技术领域
本发明涉及一种对甲氧基肉桂酸甲酯的制备方法。
背景技术
甲氧基肉桂酸甲酯作为医药中间体主要用于化妆品中，作紫外防护吸收剂。经检索目前尚未见到有关对甲氧基肉桂酸甲酯天然存在文献报道，亦未见自生物中提取对甲氧基肉桂酸甲酯的报道。
发明内容
本发明的目的在于充分利用可再生的生物资源制备甲氧基肉桂酸甲酯，提供一种真菌源对甲氧基肉桂酸甲酯的制备方法。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是：炭团菌菌丝体发酵液的制备——炭团菌菌丝体发酵液乙酸乙酯提取物的制备——含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物的分离纯化——对甲氧基肉桂酸甲酯的分离。
(1)炭团菌菌丝体发酵液的制备：
采用改良马铃薯葡萄糖液体培养基，对炭团菌菌丝体进行摇床发酵培养10天-15天，发酵培养条件为：温度25℃-30℃，摇床转数140r/min-160r/min，接种量0.5％-1.5％，装液量40％-50％，马铃薯葡萄糖液体培养基配方为：马铃薯150-250g、葡萄糖17-22g、KH2PO42.5-3.5g、MgSO41-2g、水1000ml，pH5-6，
(2)炭团菌菌丝体发酵液乙酸乙酯提取物的制备：
将培养10天-15天的炭团菌菌丝体发酵液用无菌纱布过滤后，与乙酸乙酯按重量体积比1∶3混合，常温下静止放置5天-10天，萃取后弃下层滤液，将上层有机溶剂以30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到固体样品，
(3)含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物的分离纯化：
采用硅胶柱层析法，采用湿法装柱，柱子直径2cm、长40cm，硅胶为200-300目，洗脱剂为乙酸乙酯，石油醚＝1∶2，装硅胶高度15cm-18cm，采用干法上样，将炭团菌菌丝体发酵液乙酸乙酯提取物固体样品用少量甲醇溶解后，加入少量硅胶，拌匀后水浴风干甲醇，将获得的粉末小心加到柱子的顶层，用玻棒搅拌以除去气泡，保持硅胶表面的平整，控制常压自然流速，收取20-90分钟内的馏分，经30℃真空旋转蒸发获得含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物固体样品，
(4)对甲氧基肉桂酸甲酯的分离：
采用高压液相色谱法对上述含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物进行分离。
本发明的优点是：
本发明的制备对甲氧基肉桂酸甲酯的原材料来源于可再生的生物资源，该发明具有原材料资源经济、可再生、可持续利用。
附图说明
图1是含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物的GC色谱峰；
图2是对甲氧基肉桂酸甲酯的GC色谱图及结构式。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作进一步详细描述。
实施例1、
采用改良马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、KH2PO43g、MgSO41.5g、水1000ml，pH 5-6对炭团菌菌丝体进行摇床发酵培养10天，接种量0.5％，装液量40％，发酵培养条件为：温度25℃，摇床转数140r/min，将培养10天的炭团菌菌丝体发酵液用无菌纱布过滤后，与乙酸乙酯按重量体积比1∶3混合，常温下静止放置5天，萃取后弃下层滤液，将上层有机溶剂以30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到固体样品，采用硅胶柱层析法对上述固体样品进行分离，采用湿法装柱，柱子直径2cm、长40cm，硅胶为200-300目，洗脱剂为乙酸乙酯，石油醚＝1∶2，装硅胶高度15cm，采用干法上样，将固体样品用少量甲醇溶解后，加入少量硅胶，拌匀后水浴风干甲醇，将获得的粉末加到硅胶柱子的顶层，用玻棒搅拌以除去气泡，保持硅胶表面的平整，控制常压自然流速，收取20-90分钟内的馏分，经30℃真空旋转蒸发获得含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物固体样品，采用高压液相色谱法对上述含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物进行分离。
实施例2、
采用改良马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基配方为：马铃薯180g、葡萄糖170g、KH2PO42.5g、MgSO41.3g、水1000ml，pH 5-6对炭团菌菌丝体进行摇床发酵培养12天，接种量1.5％，装液量50％，发酵培养条件为：温度26℃，摇床转数160r/min，将培养12天的炭团菌菌丝体发酵液用无菌纱布过滤后，与乙酸乙酯按重量体积比1∶3混合，常温下静止放置6天，萃取后弃下层滤液，将上层有机溶剂以30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到固体样品，采用硅胶柱层析法对上述固体样品进行分离，采用湿法装柱，柱子直径2cm、长40cm，硅胶为200-300目，洗脱剂为乙酸乙酯，石油醚＝1∶2，装硅胶高度15cm，采用干法上样，将固体样品用少量甲醇溶解后，加入少量硅胶，拌匀后水浴风干甲醇，将获得的粉末加到硅胶柱子的顶层，用玻棒搅拌以除去气泡，保持硅胶表面的平整，控制常压自然流速，收取20-90分钟内的馏分，经30℃真空旋转蒸发获得含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物固体样品，采用高压液相色谱法对上述含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物进行分离。
实施例3、
采用改良马铃薯葡萄糖(PD)液体培养基配方为：马铃薯150g、葡萄糖18g、KH2PO43.1g、MgSO41g、水1000ml，pH 5-6对炭团菌菌丝体进行摇床发酵培养15天，接种量0.7％，装液量40％，发酵培养条件为：温度28℃，摇床转数140r/min，将培养15天的炭团菌菌丝体发酵液用无菌纱布过滤后，与乙酸乙酯按重量体积比1∶3混合，常温下静止放置10天，萃取后弃下层滤液，将上层有机溶剂以30℃真空旋转蒸发除去溶剂得到固体样品，采用硅胶柱层析法对上述固体样品进行分离，采用湿法装柱，柱子直径2cm、长40cm，硅胶为200-300目，洗脱剂为乙酸乙酯，石油醚＝1∶2，装硅胶高度15cm，采用干法上样，将固体样品用少量甲醇溶解后，加入少量硅胶，拌匀后水浴风干甲醇，将获得的粉末加到硅胶柱子的顶层，用玻棒搅拌以除去气泡，保持硅胶表面的平整，控制常压自然流速，收取20-90分钟内的馏分，经30℃真空旋转蒸发获得含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物固体样品，采用高压液相色谱法对上述含对甲氧基肉桂酸甲酯化合物进行分离。