， 喜温暖多。

6、湿及通风良好的半阴环境。耐寒， 耐旱， 能耐 微碱性土壤， 适宜含腐殖质的沙壤土生长。南天竹火焰株型紧凑， 叶较普通南天竹较宽， 强 光下叶鲜红色， 尤其是隆冬季节， 叶色十分鲜艳。 园林中多丛植或孤植于花境、 庭院， 又可做 疏林地被植物， 是良好的花镜与庭院材料， 市场需求量大。但是， 该植物为国外引进的品种 引种， 组培报道尚未见， 因此数量较少， 其扦插、 分株较慢， 扦插成活率低， 导致种苗供应受 限制。 发明内容 0003 本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种移栽成活率可 高达 95、 保持母体现状的南天竹 火焰 的组织培养方法。 0004 本发明的目的可以通过。

7、以下技术方案来实现 ： 0005 南天竹火焰的组培方法， 其特征在于， 该方法通过对摘取的南天竹火焰新萌发的 小芽进行无菌处理后， 再依次接种于小芽诱导培养基、 不定芽增殖培养基、 壮苗培养基及生 根培养基中进行培养并置于温室中炼苗后， 即可移栽室外， 得到南天竹 火焰 植株。 0006 该方法具体包括以下步骤 ： 0007 (1) 无菌材料的获得 0008 摘取南天竹火焰新萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用 75wt的 乙醇浸泡20-40s及1wt升汞溶液浸泡10-20min后， 利用无菌水冲洗5-6次并吸干表面水 分， 取小芽基部并切成 1cm 接种于 pH 值为 5。

8、.5-6.0 的小芽诱导培养基上， 控制培养温度为 24-26， 光照为 70-90mol/ms， 进行芽诱导培养 ； 0009 (2) 芽的分化和增殖 0010 小芽接种于小芽诱导培养基上 4 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可 见明显的愈伤组织， 继续培养培养 1 个月， 切下带芽愈伤组织接种于 pH 值为 5.5-6.0 的不 定芽增殖培养基上， 控制培养温度为 24-26， 光照为 70-90mol/ms， 进行增殖培养 ； 0011 (3) 不定芽壮苗培养 0012 在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后， 将丛生芽分成小丛或单芽并接种于 pH 值为5.5-6.0的壮苗。

9、培养基中， 控制培养温度为24-26， 光照为70-90mol/ms， 进行壮苗 培养， 不定芽迅速伸长， 30 天后可以长到 2-3cm ； 0013 (4) 生根培养 0014 取高度为 2-3cm 的小植株， 将其接种于 pH 值为 5.5-6.0 的生根培养基中， 控制培 养温度为 24-26， 光照为 70-90mol/ms， 进行生根培养， 10 天后幼苗基部分化出许多白 说 明 书 CN 102273403 B 3 2/4 页 4 色的根原基， 30 天后可以长至 4-6cm ； 0015 (5) 炼苗与移栽 0016 继续生根培养 30-50 天， 根系长至 1-2cm 时， 。

10、选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室 内开瓶炼苗 7 天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化 40 天后， 即可移栽室外， 给予肥水管 理， 即可获得产品植株。 0017 所述的小芽诱导培养基的基本成分包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 营养成分为 MS+6-BA 1.0 5.0mg/L+NAA0.1 0.5mg/L+IBA1.0 5.0mg/L。 0018 所述小芽诱导培养基的营养成分优选 MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L。 0019 所述的不定芽增殖培养基的基本成分包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 营养成分为 1/2MS+6-BA1.0。

11、 3.0mg/L+NAA0.1 0.3mg/L+IBA0.1 0.5mg/L。 0020 所述不定芽增殖培养基的营养成分优选 1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+IBA 0.3mg/L。 0021 所 述 的 壮 苗 培 养 基 的 基 本 成 分 包 括 蔗 糖 30g/L、 琼 脂 6g/L， 营 养 成 分 为 MS+6-BA0.5 2.0mg/L+NAA0.1 0.2mg/L+IBA0.3 0.5mg/L。 0022 所述壮苗培养基的营养成分优选 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0.3mg/L。 0023 所述的生根培养基的基本成分包括蔗。

12、糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 营养成分为 1/2MS+NAA 0.1 1.0mg/L+IBA3.0 8.0mg/L。 0024 所述生根培养基的营养成分优选 1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L。 0025 与现有技术相比， 本发明的移栽成活率可高达 95， 大大提高繁殖速度和苗木的 整齐度， 更好地保持原有的母本性状。 具体实施方式 0026 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。 0027 实施例 1 0028 南天竹 火焰 的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0029 (1) 无菌材料的获得 0030 摘取南天竹火焰新萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于。

13、超净工作台上， 用 75wt的 乙醇浸泡 20s 及 1wt升汞溶液浸泡 10min 后， 利用无菌水冲洗 5-6 次并吸干表面水分， 取 小芽基部并切成 1cm 接种于小芽诱导培养基， 该小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1.0mg/ L+NAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L ； 0031 (2) 芽的分化和增殖 0032 小芽接种于小芽诱导培养基上 4 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后 可见明显的愈伤组织， 基部愈伤组织上小芽比较多， 但不影响不定芽的增殖， 不定芽生长 迅速并无玻璃化等不良现象， 在该培养中生长发育良好， 继续培养培养 1 个月， 切下带芽 愈。

14、伤组织接种于不定芽增殖培养基上， 该不定芽增殖培养基的成分为 1/2MS+6-BA1.0mg/ L+NAA0.1mg/L+IBA0.1mg/L ； 0033 (3) 不定芽壮苗培养 0034 在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后， 将丛生芽分成小丛或单芽并接种于壮苗 培养基中， 不定芽迅速伸长， 30 天后可以长到 2cm， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/ 说 明 书 CN 102273403 B 4 3/4 页 5 L+NAA0.1mg/L+IBA 0.3mg/L ； 0035 (4) 生根培养 0036 取高度为 2cm 的小植株， 将其接种于生根培养基中， 该生根培养基的。

15、成分为 1/2MS+NAA0.1mg/L+IBA3.0mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以 长至 4cm ； 0037 (5) 炼苗与移栽 0038 继续生根培养30天， 根系长至1cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗7天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理， 即可 获得产品植株。 0039 上述的所有培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 24， 光照为 70mol/ms， pH 值为 5.5。 0040 实施例 2 0041 南天竹 火焰 的组织培养方法， 。

16、该方法包括以下步骤 ： 0042 (1) 无菌材料的获得 0043 摘取南天竹火焰新萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用 75wt的 乙醇浸泡 40s 及 1wt升汞溶液浸泡 20min 后， 利用无菌水冲洗 6 次并吸干表面水分， 取 小芽基部并切成 1cm 接种于小芽诱导培养基， 该小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA3.0mg/ L+NAA0.3mg/L+IBA3.0mg/L ； 0044 (2) 芽的分化和增殖 0045 小芽接种于小芽诱导培养基上 4 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可 见明显的愈伤组织， 基部愈伤组织上小芽比较多， 但不影响不。

17、定芽的增殖， 不定芽生长迅 速并无玻璃化等不良现象， 在该培养中生长发育良好， 继续培养培养 1 个月， 切下带芽愈 伤组织接种于不定芽增殖培养基上， 该不定芽增殖培养基的成分为 1/2MS+6-BA 3.0mg/ L+NAA0.3mg/L+IBA0.5mg/L ； 0046 (3) 不定芽壮苗培养 0047 在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后， 将丛生芽分成小丛或单芽并接种于壮苗 培养基中， 不定芽迅速伸长， 30 天后可以长到 3cm， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA2.0mg/ L+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L ； 0048 (4) 生根培养 0049 取高度为 3c。

18、m 的小植株， 将其接种于生根培养基中， 该生根培养基的成分为 1/2MS+NAA1.0mg/L+IBA8.0mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以 长至 6cm ； 0050 (5) 炼苗与移栽 0051 继续生根培养50天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗7天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理， 即可 获得产品植株。 0052 上述的所有培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 26， 光照为 90mol/ms， pH 值为 6.0。 0053。

19、 实施例 3 说 明 书 CN 102273403 B 5 4/4 页 6 0054 南天竹 火焰 的组织培养方法， 该方法包括以下步骤 ： 0055 (1) 无菌材料的获得 0056 摘取南天竹火焰新萌发的小芽， 用自来水冲洗 2h 后于超净工作台上， 用 75wt的 乙醇浸泡 30s 及 1wt升汞溶液浸泡 15min 后， 利用无菌水冲洗 5 次并吸干表面水分， 取 小芽基部并切成 1cm 接种于小芽诱导培养基， 该小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA5.0mg/ L+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L ； 0057 (2) 芽的分化和增殖 0058 小芽接种于小芽诱导培养基上。

20、 4 周后， 小芽开始膨大， 出现黄绿色突起， 2 周后可 见明显的愈伤组织， 继基部愈伤组织上小芽比较多， 但不影响不定芽的增殖， 不定芽生长 迅速并无玻璃化等不良现象， 在该培养中生长发育良好， 继续培养培养 1 个月， 切下带芽 愈伤组织接种于不定芽增殖培养基上， 该不定芽增殖培养基的成分为 1/2MS+6-BA2.0mg/ L+NAA0.2mg/L+IBA 0.3mg/L ； 0059 (3) 不定芽壮苗培养 0060 在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后， 将丛生芽分成小丛或单芽并接种于壮苗 培养基中， 该壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+IBA0。

21、.3mg/L， 不定芽迅速 伸长， 30 天后可以长到 3cm ； 0061 (4) 生根培养 0062 取高度为 3cm 的小植株， 将其接种于生根培养基中， 该生根培养基的成分为 1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA5.0mg/L， 10 天后幼苗基部分化出许多白色的根原基， 30 天后可以 长至 6cm ； 0063 (5) 炼苗与移栽 0064 继续生根培养40天， 根系长至2cm时， 选择根系发达生长健壮的无菌苗， 室内开瓶 炼苗7天， 取出后洗净根部琼脂， 在温室中驯化40天后， 即可移栽室外， 给予肥水管理， 即可 获得产品植株。 0065 上述的所有培养基的成分还包括蔗糖 30g/L、 琼脂 6g/L， 该培养基的培养温度为 25， 光照为 80mol/ms， pH 值为 5.8。 说 明 书 CN 102273403 B 6 。