一种副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂及其应用方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410771343.8 (22)申请日 2014.12.15 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104498360 A (43)申请公布日 2015.04.08 (73)专利权人 广东省微生物研究所 地址 510070 广东省广州市先烈中路100号 专利权人 广东环凯微生物科技有限公司 (72)发明人 柏建玲莫树平吴清平王惠惠 吴军林丘明泉张菊梅 (74)专利代理机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 代理人 刘明星 (51)Int.Cl. C12N。

2、 1/04(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (56)对比文件 CN 101524150 A,2009.09.09, WO 9957242 A1,1999.11.11, CN 101649293 A,2010.02.17, CN 103099821 A,2013.05.15, CN 103695330 A,2014.04.02, 审查员 张娟 (54)发明名称 一种副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥 保护剂及其应用方法 (57)摘要 本发明公开了一种副干酪乳杆菌活菌制剂 常温真空干燥保护剂及其应用方法。 它按总质量 分数100计， 包括北虫草提取物1530、 L-苹 果酸。

3、14、 甘油15、 半乳糖25、 脱脂奶 粉1530， 余量为水； 所述的北虫草提取物是 将北虫草水解后， 过滤去渣， 滤液浓缩至7- 8Brix， 得到北虫草提取物。 本发明的北虫草提取 物含有大量虫草多糖等双歧因子， 其对副干酪乳 杆菌具有独特的保护作用， 同时赋予活菌制剂新 的保健功能， 拓宽了副干酪乳杆菌活菌制剂的保 健范围， 利用该保护剂制备副干酪乳杆菌制剂， 在常温条件下进行真空干燥， 制备成本低、 工艺 方法简单、 易操作， 保护剂能有效保护副干酪乳 杆菌活菌， 使活菌制剂达到产品要求， 从而为活 菌制剂产品进一步推广提供理论基础。 权利要求书1页 说明书5页 CN 104498。

4、360 B 2017.08.22 CN 104498360 B 1.一种副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂， 其特征在于， 按总质量分数100 计， 包括北虫草提取物1530、 L-苹果酸14、 甘油15、 半乳糖25、 脱脂奶粉15 30， 余量为水； 所述的北虫草提取物是将北虫草水解后， 过滤去渣， 滤液浓缩至7-8Brix， 得到北虫草 提取物。 2.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂， 其特征在于， 所 述的将北虫草水解是将北虫草加入其重量50倍的水中， 煮沸后打浆， 98100水解3小时。 3.根据权利要求1所述的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂， 。

5、其特征在于， 所 述的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂， 按总质量分数100计， 包括北虫草提取 物20、 L-苹果酸1.5、 甘油2、 半乳糖3、 脱脂奶粉20， 余量为水。 4.一种副干酪乳杆菌制剂的常温真空干燥方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 将权利要求1所述的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂、 副干酪乳杆菌湿菌 泥和微晶纤维素按照重量比0.51： 1： 0.81.2混合均匀， 然后真空干燥。 5.根据权利要求4所述的常温真空干燥方法， 其特征在于， 将副干酪乳杆菌活菌制剂常 温真空干燥保护剂、 副干酪乳杆菌湿菌泥和微晶纤维素按照重量比0.6 1 1混合均匀， 然后 真空。

6、干燥。 6.根据权利要求4所述的常温真空干燥方法， 其特征在于， 所述的真空干燥为： 将混匀 后的物质装入真空旋转蒸发仪中， 旋转30-50rpm， 抽真空， 同时水浴加热至33-39， 保持 90-180min， 然后取出用粉碎机慢速粉碎， 装回真空旋转蒸发仪中， 旋转40-80rpm， 抽真空， 温度28-31， 保持直至制剂干燥。 7.根据权利要求6所述的常温真空干燥方法， 其特征在于， 将混匀后的物质装入真空旋 转蒸发仪中， 旋转30rpm， 抽真空， 同时水浴加热至35-37， 保持120min， 然后取出用粉碎机 慢速粉碎， 装回真空旋转蒸发仪中， 旋转50rpm， 抽真空， 温度。

7、29-30， 保持直至制剂干燥。 权利要求书 1/1 页 2 CN 104498360 B 2 一种副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂及其应用 方法 技术领域： 0001 本发明属于微生物领域， 具体涉及一种副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护 剂及其应用方法。 背景技术： 0002 由于益生菌对机体肠道菌系具有很好的调节作用， 而肠道菌系平衡则是关系到人 体营养和健康的至关重要的因素， 这使益生菌的研究逐渐成为功能食品研究中的焦点。 副 干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)广泛存在于乳酪、 泡菜等发酵食品以及人体的口 腔及肠道中。 副干酪乳酸菌是益生菌的一种， 是。

8、人体肠道内重要的生理性益生菌， 能促进机 体微生物菌群和酶的平衡以及刺激特异性和非特异性的免疫机制， 在一定程度上可以起到 预防某些疾病、 促进发育、 增强体质、 延缓衰老和延长寿命的作用。 一般副干酪乳杆菌制剂 多采用低温冷冻干燥的方法制备， 生产过程复杂， 条件要求高、 成本较高， 极大地限制了高 活性乳酸菌制剂的生产和推广应用。 0003 另一方面， 在微生物冷冻干燥过程中为了降低微生物的损失和死亡率添加保护 剂， 常用的保护剂主要有牛奶或奶粉、 蔗糖、 明胶等， 在冻干过程中， 培养条件、 收获期、 冷冻 速率、 保护剂、 残留水分及复水条件等都或多或少影响冷冻干燥菌体的存活率， 其中。

9、保护剂 是最复杂、 也最难选择的一个关键因素。 因此， 积极寻求新型冻干保护剂， 最大限度降低细 胞的损失， 是制备高洁性副干酪乳杆菌冻干制剂及进一步延长活菌保藏期的技术关键。 0004 北虫草也称蛹虫草， 是北冬虫夏草的简称， 又名北冬虫夏草、 蚕蛹虫草等。 研究发 现北虫草的药理作用及功效基本上与冬虫夏草相同， 可以作为冬虫夏草的代用品。 有滋肺 益气、 止血化痰、 抑制肿瘤、 驻容美颜、 延缓衰老、 补肾壮阳等作用及提高机体免疫力之功 效。 冬虫夏草是一个复杂而特殊的生命复合体， 含有多种特殊的活性成分。 目前已知冬虫夏 草含有糖类、 氨基酸类、 核苷酸类、 酸脂类、 无机元素类、 维生。

10、素等成分。 虫草多糖是虫草中 主要的、 也是含量最高的活性成分之一， 具有免疫活性、 抗肿瘤作用、 抗辐射作用(江晓路和 葛蓓蕾1998； 季晖等1993； Dai et al.2009)。 虫草多糖多是双岐因子， 对乳酸菌具有保护作 用。 前期的研究发现蛹虫草中含有葡萄糖和海藻糖， 其中海藻糖含量较高， 达到8左右(刘 艳芳等2011)。 目前已上市的北冬虫夏草保健品有： 虫草口服液、 虫草补肾酒、 虫草健康啤酒 以及沈阳农业大学研制的虫草胶囊等。 0005 北虫草抽提物在微生态制剂方面的研究仍然仅是用作冻干菌粉的稀释剂或作为 双歧 因 子 ， 或 者 用北 虫 草 热 反 应 物来 增 加。

11、微 生 态 制剂 增味 调味 剂。 如专 利Z L 200910040776.5是将北虫草提取物作为营养物质添加发酵乳酸菌以期提高发酵液活菌数， 在发酵后被去除； 专利ZL 200910040606.7是将北虫草热反应物与乳酸菌冻干菌粉混合制 备微生态制剂， 只增加产品的风味和口感。 0006 目前， 还没有将北虫草抽提物直接作为益生菌干燥保护剂常温真空干燥制备活菌 制剂的研究和报道。 同时， 低温冷冻干燥方法制备乳酸菌制剂成本高， 且以往常用的保护剂 说明书 1/5 页 3 CN 104498360 B 3 多数只能用于低温冷冻干燥， 也存在保护剂配方简单、 保护效果稳定性差、 不能改善或者。

12、影 响产品风味等问题。 发明内容： 0007 本发明的目的是提供一种不仅在干燥过程中对副干酪乳杆菌具有保护活菌的作 用， 还具有增强微生物制剂保健功能的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂。 0008 本发明的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂， 其特征在于， 按总质量分 数100计， 包括北虫草提取物1530、 L-苹果酸14、 甘油15、 半乳糖25、 脱 脂奶粉1530， 余量为水； 0009 所述的北虫草提取物是将北虫草水解后， 过滤去渣， 滤液浓缩至7-8Brix， 得到北 虫草提取物。 0010 优选， 所述的将北虫草水解优选是将北虫草加入其重量50倍的水中， 煮沸后打浆， 。

13、98100水解3小时。 0011 优选， 所述的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂， 按总质量分数100 计， 包括北虫草提取物20、 L-苹果酸1.5、 甘油2、 半乳糖3、 脱脂奶粉20， 余量为 水。 0012 本发明的第二个目的是副干酪乳杆菌制剂的常温真空干燥方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： 0013 将副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂、 副干酪乳杆菌湿菌泥和微晶纤维 素按照重量比0.51： 1： 0.81.2混合均匀， 然后真空干燥。 0014 优选， 将副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂、 副干酪乳杆菌湿菌泥和微 晶纤维素按照重量比0.6 1 1混合均匀， 然后。

14、真空干燥。 0015 优选， 所述的真空干燥优选为： 将混匀后的物质装入真空旋转蒸发仪中， 旋转30- 50rpm， 抽真空， 同时水浴加热至33-39， 保持90-180min， 然后取出用粉碎机慢速粉碎， 装 回真空旋转蒸发仪中， 旋转40-80rpm， 抽真空， 温度28-31， 保持直至制剂干燥。 0016 进一步优选， 将混匀后的物质装入真空旋转蒸发仪中， 旋转30rpm， 抽真空， 同时水 浴加热至35-37， 保持120min， 然后取出用粉碎机慢速粉碎， 装回真空旋转蒸发仪中， 旋转 50rpm， 抽真空， 温度29-30， 保持直至制剂干燥。 0017 本发明相比于现有技术，。

15、 具有以下有益效果： 0018 1.本发明将北虫草提取物应用于副干酪乳杆菌乳酸菌的干燥保护， 将北虫草与乳 酸菌的保健功能进行优势互补， 增强和拓宽了活性益生菌产品的保健作用， 形成了很好的 干燥保护剂的组合， 有利于菌种在保藏过程中的稳定； 0019 2.保护剂中加入L-苹果酸调节产品的酸度环境利用保护副干酪乳杆活性； 0020 3.以微晶纤维素为干燥助剂， 微晶纤维素是一种纯化的、 部分解聚的纤维素， 有多 孔微粒组成的结晶粉末， 可用于热稳定剂和快速干燥的载体。 还可作为膳食纤维应用于低 热量和低脂肪等特殊营养食品中， 加入微晶纤维素为干燥助剂， 以利于产品的干燥； 0021 4.用常温。

16、真空干燥的方法制备活性副干酪乳杆菌制剂， 方法简单易于操作。 0022 因此， 本发明的副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂中的北虫草提取物含 有大量虫草多糖等双歧因子， 其对副干酪乳杆菌具有独特的保护作用， 同时赋予活菌制剂 说明书 2/5 页 4 CN 104498360 B 4 新的保健功能， 拓宽了副干酪乳杆菌活菌制剂的保健范围， 利用该保护剂制备副干酪乳杆 菌制剂， 在常温条件下进行真空干燥， 制备成本低、 工艺方法简单、 易操作， 保护剂能有效保 护副干酪乳杆菌活菌， 使活菌制剂达到产品要求， 从而为活菌制剂产品进一步推广提供理 论基础。 具体实施方式： 0023 以下实施例是对。

17、本发明的进一步说明， 而不是对本发明的限制。 0024 实施例1： 0025 (1)称取干北虫草50克， 加入到2500mL蒸馏水中， 煮沸后倒入打浆机， 打浆， 98-100 下水解3小时； 过滤去渣、 滤液真空浓缩至7-8Brix， 即北虫草提取物； 0026 (2)副干酪乳杆菌湿菌泥制备： 用菌种Lactobacillus paracasei R8经三级深层 发酵、 离心、 去上清收集湿菌泥。 0027 (3)副干酪乳杆菌常温真空干燥助剂的制备 0028 称取食品级微晶纤维素100g， 在115干热灭菌1小时， 冷却备用。 0029 (4)副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂的制备： 。

18、将15g脱脂乳粉、 2g半乳 糖、 1.5gL-苹果酸混合均匀， 微波灭菌冷却配制成组合物A， 1.5g甘油、 15mL北虫草提取物和 30mL蒸馏水混合在110条件下湿热灭菌20min， 冷却配制成溶液B。 将A和B无菌条件下混合 均匀后配制成副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂65g。 0030 (5)一种副干酪乳杆菌常温真空干燥方法 0031 取上述副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂65g和副干酪乳杆菌湿菌泥 100g混合均匀， 再加入已灭菌微晶纤维素100g充分混合均匀后， 装入真空旋转蒸发仪中， 旋 转转速35rpm， 抽真空， 同时水浴加热至37， 保持2小时， 然后取出用粉。

19、碎机慢速粉碎， 装回 真空旋转蒸发仪中， 旋转55rpm， 抽真空， 温度30， 保持直至副干酪乳杆菌制剂干燥， 获得 副干酪乳杆菌制剂A。 0032 (6)同时将副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂配方中的北虫草提取物用 相同量的蒸馏水代替， 其他配方和方法完全相同， 制备副干酪乳杆菌菌粉B， 与将本发明方 法制备的副干酪乳杆菌制剂A， 同时放4箱保存， 每个月检测一次活菌数， 共保存六个月， 做对比保存试验。 结果见表1： 0033 表1保存试验结果 0034 说明书 3/5 页 5 CN 104498360 B 5 0035 本次试验结果证明， 不加北虫草提取物制备的产品在保存过程中活。

20、菌数下降较 快， 通过本发明获得的副干酪乳杆菌制剂A 4保存半年后的仍达到较高活菌数， 均高于 107cfu/g， 与不添加北虫草提取物制备的产品比较更稳定， 取得了较佳的干燥保存效果。 0036 实施例2 0037 (1)称取干北虫草30克， 加入到1500mL蒸馏水中， 煮沸后倒入打浆机， 打浆， 98-100 下水解3小时； 过滤去渣、 滤液真空浓缩至7-8Brix， 即北虫草提取物； 0038 (2)副干酪乳杆菌湿菌泥制备： 用菌种Lactobacillus paracasei R8经三级深层 发酵、 离心、 去上清收集湿菌泥。 0039 (3)副干酪乳杆菌常温真空干燥助剂的制备 00。

21、40 称取食品级微晶纤维素80g， 在115干热灭菌1小时， 冷却备用。 0041 (4)副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂的制备： 将30g脱脂乳粉、 5g半乳 糖、 4g L-苹果酸混合均匀， 微波灭菌冷却配制成组合物A， 5g甘油、 30mL北虫草提取物和 26mL蒸馏水混合在110条件下湿热灭菌20min， 冷却配制成溶液B。 将A和B无菌条件下混合 均匀后配制成副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂100g。 0042 (5)一种副干酪乳杆菌常温真空干燥方法 0043 取上述副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂100g和副干酪乳杆菌湿菌泥 100g混合均匀， 再加入已灭菌微晶纤。

22、维素80g充分混合均匀后， 装入真空旋转蒸发仪中， 旋 转转速50rpm， 抽真空， 同时水浴加热至39， 保持3小时， 然后取出用粉碎机慢速粉碎， 装回 真空旋转蒸发仪中， 旋转80rpm， 抽真空， 温度31， 保持直至副干酪乳杆菌制剂干燥， 得到 粉状副干酪乳杆菌制剂C。 0044 (6)同时将副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂中的北虫草提取物用相同 量的蒸馏水代替， 其他配方和方法完全相同制备副干酪乳杆菌菌粉D， 与将本发明方法制备 的副干酪乳杆菌制剂C， 同时放4箱保存， 每个月检测一次活菌数， 共保存六个月， 做对比 保存试验。 结果见表2： 0045 表2保存试验结果 004。

23、6 0047 本次试验结果证明， 不加北虫草提取物制备的产品在保存过程中活菌数下降较 快， 通过本发明获得的副干酪乳杆菌菌粉4保存半年后的仍达到较高活菌数， 均高于 107cfu/g， 与不添加北虫草提取物制备的产品比较更稳定， 取得了较佳的干燥保存效果。 0048 实施例3 说明书 4/5 页 6 CN 104498360 B 6 0049 (1)称取干北虫草40克， 加入到2000mL蒸馏水中， 煮沸后倒入打浆机， 打浆， 98-100 下水解3小时； 过滤去渣、 滤液真空浓缩至7-8Brix， 即北虫草提取物； 0050 (2)副干酪乳杆菌湿菌泥制备： 用菌种Lactobacillus 。

24、paracasei R8经三级深层 发酵、 离心、 去上清收集湿菌泥。 0051 (3)副干酪乳杆菌常温真空干燥助剂的制备 0052 称取食品级微晶纤维素80g， 在115干热灭菌1小时， 冷却备用。 0053 (4)副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂的制备： 将15g脱脂乳粉、 2g半乳 糖、 1g L-苹果酸混合均匀， 微波灭菌冷却配制成组合物A， 1g甘油、 15mL北虫草提取物和 66mL蒸馏水混合在110条件下湿热灭菌20min， 冷却配制成溶液B。 将A和B无菌条件下混合 均匀后配制成副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂100g。 0054 (5)一种副干酪乳杆菌常温真空干燥。

25、方法 0055 取上述副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂50g和副干酪乳杆菌湿菌泥 100g混合均匀， 再加入已灭菌微晶纤维素120g充分混合均匀后， 装入真空旋转蒸发仪中， 旋 转转速30rpm， 抽真空， 同时水浴加热至33， 保持90min， 然后取出用粉碎机慢速粉碎， 装回 真空旋转蒸发仪中， 旋转40rpm， 抽真空， 温度28-30， 保持直至副干酪乳杆菌制剂干燥， 制 得副干酪乳杆菌制剂E。 0056 (6)同时将副干酪乳杆菌活菌制剂常温真空干燥保护剂配方中的北虫草提取物用 相同量的蒸馏水代替， 其他配方和方法完全相同制备副干酪乳杆菌菌粉F， 与将本发明方法 制备的副干酪乳杆菌制剂E， 同时放4箱保存， 每个月检测一次活菌数， 共保存六个月， 做 对比保存试验。 结果见表3： 0057 表3保存试验结果 0058 0059 本次试验结果证明， 不加北虫草提取物制备的产品在保存过程中活菌数下降较 快， 通过本发明方法获得的副干酪乳杆菌菌粉4保存半年后的仍达到较高活菌数， 均高于 107cfu/g， 与不添加北虫草提取物制备的产品比较更稳定， 取得了较佳的干燥保存效果。 说明书 5/5 页 7 CN 104498360 B 7 。