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一种（2E6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物及其制备方法与应用.pdf

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文档编号：8920054

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1、(10)授权公告号 CN 103044227 B (45)授权公告日 2015.02.04 CN 103044227 B (21)申请号 201310032355.4 (22)申请日 2013.01.29 C07C 49/697(2006.01) C07C 45/74(2006.01) A61K 31/122(2006.01) A61P 3/10(2006.01) (73)专利权人牡丹江医学院地址 157011 黑龙江省牡丹江市爱民区通乡街 3 号 (72)发明人初彦辉葛仁山袁晓环赵冰海李洪志刘洁婷马洪闯尹昌浩付小兵刘海峰 (74)专利代理机构北京鼎佳达知识产权代理。

2、事务所 ( 普通合伙 ) 11348 代理人侯蔚寰 (54) 发明名称一种（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物及其制备方法与应用 (57) 摘要本发明提供了一种（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物，包括具有通式所示结构的化合物及其药学上可接受的盐，该类化合物具有显著的药理活性。此外，本发明进一步提供了该类化合物的制备方法及作为 1 型 11beta- 羟基类固醇脱氢酶（11beta-hydroxysteroid dehydrogenase type I， 11b-HSD1）抑制剂在预防和治疗人类糖尿病中的应用。 (51)Int.C。

3、l. 审查员罗小亮权利要求书 1 页说明书 9 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书1页说明书9页 (10)授权公告号 CN 103044227 B CN 103044227 B 1/1 页 2 1. 一种 (2E， 6E)-2,6- 双亚苄基环己酮化合物，其特征在于：结构式如下： 2. 权利要求 1 所述 (2E， 6E)-2,6- 双亚苄基环己酮化合物的制备方法，其特征在于，将 0.5g2- 溴 -6- 氟苯甲醛和环己酮溶于 2ml 乙醇中，醛和酮的摩尔比 2.2 ： 1，常温搅拌，注射器滴加2ml， 5的氢氧化钾水溶液， 50。

4、下反应0.5h至1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物 CYH06。 3. 权利要求 1 所述 (2E， 6E)-2,6- 双亚苄基环己酮化合物在制备预防及治疗人类糖尿病药物中的应用。 4. 含有权利要求 1 所述 (2E， 6E)-2,6- 双亚苄基环己酮化合物的药物组合物。权利要求书 CN 103044227 B 2 1/9 页 3 一种（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物及其制备方法与应用技术领域 0001 本发明涉及一种新化合物，具体地说，。

5、涉及一种（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物及其制备方法与应用。背景技术 0002 糖尿病（Diabetes mellitus， DM)是一种世界性疾病，根据WHO报道， 2012年12月统计，目前全世界有 3.46 亿人患有糖尿病。如果没有任何干预这个数据预计到 2030 年将翻一番，其中80%发生在低中收入国家。 DM已成为世界第三大疾病，其发病率和对人类健康的危险性，仅次于癌症和心脑血管病。在我国，目前大约有 4000 万名糖尿病患者，居全球第二，其中 2 型 DM(T2DM) 患者占全部 DM 的 90% 95%。目前， 1 型糖尿病治疗。

6、研究的方向是开发给药方便的胰岛素制剂及胰岛素代用品；而2型糖尿病可用化学药物促使细胞分泌更多胰岛素，或改善靶组织对胰岛素的敏感性进行治疗，研发新作用机制或新结构类型的高效低毒的抗糖尿病药物已成为国际上新药研发的热点。 0003 糖皮质激素是胰岛素作用的拮抗剂，它削弱依赖胰岛素的葡萄糖摄取和增加脂类分解，提高肝脏糖异生和通过蛋白水解作用增加基质（Andrew McMaster 等 ,Nature Reviews Endocrinology,2008,4,91），并且直接抑制胰岛细胞分泌胰岛素（PospsilovY 等 ,Vnitr Lek,2007,53,1,18。

7、）。胰岛素抑制肝糖异生，而糖皮质激素增加糖异生，直接或间接激活参与此过程的主要基因或激素，如：胰高血糖素、肝内磷酸烯醇丙酮羧化酶的基因表达 (PEPCK)， PEPCK 是糖异生的限速酶，它被糖皮质激素反应元件调控，它还会对 cAMP r 调控元件绑定蛋白 (CREB) 作用（Gavin P.,Molecular and Cellular Endocrinology,2009,300,2）。糖皮质激素和 CREB 协同作用诱导过氧化酶体增值激活受体 - 共活化剂 1(PGC-1)，它是肝糖异生主要的激活剂 (Yoon JC 等 ,Nature,2001,413,。

8、131)。另外，糖皮质激素通过抑制转运蛋白 4 的翻译，对抗胰岛素反应包括抑制胰岛素信号传递和抑制胰岛素刺激葡萄糖摄取（NicholasMichael Morton,Molecular and cellular endocrinology,2010,316,154）。所以糖皮质激素水平的高低直接影响胰岛素的作用。 0004 糖皮质激素是在下丘脑 - 垂体 - 肾上腺 - 轴线（HPA）控制下，由肾上腺分泌到血液中。然而在 HPA 决定血液糖皮质激素水平的同时，最近突出的研究表明细胞内 11beta 羟基类固醇脱氢酶 11b-HSDs）调节糖皮质激素水平。因此尽管在一些。

9、细胞中有正常的糖皮质激素水平，但是有时会使它处于非活性状态，有时由非活性的转化为活性状态，这些都是由 11b-HSD来催化， 11b-HSD有两种异构体， 11b-HSD1能活化惰性的前体（强的松或11-脱氢皮质酮）变为活化的糖皮质激素（皮质醇或皮质酮），它主要在肝脏、脂肪组织、脑、骨骼肌、平滑肌细胞中具有还原性 (T.M.Stulnig1,Diabetologia,2004,47,1)。 0005 在日常变化过程中血浆活性皮质醇浓度变化较大 (1100nmol/L)。与此相反，非活性可的松没有大的日常变化，在 50-100nmol/L 波动，与皮质醇比较。

10、有较高的自由的血浆说明书 CN 103044227 B 3 2/9 页 4 浓度（Stewart PM 等 ,Vitam Horm,1999,57,249）。因此，血浆可的松可以当成是非活性的糖皮质激素的贮存池能够不断的提供 11b-HSD1 还原性以维持局部活性糖皮质激素浓度，在新陈代谢活跃组织中糖皮质激素与胰岛素功能对抗。 0006 国外学者用转基因小鼠研究得出数据显示 11b-HSD1-/- 小鼠细胞内糖皮质激素被损伤，它不再与胰岛素抵抗 (Erika Harno 等 ,Trends in Endocrinology & Metabolism,。

11、2010,21,619) 0007 因此 11b-HSD1 抑制剂的研究备受国内外学者的重视， 11b-HSD1 抑制作用对糖尿病者的胰岛素敏感性具有积极影响。因为大多数 2 型糖尿病患者都是肥胖者，其内脏脂肪肥大并且 11b-HSD1 高表达，抑制剂或者 11b-HSD1 能够改善糖血症。与非特异性抑制剂 11-HSD 对比，肾 11b-HSD2 抑制剂能够引起高血压和低血钾症，鼠类选择性抑制剂 11b-HSD1(BVT.2733) 显示在自发性地高血糖症 KKAy 小鼠中能够降低肝磷酸烯酮式丙酮酸羧激酶 PEPCK 和葡萄糖 -6- 磷酸酶 mRNA 表达，同时降低血糖。

12、和血清胰岛素浓度 (Malgorzata Wamil等,Drug Discovery Today,2007,12,504)。 11b-HSD1人选择性抑制剂已经合成 (Barf T 等 ,J Med Chem,2002,45,3813)， 11b-HSD1 选择性抑制剂能够对胰岛素抵抗或者 2 型糖尿病肥胖患者有益处。因为在这些失调状态， 11b-HSD1 表达以组织特异性方式反常调控，在脂肪组织高表达，但在肝脏中低活性， 11b-HSD1 选择性抑制剂的临床作用能随着它们在脂肪组织和肝脏组织中局部浓度变化而改变。除了在新陈代谢活跃的组织有影响，我们期盼 HPAaxis 中。

13、11b-HSD1 诱导改变，因为中枢神经系统 11b-HSD1 的抑制作用破坏下丘脑垂体肾上腺负反馈。11b-HSD1 对于大脑中糖皮质激素活性很重要，并且调控 HPA 轴。因此下丘脑 11-HSD1 的抑制剂能够通过降低局部的皮质醇浓度麻痹负反馈调控，并且导致肾上腺分泌糖皮质激素增多。为了避免 11b-HSD1 特殊抑制剂对下丘脑的干预，这些药物应该不能穿过血脑屏障。另一方面，中枢神经系统中的 11b-HSD1 的抑制作用能够保护大脑避免收到老化时糖皮质激素的负面影响 (Adam J.Rose 等 ,The Journal of Steroid Biochemistry a。

14、nd Molecular Biology,2010,122,10)。因此 11b-HSD1 抑制剂，将会有望成为未来有趣的新型的药物，甚至不仅仅局限于治疗肥胖和 2 型糖尿病。 0008 （2E， 6E） -2,6-双亚苄基环己酮类似物是主链为不饱和脂族及侧链芳香族基团。需要开发具有更好的抑制 11b-HSD1 酶活性的（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物，为日后开发预防和治疗结糖尿病的药物提供实验和临床基础。发明内容 0009 本发明的目的是提供一种具有抑制1型11beta-羟基类固醇脱氢酶的活性的（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物。为实现。

15、上述目的，本发明采用如下技术方案： 0010 一种（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物，包括具有通式所示结构的化合物及其药学上可接受的盐： 0011 说明书 CN 103044227 B 4 3/9 页 5 0012 其中： R1和 R2各自独立选自 H、 Br、 CF3或者 F ； 0013 其中，优选所述的 R1和 R2各自独立选自 Br、 CF3或 F。 0014 更优选所述的 R1为 Br 或 F， R2为 CF3或 F，即： 0015 0016 CYH09 0017 本发明的另一目的在于提供上述（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物。

16、的制备方法，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 0018 上述（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物的制备方法，具体为：环己酮和卤代苯甲醛在溶剂中，以氢氧化钾或甲醇钠为催化剂，加热回流 0.3-2h 进行反应，反应温度为 20 -80，分离及纯化产物得到目标化合物。 0019 本发明所述的制备方法中，所述的卤代苯甲醛为2， 6二氟苯甲醛、 2-溴-6-氟苯甲醛、 2- 氟 -6- 三氟甲基苯甲醛、 2， 6 二溴苯甲醛、 2， 6 二氯苯甲醛或 2- 三氟甲基 -6- 氟苯甲醛，优选 2， 6 二氟苯甲醛、 2- 溴 -6- 氟苯甲醛或 2-。

17、氟 -6- 三氟甲基苯甲醛。 0020 本发明所述的制备方法中，所述的溶剂为乙醇或甲醇。优选所述的溶剂为乙醇。所述溶剂的体积用量为反应物总质量的 3-5 倍，其中体积单位为 ml，质量单位为 g，如当酮与醛的总质量为 0.5g，溶剂的用量应当为 1.5-2.5ml。 0021 本发明所述的制备方法中，所述环己酮和卤代苯甲醛的摩尔用量比为 3:1-2:1，所述催化剂的质量用量为环己酮与卤代苯甲醛总质量的 10%-30%，优选所述环己酮和卤代苯说明书 CN 103044227 B 5 4/9 页 6 甲醛的摩尔用量比为 2.2:1，所述催化剂的质量用量为环己酮与。

18、卤代苯甲醛总质量的 20%。 0022 本发明所述的制备方法中，反应时间为 0.3h-2h，反应温度为 20 -80，优选反应时间为 1h-1.5h，反应温度为 40-50，更优选反应时间为 1h，反应温度为 50。 0023 本发明所述的催化剂中，所述的氢氧化钾为质量浓度为 5% 的氢氧化钾水溶液，所述的甲醇钠为质量浓度为 0.5% 的甲醇钠甲醇溶液。 0024 上述反应结束后，体系中有大量沉淀产生，将其冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物。本发明对反应结束后产物的分离及纯化不作特定。

19、限定，现有技术公开的多种分离和纯化方法都可以用于实现本发明，本领域技术人员可以对此进行选择合理。 0025 此外，本发明进一步要求保护上述（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物在制备预防及治疗人类糖尿病药物中的应用。 0026 以及，本发明要求保护含有上述（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物的药物组合物。本发明所述的组合物可含有 0.1%-99% 本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体或者赋形剂。可药用载体或赋形剂是一种或者多种固体、半固体、液体稀释剂、填料以及药物制品。具体药用载体或赋形剂的选择及制剂的。

20、制备为本领域技术人员所掌握，本发明对此不作特别限定。本发明的所述的药物组合物以单位体重服务量的形式使用，可以经多种形式，例如口服、直肠舌下、静脉或者透皮给药，但优选口服给药。 0027 本发明所述的药物组合物，优选为片剂，所述片剂中，主药与辅料的质量比为 4:1-6:5，优选 5:1。具体处方可为：（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物 70-85 份，填充剂 10-18 份，润滑剂 0.5-1 份，崩解剂 0.5-2 份。 0028 作为本发明片剂的最佳实施方式，具体处方采用：（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物 85.0%。

21、，微晶纤维素（填充剂） 13.7%，硬脂酸镁（润滑剂） 0.5%，羧甲基淀粉钠（崩解剂） 0.8%。具体的制备方法可参见现有技术。由于该处方科学合理，辅料之间具有理想的协同作用，所得片剂的稳定性高，药效尤为显著。 0029 采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果： 0030 临床使用方便，易于接受，不仅药物用量准确，同时增加了药物的稳定性，还可减少毒副作用，也便于药物的贮存、运输和携带。具体实施方式 0031 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均。

22、为市售商品。 0032 实施例 1（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物的制备及其鉴定化合物： 0033 (2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03） 0034 结构式： 0035 说明书 CN 103044227 B 6 5/9 页 7 0036 制备方法： 0037 将 0.5g2， 6 二氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比 2.2 ： 1）溶于 2ml 乙醇中，常温搅拌，注射器滴加 2ml， 5% 的氢氧化钾水溶液， 50下反应 0.5h 至 1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，。

23、减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物 CYH03。 0038 (2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）：黄色化合物，收率为 68.3%，纯度为 99.8%。1HNMR(400MHz,CDCl3)7.56(s,2H),7.36 7.28(m,2H),6.94(t,J=7.7Hz,4H),2.682.55(m,4H),1.821.69(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)188.33,161.63(d,J=7.5Hz。

24、),159.14(d,J=7.4Hz),141.20,130.23(t ,J=10.3Hz),124.26,113.46(t,J=19.6Hz),111.50(d,J=6.1Hz),111.30(d,J=6.1Hz),28.9 1(t,J=3.5Hz),22.55.Purity:98.7%by HPLC.HRMS(ESI):calcdfor(M+Na)+(C20H14F4O)36 9.0873,found369.0868 0039 实施例 2 0040 与实施例 1 相比，区别点仅在于： 0041 将 0.5g2， 6 二氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比 2 ： 1）溶于 1.5ml 。

25、乙醇中，常温搅拌，注射器滴加 3ml 质量浓度为 0.5% 的甲醇钠甲醇溶液， 40下反应 0.3h 至 0.5h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物 CYH03。 0042 (2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）：黄色化合物，收率为 56.2%，纯度为 97.8%。1HNMR(400MHz,CDCl3)7.56(s,2H),7.36 7.28(m,2H),6.94(t,J=7.7H。

26、z,4H),2.682.55(m,4H),1.821.69(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)188.33,161.63(d,J=7.5Hz),159.14(d,J=7.4Hz),141.20,130.23(t ,J=10.3Hz),124.26,113.46(t,J=19.6Hz),111.50(d,J=6.1Hz),111.30(d,J=6.1Hz),28.9 1(t,J=3.5Hz),22.55.Purity:98.7%by HPLC.HRMS(ESI):calcdfor(M+Na)+(C20H14F4O)36 9.0873,found369.0868 0043 实施。

27、例 3 0044 与实施例 1 相比，区别点仅在于： 0045 将 0.5g2， 6 二氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比 3 ： 1）溶于 2.5ml 乙醇中，常温搅拌，注射器滴加 3ml 质量浓度为 0.5% 的甲醇钠甲醇溶液， 80下反应 1.5h 至 2h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物 CYH03。 0046 (2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）：黄色化合物，收率为。

28、 55.2%，纯度为 96.9%。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.56(s,2H),7.36 7.28(m,2H),6.94(t,J=7.7Hz,4H),2.682.55(m,4H),1.821.69(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)188.33,161.63(d,J=7.5Hz),159.14(d,J=7.4Hz),141.20,130.2 3(t,J=10.3Hz),124.26,113.46(t,J=19.6Hz),111.50(d,J=6.1Hz),111.30(d,J=6.1H z),28.91 (t,J=3.5Hz),22.55.Purity:。

29、98.7%by HPLC.HRMS(ESI):calcd for(M+Na)+(C20H 14F4O)369.0873,found369.0868 0047 实施例 4（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物的制备及其鉴定化合物：说明书 CN 103044227 B 7 6/9 页 8 0048 (2E,6E)-2,6-bis(2-bromo-6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH06） 0049 结构式： 0050 0051 制备方法： 0052 将 0.5g2- 溴 -6- 氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比 2.2 ： 1）溶于。

30、 2ml 乙醇中，常温搅拌，注射器滴加 2ml， 5% 的氢氧化钾水溶液， 50下反应 0.5h 至 1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物 CYH06。 0053 (2E,6E)-2,6-bis(2-bromo-6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH06）： 0054 黄色化合物，收率为 66.9%，纯度为 99.8%。1H NMR(400MHz,CDCl3) 7.54(s,2H),7.45(d,J=7.9Hz,2H),7。

31、.257.18(m,2H),7.09(t,J=8.7Hz,2H),2.60 2.50(m,4H),1.801.70(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)188.19,159.54(d,J=251.9Hz) ,140.28,130.39(d,J=9.2Hz),130.29,128.44(d,J=3.4Hz),125.29(d,J=18.8Hz),124.9 5(d,J=4.0Hz),114.84(d,J=23.1Hz),28.56(d,J=5.0Hz),22.30.Purity:99.6%by HPLC. HRMS(ESI):calcd for(M+Na)+(C20H14Br2。

32、F2O)488.9272,found488.9302. 0055 实施例 5（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物的制备及其鉴定化合物： 0056 （2E,6E)-2,6-bis2-fluoro-6-(trifluoromethyl)benzylidenecyclohexanone （CYH09） 0057 结构式： 0058 0059 制备方法： 0060 将 0.5g2- 氟 -6- 三氟甲基苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比 2.2 ： 1）溶于 2ml 乙醇中，常温搅拌，注射器滴加2ml， 5%的氢氧化钾水溶液， 50下反应0.5h至1h，体系中有大量沉淀产。

33、生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物 CYH09。 0061 （2E,6E)-2,6-bis2-fluoro-6-(trifluoromethyl)benzylidenecyclohexanone （CYH09）： 0062 黄色化合物，收率为 69.1%，纯度为 99.6%。1H NMR(400MHz,CDCl3)7.63(s, 2H),7.53(d,J=7.8Hz,2H),7.44(dd,J=13.4,7.9Hz,2H),7.31(t,J=8.7Hz,2H),2.50 2.43(m,4H),1.7。

34、41.64(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)187.60,160.48,158.01,141.36 (s,4H),130.90(m),129.67(d,J=8.8Hz),126.86,123.18(m),121.81(m),119.49(d,J=23.2 Hz),28.25(d,J=3.9Hz),22.07.Purity:99.1%by HPLC.HRMS(ESI):calcd for(M+Na)+(C22H1 4F8O)469.0809,found469.0800 说明书 CN 103044227 B 8 7/9 页 9 0063 实施例 6 0064 与实施例1相。

35、比，区别点仅在于，本实施例以2， 6二溴苯甲醛替换实施例1中的2， 6 二氟苯甲醛，分别得到以下结构的化合物，其中，产物的收率为 69.7%，纯度为 99.4%。 0065 0066 实施例 7 0067 与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例以2， 6二氯苯甲醛替换实施例1中的2， 6 二氟苯甲醛，分别得到以下结构的化合物，其中，产物的收率为 70.1%，纯度为 99.6%。 0068 0069 实施例 8 0070 将实施例 1 所得化合物分别经无机酸如盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸如乙酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸等处理，以及由元素阴离子形成的。

36、盐，如氯、溴、碘。形成盐的阳离子包括钾、钠、钙、镁等。具体的制备处理方法为本领域技术人员所理解和掌握，本发明对此不作特别限定。 0071 实施例 9 药物组合物 0072 取实施例 1 得到的化合物 CYH03，按照其与赋形剂重量比为 5:1 的比例加入赋形剂，（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物 85.0%，微晶纤维素（填充剂） 13.7%，硬脂酸镁（润滑剂） 0.5%，羧甲基淀粉钠（崩解剂） 0.8%。制粒压片。 0073 实施例 10 药物组合物 0074 取实施例 4 的方法制的化合物 CYH06，然后分别按常规注射液制法加入注射用。

37、水、精滤灌封灭菌后制成注射液。其中，主药的浓度为 1.5%。 0075 实施例 11 药物组合物 0076 取实施例 5 得到的化合物 CYH09，按照其与赋形剂重量比为 5:1 的比例加入赋形剂，主药 85.0%，微晶纤维素（填充剂） 13.7%，硬脂酸镁（润滑剂） 0.5%，羧甲基淀粉钠（崩解剂） 0.8%。制粒压片。 0077 实施例 12 药物组合物 0078 与实施例11相比，区别点仅在于本实施例具体处方为：（2E， 6E） -2,6-双亚苄基环己酮类似物（实施例 5 得到的化合物 CYH09） 70g，填充剂微晶纤维素 10g，润滑剂硬脂酸镁 0。

38、.5g，崩解剂羧甲基淀粉钠 0.5g。 0079 实施例 13 药物组合物 0080 与实施例11相比，区别点仅在于本实施例具体处方为：（2E， 6E） -2,6-双亚苄基环己酮类似物（实施例 5 得到的化合物 CYH09） 85g，填充剂微晶纤维素 10g，润滑剂硬脂酸镁 0.5g，崩解剂羧甲基淀粉钠 0.5g。说明书 CN 103044227 B 9 8/9 页 10 0081 为了进一步验证本发明所述化合物的性能，发明人进一步以上述实施例制备的化合物展开了大量专项研究试验，篇幅所限，此处仅例举最具说服力的部分。 0082 试验例 1 0083 （2E， 6E。

39、） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物抑制大鼠睾丸和人肝微粒体 1 型 11b- 羟基甾体脱氢酶活性的检测 0084 1 型 11b- 羟基类固醇脱氢酶（11-hydroxysteroid dehydrogenase type I， 11b-HSD1）是一种以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸为辅酶的酶类，主要在肝脏、脂肪、脑以及睾丸等组织的微粒体中表达。含有 11b-HSD1 微粒体可以按常规的方法制备（Brennan,J. 等， Genes Dev， 2003.17， 800），也可以从试剂公司购买。按照已有的研究方法进行 11b-HSD1 酶活性的检测（Haider,S.G.In。

40、t.Rev.Cytol.,2004， 233， 181）。简言之，首先标记反应管，每管加 40g 大鼠睾丸和人肝微粒体蛋白和 10nM-0.1mM（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物（上述实施例所制备得到）（溶于二甲基苯砜， DMSO），然后加入 PBS 至 100l。然后制备类固醇检测混合物： 2l1,2-3H 可的松（40,000cpm）， 2l 未标记的可的松 25mol/L）， 1lNADPH（50mmol/L）以及 45l PBS，振荡混合。取 50l 类固醇检测混合物加入到反应管中， 34培育 45min。用 1ml 预冷乙醚终止。

41、反应后，涡旋振荡 1min。然后将上清转移到 5ml 玻璃管内，氮气干燥并析出固体。加入 70l 乙醚重溶固体，振荡 1min 后，在薄层层析板上点样，并将薄层层析板放入含有氯仿 : 甲醇（体积比 90:10）层析缸内 20min。最后，将薄层层析板放在扫描辐射仪检测 (System AR2000,Bioscan Inc.,Washington,DC,USA) 上读取放射峰值，并计算类固醇的转化率，从而得到 11b-HSD1 酶的转化活性。本实验以 DMSO 作为对照。 0085 实验结果表明，本发明实施例所制备的（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物。

42、对大鼠睾丸微粒体 11-HSD1 活性有抑制作用，其 IC50为 1793nM-4767nM ；对人 11-HSD1 活性，其 IC50为 650nM-111M。更优选的是选用 CYH06。值得注意的是这些（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物对大鼠和人 11b-HSD2 酶的活性基本没有抑制作用 ( 详见试验例 2)。 0086 表 1 （2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物对大鼠睾丸和人肝微粒体 11b-HSD1 酶活性的抑制作用 0087 0088 a%inhibition at the100M inhibitor. 说明书 CN 103044。

43、227 B 10 9/9 页 11 0089 b(IC50,n). 0090 试验例 2 0091 （2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物抑制大鼠和人微粒体 II 型 11b- 羟基甾体脱氢酶活性的检测 0092 II 型 11b- 羟基类固醇脱氢酶（11-hydroxysteroid dehydrogenase type II， 11b-HSD2）是一种以烟酰胺腺嘌呤核苷酸为辅酶的酶类，主要在肾脏、胎盘等组织的微粒体中表达。含有 11b-HSD2 微粒体可以按常规的方法制备（Brennan,J. 等， Genes Dev， 2003.17， 800），也可以从试。

44、剂公司购买。按照已有的研究方法进行 11b-HSD2 酶活性的检测（Haider,S.G.Int.Rev.Cytol.,2004， 233， 181）。简言之，首先标记反应管，每管加 40g 大鼠和人微粒体蛋白和 10nM-0.1mM（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物（溶于二甲基苯砜， DMSO），然后加入 PBS 至 100l。然后制备类固醇检测混合物： 2l1,2-3H 皮质醇（40,000cpm）， 2l 未标记的皮质醇（25mol/L）， 1l NAD+（50mmol/L）以及 45l PBS，振荡混合。取 50l 类固醇检测混合物加入到。

45、反应管中， 37C 培育 45min。用 1ml 预冷乙醚终止反应后，涡旋振荡 1min。然后将上清转移到 5ml 玻璃管内，氮气干燥并析出固体。加入 70l 乙醚重溶固体，振荡 1min 后，在薄层层析板上点样，并将薄层层析板放入含有氯仿 : 甲醇（体积比 90:10）层析缸内 20min。最后，将薄层层析板放在扫描辐射仪检测 (System A R2000,BioscanInc.,Washington,DC,USA) 上读取放射峰值，并计算类固醇的转化率，从而得到 11b-HSD2 酶的转化活性。本实验以 DMSO 作为对照。 0093 实验结果表明，本发明所述（2E， 6E） -2,6- 双亚苄基环己酮类似物对 11b-HSD2，其 IC50 为 100M。 0094 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。说明书 CN 103044227 B 11 。

摘要
申请专利号：	CN201310032355.4	申请日：	20130129
公开号：	CN103044227B	公开日：	20150204
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	C07C49/697,C07C45/74,A61K31/122,A61P3/10	主分类号：	C07C49/697,C07C45/74,A61K31/122,A61P3/10
申请人：	牡丹江医学院
发明人：	初彦辉,葛仁山,袁晓环,赵冰海,李洪志,刘洁婷,马洪闯,尹昌浩,付小兵,刘海峰
地址：	157011 黑龙江省牡丹江市爱民区通乡街3号
优先权：	CN201310032355A
专利代理机构：	北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙)	代理人：	侯蔚寰
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内容摘要

本发明提供了一种（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物，包括具有通式Ⅲ所示结构的化合物及其药学上可接受的盐，该类化合物具有显著的药理活性。此外，本发明进一步提供了该类化合物的制备方法及作为1型11beta-羟基类固醇脱氢酶（11beta-hydroxysteroid?dehydrogenase?type?I，11b-HSD1）抑制剂在预防和治疗人类糖尿病中的应用。

权利要求书

1.一种(2E，6E)-2,6-双亚苄基环己酮化合物，其特征在于：结构式如下： 2.权利要求1所述(2E，6E)-2,6-双亚苄基环己酮化合物的制备方法，其特征在于，将0.5g2-溴-6-氟苯甲醛和环己酮溶于2ml乙醇中，醛和酮的摩尔比2.2：1，常温搅拌，注射器滴加2ml，5％的氢氧化钾水溶液，50℃下反应0.5h至1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物CYH06。 3.权利要求1所述(2E，6E)-2,6-双亚苄基环己酮化合物在制备预防及治疗人类糖尿病药物中的应用。 4.含有权利要求1所述(2E，6E)-2,6-双亚苄基环己酮化合物的药物组合物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种新化合物，具体地说，涉及一种（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物及其制备方法与应用。

背景技术

糖尿病（Diabetes mellitus，DM)是一种世界性疾病，根据WHO报道，2012年12月统计，目前全世界有3.46亿人患有糖尿病。如果没有任何干预这个数据预计到2030年将翻一番，其中80%发生在低中收入国家。DM已成为世界第三大疾病，其发病率和对人类健康的危险性，仅次于癌症和心脑血管病。在我国，目前大约有4000万名糖尿病患者，居全球第二，其中2型DM(T2DM)患者占全部DM的90%～95%。目前，1型糖尿病治疗研究的方向是开发给药方便的胰岛素制剂及胰岛素代用品；而2型糖尿病可用化学药物促使β细胞分泌更多胰岛素，或改善靶组织对胰岛素的敏感性进行治疗，研发新作用机制或新结构类型的高效低毒的抗糖尿病药物已成为国际上新药研发的热点。

糖皮质激素是胰岛素作用的拮抗剂，它削弱依赖胰岛素的葡萄糖摄取和增加脂类分解，提高肝脏糖异生和通过蛋白水解作用增加基质（Andrew McMaster等,Nature Reviews Endocrinology,2008,4,91），并且直接抑制胰岛β细胞分泌胰岛素（PospísilováY等,Vnitr Lek,2007,53,1,18）。胰岛素抑制肝糖异生，而糖皮质激素增加糖异生，直接或间接激活参与此过程的主要基因或激素，如：胰高血糖素、肝内磷酸烯醇丙酮羧化酶的基因表达(PEPCK)，PEPCK是糖异生的限速酶，它被糖皮质激素反应元件调控，它还会对cAMP r调控元件绑定蛋白(CREB)作用（Gavin P.,Molecular and Cellular Endocrinology,2009,300,2）。糖皮质激素和CREB协同作用诱导过氧化酶体增值激活受体-γ共活化剂1(PGC-1)，它是肝糖异生主要的激活剂(Yoon JC等,Nature,2001,413,131)。另外，糖皮质激素通过抑制转运蛋白4的翻译，对抗胰岛素反应包括抑制胰岛素信号传递和抑制胰岛素刺激葡萄糖摄取（NicholasMichael Morton,Molecular and cellular endocrinology,2010,316,154）。所以糖皮质激素水平的高低直接影响胰岛素的作用。

糖皮质激素是在下丘脑-垂体-肾上腺-轴线（HPA）控制下，由肾上腺分泌到血液中。然而在HPA决定血液糖皮质激素水平的同时，最近突出的研究表明细胞内11beta羟基类固醇脱氢酶11b-HSDs）调节糖皮质激素水平。因此尽管在一些细胞中有正常的糖皮质激素水平，但是有时会使它处于非活性状态，有时由非活性的转化为活性状态，这些都是由11b-HSD来催化，11b-HSD有两种异构体，11b-HSD1能活化惰性的前体（强的松或11-脱氢皮质酮）变为活化的糖皮质激素（皮质醇或皮质酮），它主要在肝脏、脂肪组织、脑、骨骼肌、平滑肌细胞中具有还原性(T.M.Stulnig1,Diabetologia,2004,47,1)。

在日常变化过程中血浆活性皮质醇浓度变化较大(1–100nmol/L)。与此相反，非活性可的松没有大的日常变化，在50-100nmol/L波动，与皮质醇比较有较高的自由的血浆浓度（Stewart PM等,Vitam Horm,1999,57,249）。因此，血浆可的松可以当成是非活性的糖皮质激素的贮存池能够不断的提供11b-HSD1还原性以维持局部活性糖皮质激素浓度，在新陈代谢活跃组织中糖皮质激素与胰岛素功能对抗。

国外学者用转基因小鼠研究得出数据显示11b-HSD1-/-小鼠细胞内糖皮质激素被损伤，它不再与胰岛素抵抗(Erika Harno等,Trends in Endocrinology & Metabolism,2010,21,619)

因此11b-HSD1抑制剂的研究备受国内外学者的重视，11b-HSD1 抑制作用对糖尿病者的胰岛素敏感性具有积极影响。因为大多数2型糖尿病患者都是肥胖者，其内脏脂肪肥大并且11b-HSD1高表达，抑制剂或者11b-HSD1能够改善糖血症。与非特异性抑制剂11β-HSD对比，肾11b-HSD2抑制剂能够引起高血压和低血钾症，鼠类选择性抑制剂11b-HSD1(BVT.2733)显示在自发性地高血糖症KKAy小鼠中能够降低肝磷酸烯酮式丙酮酸羧激酶PEPCK和葡萄糖-6-磷酸酶mRNA表达，同时降低血糖和血清胰岛素浓度(Malgorzata Wamil等,Drug Discovery Today,2007,12,504)。11b-HSD1人选择性抑制剂已经合成(Barf T等,J Med Chem,2002,45,3813)，11b-HSD1选择性抑制剂能够对胰岛素抵抗或者2型糖尿病肥胖患者有益处。因为在这些失调状态，11b-HSD1表达以组织特异性方式反常调控，在脂肪组织高表达，但在肝脏中低活性，11b-HSD1选择性抑制剂的临床作用能随着它们在脂肪组织和肝脏组织中局部浓度变化而改变。除了在新陈代谢活跃的组织有影响，我们期盼HPAaxis中11b-HSD1诱导改变，因为中枢神经系统11b-HSD1的抑制作用破坏下丘脑垂体肾上腺负反馈。11b-HSD1对于大脑中糖皮质激素活性很重要，并且调控HPA轴。因此下丘脑11β-HSD1的抑制剂能够通过降低局部的皮质醇浓度麻痹负反馈调控，并且导致肾上腺分泌糖皮质激素增多。为了避免11b-HSD1特殊抑制剂对下丘脑的干预，这些药物应该不能穿过血脑屏障。另一方面，中枢神经系统中的11b-HSD1的抑制作用能够保护大脑避免收到老化时糖皮质激素的负面影响(Adam J.Rose等,The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology,2010,122,10)。因此11b-HSD1抑制剂，将会有望成为未来有趣的新型的药物，甚至不仅仅局限于治疗肥胖和2型糖尿病。

（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物是主链为不饱和脂族及侧链芳香族基团。需要开发具有更好的抑制11b-HSD1酶活性的（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物，为日后开发预防和治疗结糖尿病的药物提供实验和临床基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抑制1型11beta-羟基类固醇脱氢酶的活性的（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物，包括具有通式Ⅲ所示结构的化合物及其药学上可接受的盐：

其中：R1和R2各自独立选自H、Br、CF3或者F；

其中，优选所述的R1和R2各自独立选自Br、CF3或F。

更优选所述的R1为Br或F，R2为CF3或F，即：

CYH09

本发明的另一目的在于提供上述（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物的制备方法，为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

上述（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物的制备方法，具体为：环己酮和卤代苯甲醛在溶剂中，以氢氧化钾或甲醇钠为催化剂，加热回流0.3-2h进行反应，反应温度为20℃-80℃，分离及纯化产物得到目标化合物。

本发明所述的制备方法中，所述的卤代苯甲醛为2，6二氟苯甲醛、2-溴-6-氟苯甲醛、2-氟-6-三氟甲基苯甲醛、2，6二溴苯甲醛、2，6二氯苯甲醛或2-三氟甲基-6-氟苯甲醛，优选2，6二氟苯甲醛、2-溴-6-氟苯甲醛或2-氟-6-三氟甲基苯甲醛。

本发明所述的制备方法中，所述的溶剂为乙醇或甲醇。优选所述的溶剂为乙醇。所述溶剂的体积用量为反应物总质量的3-5倍，其中体积单位为ml，质量单位为g，如当酮与醛的总质量为0.5g，溶剂的用量应当为1.5-2.5ml。

本发明所述的制备方法中，所述环己酮和卤代苯甲醛的摩尔用量比为3:1-2:1，所述催化剂的质量用量为环己酮与卤代苯甲醛总质量的10%-30%，优选所述环己酮和卤代苯甲醛的摩尔用量比为2.2:1，所述催化剂的质量用量为环己酮与卤代苯甲醛总质量的20%。

本发明所述的制备方法中，反应时间为0.3h-2h，反应温度为20℃-80℃，优选反应时间为1h-1.5h，反应温度为40-50℃，更优选反应时间为1h，反应温度为50℃。

本发明所述的催化剂中，所述的氢氧化钾为质量浓度为5%的氢氧化钾水溶液，所述的甲醇钠为质量浓度为0.5%的甲醇钠甲醇溶液。

上述反应结束后，体系中有大量沉淀产生，将其冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物。本发明对反应结束后产物的分离及纯化不作特定限定，现有技术公开的多种分离和纯化方法都可以用于实现本发明，本领域技术人员可以对此进行选择合理。

此外，本发明进一步要求保护上述（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物在制备预防及治疗人类糖尿病药物中的应用。

以及，本发明要求保护含有上述（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物的药物组合物。本发明所述的组合物可含有0.1%-99%本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体或者赋形剂。可药用载体或赋形剂是一种或者多种固体、半固体、液体稀释剂、填料以及药物制品。具体药用载体或赋形剂的选择及制剂的制备为本领域技术人员所掌握，本发明对此不作特别限定。本发明的所述的药物组合物以单位体重服务量的形式使用，可以经多种形式，例如口服、直肠舌下、静脉或者透皮给药，但优选口服给药。

本发明所述的药物组合物，优选为片剂，所述片剂中，主药与辅料的质量比为4:1-6:5，优选5:1。具体处方可为：（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物70-85份，填充剂10-18份，润滑剂0.5-1份，崩解剂0.5-2份。

作为本发明片剂的最佳实施方式，具体处方采用：（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物85.0%，微晶纤维素（填充剂）13.7%，硬脂酸镁（润滑剂）0.5%，羧甲基淀粉钠（崩解剂）0.8%。具体的制备方法可参见现有技术。由于该处方科学合理，辅料之间具有理想的协同作用，所得片剂的稳定性高，药效尤为显著。

采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：

临床使用方便，易于接受，不仅药物用量准确，同时增加了药物的稳定性，还可减少毒副作用，也便于药物的贮存、运输和携带。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物的制备及其鉴定化合物：

(2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）

结构式：

制备方法：

将0.5g2，6二氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比2.2：1）溶于2ml乙醇中，常温搅拌，注射器滴加2ml，5%的氢氧化钾水溶液，50℃下反应0.5h至1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物CYH03。

(2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）：黄色化合物，收率为68.3%，纯度为99.8%。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(s,2H),7.36–7.28(m,2H),6.94(t,J=7.7Hz,4H),2.68–2.55(m,4H),1.82–1.69(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.33,161.63(d,J=7.5Hz),159.14(d,J=7.4Hz),141.20,130.23(t,J=10.3Hz),124.26,113.46(t,J=19.6Hz),111.50(d,J=6.1Hz),111.30(d,J=6.1Hz),28.91(t,J=3.5Hz),22.55.Purity:98.7%by HPLC.HRMS(ESI):calcdfor(M+Na)+(C20H14F4O)369.0873,found369.0868

实施例2

与实施例1相比，区别点仅在于：

将0.5g2，6二氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比2：1）溶于1.5ml乙醇中，常温搅拌，注射器滴加3ml质量浓度为0.5%的甲醇钠甲醇溶液，40℃下反应0.3h至0.5h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物CYH03。

(2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）：黄色化合物，收率为56.2%，纯度为97.8%。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(s,2H),7.36–7.28(m,2H),6.94(t,J=7.7Hz,4H),2.68–2.55(m,4H),1.82–1.69(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.33,161.63(d,J=7.5Hz),159.14(d,J=7.4Hz),141.20,130.23(t,J=10.3Hz),124.26,113.46(t,J=19.6Hz),111.50(d,J=6.1Hz),111.30(d,J=6.1Hz),28.91(t,J=3.5Hz),22.55.Purity:98.7%by HPLC.HRMS(ESI):calcdfor(M+Na)+(C20H14F4O)369.0873,found369.0868

实施例3

与实施例1相比，区别点仅在于：

将0.5g2，6二氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比3：1）溶于2.5ml乙醇中，常温搅拌，注射器滴加3ml质量浓度为0.5%的甲醇钠甲醇溶液，80℃下反应1.5h至2h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物CYH03。

(2E,6E)-2,6-bis(2,6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH03）：黄色化合物，收率为55.2%，纯度为96.9%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.56(s,2H),7.36–7.28(m,2H),6.94(t,J=7.7Hz,4H),2.68–2.55(m,4H),1.82–1.69(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.33,161.63(d,J=7.5Hz),159.14(d,J=7.4Hz),141.20,130.23(t,J=10.3Hz),124.26,113.46(t,J=19.6Hz),111.50(d,J=6.1Hz),111.30(d,J=6.1Hz),28.91 (t,J=3.5Hz),22.55.Purity:98.7%by HPLC.HRMS(ESI):calcd for(M+Na)+(C20H14F4O)369.0873,found369.0868

实施例4（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物的制备及其鉴定化合物：

(2E,6E)-2,6-bis(2-bromo-6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH06）

结构式：

制备方法：

将0.5g2-溴-6-氟苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比2.2：1）溶于2ml乙醇中，常温搅拌，注射器滴加2ml，5%的氢氧化钾水溶液，50℃下反应0.5h至1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物CYH06。

(2E,6E)-2,6-bis(2-bromo-6-fluorobenzylidene)cyclohexanone（CYH06）：

黄色化合物，收率为66.9%，纯度为99.8%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.54(s,2H),7.45(d,J=7.9Hz,2H),7.25–7.18(m,2H),7.09(t,J=8.7Hz,2H),2.60–2.50(m,4H),1.80–1.70(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ188.19,159.54(d,J=251.9Hz),140.28,130.39(d,J=9.2Hz),130.29,128.44(d,J=3.4Hz),125.29(d,J=18.8Hz),124.95(d,J=4.0Hz),114.84(d,J=23.1Hz),28.56(d,J=5.0Hz),22.30.Purity:99.6%by HPLC.HRMS(ESI):calcd for(M+Na)+(C20H14Br2F2O)488.9272,found488.9302.

实施例5（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物的制备及其鉴定化合物：

（2E,6E)-2,6-bis[2-fluoro-6-(trifluoromethyl)benzylidene]cyclohexanone（CYH09）

结构式：

制备方法：

将0.5g2-氟-6-三氟甲基苯甲醛和环己酮（醛和酮的摩尔比2.2：1）溶于2ml乙醇中，常温搅拌，注射器滴加2ml，5%的氢氧化钾水溶液，50℃下反应0.5h至1h，体系中有大量沉淀产生，冷至室温，减压抽滤，滤物用少量乙醇冲洗多次，干燥后经硅胶柱层析进行分离纯化，所得产品真空干燥，得到目标产物CYH09。

（2E,6E)-2,6-bis[2-fluoro-6-(trifluoromethyl)benzylidene]cyclohexanone（CYH09）：

黄色化合物，收率为69.1%，纯度为99.6%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(s,2H),7.53(d,J=7.8Hz,2H),7.44(dd,J=13.4,7.9Hz,2H),7.31(t,J=8.7Hz,2H),2.50–2.43(m,4H),1.74–1.64(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ187.60,160.48,158.01,141.36(s,4H),130.90(m),129.67(d,J=8.8Hz),126.86,123.18(m),121.81(m),119.49(d,J=23.2Hz),28.25(d,J=3.9Hz),22.07.Purity:99.1%by HPLC.HRMS(ESI):calcd for(M+Na)+(C22H14F8O)469.0809,found469.0800

实施例6

与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例以2，6二溴苯甲醛替换实施例1中的2，6二氟苯甲醛，分别得到以下结构的化合物，其中，产物的收率为69.7%，纯度为99.4%。

实施例7

与实施例1相比，区别点仅在于，本实施例以2，6二氯苯甲醛替换实施例1中的2，6二氟苯甲醛，分别得到以下结构的化合物，其中，产物的收率为70.1%，纯度为99.6%。

实施例8

将实施例1所得化合物分别经无机酸如盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸如乙酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸等处理，以及由元素阴离子形成的盐，如氯、溴、碘。形成盐的阳离子包括钾、钠、钙、镁等。具体的制备处理方法为本领域技术人员所理解和掌握，本发明对此不作特别限定。

实施例9药物组合物

取实施例1得到的化合物CYH03，按照其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物85.0%，微晶纤维素（填充剂）13.7%，硬脂酸镁（润滑剂）0.5%，羧甲基淀粉钠（崩解剂）0.8%。制粒压片。

实施例10药物组合物

取实施例4的方法制的化合物CYH06，然后分别按常规注射液制法加入注射用水、精滤灌封灭菌后制成注射液。其中，主药的浓度为1.5%。

实施例11药物组合物

取实施例5得到的化合物CYH09，按照其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂，主药85.0%，微晶纤维素（填充剂）13.7%，硬脂酸镁（润滑剂）0.5%，羧甲基淀粉钠（崩解剂）0.8%。制粒压片。

实施例12药物组合物

与实施例11相比，区别点仅在于本实施例具体处方为：（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物（实施例5得到的化合物CYH09）70g，填充剂微晶纤维素10g，润滑剂硬脂酸镁0.5g，崩解剂羧甲基淀粉钠0.5g。

实施例13药物组合物

与实施例11相比，区别点仅在于本实施例具体处方为：（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物（实施例5得到的化合物CYH09）85g，填充剂微晶纤维素10g，润滑剂硬脂酸镁0.5g，崩解剂羧甲基淀粉钠0.5g。

为了进一步验证本发明所述化合物的性能，发明人进一步以上述实施例制备的化合物展开了大量专项研究试验，篇幅所限，此处仅例举最具说服力的部分。

试验例1

（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物抑制大鼠睾丸和人肝微粒体1型11b-羟基甾体脱氢酶活性的检测

1型11b-羟基类固醇脱氢酶（11β-hydroxysteroid dehydrogenase type I，11b-HSD1）是一种以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸为辅酶的酶类，主要在肝脏、脂肪、脑以及睾丸等组织的微粒体中表达。含有11b-HSD1微粒体可以按常规的方法制备（Brennan,J.等，Genes Dev，2003.17，800），也可以从试剂公司购买。按照已有的研究方法进行11b-HSD1酶活性的检测（Haider,S.G.Int.Rev.Cytol.,2004，233，181）。简言之，首先标记反应管，每管加40μg大鼠睾丸和人肝微粒体蛋白和10nM-0.1mM（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物（上述实施例所制备得到）（溶于二甲基苯砜，DMSO），然后加入PBS至100μl。然后制备类固醇检测混合物：2μl[1,2-3H]可的松（40,000cpm），2μl未标记的可的松25μmol/L），1μlNADPH（50mmol/L）以及45μl PBS，振荡混合。取50μl类固醇检测混合物加入到反应管中，34℃培育45min。用1ml预冷乙醚终止反应后，涡旋振荡1min。然后将上清转移到5ml玻璃管内，氮气干燥并析出固体。加入70μl乙醚重溶固体，振荡1min后，在薄层层析板上点样，并将薄层层析板放入含有氯仿:甲醇（体积比90:10）层析缸内20min。最后，将薄层层析板放在扫描辐射仪检测(System AR2000,Bioscan Inc.,Washington,DC,USA)上读取放射峰值，并计算类固醇的转化率，从而得到11b-HSD1酶的转化活性。本实验以DMSO作为对照。

实验结果表明，本发明实施例所制备的（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物对大鼠睾丸微粒体11β-HSD1活性有抑制作用，其IC50为1793nM-4767nM；对人11β-HSD1活性，其IC50为650nM-111μM。更优选的是选用CYH06。值得注意的是这些（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物对大鼠和人11b-HSD2酶的活性基本没有抑制作用(详见试验例2)。

表1（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物对大鼠睾丸和人肝微粒体11b-HSD1酶活性的抑制作用

a%inhibition at the100μM inhibitor.

b(IC50,nΜ).

试验例2

（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物抑制大鼠和人微粒体II型11b-羟基甾体脱氢酶活性的检测

II型11b-羟基类固醇脱氢酶（11β-hydroxysteroid dehydrogenase type II，11b-HSD2）是一种以烟酰胺腺嘌呤核苷酸为辅酶的酶类，主要在肾脏、胎盘等组织的微粒体中表达。含有11b-HSD2微粒体可以按常规的方法制备（Brennan,J.等，Genes Dev，2003.17，800），也可以从试剂公司购买。按照已有的研究方法进行11b-HSD2酶活性的检测（Haider,S.G.Int.Rev.Cytol.,2004，233，181）。简言之，首先标记反应管，每管加40μg大鼠和人微粒体蛋白和10nM-0.1mM（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物（溶于二甲基苯砜，DMSO），然后加入PBS至100μl。然后制备类固醇检测混合物：2μl[1,2-3H]皮质醇（40,000cpm），2μl未标记的皮质醇（25μmol/L），1μl NAD+（50mmol/L）以及45μl PBS，振荡混合。取50μl类固醇检测混合物加入到反应管中，37C培育45min。用1ml预冷乙醚终止反应后，涡旋振荡1min。然后将上清转移到5ml玻璃管内，氮气干燥并析出固体。加入70μl乙醚重溶固体，振荡1min后，在薄层层析板上点样，并将薄层层析板放入含有氯仿:甲醇（体积比90:10）层析缸内20min。最后，将薄层层析板放在扫描辐射仪检测(System AR2000,BioscanInc.,Washington,DC,USA)上读取放射峰值，并计算类固醇的转化率，从而得到11b-HSD2酶的转化活性。本实验以DMSO作为对照。

实验结果表明，本发明所述（2E，6E）-2,6-双亚苄基环己酮类似物对11b-HSD2，其IC50为>100μM。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。