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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810519484.9 (22)申请日 2018.05.28 (71)申请人 江西农业大学 地址 330045 江西省南昌市昌北经济技术 开发区江西农业大学 (72)发明人 张清峰冯峰郑丹 (74)专利代理机构 南昌新天下专利商标代理有 限公司 36115 代理人 刘华 (51)Int.Cl. C07D 311/32(2006.01) C07D 311/40(2006.01) (54)发明名称 一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素 的方法 (57)摘要 本发明属公开了一种以。
2、土茯苓为原料制备 高纯度花旗松素的方法， 主要包括-环糊精水 溶液提取， 树脂吸附， 酸水解， 乙酸乙酯萃取和重 结晶等步骤。 通过本方法可将土茯苓中落新妇苷 转化为花旗松素， 经分离纯化后花旗松素纯度大 于98， 得率为0.35。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 108675978 A 2018.10.19 CN 108675978 A 1.一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法， 其特征在于： 依照以下步骤： (1)土茯苓粉碎后过40目筛， 按1公斤土茯苓加入10L质量浓度为0.251 -环糊精水 溶液(m/v)， 在20-40条件下搅拌提取30min， 经常规过滤获得提取。
3、液； 将料渣进行二次提 取， 合并提取液； (2)将步骤(1)所得提取液流过H103大孔树脂床， 进行吸附操作； (3)用5090乙醇进行洗脱操作， 收集洗脱液， 真空浓缩回收乙醇后得到解吸液； (4)往步骤(3)所得解吸液中加HCl至浓度为0.252mol/L， 并在6080水浴条件下 酸解0.54h； (5)酸解液放凉至室温后， 用NaOH调节pH至15， 用等体积乙酸乙酯萃取三次， 合并乙 酸乙酯， 真空浓缩至干。 贴壁残渣用少量热乙醇溶解后， 放置于4冰箱中结晶48h， 收集结 晶干燥后得到纯度为98的花旗松素。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108675978 A 2 一种以土茯。
4、苓为原料制备高纯度花旗松素的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法， 属医药领域。 背景技术 0002 花旗松素， 又名二氢槲皮素、 黄杉素、 紫杉叶素， 是一种二氢黄酮醇。 研究表明花旗 松素有多种显著的药理活性， 如具有非常强的抗氧化活性， 能保护红细胞避免氧化导致的 溶血； 有降 “三高” 作用， 可以用于心血管疾病和糖尿病的治疗； 花旗松素还具有抗菌、 抗病 毒、 抗辐射、 抗突变、 抗肿瘤等作用。 此外， 花旗松素无任何毒副作用， 是食品、 药品、 保健品 生产的珍贵原料。 俄罗斯已开发出以花旗松素和维生素C为主要功能成分的新药 Ascover。
5、tin， 并用于心血管疾病的治疗。 0003 花旗松素在紫杉、 黄杉、 落叶松等松科植物中含量较高， 但这些植物资源在我国较 为稀少和匮乏。 因为原料和生产工艺问题， 俄罗斯是目前花旗松素的主要生产和产品开发 国家。 因此， 市场上高纯度花旗松素价格非常昂贵。 0004 土茯苓是我国的常用中药， 其主要功效成分为黄酮 “落新妇苷” , 中国药典 要求 其在土茯苓中的含量0.45。 落新妇苷是花旗松素的鼠李糖苷， 在一定条件下可以水解生 成花旗松素。 我们通过实验优化了土茯苓中落新妇苷的水解条件， 并建立了水解液中花旗 松素的分离纯化方法。 本发明方法可以土茯苓为原料大量制备高纯度花旗松素， 拓。
6、展了土 茯苓的用途， 并为后续花旗松素产品的开发奠定了基础。 发明内容 0005 本发明在于提供一种以土茯苓为原料制备高纯度花旗松素的方法。 本发明方法是 通过以下步骤来实现的： 0006 (1)土茯苓粉碎后过40目筛， 按1公斤土茯苓加入10L质量浓度为0.251 -环糊 精水溶液(m/v)， 在20-40条件下搅拌提取30min， 经常规过滤获得提取液； 将料渣进行二 次提取， 合并提取液； 0007 (2)将步骤(1)所得提取液流过H103大孔树脂床， 进行吸附操作； 0008 (3)用5090乙醇进行洗脱操作， 收集洗脱液， 真空浓缩回收乙醇后得到解吸 液； 0009 (4)往步骤(3。
7、)所得解吸液中加HCl至浓度为0.252mol/L， 并在6080水浴条 件下酸解0.54h； 0010 (5)酸解液放凉至室温后， 用NaOH调节pH至15， 用等体积乙酸乙酯萃取三次， 合 并乙酸乙酯， 真空浓缩至干。 贴壁残渣用少量热乙醇溶解后， 放置于4冰箱中结晶48h。 收 集结晶干燥后得到纯度为98的花旗松素。 0011 为了达到更好的技术效果： 0012 作为优选， 步骤(1)所述 -环糊精水溶液的浓度为0.5(m/v)。 0013 作为优选， 步骤(2)所述H103大孔树脂床体积为1000ml， 柱床高度为80cm， 吸附流 说明书 1/3 页 3 CN 108675978 A。
8、 3 速为40ml/min。 0014 作为优选， 步骤(3)所述洗脱溶剂为75乙醇， 洗脱体积为3倍柱体积， 洗脱流速为 20ml/min。 0015 作为优选， 步骤(4)所述HCl浓度为1mol/L， 水解温度为80， 水解时间为1h。 0016 作为优选， 步骤(5)所述pH值为2。 0017 在以上技术方案中， 所述土茯苓是名称为土茯苓的中药材， 其本质为百合科植物 光叶菝葜的干燥根茎。 所述筛过物是指利用筛网筛分后， 粒径较小因而通过筛网的部分。 0018 本发明提供了一种以土茯苓为原料制备花旗松素的方法。 土茯苓中几乎不含天然 花旗松素， 但富含其鼠李糖苷化合物 “落新妇苷” 。。
9、 在这种情况下， 本发明通过酸水解将落新 妇苷转化为花旗松素， 并设计了前端的浸提条件以及后续的纯化方法。 0019 本发明的有益效果 0020 (1)提取花旗松素的常用原料为落叶松， 其生长受环境影响， 主要在我国东北和俄 罗斯分布， 并且生长周期非常长， 我国资源短缺。 而土茯苓是一种常见中药， 资源非常丰富。 0021 (2)在提取步骤中， 用 -环糊精水溶液代替常用的乙醇溶液， 在保证落新妇苷提取 效率的同时， 实现了绿色提取； 并且提取液直接上柱， 无需浓缩回收乙醇， 节约了能源； 0022 (3)H103树脂具有突出的吸附落新妇苷效果， 通过H103树脂柱对土茯苓提取液进 行浓缩和。
10、纯化， 减少了后续酸解时盐酸用量和能量消耗。 0023 (4)优化了酸解条件中盐酸浓度、 水解温度、 及水解时间， 让落新妇苷水解完全， 同 时尽量避免其结构被破坏分解， 提高花旗松素产率。 0024 (5)通过用NaOH调节酸解液pH值， 可以增加乙酸乙酯萃取对花旗松素的选择性， 去 除部分杂质， 再通过重结晶即可获得花旗松素纯品。 附图说明 0025 图1为土茯苓提取液酸水解前(a)和酸水解后(b)的高效液相液色谱图， 图中： 1号 峰为落新妇苷； 2号峰为花旗松素。 0026 图2是本发明具体实施方式中， 花旗松素产物的高效液相液色谱图。 具体实施方式 0027 以下将对本发明的具体实施。
11、方式进行详细描述。 为了避免过多不必要的细节， 在 以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。 0028 以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述， 表明在不改变基本功能的情 况下可允许数量有一定的变动。 因此， 用 “大约” 、“左右” 等语言所修正的数值不限于该准确 数值本身。 在一些实施例中，“大约” 表示允许其修正的数值在正负百分之十(10)的范围 内变化， 比如，“大约100” 表示的可以是90到110之间的任何数值。 此外， 在 “大约第一数值到 第二数值” 的表述中， 大约同时修正第一和第二数值两个数值。 在某些情况下， 近似性语言 可能与测量仪器的精度有关。 00。
12、29 除有定义外， 以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人 员普遍理解的相同含义。 0030 以下实施例中所用的试验试剂耗材， 如无特殊说明， 均为常规生化试剂； 所述实验 说明书 2/3 页 4 CN 108675978 A 4 方法， 如无特殊说明， 均为常规方法； 以下实施例中的定量试验， 均设置三次重复实验， 结果 取平均值； 以下实施例中的， 如无特别说明， 均为质量百分含量。 0031 实施例1 0032 (1)取1kg土茯苓粉碎过后40目筛， 加入10L的0.5 -环糊精水溶液， 在室温下搅 拌提取30min， 经200目的滤布过滤后得到提取液。 将滤渣进行二。
13、次提取， 合并滤液， 即得土 茯苓提取液。 经高效液相色谱法测定， 提取液中总共含有落新妇苷20.6g(图1a)。 0033 (2)H103树脂经常规净化操作后， 装入内径为4cm的树脂柱， 树脂柱床高为80cm， 柱 床体积为1000mL。 0034 (3)以40ml/min的流速使土茯苓提取液流过树脂柱， 进行吸附操作。 0035 (4)吸附操作结束后， 用3L 75的乙醇溶液以20ml/min的流速对树脂吸附的黄酮 进行洗脱； 收集洗脱液， 60减压回收乙醇后得到约500ml浓缩液。 0036 (5)往浓缩液中加浓盐酸， 盐酸最终浓度为1mol/L， 并在80水浴条件下酸解 60min。。
14、 经高效液相色谱法测定， 水解液中共含有花旗松素10.6g， 而落新妇苷含量为0(图 1b)。 0037 (6)酸解结束后， 将酸解液放凉至室温， 用NaOH调节pH至2， 用等体积乙酸乙酯萃取 三次， 合并乙酸乙酯， 60减压浓缩至干。 贴壁残渣用50ml热乙醇溶解后， 放置于4冰箱中 结晶48h。 收集结晶并干燥得到3.5g产物； 经HPLC分析产物中花旗松素纯度为98.6。 0038 对比例1 0039 取与实施例1同一批1kg土茯苓粉碎过后40目筛， 加入10L的0.25 -环糊精水溶 液， 吸附树脂采用的是D101树脂， 其余同实施例1。 收集结晶干燥得到2.8g产物， 经过HPLC分 析产物中花旗松素纯度为96.2。 说明书 3/3 页 5 CN 108675978 A 5 图1 图2 说明书附图 1/1 页 6 CN 108675978 A 6 。