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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610728726.6 (22)申请日 2016.08.25 (71)申请人 桂林益天成生物科技有限公司 地址 541004 广西壮族自治区桂林市七星 区空明西路新建区五号小区创业大厦 B座B303号房 (72)发明人 谢冬养黄健军陆美珍叶出良 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 周兆阳 (51)Int.Cl. C07J 63/00(2006.01) (54)发明名称 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法 (57)摘要 本发明公开了一种。
2、从油橄榄叶中提取山楂 酸的方法， 包括以下步骤： 1)将油橄榄叶用体积 浓度为7090的乙醇溶液提取， 将提取液过 滤， 取滤液减压回收乙醇， 得到粗提物； 2)将粗提 物加入体积浓度为5065乙醇溶液重新溶解， 得到混合溶液； 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树 脂柱， 先用水洗脱至无色， 然后加入4050、 0.10.15mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 收集 碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至35， 过滤， 取滤渣干 燥， 即得。 本发明提取的山楂酸纯度高， 收率大。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106349324 A 2017.01.25 CN 106349324 A 1.从油橄榄叶。
3、中提取山楂酸的方法， 其特征在于： 包括以下步骤： 1)将油橄榄叶粉碎， 用体积浓度为7090的乙醇溶液提取， 将提取液过滤， 取滤液减 压回收乙醇， 得到粗提物； 2)将粗提物加入体积浓度为5065乙醇溶液重新溶解， 得到混合溶液； 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树脂柱， 先用水洗脱至无色， 然后加入4050、 0.1 0.15mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 收集碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至35， 过滤， 取滤渣干 燥， 即得。 2.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取山楂酸的方法， 其特征在于： 步骤1)中， 油 橄榄叶与乙醇溶液的料液比为1g： 1020ml。 3.根据权利要求1所。
4、述的从油橄榄叶中提取山楂酸的方法， 其特征在于： 步骤1)中， 所 述提取次数13次， 每次提取时间为13h。 4.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取山楂酸的方法， 其特征在于： 步骤2)中， 加 入乙醇溶液至粗提物浓度为0.060.10g/ml。 5.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取山楂酸的方法， 其特征在于： 步骤3)中， 碳 酸氢钠溶液的洗脱速度为11.5BV/h， 其用量为11.5BV。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106349324 A 2 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法 技术领域 0001 本发明属于生物提取技术领域， 具体涉及一种从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方 法。。
5、 背景技术 0002 油橄榄(Olea europare L.)是世界著名的木本油料树种， 有4000多年的栽培历 史。 油橄榄叶的煎剂或浸剂在地中海国家常作为糖尿病的民间用药， 有一定的疗效。 油橄榄 叶提取物在美洲和欧洲用作膳食补充剂以增强免疫功能。 现代资料表明， 油橄榄叶中含有 黄酮类、 三萜类、 糖类、 列环烯醚萜类等有效成分。 三萜类化合物主要是由6个异戊二烯结构 单元构成， 大部分为含30个碳原子的萜类化合物。 油橄榄叶中三萜类成分主要包括齐墩果 酸、 山楂酸和熊果酸， 而这三种物质结构相似， 通常采用柱色谱技术将其进行分离， 但反复 硅胶柱色谱分离和重结晶导致最终得到的样品量很。
6、少。 又由于柱色谱技术普遍存在处理周 期长， 连续操作性不强， 不易作为分离介质用于生物活性物质的工业生产进程。 发明内容 0003 本发明解决的技术问题是提供一种从油橄榄叶中提取山楂酸的方法， 该方法简 单， 周期短， 得到的山楂酸纯度高， 收率大。 0004 本发明提供的技术方案是从油橄榄叶中提取山楂酸的方法， 包括以下步骤： 0005 1)将油橄榄叶粉碎， 用体积浓度为7090的乙醇溶液提取， 将提取液过滤， 取滤 液减压回收乙醇， 得到粗提物； 0006 2)将粗提物加入体积浓度为5065乙醇溶液重新溶解， 得到混合溶液； 0007 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树脂柱， 先用水洗脱。
7、至无色， 然后加入4050、 0.10.15mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 收集碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至35， 过滤， 取 滤渣干燥， 即得。 0008 在步骤1)中， 采用体积浓度为7090的乙醇溶液提取油橄榄叶， 可充分提取油 橄榄叶中的齐墩果酸、 山楂酸以及熊果酸。 油橄榄叶与乙醇溶液的料液比为1g： 1020ml。 所述提取为加热回流提取， 提取次数为13次， 每次提取时间为13h。 0009 步骤2)中， 采用体积浓度为5065的乙醇溶液溶解粗提物， 可去除粗提物中极 性较小的杂质， 起到初步纯化的效果。 加入乙醇溶液至粗提物浓度为0.060.10g/ml， 此时 上柱的吸附。
8、效果最佳。 0010 步骤3)中， AB-8型号的大孔树脂为弱极性， 平均孔径为1314nm， 比表面积为480 520m2/g。 由于齐墩果酸、 山楂酸、 熊果酸均为弱极性物质， 且具有一定的疏水性， 生成氢 键的能力较弱， 因而易被非极性及弱极性树脂所吸附。 其次， 大孔吸附树脂吸附物质时， 被 吸附组分是通过树脂的孔径扩散到树脂孔内表面而被吸附， 当树脂孔径小于吸附的有效成 分分子时， 有效成分分子不能进入树脂内部， 只能吸附在树脂外表面， 当树脂孔径大于有效 成分分子时， 有效成分既能吸附在树脂外表面也可吸附在内表面， 对山楂酸、 齐墩果酸以及 说明书 1/3 页 3 CN 10634。
9、9324 A 3 熊果酸来说， 其分子量分别为472、 456和456， 因此采用AB-8大孔树脂的吸附效果较好。 树脂 柱的径高比为1:36为宜， 以1:4最佳。 0011 齐墩果酸、 山楂酸和熊果酸结构极为相似， 其中熊果酸和齐墩果酸更是同分异构 体， 普通的柱色谱很难将其分离开来， 但是本发明采用4050、 0.10.15mol/L的碳酸氢 钠溶液可以与树脂中极性较大的山楂酸反应生成可溶性钠盐， 进而洗脱下来， 而极性偏小 的齐墩果酸和熊果酸的羧基和水分子的极化能力较差， 不能电离出H+， 无法与碳酸氢钠进 行反应生成钠盐， 则留在树脂柱中。 0012 本发明的方法简单、 周期短， 提取。
10、的山楂酸纯度高， 收率大。 具体实施方式 0013 以下具体实施例对本发明作进一步阐述， 但不作为对本发明的限定。 0014 实施例1 0015 1)将油橄榄叶粉碎至100目， 与体积浓度为70的乙醇溶液按料液比为1g： 10ml的 比例混合， 加热回流提取3h， 将提取液过滤， 取滤液减压回收乙醇， 得到粗提物； 0016 2)将粗提物加入体积浓度为50乙醇溶液至粗提物浓度为0.06g/ml， 搅匀， 得到 混合溶液； 0017 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树脂柱， 树脂柱径高比为1:3， 先用水洗脱至无色， 然后加入40、 0.1mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 碳酸氢钠溶液的洗脱速。
11、度为1BV/h， 其 用量为1BV， 收集碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至3， 过滤， 取滤渣干燥， 即得。 根据高效液相色谱 法进行测定， 其纯度为99.1， 收率为95.3。 0018 实施例2 0019 1)将油橄榄叶粉碎至180目， 与体积浓度为90的乙醇溶液按料液比为1g： 20ml的 比例混合， 加热回流提取3次， 每次提取时间为3h， 将提取液过滤， 取滤液减压回收乙醇， 得 到粗提物； 0020 2)将粗提物加入体积浓度为65乙醇溶液至粗提物浓度为0.10g/ml， 搅匀， 得到 混合溶液； 0021 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树脂柱， 树脂柱径高比为1:6， 先用水洗脱至无。
12、色， 然后加入50、 0.15mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 碳酸氢钠溶液的洗脱速度为1.5BV/h， 其用量为1.5BV， 收集碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至5， 过滤， 取滤渣干燥， 即得。 根据高效液相 色谱法进行测定， 其纯度为99.0， 收率为95.1。 0022 实施例3 0023 1)将油橄榄叶粉碎至200目， 与体积浓度为90的乙醇溶液按料液比为1g： 20ml的 比例混合， 加热回流提取2次， 每次提取时间为2h， 将提取液过滤， 取滤液减压回收乙醇， 得 到粗提物； 0024 2)将粗提物加入体积浓度为55乙醇溶液至粗提物浓度为0.08g/ml， 搅匀， 得到 混合溶液；。
13、 0025 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树脂柱， 树脂柱径高比为1:4， 先用水洗脱至无色， 然后加入45、 0.12mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 碳酸氢钠溶液的洗脱速度为1.2BV/h， 其用量为1.2BV， 收集碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至4， 过滤， 取滤渣干燥， 即得。 根据高效液相 说明书 2/3 页 4 CN 106349324 A 4 色谱法进行测定， 其纯度为99.5， 收率为96.8。 0026 实施例4 0027 1)将油橄榄叶粉碎至150目， 与体积浓度为70的乙醇溶液按料液比为1g： 20ml的 比例混合， 加热回流提取3次， 每次提取时间为1h， 将提取液过滤， 取滤液减压回收乙醇， 得 到粗提物； 0028 2)将粗提物加入体积浓度为65乙醇溶液至粗提物浓度为0.06g/ml， 搅匀， 得到 混合溶液； 0029 3)将混合溶液上AB-8大孔吸附树脂柱， 树脂柱径高比为1:3， 先用水洗脱至无色， 然后加入50、 0.1mol/L的碳酸氢钠溶液进行洗脱， 碳酸氢钠溶液的洗脱速度为1.5BV/h， 其用量为1BV， 收集碳酸氢钠洗脱液， 调节pH至5， 过滤， 取滤渣干燥， 即得。 根据高效液相色 谱法进行测定， 其纯度为99.0， 收率为95.4。 说明书 3/3 页 5 CN 106349324 A 5 。