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1、(10)授权公告号 CN 101892160 B (45)授权公告日 2012.10.03 CN 101892160 B *CN101892160B* (21)申请号 201010000055.4 (22)申请日 2010.01.06 CGMCC No.3535 2009.12.23 C12N 1/14(2006.01) C12P 7/64(2006.01) A23L 1/30(2006.01) A23K 1/16(2006.01) A23D 7/00(2006.01) A23D 9/00(2006.01) C11C 3/10(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (73)。
2、专利权人 吉林省希玛生物科技有限公司 地址 136200 吉林省辽源市人民大街 119 号 (72)发明人 杨勇 郗大兴 CN 1648233 A,2005.08.03, 全文 . CN 101575584 A,2009.11.11, 全文 . CN 1916156 A,2007.02.21, 全文 . (54) 发明名称 一种海洋真菌裂殖壶菌 (Schizochytrium) LX0809 及其工业应用 (57) 摘要 本 发 明 提 供 了 一 种 海 洋 真 菌 裂 殖 壶 菌 LX0809, 其具有高产二十二碳六烯酸 (DHA) 的能 力。 本发明所述的裂殖壶菌LX0809分离自辽宁省。
3、 盘锦市大洼县赵圈河乡红海滩里采集的腐土, 已 于 2009 年 12 月 23 日保藏在中国微生物菌种保 藏管理委员会普通微生物中心, 保藏编号为CGMCC No.3535, 所述裂殖壶菌 LX0809 通过补料发酵, 发 酵液的细胞干重可达到 72.5g/L, DHA 的产量达到 15.3g/L。LX0809 菌体细胞及其提取物既可用作 食用油、 乳制品和谷物制品等的食品添加剂, 也可 作为水产和畜牧养殖等的饲料添加剂。菌体细胞 中的饱和甘油三酯, 经催化转酯化反应可制得生 物柴油。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 孙彦珂 权利要求书 1 页 说明书。
4、 7 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一 株 海 洋 真 菌 裂 殖 壶 菌 (Schizochytrium)LX0809, 该 菌 种 保 藏 号 为 CGMCC No.3535。 权 利 要 求 书 CN 101892160 B 2 1/7 页 3 一种海洋真菌裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 及其工 业应用 技术领域 0001 本发明涉及海洋微生物的应用技术, 具体讲是一种海洋真菌裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809及其在食品和饲料添加。
5、剂和生物柴油工业生产中的应用。 其属于 微生物应用技术领域。 背景技术 0002 营养学和医学研究表明, DHA 是一种重要的营养保健品, 可有效增进健康和抵御疾 病侵扰。DHA 是人脑神经细胞膜中主要的脂质成分, 也是大脑、 神经和视觉细胞中重要的脂 肪酸成分, 对人体生理功能的正常发挥及多种疾病的防治有着重要作用, 特别是在婴幼儿 大脑和视觉系统发育过程中占有十分重要的地位。 DHA参与婴儿大脑组织(如脑囊泡, 髓磷 脂和线粒体 ) 发育。世界卫生组织强烈建议在婴儿食品中添加 DHA。 0003 DHA可以从海洋鱼油中提取, 也可以通过海洋微生物发酵获得。 鱼油DHA生产成本 低, 价格便。
6、宜, 但是鱼油中常含有的滴滴涕、 化学杀虫剂、 多氯联苯类物质、 二恶英和六氯苯 等有害物质。 纯种海洋微生物从纯种培养到精炼都需严格消毒, 无菌操作, 并可采用国际认 可的食品安全生产及控制管理技术, 所生产的油脂纯度高、 无污染, 可做到不含或仅含微量 EPA, 而且 DHA 稳定, 不含鱼腥味。 0004 到目前为止, 已有上百个品种海洋微生物的脂肪酸组成中含有 DHA。它们隶属于 硅藻类、 金藻类、 绿藻类、 甲藻类、 隐甲藻类、 蓝藻类和黄藻类。其中研究最多的菌种有三角 褐指藻、 小球藻、 盐藻、 中肋骨条藻、 新月菱形藻、 裂殖壶菌等。其中最有应用价值和发展潜 力的海洋微生物是破囊。
7、壶菌科的 (Thraustochytriaceae) 的裂殖壶菌 (Schizochytrium)。 它具有生产周期短、 培养简单、 细胞内脂肪酸和 DHA 含量高等优势, 被认为是一种具有潜力 的 DHA 的新生资源, 是目前进行工业化培养作为 DHA 来源最理想的物种之一。 裂殖壶菌的 安全性已经得到美国食品和药品部 (FDA) 的认可, 并开发了从医药、 食品以及饲料等一系 列产品。 0005 授权公告号为 CN1648233A 的专利公开了一种以裂殖壶菌 SR21 的菌株为出发菌 株, 通过化学和物理诱变相结合而得到的一株突变株 OUC88, 通过优化菌株的培养条件下, 培养后期补加碳。
8、源, 发酵液的细胞干重达到 25g/l, DHA 含量达到 8.27g/l。无论是发酵液 的细胞干重, 还是 DHA 含量菌株 OUC88 均显著低于本发明所述裂殖壶菌 (Schizochytrium) LX0809 菌株。 0006 授权公告号为 CN1916156A 的专利公开了一种以裂殖壶菌 WZU4771 菌株及其在制 备 DHA 粉末和 DHA 油脂中的应用。该菌株在优化的培养条件下培养 5 天, 发酵液的细胞干 重达到42.15g/l, DHA含量达到14.1g/l。 发酵液的细胞干重明显低于本发明所述裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 菌株, DHA 含量也略。
9、低于本发明所述裂殖壶菌 (Schizochytrium) LX0809 菌株, 发酵培养时间也长于本发明, 不利于规模化生产。 说 明 书 CN 101892160 B 3 2/7 页 4 发明内容 0007 有鉴于此, 本发明的目的是提供一种生产周期更短、 菌体细胞生物量增加更快、 易 于规模化培养并高产二十二碳六烯酸的裂殖壶菌菌株。在含有 30 50g/L 葡萄糖为碳源, 1 10g/L 的玉米浆为氮源, 包括钠盐、 钾盐、 镁盐、 锰盐、 硼化物、 溴化物及其混合物的无机 盐, pH 为 4.5 8.0 的发酵培养基中 20 30培养 80 100 小时, 得到含有长链多不饱 和脂肪酸的。
10、油脂, 包括二十二碳六烯酸 (DHA) 和二十二碳五烯酸 (DPA)。 0008 本发明所述的裂殖壶菌 (Schizochytrium) 是以从辽宁省盘锦市大洼县赵圈 河乡红海滩里 ( 东经 122 01, 北纬 41 11 ) 采集的腐土上分离的菌株裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809, 该菌株已于 2009 年 12 月 23 日保藏在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号), 保藏编号为CGMCC No.3535, 其具体的筛选步骤如下 : 0009 1、 初筛 : 取盘锦市沿海滩涂里的腐土接种在所述的初筛培养基 ( 葡萄糖 10g。
11、/l, 酵 母粉 2g/l, 蛋白胨 1g/l, 青霉素 0.5g/l, 链霉素 0.5g/l, 琼脂 15g/l, 用盘锦市海域海水稀 释 10 倍后配制 ) 平板上, 30培养 3 天。挑取培养物转接到新的平板上进行培养, 划线分 离得到纯培养物。 0010 2、 复筛 : 将纯培养物接种到所述的复筛培养基 ( 葡萄糖 40g/l, 酵母粉 5g/l, 蛋白 胨3g/l, 用盘锦市海域海水稀释10倍后配制)中, 在摇床上培养。 离心分离得到培养物, 真 空干燥至恒重, 称量细胞干重。 索氏提取法检测细胞干重中的脂肪含量, 气相色谱法检测脂 肪中的DHA含量, 以发酵液细胞干重和DHA产率为。
12、指标, 筛选得到高产菌株, 命名为LX0809。 0011 本发明所述的 LX0809 在在扫描和透视电镜下观察所述的高产 DHA 的菌株的外部 形态和超微结构, 其特征为 : 营养菌体为椭圆球形, 由不连续的细胞壁包裹着, 单核。 细胞壁 由几层紧压在一起的致密鳞片构成, 在细胞壁不连续处可分辨鳞片, 鳞片厚约 2 3 纳米。 形成放射状的、 根状的外质网依附在底物上, 外质网产生于外质网形成体, 从细胞壁不连续 出长出。行无性繁殖, 由营养菌体转化为游动孢子囊, 其内有许多游动孢子。在游动孢子生 成过程中, 细胞质分裂紧接着每次细胞核分裂进行, 并且形成四倍体细胞。 游动孢子侧生着 不等长。
13、的双鞭毛, 前向鞭毛两边排列茸鞭茸毛, 后向鞭毛较短。 0012 存在由鳞片构成的细胞壁、 外质网形成体和外质网是现行的鉴定破囊壶菌科的标 准。破囊壶菌的游动孢子形成机制有两种 : (1) 分裂细胞核分裂完全完成后进行细胞质分 裂的阶段性和 (2) 细胞质分裂紧接着每次细胞核分裂进行的连续性分裂。连续性分裂可以 形成四倍体细胞。 以连续性分裂形成游动孢子, 产生四倍体细胞, 是裂殖壶菌的特征。 因此, 所述的高产 DHA 的诱变菌株鉴定为裂殖壶菌, 命名为裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809。 0013 所述的裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 在不同时间。
14、内的培养基中发酵所得细 胞干重和 DHA 产量如图 1 所示。发酵液离心后真空干燥得到菌体 干粉, 然后菌体干粉经过 正己烷萃取, 减压蒸馏的到含有 DHA 毛油。毛油经过脱胶、 脱酸、 脱色、 脱臭、 脱蜡等工艺过 程, 加入抗氧化剂, 混匀得到应用于食品的 DHA 油脂。经过气相色谱检测, 油脂含量为细胞 干重重量百分含量的 40 55, 其中饱和脂肪酸占油脂重量百分含量的 40 45, 不饱 和脂肪酸占油脂重量百分含量的 45 55, 其中 DHA 占油脂重量百分含量的 35 40, DPA 占油脂重量百分含量的 10 12。可用作儿童和妇女的多不饱和脂肪酸补充的保健 品, 也可作为食用。
15、油、 乳制品和谷物制品等的食品添加剂, 也可作为水产和畜牧养殖等的饲 说 明 书 CN 101892160 B 4 3/7 页 5 料添加剂。以棕榈酸酯为主的甘油三酯经过催化转酯化反应制得棕榈酸甲酯, 可以作为生 物柴油使用。 0014 本发明的优点在于 : 所述的裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 能够以普通 碳源 ( 葡萄糖 ) 和普通氮源 ( 玉米浆 ) 进行细胞生长和 DHA 积累 ; 所述的裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 通过培养基和培养条件优化, 经过 100 小时发酵培养可达到细胞 干重为72.5g/l, DHA含量达到15.3g/l,。
16、 高于已见报道的菌株 ; 裂殖壶菌(Schizochytrium) 的安全性已经得到美国食品和药品部(Food and Drug Administration)的认可, 可开发从 医药、 食品 ( 尤其是孕妇、 哺乳期妇女和儿童食品 ) 以及饲料等一系列产品 ; 所述裂殖壶菌 LX0809 的氨基酸种类平衡, 并富含甲硫氨酸和赖氨酸等必需氨基酸, 适合作为食品和饲料 的添加剂 ; 所述裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的长链多不饱和脂肪酸谱简单, 除 DHA 外, 只含有少量的 DPA, 利于 DHA 分离和纯化。 附图说明 0015 图1为裂殖壶菌(Schizochyt。
17、rium)LX0809(CGMCC3535)的在不同发酵时间下的细 胞干重和 DHA 产量。 具体实施方式 0016 实施实例 1. 裂殖壶菌的筛选 0017 取辽宁省盘锦市大洼县赵圈河乡红海滩里采集的腐土, 接种在所述的初 筛培养 基平板上, 在30下富集培养5天。 挑取培养物转接到新的平板上进行培养, 直到得到纯培 养物为止。将纯培养物接种到装有 50ml 所述的复筛培养基的 250ml 摇瓶中, 在 200rpm 的 摇床上培养 3 天, 培养温度为 30。培养液经过离心 (8000rpm, 5 分钟 )、 水洗后再离心, 然 后真空干燥 ( 温度为 60 80, 真空度为 80 干帕 。
18、)3 小时, 称量细胞干重。采用索氏提取 法萃取细胞干粉中的油脂, 然后用气相色谱法检测油脂中的脂肪酸组成, 以 DHA 的产率作 为指标, 筛选出高产DHA的裂殖壶菌菌株, 命名为LX0809。 采用离子色谱分析法得到所得裂 殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 菌株的氨基酸谱图见表 1。 0018 表 1. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的氨基酸谱 0019 氨基酸类型 占总氨基酸的重量百分比 ( ) 天门冬氨酸 8.95 苏氨酸 4.80 丝氨酸 5.11 谷氨酸 15.97 脯氨酸 4.47 甘氨酸 4.79 丙氨酸 7.99 缬氨酸 7.35。
19、 甲硫氨酸 2.24 异亮氨酸 4.15 亮氨酸 7.67 酪氨酸 3.83 苯丙氨酸 4.15 组氨酸 1.92 说 明 书 CN 101892160 B 5 4/7 页 6 赖氨酸 6.07 精氨酸 7.03 半胱氨酸 1.92 色氨酸 1.60 0020 分析结果显示本发明所述的裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的氨基酸种类及 各种氨基酸的数量与营养需要量相符, 并且富含甲硫氨酸(2.24) 和赖氨酸(6.07)等 必需氨基酸。从氨基酸角度来看, 裂殖壶菌 LX0809 也是作为食品膳食补充剂和饲料添加剂 的理想来源。 0021 实施实例 2. 裂殖壶菌 (Schi。
20、zochytrium)LX0809 的发酵生产 0022 将在斜面生长 45 小时的裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 菌种接种至 500ml 摇 瓶中。种子液和发酵培养基包括 50g/L 葡萄糖、 10g/L 玉米浆、 5g/L 氯化钠、 2g/L 氯化钾、 0.5g/L硫酸镁、 0.05g/L氯化锰、 0.01g/L硼酸、 0.01g/L溴化钾。 在30的摇床中以250rpm 的转速培养至菌液的 OD600 达到 1.0 时完成第一代活化, 然后取 10ml 菌液接种至上述新鲜 培养基中, 连续传三代 ( 均以至菌液的 OD600 达到 1.0 时作为一代活化完成 ),。
21、 得到具有较 高活力的种子液 ; 再以1的接种量将种子液接种至5L的发酵罐, 搅拌转速300rpm, 通气量 3.0 升 / 分钟, 通过控制通气量和搅拌转速将发酵罐中溶解氧饱和度控制在 40 ( 溶解氧 饱和度 ( ) 溶解氧实测含量 / 实测条件下溶解氧的饱和含量 ), 通过自动添加 2.5M 的 硫酸或氢氧化钠维持 pH 在 7.5。采用 SBA-40C 生物传感分析仪 ( 山东省科学院生物研究 所 ) 测定发酵液中的葡萄糖含量, 补料维持发酵液中的碳源和氮源浓度不变, 90 小时停止 发酵。 0023 发酵液经离心 ( 贝克曼 Allegra 64R 台式高速冷冻离心机, 8,000r。
22、pm, 5 分钟 ) 弃上清, 向离心管中加入与菌体相同体积的蒸馏水洗涤菌体细胞, 然后再离心 ( 贝克曼 Allegra 64R 台式高速冷冻离心机, 10,000rpm, 5 分钟 ) 弃上清。然后湿菌体经真空干燥 ( 温度为 60 80, 真空度为 80 千帕 )3 小时, 称量的干细胞 72.3g/L。用正己烷萃取得 到菌体油脂 36ml/L。取 1.0g 萃取的油脂置于 200ml 园底烧瓶中, 加入浓度为 0.8M 的氢氧 化钾 - 甲醇溶液 70.5ml, 65水浴回流皂化 15 分钟 ; 冷却后加入 70ml 45 (w/v) 的三氟 化硼 - 乙醚, 于 65水浴回流 10 。
23、分钟甲酯化。冷却后加入 60ml 正己烷振荡 2 分钟, 再加 20ml 饱和氯化钠溶液, 振荡, 静置, 收集上清液, 减压蒸馏去除正己烷后即得到脂肪酸甲酯。 气相色谱检测结果 ( 表 2) 显示, 所得的裂殖壶菌 LX0809 的脂肪酸组成入表 2 所示。其中 棕榈酸甘油三酯的含量最高, 占油脂重量百分含量的40.4; DHA(C22:6n3)含量较高, 占油 脂重量百分含量的 38.0, DPA(C22:5n6) 含量次之, 占油脂重量百分含量的 10.5, 其它 油脂总计仅占 12, 易于提取纯化。 0024 表 2. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的脂肪酸谱。
24、 0025 脂肪酸成分 占脂肪酸重量百分比 ( ) C 14:0 2.91 C 15:0 1.64 C 16:0 40.4 C 17:0 0.71 C 18:0 1.61 C 18:1n9 0.78 C 18:2n6 0.28 说 明 书 CN 101892160 B 6 5/7 页 7 C 20:4n3 0.48 C 20:5n3 0.90 C22:5n6 10.0 C22:5n3 0.60 C22:6n3 38.0 其他 2.41 0026 实施实例 3. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的发酵生产 0027 将在斜面生长 45 小时的裂殖壶菌 (Schizochy。
25、trium)LX0809 菌种按照实施例 2 的 方法活化, 然后 5的接种量接种至 5L 发酵罐中。发酵培养基为 : 30g/L 葡萄糖、 1g/L 玉米 浆、 5g/L 氯化钠、 2g/L 氯化钾、 0.5g/L 硫酸镁、 0.05g/L 氯化锰、 0.01g/L 硼酸、 0.01g/L 溴 化钾。按照实施例 2 条件发酵 80 小时停止发酵, 测得发酵液细胞干重为 67.7g/L。用正 己烷萃取得到菌体油脂 32ml/L。取 1.0g 萃取的油脂置于 200ml 园底烧瓶中, 加入浓度为 0.8M 的氢氧化钾 - 甲醇溶液 70.5ml, 65水浴回流皂化 15 分钟 ; 冷却后加入 7。
26、0ml 45 (w/v) 的三氟化硼 - 乙醚, 于 65水浴回流 10 分钟甲酯化。冷却后加入 60ml 正己烷振荡 2 分钟, 再加 20ml 饱和氯化钠溶液, 振荡, 静置, 收集上清液, 减压蒸馏去除正己烷后即得 到脂肪酸甲酯。菌体细胞油脂的脂肪酸谱如表 3 所示。其中棕榈酸甘油三酯的含量最高, 占油脂重量百分含量的 42.5 ; DHA(C22:6n3) 含量较高, 占油脂重量百分含量的 36.0, DPA(C22:5n6) 含量次之, 占油脂重量百分含量的 10.5, 其它油脂总计仅占 11, 易于提 取纯化和工业化生产。 0028 表 3. 裂殖壶菌 (Schizochytriu。
27、m)LX0809 的脂肪酸谱 0029 脂肪酸成分 占脂肪酸重量百分比 ( ) C 14:0 2.21 C 15:0 1.34 C 16:0 42.5 C 17:0 0.71 C 18:0 1.61 C 18:1n9 0.78 C 18:2n6 0.28 C 20:4n3 0.16 C 20:5n3 0.90 C 22:5n6 10.5 C 22:5n3 0.60 C 22:6n3 36.0 其他 2.41 0030 实施实例 4. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的发酵生产 0031 将在斜面生长 45 小时的裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 菌。
28、种按照实施例 2 的 方法活化, 然后 5的接种量接种至 5L 发酵罐中。发酵培养基为 : 40g/L 葡萄糖、 5g/L 玉米 浆、 5g/L 氯化钠、 2g/L 氯化钾、 0.5g/L 硫酸镁、 0.05g/L 氯化锰、 0.01g/L 硼酸、 0.01g/L 溴化 钾。按照实施例 2 条件发酵 90 小时停止发酵, 测得发酵液细胞干重为 71.6g/L。用正己烷 萃取得到菌体油脂 105ml。取 1.0g 萃取的油脂置于 200ml 园底烧瓶中, 加入浓度为 0.8M 的 氢氧化钾 - 甲醇溶液 70.5ml, 65水浴回流皂化 15 分钟 ; 冷却后加入 70ml 45 (w/v) 的。
29、 三氟化硼 - 乙醚, 于 65水浴回流 10 分钟甲酯化。冷却后加入 60ml 正己烷振荡 2 分钟, 再加 20ml 饱和氯化钠溶液, 振荡, 静置, 收集上清液, 减压蒸馏去除正己烷后即得到脂肪酸 说 明 书 CN 101892160 B 7 6/7 页 8 甲酯。菌体细胞油脂的脂肪酸谱如表 4 所示。 0032 表 4. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的脂肪酸谱 0033 脂肪酸成分 占脂肪酸重量百分比 ( ) C 14:0 2.11 C 15:0 1.64 C 16:0 41.5 C 17:0 0.71 C 18:0 1.61 C 18:1n9 0.78 C。
30、 18:2n6 0.28 C 20:4n3 0.48 C 20:5n3 0.90 C 22:5n6 10.0 C 22:5n3 0.60 C 22:6n3 37.0 其他 2.41 0034 实施实例 5. 裂殖壶菌菌体细胞油脂的提取和精炼 0035 取实施实例2所述裂殖壶菌(Schizochytrium)LX0809的干燥细胞200g, 用滤纸包 裹后置于索氏提取器, 用 500ml 正己烷浸出 24 小时, 然后在减压蒸馏分离除去正己烷得到 96ml 毛油。毛油在搅拌下加入 1ml 浓度为 95的磷酸, 再加入 300ml 热水混合均匀后。静 置分层后取出上层毛油, 用热水反复洗涤至 pH。
31、 值中性。然后在强烈的搅拌下, 加入 1ml 浓 度为 8的氢氧化钠溶液。加热至 90, 静置沉降, 除去皂脚。再用 50ml 的 90去离子水 洗涤, 然后真空干燥, 干燥温度为 60 80, 真空度为 80.0 千帕。向干燥油脂中加入 2.5g 活性白土吸附脱色, 脱色温度为 90, 脱色时间为 20 分钟。过滤除去活性白土。然后对油 脂采用水蒸气气提脱臭, 脱臭温度为180, 脱臭时间为2小时。 脱臭后油脂在慢速搅拌下, 冷却至46左右, 约24小时, 使固 体脂肪生成较大结晶, 沉淀析出。 过滤分离得到39ml DHA 含量 80以上液体油和 43g 固体脂肪。向液体油中加入抗氧化剂,。
32、 得到富含 DHA 的成 品油脂。 0036 实施实例 6. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 的规模化生产 0037 按照实施实例 4 所述的方法, 得到具有较高活力的种子液 ; 然后将裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 菌液以 5的接种量将种子液接种至 20 吨发酵罐中, 搅拌转速 300rpm, 通气量 1.0vvm, 通过控制通气量和搅拌转速将发酵罐中溶解氧饱和度控制在 5 55 ( 溶解氧饱和度 ( ) 溶解氧实测含量 / 实测条件下溶解氧的饱和含量 ), 通过自动 添加 2.5M 的硫酸或氢氧化钠维持 pH 在 5.5 7.5 之间。采用 。
33、SBA-40C 生物传感分析仪 测定发酵液中的葡萄糖含量, 通过补料维持发酵液中葡萄糖浓度为 40g/L, 100 小时停止发 酵。用碟片离心机分离出菌体细胞, 然后在气流干燥机中干燥得到 1604kg 菌体细胞 ( 含水 量低于 8 ), 然后干燥细胞在萃取罐中用正己烷萃取, 萃取温度为 40 50, 板框过滤去 除菌体碎片, 然后在减压蒸馏分离正己烷得到 748kg 毛油。取 374kg 毛油按照实施实例 4 所述的方法对毛油进行脱胶、 脱酸、 脱色、 脱臭和冬化处理, 得到 DHA 含量 80以上液体油 156kg 和 171kg 固体脂肪。将固体脂肪 171kg, 置于酯交换反应器, 。
34、加入 4275kg 甲醇和 17kg 的氢氧化钾, 在 65下反应 1 小时, 沉降分层, 取上层脂肪酸甲酯经分子蒸馏得到 157kg 生 物柴油, 产率达到92。 所得生物柴油以棕榈酸甲酯为主符合2#矿物柴油和相关国家制定 说 明 书 CN 101892160 B 8 7/7 页 9 的生物柴油的标准, 可以作为矿物柴油的替代燃料使用。 0038 实施实例 7. 裂殖壶菌 (Schizochytrium)LX0809 在食品和饲料中的应用 0039 将上述实施实例 6 方法所得的发酵液经过 121杀菌 20 分钟, 经过碟式离心机脱 水后送入旋转闪蒸干燥机中干燥得到含水量为 5的菌体干粉, 可直接作为食品和饲料添 加剂。将菌体干粉用正己烷萃取后得到毛油, 减压蒸馏除去正己烷, 然后将毛油通过脱胶、 脱酸、 脱色、 脱臭处理得到含 DHA 重量百分含量为 65, 可直接食用或与其它食用油一起食 用。 说 明 书 CN 101892160 B 9 1/1 页 10 图 1 说 明 书 附 图 CN 101892160 B 10 。