一种改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌及其应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103571775 A (43)申请公布日 2014.02.12 CN 103571775 A (21)申请号 201310486445.0 (22)申请日 2013.10.17 CGMCC NO.3819 2010.05.07 C12N 1/20(2006.01) A23C 9/127(2006.01) C12R 1/46(2006.01) (71)申请人 哈尔滨工业大学 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市南岗区西大 直街 92 号 (72)发明人 韩雪 张兰威 冯镇 单毓娟 易华西 宋微 张英春 (54) 发明名称 一种改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌及 其应用。

2、 (57) 摘要 一种改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌及 其应用， 属于乳品加工领域。 本发明提供的产胞外 多糖乳酸菌菌株为嗜热链球菌 ZLW-TM11 菌株， 保 存于中国普通微生物菌种保藏中心， 其保藏编号 为CGMCC No.3819， 保藏日期为2010.5.7。 本发明 菌株产胞外多糖含量约为 43mg/L， 单菌发酵乳粘 度为 7716mPa/s， 可做为酸奶发酵剂应用于酸乳 中， 改善酸奶品质。 使用上述改善发酵乳黏度的产 胞外多糖菌 ZLW-TM11 制备的直投发酵剂应用到 发酵乳中， 可与发酵乳用任何一株菌或直投发酵 剂混合使用， 不改变原有发酵制品产酸速度及风 味， 且制得。

3、的产品中胞外多糖含量可达 40-45mg/ L， 产品具有很好的粘稠性， 无须添加明胶等增稠 剂。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103571775 A CN 103571775 A 1/1 页 2 1. 一 种 改 善 发 酵 乳 黏 度 的 产 胞 外 多 糖 乳 酸 菌， 其 分 类 命 名 为 嗜 热 链 球 菌 （Streptococcus thermophilus） ZLW-TM11 菌株， 保。

4、存于中国普通微生物菌种保藏中心， 保 藏编号为 CGMCC No.3819， 保藏日期为 2010.5.7。 2. 根据权利要求 1 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌， 其特征在于所述 ZLW-TM11 菌株产生的胞外多糖主要由鼠李糖、 甘露糖、 葡萄糖及半乳糖以 8-10: 4-5: 39-40: 45-47 的质量比组成， 其结构为 -D- 吡喃糖。 3. 根据权利要求 1 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌， 其特征在于所述 ZLW-TM11 菌株经 16S rRNA 基因测序的结果如附图 1 所示。 4. 一种权利要求 1 所述改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌的应用， 其特征。

5、在于所述 ZLW-TM11 菌株用于制备直投发酵剂的应用。 5. 根据权利要求 4 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌的应用， 其特征在于所 述制备直投发酵剂的过程为 ： 菌种恒温恒定 pH 发酵离心加入冻干保护剂产品， 具 体实施步骤如下 ： 将 ZLW-TM11 菌株按 3% 的接种量接种到增菌培养基中， 恒定发酵罐温度 41.5-43.5、 用 10-15wt.% 的氢氧化钠中和恒定发酵液 pH 值在 5.6-6.0， 发酵培养 4.0-4.7 小时 ； 然后在 0-20、 转数为 6000-15000 转 / 分钟的条件下离心处理， 得到离心沉淀物 ； （3） 按离心沉淀物重量的 。

6、1-2 倍添加冻干保护剂， 在无菌条件下均匀混合， 然后真空冷 冻干燥， 得到直投发酵剂。 6. 根据权利要求 5 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌的应用， 其特征在于所 述增菌培养基由 8-12vol.% 脱脂乳粉、 4-6vol.% 胰蛋白酶水解乳清粉、 3-6vol.% 番茄汁、 3-6vol.% 麦芽糖、 1-3vol.% 乳糖、 0.5-0.7vol.% 酵母膏或酵母粉、 40-80 mg/kg 毫克 / 公斤 甲酸和余量的水组成。 7. 根据权利要求 5 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌的应用， 其特征在于所 述冻干保护剂由 10-20vol.% 奶粉、 1-3vol.。

7、% 甘油、 1-2vol.% 维生素 C、 0.5-1vol.% 谷氨酸 或甘氨酸、 5vol.% 蔗糖、 1vol.% 海藻糖和余量的水组成。 8. 根据权利要求 4 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌的应用， 其特征在于所 述直投发酵剂应用到发酵乳发酵中。 9. 根据权利要求 8 所述的改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌的应用， 其特征在于所 述直投发酵剂按 0.03-0.05wt.接入到发酵乳中。 权 利 要 求 书 CN 103571775 A 2 1/5 页 3 一种改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌及其应用 技术领域 0001 本发明属于乳品加工领域， 涉及一株可改善发酵乳粘度的高。

8、产胞外多糖乳酸菌及 其应用。 背景技术 0002 目前发酵乳普遍存在的问题是， 经工业化生产后产品质地稀薄， 凝胶易断裂， 粘度 低， 乳清析出过多， 严重影响了发酵乳的品质， 因此许多乳品厂多向发酵乳中加入增稠剂来 提高发酵乳品质。然而增稠剂的使用不但会影响到产品的风味而且也不被消费者接受。尤 其是欧洲一些国家严禁使用的稳定剂。 因此如何稳定和提高酸奶制品的质量已成为我国乳 品生产面临的重大问题。 0003 众所周知， 在发酵乳发酵过程中某些特定的乳酸菌在生长过程中可以产生多种类 型的多糖， 根据这些多糖所处的位置， 可以分为荚膜多糖和分泌到生长环境中的多糖， 又称 为胞外多糖 （EPS） 。

9、。 正常发酵乳产生的EPS可以用作天然的生物增稠剂， 替代或减少增稠剂 的使用， 它还可以提高乳制品的保水性， 从而提高乳制品的保鲜度。 此外乳酸菌产生的胞外 多糖还可以降低胆固醇， 调节免疫力及抗肿瘤等功能性。因此获得高产胞外多糖的乳酸菌 菌株对改善发酵乳品质， 提高发酵乳营养作用具有重要意义。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一株可改善发酵乳粘度的高产胞外多糖菌株， 及该胞外多糖 菌株直投发酵剂的制备方法和应用。 0005 本发明提供的可改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌菌株， 分类命名为嗜热链球 菌 （Streptococcus thermophilus） ZLW-TM11 菌株， 。

10、保存于中国普通微生物菌种保藏中心 (CGMCC)， 地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号院中科院微生物研究所， 其保藏编号为 CGMCC No.3819， 保藏日期为2010年5月7日， 单菌发酵乳粘度可达7716mPa/s。 该菌株经16S rRNA 基因测序的结果如下 ： AGGCGGCTGGCTCCAAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGT GTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCGTGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGTAGGCGAGT TGCAGCCTA。

11、CAATCCGAACTGAGATTGGCTTTAAGAGATTAGCTCGCCGTCACCGACTCGCAACTCGTTGTACCAAC CATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTATTA CCGGCAGTCTCGCTAGAGTGCCCAACTGAATGATGGCAACTAACAATAGGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCC AACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACCGATGTAGCGAAGTAACTTTCTATCTCTA。

12、GA AATAGCATCGGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGC GGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTTCGG CACTGAATCCCGGAAAGGATCCAACACCTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTC GCTCCCCACGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGCCGCTTTCGCCACCGGTG。

13、TTCCTCCATATATC TACGCATTTCACCGTCACACATGGAATTCCACTCTCCCCTTCTGCACTCAAGTTTGACAGTTTCCAAAGCGAACTAT 说 明 书 CN 103571775 A 3 2/5 页 4 GGTTGAGCCACAGCCTTTAACTTCAGACTTATCAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGC TCGGGACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTCCCTTTCTGGTAAGCTACCGTCACAGTGTGAA CTTTCCACTCTCACACCCGT。

14、TCTTGACTTACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCTTCACTCACGCGGCGTTG CTCGGTCAGGGTTGCCCCCATTGCCGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCC AGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTATGTATCGTCGCCTAGGTGAGCCATTACCTCACCTACTAGCTAATAC AACGCAGGTCCATCTTGTAGTGGAGCAATTGCCCCTTTCAAATAAATGACATGTGTCATCCATTGTTATGCGGTATT AGCTATCG。

15、TTTCCAATAGTTATCCCCCGCTACAAGGCAGGTTACCTACGCGTTACTCACCCGTTCGCAACTCATCCA AGAAGAGCAAGCTCCTCTCTTCAGCGTTCTACTGCA。 0006 对本发明提供的菌株产生的胞外粗多糖采用 DEAE-52 离子交换层析柱上进行分 离纯化可得到三种中性多糖组分 EPS-1、 EPS-2、 EPS-3 及一种酸性多糖组分 EPS-4 （见图 1-2） ， 得到的四种组分进一步用 Superdex 200 分子筛凝胶柱纯化， 分别纯化出 ZLW-TM11-1 （纯度 89.35%） ， ZLW-TM11-2（纯度 92.49。

16、%） , ZLW-TM11-3（纯度 81.03%） 和 ZLW-TM11-4（纯 度 93.37%） （见图 3-6） 。对四种组分多糖对酸乳黏度影响其中多糖组分 ZLW-TM11-2 对酸 乳黏度供献最大。 0007 采用 GC-MS 对酸乳黏度供献较大的多糖组分 ZLW-TM11-2 的单糖组成分析， 得到 该组分多糖的单糖组成为鼠李糖、 甘露糖、 葡萄糖和半乳糖， 且比例为 8-10: 4-5: 39-40: 45-47 的质量比组成， 其结构为 -D- 吡喃糖。 0008 上述改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌 ZLW-TM11 可以用于制备直投发酵剂， 其生产工艺为 ： 菌种恒温恒定。

17、 pH 发酵离心加入冻干保护剂产品， 具体实施步骤如 下 ： （1） 将产胞外多糖乳酸菌 ZLW-TM11 菌株按 3% 的接种量接种到由 8-12vol.% 脱脂乳 粉、 4-6vol.% 胰蛋白酶水解乳清粉、 3-6vol.% 番茄汁、 3-6vol.% 麦芽糖、 1-3vol.% 乳糖、 0.5-0.7vol.% 酵母膏或酵母粉、 40-80 mg/kg 毫克 / 公斤甲酸和余量的水组成的增菌培 养基中， 恒定发酵罐温度 41.5-43.5、 用 10-15wt.% 的氢氧化钠中和恒定发酵液 pH 值在 5.6-6.0， 发酵培养 4.0-4.7 小时 ； （2） 然后在 0-20、 转。

18、数为 6000-15000 转 / 分钟的条件下离心处理， 得到离心沉淀物 ； （3） 按离心沉淀物重量的 1-2 倍添加冻干保护剂， 在无菌条件下均匀混合， 然后真空冷 冻干燥， 得到直投发酵剂， 所述冻干保护剂由10-20vol.%奶粉、 1-3vol.%甘油、 1-2vol.%维 生素 C、 0.5-1vol.% 谷氨酸或甘氨酸、 5vol.% 蔗糖、 1vol.% 海藻糖和余量的水组成。 0009 使用上述改善发酵乳黏度的产胞外多糖菌 ZLW-TM11 制备的直投发酵剂应用到发 酵乳发酵中的条件为 ： 取上述制得的直投发酵剂按鲜奶量的 0.03-0.05wt.接入到鲜奶 中， 可与发酵。

19、乳用任何一株菌混合， 也可与发酵乳用混合发酵剂混合接入鲜奶， 增加原有制 品的粘度， 提高制品保水性。 0010 本发明菌株产胞外多糖含量约为 43mg/L， 单菌发酵乳粘度为 7716 mPa/s， 可做 为酸奶发酵剂应用于酸乳中， 改善酸奶品质， 解决目前发酵乳产品粘稠度低、 保水性差的问 题。 0011 使用上述改善发酵乳黏度的产胞外多糖菌 ZLW-TM11 制备的直投发酵剂应用到 发酵乳中， 可与发酵乳用任何一株菌或直投发酵剂混合使用， 于 37-45培养， 发酵时间为 5-7h， 不改变原有发酵制品产酸速度及风味， 且制得的产品中胞外多糖含量可达 40-45mg/ 说 明 书 CN 。

20、103571775 A 4 3/5 页 5 L， 产品具有很好的粘稠性， 无须添加明胶等增稠剂。 附图说明 0012 图 1 为本发明乳酸菌 ZLW-TM11 胞外多糖粗品在 DEAE-52 离子交换层析柱上的水 洗中性多糖洗脱曲线图 ； 其中纵坐标为经过硫酸 - 苯酚比色法在 n=490nm 处的光吸收值 OD， 横坐标为试管号。 0013 图 2 为本发明乳酸菌 ZLW-TM11 胞外多糖粗品在 DEAE-52 离子交换层析柱上的盐 洗酸性多糖洗脱曲线图。 0014 图 3 为本发明乳酸菌 ZLW-TM11 胞外多糖洗脱峰 EPS-1 在 Superdex 200 分子筛凝 胶柱上的洗脱曲。

21、线图 ； 其中纵坐标为经过硫酸 - 苯酚比色法在 n=490nm 处的光吸收值 OD， 横坐标为试管号。 0015 图 4 为本发明乳酸菌 ZLW-TM11 胞外多糖洗脱峰 EPS-2 在 Superdex 200 分子筛凝 胶柱上的洗脱曲线图。 0016 图 5 为本发明乳酸菌 ZLW-TM11 胞外多糖洗脱峰 EPS-3 在 Superdex 200 分子筛凝 胶柱上的洗脱曲线图。 0017 图 6 为本发明乳酸菌 ZLW-TM11 胞外多糖洗脱峰 EPS-4 在 Superdex 200 分子筛凝 胶柱上的洗脱曲线图。 具体实施方式 0018 下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步的说。

22、明， 但并不局限如此， 凡是对 本发明技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的精神和范围， 均应涵 盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 均按照本领域常规 方法和条件。 0019 实施例 1 菌株的获得 ： 本发明中的乳酸菌 ZLW-TM11 是从采集的传统发酵乳中分离获得的， 将从传统发酵乳 中分离筛选的具有良好发酵风味的各乳酸菌菌株， 分别接入到 12% 的还原脱脂乳中， 发酵 至 pH4.6 后， 分别取各发酵乳样测定其发酵乳粘度和胞外多糖含量， 胞外多糖的提取采用 如下方法 ： （1） 将发酵后的发酵乳放在灭菌锅中， 100条件下串气 10mi。

23、n 灭酶活 ； （2） 将串气后的样品使用双层普通滤纸减压过滤除掉杂质 ； （3） 收集滤过液 4 6000-8000g 离心 15min ； （4） 收集上清， 使用 0.45m 的膜进行微滤 ； （5） 滤过液使用乙醇沉淀过夜， 比例 ： 乙醇 ： 样品 =3:1 ； （6） 弃上清， 18000-20000g 4离心 15min ； （7） 弃上清， 95热水浸提多糖 ； （8） 使用普通滤纸减压过滤， 除去不容物 ； （9） 使用 0.45m 和 0.22m 的膜过滤 ； （10） 使用分子量为 5000 的超滤膜在超滤系统中超滤， 直到滤过液 ： 截留液 =30:1 ； 说 明 书 。

24、CN 103571775 A 5 4/5 页 6 （11） 冻干得到粗多糖。 0020 提取的胞外多糖采用苯酚硫酸法测定， 从而筛选出一株产胞外多糖且发酵乳黏度 高的菌株。根据其生理生化特性及 16S rDNA 序列分析的结果， 经中国微物物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心 （CGMCC） 鉴定为 （Streptococcus thermophilus） ZLW-TM11 菌株， 并 进行了保藏， 保藏号为 CGMCC No.3819， 该菌株的微生物学特性如表 1 所示 ： 表 1（Streptococcus thermophilus ） ZLW-TM11 菌株理化试验结果 试验项目结果 。

25、试验项目结果试验项目结果 试验项目结果 革兰氏染色阳性 细胞形状球状、 椭圆形成芽孢-接触酶- 氧化酶-空气中生长+发酵葡萄糖产酸+15生长- 45生长+6.5NaCl% 生长-pH4.5 生长+pH9.6 生长- 葡萄糖+甘露糖-松三糖-果糖- 水杨苷-核糖-海藻糖-木糖- 鼠李糖-麦芽糖-乳糖+棉子糖- 山梨醇-蜜二糖-半乳糖-甘露醇- 阿拉伯糖-葡萄糖酸钠-蔗糖-纤维二糖- 七叶灵-苦杏仁苷- 实施例 2 改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌 ZLW-TM11 直投发酵剂的生产及应用 ： 采用两种层析柱分离纯化了 ZLW-TM11 产生的胞外多糖组分 （图 1-6） ， 得到了一种对酸 乳黏。

26、度供献较高的多糖组分， 采用红外光谱测定多糖组分得该产粘多糖主要由鼠李糖、 甘 露糖、 葡萄糖及半乳糖以 9: 4: 39.5: 45.8 的比例组成， 其结构为 -D- 吡喃糖。将保存 的嗜热链球菌ZLW-TM11 按3%的接种量， 接种到增殖培养基中， 增殖培养基由10%的灭菌脱 脂乳、 5%的胰蛋白酶水解乳清粉、 4%的番茄汁、 4%的麦芽糖、 2%乳糖、 0.5%的酵母膏或粉、 43 毫克/公斤甲酸和余量的水组成， 恒定发酵罐温度42、 用12%的氢氧化钠中和恒定发酵液 pH 值在 5.8， 发酵培养 4.3 小时 ； 然后在 4， 转数为 10000 转 / 分钟的条件下离心处理， 。

27、得 到离心沉淀物 ； 按离心沉淀物重量的 1 倍添加冻干保护剂， 冻干保护剂由 10% 奶粉、 1% 的甘 油、 1.5%的维生素C、 1%的谷氨酸或甘氨酸、 5%蔗糖、 1%的海藻糖和余量的水组成， 冻干保护 剂与菌体离心沉淀物按 1 ： 1 的比例在无菌条件下均匀混合， 然后真空冷冻干燥， 得到直投 发酵剂。将制得的直投发酵剂按鲜奶量的 0.03接入到鲜奶中， 同时接入科汉森直投发酵 剂 812， 42培养， 发酵时间为 5h， 制得发酵乳制品。 0021 实施例 3 改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌 ZLW-TM11 直投发酵剂的生产及应用 ： 将保存的嗜热链球菌 ZLW-TM11 按 。

28、3% 的接种量， 接种到增殖培养基中， 增殖培养基由 12% 的灭菌脱脂乳， 4% 的胰蛋白酶水解乳清粉， 5% 的番茄汁、 4% 的麦芽糖、 1% 乳糖、 0.7% 的 酵母膏或粉、 50 毫克 / 公斤甲酸和余量的水组成， 恒定发酵罐温度 43、 用 10% 的氢氧化钠 中和恒定发酵液 pH 值在 6.0， 发酵培养 4.5 小时 ； 然后在 10， 转数为 8000 转 / 分钟的条 件下离心处理， 得到离心沉淀物 ； 按离心沉淀物重量的 2 倍添加冻干保护剂， 冻干保护剂由 15%奶粉、 2%的甘油、 2%的维生素C、 0.8%的谷氨酸或甘氨酸、 5%蔗糖、 1%的海藻糖和余量的 水组。

29、成， 冻干保护剂与菌体离心沉淀物按 2 ： 1 的比例在无菌条件下均匀混合， 然后真空冷 冻干燥， 得到直投发酵剂。 将制得的直投发酵剂按鲜奶量的0.04接入到鲜奶中， 同时接入 保加利亚乳杆菌， 43培养， 发酵时间为 6h， 制得发酵乳制品。 说 明 书 CN 103571775 A 6 5/5 页 7 0022 序列表 哈尔滨工业大学 一种改善发酵乳黏度的产胞外多糖乳酸菌及其应用 1 1417 RNA 产胞外多糖乳酸菌 ZLW-TM11 16S rRNA 基因 1 aggcggctgg ctccaaaagg ttacctcacc gacttcgggt gttacaaact ctcgtgg。

30、tgt 60 gacgggcggt gtgtacaagg cccgggaacg tattcaccgc ggcgtgctga tccgcgatta 120 ctagcgattc cgacttcatg taggcgagtt gcagcctaca atccgaactg agattggctt 180 taagagatta gctcgccgtc accgactcgc aactcgttgt accaaccatt gtagcacgtg 240 tgtagcccag gtcataaggg gcatgatgat ttgacgtcat ccccaccttc ctccggttta 300 ttaccggcag tc。

31、tcgctaga gtgcccaact gaatgatggc aactaacaat aggggttgcg 360 ctcgttgcgg gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacaacc atgcaccacc 420 tgtcaccgat gtagcgaagt aactttctat ctctagaaat agcatcggga tgtcaagacc 480 tggtaaggtt cttcgcgttg cttcgaatta aaccacatgc tccaccgctt gtgcgggccc 540 ccgtcaattc ctttgagttt caaccttgcg 。

32、gtcgtactcc ccaggcggag tgcttaatgc 600 gttagcttcg gcactgaatc ccggaaagga tccaacacct agcactcatc gtttacggcg 660 tggactacca gggtatctaa tcctgttcgc tccccacgct ttcgagcctc agcgtcagtt 720 acagaccaga gagccgcttt cgccaccggt gttcctccat atatctacgc atttcaccgt 780 cacacatgga attccactct ccccttctgc actcaagttt gacagtttc。

33、c aaagcgaact 840 atggttgagc cacagccttt aacttcagac ttatcaaacc gcctgcgctc gctttacgcc 900 caataaatcc ggacaacgct cgggacctac gtattaccgc ggctgctggc acgtagttag 960 ccgtcccttt ctggtaagct accgtcacag tgtgaacttt ccactctcac acccgttctt 1020 gacttacaac agagctttac gatccgaaaa ccttcttcac tcacgcggcg ttgctcggtc 1080 a。

34、gggttgccc ccattgccga agattcccta ctgctgcctc ccgtaggagt ctgggccgtg 1140 tctcagtccc agtgtggccg atcaccctct caggtcggct atgtatcgtc gcctaggtga 1200 gccattacct cacctactag ctaatacaac gcaggtccat cttgtagtgg agcaattgcc 1260 cctttcaaat aaatgacatg tgtcatccat tgttatgcgg tattagctat cgtttccaat 1320 agttatcccc cgctacaagg caggttacct acgcgttact cacccgttcg caactcatcc 1380 aagaagagca agctcctctc ttcagcgttc tactgca 1417。 说 明 书 CN 103571775 A 7 1/2 页 8 图 1 图 2 图 3图 4 说 明 书 附 图 CN 103571775 A 8 2/2 页 9 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 103571775 A 9 。