一种羟甲香豆素的药物组合物及其医药用途.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610332765.4 (22)申请日 2016.05.19 (71)申请人 蒋灵锟 地址 325308 浙江省温州市文成县十源乡 十源村 (72)发明人 蒋灵锟 (51)Int.Cl. C07J 21/00(2006.01) A61K 31/585(2006.01) A61K 31/37(2006.01) A61P 3/06(2006.01) (54)发明名称 一种羟甲香豆素的药物组合物及其医药用 途 (57)摘要 本发明公开了一种羟甲香豆素的药物组合 物及其医药用途， 。

2、本发明提供的羟甲香豆素的药 物组合物中含有羟甲香豆素和一种结构新颖的 天然产物化合物()， 羟甲香豆素、 化合物()单 独作用时， 对高脂血症具有治疗作用； 羟甲香豆 素和化合物()联合作用时， 对高脂血症的治疗 效果进一步提高， 可以开发成治疗高脂血症的药 物， 与现有技术相比具有突出的实质性特点和显 著的进步。 权利要求书2页 说明书5页 CN 105859819 A 2016.08.17 CN 105859819 A 1.一种具有下述结构式的化合物()， 2.一种羟甲香豆素的药物组合物， 其特征在于： 包括羟甲香豆素、 如权利要求1所述的 化合物()和药学上可以接受的载体， 制备成需要的。

3、剂型。 3.根据权利要求2所述的羟甲香豆素的药物组合物， 其特征在于： 药学上可以接受的载 体包括稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载 体或润滑剂。 4.根据权利要求2所述的羟甲香豆素的药物组合物， 其特征在于： 所述剂型包括片剂、 胶囊剂、 口服液、 口含剂、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注射 剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂或贴剂。 5.权利要求1所述的化合物()的制备方法， 其特征在于， 包含以下操作步骤： (a)将巴 戟天粉碎， 用7080乙醇热回流提取， 合并提取液， 浓缩至无醇味。

4、， 依次用石油醚、 乙酸乙 酯和水饱和的正丁醇萃取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b) 步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂， 先用15乙醇洗脱6个柱体积， 再用70乙醇洗 脱10个柱体积， 收集70洗脱液， 减压浓缩得70乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中70乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为80:1、 30:1、 15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到4个组分； (d)步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为25:1、 15:1 和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合。

5、的 反相硅胶分离， 用体积百分浓度为72的甲醇水溶液等度洗脱， 收集814个柱体积洗脱 液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物()。 6.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 步骤(a)用75乙醇热回 流提取， 合并提取液。 7.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。 8.根据权利要求5所述的化合物()的制备方法， 其特征在于： 步骤(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯进行萃取， 得到二氯甲烷萃取物。 9.权利要求1所述的化合物()在制备治疗高脂血症的药物中的应用。 10.权利要求24任一所述的羟甲香豆素的药物组合物在制备。

6、治疗高脂血症的药物中 权利要求书 1/2 页 2 CN 105859819 A 2 的应用。 权利要求书 2/2 页 3 CN 105859819 A 3 一种羟甲香豆素的药物组合物及其医药用途 技术领域 0001 本发明属于生物医药领域， 涉及羟甲香豆素的新用途， 具体涉及羟甲香豆素的药 物组合物及其在治疗高脂血症中的应用。 背景技术 0002 羟甲香豆素为香豆素衍生物， 能松弛奥狄括约肌， 具有较强的解痉、 镇痛作用， 同 时也能温和、 持续地促进胆汁分泌， 加强胆囊收缩和抑菌作用， 具有明显的利胆作用， 有利 于结石排出， 对胆总管结石有一定排石效果。 发明内容 0003 本发明的目的在。

7、于提供一种羟甲香豆素的药物组合物， 该药物组合物中含有羟甲 香豆素和一种天然产物， 羟甲香豆素和该天然产物可以协同治疗高脂血症。 0004 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的： 0005 一种具有下述结构式的化合物()， 0006 0007 一种羟甲香豆素的药物组合物， 包括羟甲香豆素、 如权利要求1所述的化合物() 和药学上可以接受的载体， 制备成需要的剂型。 0008 进一步地， 药学上可以接受的载体包括稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载体或润滑剂。 0009 进一步地， 所述剂型包括片剂、 胶囊剂、 口服液、 口含剂。

8、、 颗粒剂、 冲剂、 丸剂、 散剂、 膏剂、 丹剂、 混悬剂、 粉剂、 溶液剂、 注射剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂或贴剂。 0010 上述化合物()的制备方法， 包含以下操作步骤： (a)将巴戟天粉碎， 用7080乙 醇热回流提取， 合并提取液， 浓缩至无醇味， 依次用石油醚、 乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃 取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中正丁醇萃取物 用大孔树脂除杂， 先用15乙醇洗脱6个柱体积， 再用70乙醇洗脱10个柱体积， 收集70 说明书 1/5 页 4 CN 105859819 A 4 洗脱液， 减压浓缩得70乙醇洗脱浓缩物； (c)步。

9、骤(b)中70乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶 分离， 依次用体积比为80:1、 30:1、 15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d) 步骤(c)中组分3用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为25:1、 15:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体 积百分浓度为72的甲醇水溶液等度洗脱， 收集814个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得 到纯的化合物()。 0011 进一步地， 化合物()的制备方法中， 步骤(a)用75乙醇热回流提取， 合并提取 液。 0012 进一步地， 化合物()的制备方法中， 所述大。

10、孔树脂为D101型大孔吸附树脂。 0013 进一步地， 化合物()的制备方法中， 步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取， 得到二氯甲烷萃取物。 0014 上述化合物()在制备治疗高脂血症的药物中的应用。 0015 上述羟甲香豆素的药物组合物在制备治疗高脂血症的药物中的应用。 0016 本发明的优点： 0017 本发明提供的羟甲香豆素的药物组合物中含有羟甲香豆素和一种结构新颖的天 然产物， 羟甲香豆素和该天然产物单独作用时， 具有治疗高脂血症作用； 二者联合作用时， 治疗高脂血症效果更好， 可以开发成治疗高脂血症的药物。 本发明与现有技术相比具有突 出的实质性特点和显著的进步。 具体实施。

11、方式 0018 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容， 但并不以此限定本发明保护范 围。 尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明， 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和范围。 0019 实施例1： 化合物()分离制备及结构确证 0020 试剂来源： 乙醇、 石油醚、 乙酸乙酯、 正丁醇、 二氯甲烷为分析纯， 购自上海凌峰化 学试剂有限公司， 甲醇， 分析纯， 购自江苏汉邦化学试剂有限公司。 0021 分离方法： (a)将巴戟天(2kg)粉碎， 用75乙醇热回流提取(20L3次)， 合并提取 液， 浓缩至无醇味(4L。

12、)， 依次用石油醚(4L3次)、 乙酸乙酯(4L3次)和水饱和的正丁醇 (4L3次)萃取， 分别得到石油醚萃取物、 乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； (b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用D101型大孔树脂除杂， 先用15乙醇洗脱6个柱体积， 再用70乙醇洗脱10 个柱体积， 收集70洗脱液， 减压浓缩得70乙醇洗脱浓缩物； (c)步骤(b)中70乙醇洗脱 浓缩物用正相硅胶分离， 依次用体积比为80:1(8个柱体积)、 30:1(8个柱体积)、 15:1(8个柱 体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d)步骤(c)中组分3用 正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为25。

13、:1(8个柱体积)、 15:1(10个柱体积)和2:1(5个柱 体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分； (e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离， 用体积百分浓度为72的甲醇水溶液等度洗脱， 收集814个柱体积洗脱 液， 洗脱液减压浓缩得到化合物()(纯度大于98)。 0022 结构确证： HR-ESI-MS显示M+Na+为m/z591.2604， 结合核磁特征可得分子式为 C32H40O9， 不饱和度为13。 核磁共振氢谱数据 H(ppm， DMSO-d6， 400MHz)： H-2(5.86， dd， J 说明书 2/5 页 5 CN 105859819 A 5 1。

14、0.0， 2.0)， H-3(6.56， ddd， J10.0， 4.8， 2.4)， H-4(2.63， m)， H-4(3.10， m)， H-6(5.47， d， J 6.0)， H-7(2.04， m)， H-7(2.77， m)， H-8(1.94， m)， H-9(2.84， m)， H-11(1.60， m)， H-11 (2.60， m)， H-12(2.04， m)， H-12(2.77， m)， H-15(5.41， dd， J9.9， 8.0)， H-16(2.76， dd， J 11.2， 9.9)， H-16(3.02， dd， J11.2， 8.0)， H-18(4。

15、.65， d， J11.6)， H-18(5.02， d， J 11.6)， H-19(1.19， s)， H-21(1.71， s)， H-22(5.21， dd， J13.2， 2.9)， H-23(2.59， m)， H-23 (3.06， m)， H-27(1.98， s)， H-28(1.81， s)， 15-OAc(2.17， s)， 18-OAc(2.06， s)； 核磁共振碳谱 数据 C(ppm， DMSO-d6， 125MHz)： 204.0(C， 1-C)， 128.1(CH， 2-C)， 145.8(CH， 3-C)， 33.5(CH2， 4-C)， 135.2(C， 5。

16、-C)， 125.9(CH， 6-C)， 26.3(CH2， 7-C)， 38.2(CH， 8-C)， 36.7(CH， 9-C)， 51.1 (C， 10-C)， 23.6(CH2， 11-C)， 26.4(CH2， 12-C)， 57.9(C， 13-C)， 79.8(C， 14-C)， 77.1(CH， 15- C)， 43.0(CH2， 16-C)， 53.8(C， 17-C)， 65.1(CH2， 18-C)， 19.1(CH3， 19-C)， 69.2(C， 20-C)， 19.3 (CH3， 21-C)， 81.7(CH， 22-C)， 34.5(CH2， 23-C)， 150.。

17、8(C， 24-C)， 121.7(C， 25-C)， 166.8(C， 26-C)， 13.1(CH3， 27-C)， 20.6(CH3， 28-C)， 171.1(C， 15-OAc)， 21.7(CH3， 15-OAc)， 171.3(C， 18-OAc)， 21.8(CH3， 18-OAc)。 IR光谱表明该化合物含有羟基(3260cm-1)， 双键(1640cm-1)和 酯基(1740cm-1)基团。 1H-NMR谱显示四个甲基信号 H1.19(3H， s， Me-19)， 1.71(3H， s， Me- 21)， 1.98(3H， s， Me-27)和1.81(3H， s， Me-。

18、28)， 两个乙酰甲基 H2.17(3H， s， 15-OAc)和 2.06(3H， s， 18-OAc)， 一个含氧亚甲基 H4.65(1H， d， J11.6Hz， H-18)和5.02(1H， d， J 11.6Hz， H-18)， 三个烯烃次甲基质子信号 H5.86(1H， dd， J10.0， 2.0Hz， H-2)， 6.56(1H， ddd， J10.0， 4.8， 2.4Hz， H-3)和5.47(1H， d， J6.0Hz， H-6)， 两个含氧次甲基 H5.41 (1H， dd， J9.9， 8.0Hz， H-15)和5.21(1H， dd， J13.2， 2.9Hz， H。

19、-22)。 13C-NMR谱显示32个共 振碳信号， 六个甲基(两个乙酰甲基)， 七个亚甲基(一个含氧亚甲基)， 七个次甲基(三个烯 属次甲基和两个含氧次甲基)以及十二个季碳(一个酮羰基， 三个酯羰基， 三个烯烃季碳和 三个含氧季碳)。 上述核磁数据表明该化合物为六元环结构。 核磁数据表明该化合物含有一 个二甲基取代的, -不饱和-内酯结构 C81.7(C-22)， 34.5(C-23)， 150.8(C-24)， 121.7(C-25)， 166.8(C-26)， 13.1(C-27)和20.6(C-28)； H5.21(1H， dd， J13.2， 2.9Hz， H- 22)， 2.59(。

20、1H， m， H-23)， 3.06(1H， m， H-23)， 1.98(3H， s， H-27)和1.81(3H， s， H-28)， 一个1- 氧代-2,5二烯结构 C204.0(C-1)， 128.1(C-2)， 145.8(C-3)， 135.2(C-5)和125.9(C-6)， 以及一个环氧结构 C53.8(C-17)和69.2(C-20)。 HMBC谱中， H-15和H2-18与相应乙酰碳( C171.1和171.3)的相关性表明C-15和C-18位各连有一个乙酰氧基。 ROESY谱中H-15与H-18 ( H5.02)的相关性表明C-15位的乙酰氧基为 构型。 综合氢谱、 碳谱。

21、、 HMBC谱和ROESY谱， 以 及文献关于相关类型核磁数据， 可基本确定该化合物如下所示， 立体构型进一步通过ECD试 验确定， 理论值与实验值基本一致。 0023 该化合物化学式及碳原子编号如下： 说明书 3/5 页 6 CN 105859819 A 6 0024 0025 实施例2： 药理作用 0026 本实施例给以一定量的高脂饲料喂饲建立高脂血症动物模型， 通过血液脂质和血 液流变学的测定， 观察药物的降脂作用。 0027 1、 材料与方法 0028 1.1动物 0029 雄性SD大鼠60只， 体重(20020)g， 由湖北中医学院动物室提供。 0030 1.2试剂与样品 0031 。

22、羟甲香豆素购自中国药品生物制品检定所。 化合物()自制， 制备方法见实施例1。 非诺贝特， 由广州威尔曼药业有限公司生产。 血脂测定试剂盒， 由浙江东瓯生物工程公司提 供； 胆固醇， 北京市海淀区微生物培养基制品厂生产； 胆盐、 硫氧嘧啶， 上海化学试剂采购供 应站； 猪油， 市售。 0032 1.3仪器 0033 TBA-40FA全自动生化分析仪， 日本TOSHIBA公司产品； FASCO-3010全自动血流变快 测仪， 重庆大学维多生物工程研究所产品。 0034 1.4大鼠分组及模型制备 0035 高胆固醇血症造型组膳食配制： 常规膳加20胆固醇， 10猪油， 0.1甲基硫氧 嘧啶， 0.。

23、2胆酸钠。 自造模第1天起， 羟甲香豆素组每天给与400mg/kg羟甲香豆素拌入饲料 中； 化合物()组组每天给与400mg/kg化合物()组拌入饲料中； 羟甲香豆素与化合物()组 合物组每天给与200mg/kg羟甲香豆素和200mg/kg化合物()拌入饲料中。 阳性对照组每日 给予非诺贝特26.8mg/kg， 另设空白及高脂对照组(模型对照组)， 分别给予常规膳及高脂 膳。 各组大鼠每天每鼠定量给予各自的膳食20g， 饮水不限， 饲喂1个月。 0036 1.5大鼠血脂水平测定实验 0037 各组动物在造型1个月后， 用水合氯醛腹腔注射进行麻醉， 开放式心脏采血， 根据 血脂测定试剂盒， 测定。

24、TG， TC， HDL-C， LDL-C。 0038 1.6大鼠血液流变学指标的检测实验 0039 各组动物在造模1个月后， 用水合氯醛腹腔注射进行麻醉， 开放式心脏采血， 测定 说明书 4/5 页 7 CN 105859819 A 7 血液流变学指标。 0040 1.7统计学方法 0041实验数据用均数标准差表示， 应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验， 以P0.05为差异有统计学意义。 0042 2、 实验结果 0043 2.1对大鼠TG， TC， LDL-C， HDL-C水平(mmolL-1)的影响 0044 与空白对照组比， 模型组大鼠TG、 TC、 LDL-C水。

25、平显著升高(P0.01)， HDL-C水平显 著降低(P0.01)， 说明造模成功。 与模型对照组比， 阳性对照组大鼠TG、 TC、 LDL-C水平显著 降低(P0.01)， HDL-C水平显著升高(P0.01)； 与模型对照组比， 羟甲香豆素组、 化合物 ()组大鼠TG、 TC、 LDL-C水平降低(P0.05)， HDL-C水平升高(P0.05)； 与模型对照组相 比， 羟甲香豆素与化合物()组合物组大鼠TG、 TC、 LDL-C水平显著降低(P0.01)， HDL-C水 平显著升高(P0.01)。 0045 试验结果见表1。 0046 2.2对大鼠血液流变学的影响 0047 与空白对照组。

26、比， 模型组大鼠血浆比粘度(mpas)升高(P0.05)， 说明造模成功。 与模型对照组比， 阳性对照组大鼠血浆比粘度降低(P0.05)； 与模型对照组比， 羟甲香豆 素与化合物()组合物组大鼠血浆比粘度降低(P0.01)。 0048 试验结果见表1。 0049表1对高脂血症模型大鼠血脂水平和血液流变学的影响 0050 0051 上述结果表明， 羟甲香豆素、 化合物()单独作用时， 对高脂血症具有治疗作用； 羟 甲香豆素和化合物()联合作用时， 对高脂血症的治疗效果进一步提高， 可以开发成治疗高 脂血症的药物。 0052 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容， 但并不以此限定本发明的保护 范围。 本领域的普通技术人员应当理解， 可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。 说明书 5/5 页 8 CN 105859819 A 8 。