技术领域
本发明涉及吸附/脱附提纯系统，具体是指一种通过两步吸附/ 脱附精制过程以及硅烷基衍生化反应，实现苯酚类和脂肪类混合物的 分离方法及其专用设备。
技术背景
气相色谱/质谱联用(GC/MS)技术对苯酚类化合物的检测具有高 灵敏度，但因生物样品中脂肪含量高，影响色谱分析，影响生物体中 苯酚类化合物的定性和定量分析，因此需要对苯酚类和脂肪类混合物 的分离。现有的分离方法如凝胶色谱技术、基质固相分散萃取、固相 微萃取，以及氧化铝、硅胶、硅藻土等柱层析技术，以上技术或者在 溶剂和材料的用量方面、或者在方法的稳定性方面、或者在柱容量方 面、或者在时间的消耗等方面存在着不足。因此需要开发一种方便、 经济、高效、稳定的分离方法。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种应用硅烷基衍生化技术和吸附技 术实现生物提取液中脂肪类与苯酚类化合物分离的方法，以便利用 GC/MS定性定量分析生物体中痕量的苯酚类化合物。
本发明还提供了一种应用硅烷基衍生化技术和吸附技术实现生 物提取液中脂肪与苯酚类化合物分离有效分离的专用设备。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种分离苯酚类和脂肪类化合物的方法，包括以下步骤：
第一步：将含有苯酚类和脂肪类化合物的生物提取液移至以去活 化硅藻土为柱填料的吸附柱I，用正己烷洗脱非极性脂肪，然后用二 氯甲烷洗脱苯酚类化合物，收集二氯甲烷洗脱液，将其通入氮气进行 浓缩；
第二步：将浓缩后的二氯甲烷洗脱液中的苯酚类化合物进行硅烷 基衍生化反应，之后移至以活化硅藻土为柱填料的吸附柱II，或是在 柱II上进行硅烷基衍生化反应，硅烷基化的苯酚类化合物用正己烷洗 脱，脂肪被吸附于柱上而完成苯酚类化合物和脂肪类化合物的分离。
分离苯酚类和脂肪类化合物的上述方法中所使用的专用设备，包 括柱I、柱II的两个吸附柱和连接该两个吸附柱的连接器，所述的柱 I为具有上、下开口的管状玻璃容器，其下端开口处设有活塞，在玻 璃容器内由上至下依次充填有无水硫酸钠、去活化的硅藻土、无水硫 酸钠和玻璃棉；所述的柱II为具有上、下开口的管状玻璃容器，其下 端开口处设有活塞，在玻璃容器内由上至下依次充填有无水硫酸钠、 活化的硅藻土、无水硫酸钠和玻璃棉；所述的连接器是由具有通气口 的连接体和连接体下端底座以及连接体与底座之间设有的三通阀构 成，柱I下置于连接体的上端口处，底座置于柱II上。
本发明是利用苯酚类化合物、脂肪类化合物、硅烷基化的苯酚类 化合物与两种活性不同的硅藻土吸附剂和洗脱溶剂之间的相互作用 分离和净化苯酚类化合物。主体是两个吸附柱，由去活化的硅藻土吸 附剂为柱填料的吸附柱I和活化的硅藻土吸附剂为柱填料的吸附柱 II构成。柱I用非极性洗脱溶剂正己烷洗脱低极性的脂肪类化合物， 然后用极性高于正己烷的洗脱溶剂二氯甲烷洗脱苯酚类化合物，中等 极性的脂肪被同时洗脱，强极性的脂肪类被柱I保留。二氯甲烷洗脱 液经硅烷基衍生化后在柱II上再次被正己烷洗脱，硅烷基化的苯酚类 化合物被洗脱下来，而中等极性的脂肪被保留于柱II。两个吸附柱可 由一个连接器相连，实现整个技术的半自动化。本发明具有操作方便、 节约时间、柱填料和溶剂用量少、苯酚类和脂肪类化合物的分离效果 好等优点，适用于生物样品中苯酚类化合物的分析。
附图说明
图1为本发明专用设备的结构示意图。
图2经过吸附柱I的生物样品二氯甲烷洗脱液的液相色谱图。
图3是经过吸附柱I的生物样品后，此样品再经过吸附柱II后的 液相色谱图。
本发明具体实施方式
一种分离苯酚类和脂肪类化合物的专用设备，包括柱I11、柱II 13的两个吸附柱和连接该两个吸附柱的连接器12，所述的柱I为具 有上、下开口的10cm的玻璃注射器1，其下端开口处设有活塞5，在 玻璃注射器内由上至下依次充填有无水硫酸钠2、去活化的硅藻土3、 无水硫酸钠2和玻璃棉4；所述的柱II为具有上、下开口的10cm的 玻璃注射器1，其下端开口处设有活塞5，在玻璃注射器内由上至下 依次充填有无水硫酸钠2、活化的硅藻土10、无水硫酸钠2和玻璃棉 4；所述的连接器12是由具有通气口6的连接体7和连接体下端底座 9以及连接体与底座之间设有的三通阀8构成，连接体7与连接体底 座9是可拆卸的，柱I下置于连接体的上端口处，底座置于柱II上， 所述的通气口为通氮气所用，用于洗脱液的浓缩。
一种分离苯酚类和脂肪类化合物的方法，包括以下步骤：
第一步：将含有苯酚类和脂肪类化合物的生物提取液移至上述专 用的分离设备中的吸附柱柱I 11，用正己烷洗脱非极性脂肪，然后用 二氯甲烷洗脱苯酚类化合物，整个洗脱过程可由活塞5调节，将二 氯甲烷洗脱液收集于连接体7中，从通气口6通入氮气进行浓缩。该 步中主要是柱I以去活化的硅藻土吸附剂3为柱填料，先后以正己烷 和二氯甲烷为洗脱溶剂用于柱I上分离苯酚类化合物和非极性及强 极性的脂肪类化合物；
第二步：将浓缩后的二氯甲烷洗脱液中的苯酚类化合物进行硅烷 基衍生化反应，之后转至吸附柱II 13，或是在柱II上进行硅烷基衍生 化反应，硅烷基化的苯酚类化合物用正己烷洗脱，脂肪被吸附于柱上 而完成苯酚类化合物和脂肪类化合物的分离。该步主要是柱II以活 化的硅藻土吸附剂10为柱填料，以正己烷为洗脱溶剂用于柱II上分 离硅烷基苯酚类化合物和剩余的脂肪类化合物。
对实际生物样品中的苯酚类和脂肪类的分离效果如图2和图3所 示。图2是经过吸附柱I的样品洗脱液的液相色谱图，如图所示洗 脱液中仍然含有许多脂肪类物质。但是如图3所示，此样品经过吸附 柱II后这些脂肪类物质完全和苯酚类物质分离而得到只含有苯酚类 物质的液相色谱图。图3插入图中给出了同样馏分的气质联用总离子 流图。
本发明公开了生物体中苯酚类物质和脂肪类化合物的一种新分 离技术，该技术在环境分析中具有广阔的应用前景。