一种榛子素及其提取方法和药物用途.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101613340 B (45)授权公告日 2013.03.06 CN 101613340 B *CN101613340B* (21)申请号 200910066909.6 (22)申请日 2009.05.06 C07D 317/70(2006.01) A61K 31/36(2006.01) A61P 3/06(2006.01) (73)专利权人 吉林大学 地址 130021 吉林省长春市新民大街 126 号 (72)发明人 刘金平 李平亚 卢丹 薛健飞 (74)专利代理机构 吉林长春新纪元专利代理有 限责任公司 22100 代理人 魏征骥 CN 1566106 A,2。

2、005.01.19, (54) 发明名称 一种榛子素及其提取方法和药物用途 (57) 摘要 本发明涉及一种榛子素及其提取方法和其药 物用途。属于新化合物及其药物用途。以平榛 叶为原料， 经过醇提， 有机溶剂萃取以及硅胶柱 层析， 重结晶方法， 得到了一种新化合物， 其化学 名称为 ： 化学名称为 7， 8， 10- 三甲氧基 -4， 5- 二 氢菲并 2， 3 二氧戊烷 (7， 8， 10-trimethoxy-4， 5-dihydrophenanthro2， 3dioxolane)， 简称榛 子素A， 产率达 0.01以上。 榛子素 A 在制备治疗 高血脂症药物中有着广泛的药物用途。 (51。

3、)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李满宇 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 5 页 1/1 页 2 1. 一种如下式的榛子素 A ： 2. 一种如权利要求 1 所述榛子素 A 的制备方法， 其特征在于， 包括下列步骤 ： a、 提取 ： 取干燥榛叶 5.0kg， 用 3-5 倍量的 75% 95% 乙醇室温浸泡 24 小时， 滤过， 回 收溶剂， 浸提3次， 合并提取液， 减压回收溶剂至相对密度1.121.15， 滤过， 滤液依次用石 油醚、 三氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁。

4、醇萃取， 减压回收溶剂至干， 得正丁醇部分 25 30g ； b、 分离 ： 将得到的正丁醇部分进行硅胶柱层析200300目， 三氯甲烷-甲醇1:110 洗脱， 收集榛子素 A 部分洗脱液， 回收溶剂得榛子素 A 粗产品， 收率 0.010% 0.015% ； C、 榛子素 A 的纯化 ： 取粗榛子素 A 用甲醇进行重结晶， 得纯榛子素 A ： 0.5g 0.7g。 3. 如权利要求 l 所述的榛子素 A 在制备治疗高血脂症药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 101613340 B 2 1/6 页 3 一种榛子素及其提取方法和药物用途 技术领域 0001 本发明涉及榛子素 A 及其提取方。

5、法， 和其在制备治疗高血脂症药物中的应用。 0002 背景技术 0003 平 榛 (Corylus heterophylla Fisch) 是 榛 (Corylus heterophylla Fish. exBess.) 属中的一种植物。 0004 榛 (Corylus heterophylla Fish.ex Bess.) 为 桦 木 科 (Betulaceae) 榛 属 (Corlus)植物， 原产我国， 据考证迄今已有6000多年的历史。 由于榛的野生资源丰富， 多年 来我国较多的是利用野生资源， 随着栽培学的迅速发展， 市场的不断开拓， 近些年来在我国 部分地区已有少量的栽培。 目前，。

6、 在我国栽培的榛有平榛(Corylus heterophylla Fisch)、 毛榛 (Corlus mandshuricaBatal)、 刺榛 (Corylus tibetica Batal) 等 12 种， 其中以平榛 分布较多而且普遍， 在辽宁、 吉林、 黑龙江、 山西、 山东、 河南等地均有分布。 榛是果材兼用的 优良树种， 不仅可生产十分珍贵的木材， 而且能生产上等的坚果和以其种仁为原料的高档 食品。榛的木材坚硬， 纹理、 色泽美观， 可做小型细木工的材料， 它的种仁油芳香可食， 又是 制作肥皂、 蜡烛和化妆品的原料。 0005 榛的植物学特征及生长分布 ： 榛为多年生乔木或灌木，。

7、 树高一般为 1.5-2m， 树皮 灰褐色， 有光泽， 1 年生枝褐色， 密生茸毛 ； 芽鳞暗褐色， 边缘有毛 ； 叶互生， 托叶小， 早落 ； 叶 片圆形、 广卵形或倒卵形， 尖端近截形或圆形， 浅裂， 中央裂片较长， 渐尖， 基部心形或截形， 边缘有不规 则重锯齿 ； 顶端平截， 中央有突出的叶尖 ； 叶上面深绿色， 下面浅绿色， 侧脉 3-5 对， 多为羽状叶脉 ； 单性花， 雌雄同株， 无花瓣， 先叶开放， 雄花序为圆柱形， 下垂的菜荑 花序， 具多数、 覆瓦状排列的苞片， 每一苞片内有叉状的雄蕊 4-8 枚， 花药黄色， 雌花着生于 雄花序附近， 包藏于一总苞内， 仅红色柱头突出， 。

8、开放时露出芽顶 ； 坚果 1-6 个， 浅褐色， 簇 生或单生， 较大， 球形或卵圆形， 径约 1.5cm， 有总苞片 2 个， 浅裂， 钟状， 外面密生短柔毛和 刺毛状腺体。花期 4-5 月， 果熟期 9 月。榛生于向阳干燥的山坡、 岗地、 路边荒地和林缘等 处。分布于中国东北、 华北。 0006 榛的主要成分 ： 榛树的叶含鞣质， 并有黄酮反应， 树皮含有鞣质 ； 果仁含碳水化合 物、 蛋白质、 脂肪 ； 果实含有淀粉 ； 叶尚含有生物碱。油的脂肪酸组成有棕榈酸、 硬脂酸、 油 酸和亚麻油酸等。 0007 榛具有广泛的药用价值 ： 种仁可以益气、 开胃、 明目。用于病后体虚， 食少疲倦。水。

9、 煎服， 用量 30-60g。榛的雄花具有消炎、 消肿、 止痛作用。可用于皮肤炎症、 冻伤等。 0008 目前国内外学者对榛属植物研究主要集中在高极性的鞣质化合物， 对榛属植物中 含有的较低极性的化学成分研究较少， 主要化学成分为酮类化合物。 0009 鞣质类化合物是该属植物的主要成分之一。目前， 针对该属植物所含的鞣质类化 合物的研究较多， 对该属植物的其他化学成分研究较少。 0010 金 哲 雄，等 从 榛 叶 中 分 离 提 取 出 8 个 化 合 物，分 别 为 quercetin-3-O-D-glucuronide ； 3， 4， 6-penta-O-galloyl-D-glucos。

10、e ； 1， 2， 3， 6-tetra-D-glucose ； casuarictin ； rugosin C ； degalloylrugosin F ； heterophylliin 说 明 书 CN 101613340 B 3 2/6 页 4 A 和 tellimagrandinII( 金 哲 雄， 张 秀 鹃 . 榛 子 叶 鞣 质 类 化 学 成 分 研 究 J. 中 草 药， 2001， 32(3) ： 193-195)。王力， 等从榛叶中分离提取出 4 个化合物， 分别为榛叶素 B(heterophylliin B)， tellinagrandin， casuarictin和c。

11、asuarinin。 其中榛叶素B为一种 新的鞣花二聚体成分 ( 王力， 金哲雄 . 榛子叶鞣质类化学成分研究 (II)J. 中草药， 2004， 35(6) ： 606-608.)。 0011 张丽华， 等发现榛属中含有紫杉醇类物质， 含量为紫杉树皮的 1/10， 同时在鞍山科 技大学分离技术中心参照Angela Hoffman的实验条件和榛树中紫杉醇的图谱， 进行了大量 的实验研究， 确认鞍山地区的山榛树中也含有紫杉醇， 并对其进行了提取和纯化， 最终分离 得到了目标物， 初步鉴定为紫杉醇(张丽华， 高丽娟.鞍山地区山榛子树皮中紫杉醇的提取 J. 福建分析测试， 2003， 12(2) ：。

12、 1765-1768.)。 0012 该植物中含有大量酮类化合物。 简单异戊烯基酮是指酮母核上仅含有一些结构简 单的羟基、 甲氧基及直链的异戊烯结构单元取代基的化合物， 该类化合物有 260 余种。 0013 目前未见到有关榛子素 A 的提取方法及化合物的报道， 该化合物属于新化合物， 属于首次分离得到 ； 该化合物的新的药物用途属首次发现。 发明内容 0014 本发明提供榛子素 A 及其提取方法和药物用途。 0015 一种如下式的榛子素 A ： 0016 0017 棕色针晶 (MeOH)， mp 145 146。TLC 检测， 10硫酸 - 乙醇为显色剂， 105下加热显鲜绿色斑点。是从榛叶。

13、中分离得到的单体化合物， 故命名为榛子素 A， 化 学名称为 7， 8， 10- 三甲氧基 -4， 5- 二氢菲并 2， 3 二 氧戊烷 (7， 8， 10-trimethoxy-4， 5-dihydrophenanthro2， 3dioxolane)。 0018 本发明榛子素 A 的制备方法是， 包括下列步骤 ： 0019 a、 提取 ： 取干燥榛叶 5.0kg， 用 3 5 倍量的 75 95乙醇室温浸泡 24 小时， 滤过， 回收溶剂， 浸提 3 次， 合并提取液， 减压回收溶剂至相对密度 1.12 1.15， 滤过， 滤液 依次用石油醚、 三氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 减压回收。

14、溶剂至干， 得正丁醇部分 25g 30g ； 0020 b、 分离 ： 将得到的正丁醇部分进行硅胶柱层析 200 300 目， 三氯甲烷 - 甲醇 1 1 10 洗脱， 收集榛子素 A 部分洗脱液， 回收溶剂得榛子素 A 粗产品， 收率 0.010 0.015 ； 0021 C、 榛子素A的纯化 ： 取粗榛子素A用甲醇进行重结晶， 得纯榛子素A ： 0.5g0.7g。 0022 本发明榛子素 A 在制备治疗高血脂症药物中的应用。 0023 当本发明用于制备治疗高血脂症的药物时， 其口服或胃肠外给药， 均是安全的， 在 说 明 书 CN 101613340 B 4 3/6 页 5 口服情况下， 。

15、其可以任何常规形式给药， 如散剂、 粒剂、 片剂、 胶囊剂、 丸剂、 溶液剂、 悬浮液、 糖浆、 口腔含片、 舌下含片等 ： 当该药物肠胃外给药时， 可采取任何常规形式， 例如注射剂 ： 如静脉内注射、 软膏剂、 栓剂、 经皮给药、 吸入剂等。 0024 本发明制备治疗高血脂症的药物是由有效成分单体或有效成分与固体或液体的 赋形剂一起构成的， 这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的， 下面举几个 具体例子， 散剂是内服的粉末剂， 它的赋形剂有乳糖、 淀粉、 浆糊精、 碳酸钙、 合成或天然硫 酸铝、 氧化镁、 硬脂酸镁， 碳酸氢钠、 干燥酵母等 ； 溶液剂的赋形剂有水、 甘油、 1， 。

16、2- 丙二醇、 单糖浆、 乙醇、 乙二醇、 聚乙二醇、 山梨糖醇等 ； 软膏剂的赋形剂可以使用脂油， 含水羊毛脂、 凡士林、 甘油、 蜂腊、 木腊、 液体石腊、 树脂、 高级 腊等组合成的疏水剂或亲水剂。 0025 本发明的有益效果在于， 新化合物榛子素 A 可用于制备降血脂的药物， 具有疗效 显著的特点。 0026 有效物质的剂量可以根据服用方式， 病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类 似的因素而改变， 口服量为 ： 100 300mg， 每日二次服用 ； 注射 10 30mg， 每日一次。 附图说明 0027 图 1 是榛子素 A 的 HMBC 谱主要相关信号图。 0028 图 2 是榛。

17、子素 A 的 1HNMR 谱图。 0029 图 3 是榛子素 A 的 13CNMR 谱图。 0030 图 4 是榛子素 A 的 HMBC 谱图。 0031 图 5 是榛子素 A 的 HR-ESI-MS 谱图。 具体实施方式 0032 实施例 1 ： 0033 a、 提取 ： 取干燥榛叶 5.0kg， 用 3 倍量的 85乙醇室温浸泡 24 小时， 滤过， 回收溶 剂， 浸提 3 次， 合并提取液， 减压回收溶剂至相对密度 1.12， 滤过， 滤液依次用石油醚、 三氯 甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 减压回收溶剂至干， 得正丁醇部分 25g， 0034 b、 分离 ： 将得到的正丁醇部分进行硅。

18、胶柱层析 200 300 目， 三氯甲烷 - 甲醇 1 1 洗脱， 收集洗脱液， 回收溶剂得榛子素 A 粗产品， 收率 0.012， 0035 c、 榛子素 A 的纯化 ： 取粗榛子素 A 用甲醇进行重结晶， 得纯榛子素 A ： 0.6g。 0036 鉴定 ： 采用波谱学方法进行结构鉴定。 0037 HR-ESI-MS 谱给出分子量为 313.1147M-1-1， 结合 DEPTQSP、 1HNMR 谱确定其分子 式为 C18H18O5。 0038 在 1HNMR(500MHz， Pyridine-D 5)谱中， 给出6.10(1H， s)、 6.86(1H， s)和7.10(1H， s)3 。

19、个芳香质子， 根据其化学位移和单峰信号可知为孤立的芳香质子信号， 由 5.87(2H， s) 化学位移和单峰信号可知 -OCH2O- 片段的存在。另外在 3.65(3H， s)、 3.57(3H， s) 和 3.50(3H， s) 处分别给出 3 个甲氧基的质子信号， 在高场 2.42(2H， m) 和 2.40(2H， m) 的两 组信号， 结合 DEPTQSP 谱归属为两个相连的亚甲基质子信号。 0039 在 DEPTQSP(125.8MHz， Pyridine-D5) 谱中可见 18 个碳信号， 其中 9 个季碳信号， 3 个叔碳信号， 3 个伯碳信号和 3 个仲碳信号。结合 1HNMR。

20、 谱可知， 57.83、 57.01 和 56.25 说 明 书 CN 101613340 B 5 4/6 页 6 为 3 个甲氧基碳信号， 32.15 和 30.27 为两个亚甲基碳信号， 102.44 为 -OCH2O- 基团的 碳信号， 及其余 12 个芳香碳信号。 0040 在 HMBC 谱 中， 可 见 位 于 低 场 H 7.10(1H， s， H-9) 质 子 信 号 分 别 与 C 147.22(C-7)、 146.82(C-8)、 132.26(C-5a)、 125.77(C-9a)、 116.69(C-10b)、 116.57(C-6)、 159.02(C-10) 和 30。

21、.27(C-5) 存在相关信号， 而 H 6.86(1H， s， H-6) 质子信号分别与 C 147.22(C-7)、 146.82(C-8)、 125.77(C-9a)、 116.69(C-10b)、 114.36(C-9)、 132.26(C-5a)、 30.27(C-5) 和 32.15(C-4) 存在相关信号， 由此推断两个质子位于同一个苯环上的对 位 ； 另 外 H 6.10(1H， s， H-1) 质 子 信 号 分 别 与 C 159.02(C-10)、 116.69(C-10b)、 102.44(C-11)、 147.88(C-2)、 141.83(C-3) 和 142.84。

22、(C-4b) 存在相关信号， 推断该质子与 C-1 相连。 0041 在 HMBC 谱中， 通过 H3.50(3H， s) 质子信号与 C100.29(C-1)、 159.02(C-10)、 116.69(C-10b) 存在相关信号， 推断该甲氧基与 C-10 相连 ； H3.65(3H， s) 质子信号分别 与C116.57(C-6)、 147.22(C-7)和146.82(C-8)存在相关信号， 可知该甲氧基与C-7相连 ； 另一H3.57(3H， s)质子信号分别与C147.22(C-7)、 146.82(C-8)、 114.36(C-9)存在相关 信号， 确定该甲氧基与 C-8 相连。。

23、 0042 HMBC 谱中， H5.87(2H， s) 与 C100.29(C-1)、 147.88(C-2)、 141.83(C-3)、 142.84(C-4b) 存在相关信号， 确定 -OCH2O- 基团与 C-2 和 C-3 相连。 0043 HMBC 谱中， 亚甲基 H2.42(2H， m) 信号分别与 C 147.88(C-2)、 141.83(C-3)、 142.84(C-4b)、 159.02(C-10)、 116.69(C-10b)、 30.27(C-5)、 132.26(C-5a)、 116.57(C-6) 和 125.77(C-9a) 存在较强相关信号， 与 C100.29。

24、(C-1) 存在较弱相关信号 ； 而另一亚甲基 H2.40(2H， m) 信号分别与 C141.83(C-3)、 142.84(C-4b)、 116.69(C-10b)、 32.15(C-4)、 132.26(C-5a)、 116.57(C-6)、 125.77(C-9a)、 147.22(C-7) 和 114.36(C-9) 存在相关信号， 推断二者为二氢菲的两个亚甲基。 0044 榛子素 A 的 HMBC 谱主要相关信号见图 1。 0045 根据 1HNMR、 DEPTQSP 和 HMBC 谱所提供的信息， 对榛子素 A 的碳氢核磁数据进行了 归属， 见表 1。 0046 表 1 榛子素 。

25、A 的碳氢核磁数据 0047 说 明 书 CN 101613340 B 6 5/6 页 7 0048 将榛子素 A 的波谱数据与文献报道的 2， 7- 二羟基 -3， 5- 二甲氧基 -9， 10- 二氢菲 比较 (Chen FC， Lin YM， Hung JC.Phenolic compounds from theheartwood of Garcinia multifloraJ.Phytochemistry， 1975， 14 ： 300-304.)， 结果发现， 除 2、 3 位连有的基团有 差异外， 其余基本相同。1HNMR、 DEPTQSP、 HMBC、 HRMS 谱分别见图 2、。

26、 图 3、 图 4、 图 5。 0049 综合分析， 鉴定榛子素 A， 化学名称为 7， 8， 10- 三甲氧基 -4， 5- 二氢菲并 2， 3 二 氧戊烷 (7， 8， 10-trimethoxy-4， 5-dihydrophenanthro2， 3dixole)， 是从平榛叶中得到的 新化合物。 0050 实施例 2 ： 0051 a、 提取 ： 取干燥榛叶 5.0kg， 用 4 倍量的 75乙醇室温浸泡 24 小时， 滤过， 回收溶 剂， 浸提 3 次， 合并提取液， 减压回收溶剂至相对密度 1.15， 滤过， 滤液依次用石油醚、 三氯 甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 减压回收溶剂至。

27、干， 得正丁醇部分 28g。 0052 b、 分离 ： 将得到的正丁醇部分进行硅胶柱层析 200 300 目， 三氯甲烷 - 甲醇 1 5 洗脱， 收集榛子素 A 部分洗脱液， 回收溶剂得榛子素 A 粗产品， 收率 0.013。 0053 c、 榛子素 A 的纯化 ： 取粗榛子素 A 用甲醇进行重结晶， 得纯榛子素 A ： 0.64g。 0054 实施例 3 ： 说 明 书 CN 101613340 B 7 6/6 页 8 0055 a、 提取 ： 取干燥榛叶 5.0kg， 用 5 倍量的 95乙醇室温浸泡 24 小时， 滤过， 回收溶 剂， 浸提 3 次， 合并提取液， 减压回收溶剂至相对密。

28、度 1.14， 滤过， 滤液依次用石油醚、 三氯 甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇萃取， 减压回收溶剂至干， 得正丁醇部分 30g。 0056 b、 分离 ： 将得到的正丁醇部分进行硅胶柱层析 200 300 目， 三氯甲烷 - 甲醇 1 10 洗脱， 收集榛子素 A 部分洗脱液， 回收溶剂得榛子素 A 粗产品， 收率 0.015。 0057 c、 榛子素 A 的纯化 ： 取粗榛子素 A 用甲醇进行重结晶， 得纯榛子素 A ： 0.7g。 0058 实验例、 榛子素 A 预防和治疗高血脂症的药效试验 0059 1、 材料与方法 0060 1.1 动物 SD 大鼠， 60 只， 雄性， 体重 130g。

29、 150g， 购自本校实验动物中心。 0061 1.2药物榛子素A ： 自制 ； 非诺贝特 ： 规格200mg/粒， 批号89396， 法国利博福尼制 药公司生产 ； 胆固醇粉 ： 购自北京双旋生物培养基制品厂， 批号 ： 20050606。 0062 1.3 高脂兔饲料及各种含药物高脂饲料的配制高脂饲料配制 ： 基础饲料 100g 中加 入胆固醇 0.4g， 猪油 2mL ； 在高脂饲料的基础上加入不同含量的药物配制成含药物的高脂 饲料供实验喂养。 0063 2、 对正常大鼠血脂水平的影响取大鼠 60 只， 禁食给水 12h， 称体重， 随机分为 6 组 ( 每组各 10 只 ) ： 正常对。

30、照组、 高脂模型组 ( 生理盐水， 10ml/kg)、 阳性对照组 ( 非诺贝特 20mg/kg)、 榛子素 A 大剂量组 (60mg/kg)、 中剂量组 (30mg/kg) 和小剂量组 (15mg/kg)。上 述药物均灌胃 (ig) 给药， 每日 1 次， 共 15d， 实验过程中每周称体重 1 次， 第 16 天摘除大鼠 眼球， 眼眶取血 2-3ml， 送血生化检查， 测血清中 TG 和 TC 含量。 0064 3、 榛子素 A 降血脂试验结果见表 2。 0065 表 2 榛子素 A 降血脂试验结果 (xs， n 10) 0066 0067 * 与正常对照组比较， p 0.05 ； * 与。

31、正常对照组比较， p 0.01。 0068 4、 结论实验结果表明榛子素 A 具有明显的降血脂作用。 0069 制备药剂的实施例 1 ： 0070 榛子素 A 20.0g， 以 1， 2- 丙二醇 1000ml 溶解， 过滤后分装于 1000 支安瓶中， 每支 1ml， 含榛子素 A 20mg。 0071 制备药剂的实施例 2 ： 0072 榛子素 A 200.0g， 药用淀粉适量， 二者充分混合， 装胶囊， 制成 1000 粒胶囊， 每粒 重 0.25g， 含榛子素 A 200mg。 说 明 书 CN 101613340 B 8 1/5 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 101613340 B 9 2/5 页 10 说 明 书 附 图 CN 101613340 B 10 3/5 页 11 说 明 书 附 图 CN 101613340 B 11 4/5 页 12 说 明 书 附 图 CN 101613340 B 12 5/5 页 13 说 明 书 附 图 CN 101613340 B 13 。