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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811036257.7 (22)申请日 2018.09.06 (71)申请人 南昌大学 地址 330031 江西省南昌市红谷滩新区学 府大道999号 (72)发明人 刘玉环刘童莹王允圃巫小丹 彭红郑洪立向书玉艾力 曹雷鹏张锦胜 (74)专利代理机构 南昌新天下专利商标代理有 限公司 36115 代理人 施秀瑾 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种富硒灵芝菌丝粉的制备方法 (57)摘要 一。
2、种富硒灵芝菌丝粉的制备方法， 包括以下 步骤： 步骤1、 灵芝母种制备； 步骤2、 灵芝液态发 酵菌种制备； 步骤3、 灵芝固体发酵培养基制备； 步骤4、 灵芝培养与菌丝溶解； 步骤5、 富硒灵芝粉 制备。 本发明的优点：（1） 富硒灵芝菌粉的生产全 部建立在有机硒转化的基础上， 确保了硒源的绝 对安全；（2） 产品中不仅含有丰富的有机硒、 同时 还含有灵芝的功能性成分、 酶降解的各种多肽、 低聚糖类膳食纤维；（3） 本发明工艺中， 原料所含 的有机硒全部转化进入产品中， 有机硒转化利用 率较之于利用固体发酵获得富硒灵芝子实体的 生产工艺大大提高。 权利要求书1页 说明书3页 CN 10923。
3、4171 A 2019.01.18 CN 109234171 A 1.一种富硒灵芝菌丝粉的制备方法， 其特征是包括以下步骤： 步骤1、 灵芝母种制备： 从中国工业微生物菌种保藏管理中心购买灵芝菌株， 以PDA培养基进行活化； 使用活化 用PDA培养基配方如下： 去皮马铃薯200g （煮汁） ， VB10.01g/l、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 水 1000ml， 高压蒸汽灭菌， pH自然； 葡萄糖20g、 琼脂18g、 水1000ml， pH自然； 在30， 遮光培 养； 从活化好的优势菌落的边沿挖取菌丝， 接种到驯化培养基中； 使用驯化用斜面培养基 斜面培养基： 富硒高粱。
4、种子粉、 富硒螺旋藻粉各10g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 葡萄 糖5g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， pH自然； 在28， 遮光培养； 从驯化培养基中挑选长势旺盛的菌丝体接种到母种培养斜面上， 在1830下， 遮光培 养到菌丝铺满3/4斜面， 放入4冷藏柜， 避光保存备用； 母种斜面培养基： 富硒高粱种子粉、 富硒螺旋藻粉各15g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， pH自然； 步骤2、 灵芝液态发酵菌种制备： 在2000ml大锥形瓶中装如1200ml液。
5、体培养基， 接种3个母管驯化好的灵芝母种， 摇床上 以最小的摇动频率， 在2830下， 遮光培养， 直到形成密集的菌丝球即可用于固态发酵的 接种剂； 液体培养基配方： 富硒高粱种子粉、 富硒螺旋藻粉各15g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 葡萄糖5g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， 调节pH6.0； 步骤3、 灵芝固体发酵培养基制备： 灵芝固体发酵培养基配方： 富硒高粱种子粉6575份、 富硒螺旋藻粉2535份， 水3545 份， 充分混合均匀装入底部铺垫3层无菌纱布的不锈钢蒸笼中， 厚度4cm， 摊平覆盖3层无菌 纱布， 100蒸汽蒸煮3。
6、0min， 冷却， 搬入无菌培养室； 步骤4、 灵芝培养与菌丝溶解： 在无菌培养室中， 严格按照无菌接种要求， 掀开表层覆盖纱布、 向灭菌后的固体发酵培 养基中接种液态发酵菌种， 接种量为固体培养基重量的15%20%； 重新覆盖纱布； 在2830 下， 遮光培养到菌丝全面覆盖培养基， 整个过程持续35天； 将发酵充分的灵芝培养料装入灭菌好的陶瓷大罐中， 保鲜膜封口， 移入无菌加工车间 智能培养箱中， 把温度升高到45， 保温46小时， 酶解充分后， 立即转入热热风干燥箱中80 下鼓风干燥到含水率低于12%； 步骤5、 富硒灵芝粉制备： 将步骤4制备的灵芝干发酵料以锤片式粉碎机过80120目网；。
7、 再以超微粉碎机粉碎过 250300目筛网， 得到有机硒含量300500mg/kg的超微化富硒灵芝粉， 以100ml塑料瓶或棕 色玻璃瓶灌装密封； 产品可以用于食品有机硒的安全添加。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109234171 A 2 一种富硒灵芝菌丝粉的制备方法 技术领域 0001 本发明属于农产品精深加工技术领域， 涉及一种富硒灵芝粉的制备方法。 背景技术 0002 硒对人类健康非常有益， 但是无机硒利用率低、 毒性强。 植物和微生物都有吸收和 转化无机硒为有机硒的能力， 目前已知的有机硒主要残渣形态是硒代氨基酸以及带有硒代 氨基酸残基的蛋白质、 某些生物的多糖类中带有硫酸酯结构。
8、也可以发生硒代反应， 另外在 百合科植物中含有非蛋白态的含硫氨基酸， 也可以发生硒代反应， 目前也受到了关注。 0003 利用某些具有显著生理功能的食用菌的富硒特性来富集培养基中的有机态硒， 进 而将富硒食用菌超微化粉碎制备人类食品的富硒添加剂一直是食品行业关注的热点。 例如 中国发明专利一种富含有机硒的产品配方及其工艺 CN201710280008.1 是将200300ppm 的的亚硒酸钠溶液喷撒在粉碎的桑葚枝条粉上， 配置食用菌培养基， 待食用菌子实体收获 后烘干超微粉碎而成。 但是实际上高浓度的亚硒酸钠对食用菌的生长是有害的， 其子实体 生产效率低。 0004 在藻类中， 螺旋藻富硒能力。
9、最强， 多次添加微量亚硒酸钠的情况下， 螺旋藻干粉硒 积累量可以达到接近2900mg/kg， 其中既有存在于硒代氨基酸、 含有硒代氨基酸的多肽、 蛋 白质中的有机硒、 也有以硒酸盐酯键结合在多糖上的有机硒。 这些形态的有机硒对于微生 物、 动物都具有毒性低、 可利用率高的特点。 0005 在食用 （药用） 真菌中， 灵芝属于名贵中药材中的上品， 具有滋补强壮、 固本扶正的 功效， 俗称仙草。 灵芝的富硒能力最强， 在培养条件合适的情况下， 灵芝菌丝的硒积累量可 以达到接近3000mg/kg， 灵芝还能够在高粱的种子上很好的生长。 发明内容 0006 本发明的目的是提出一种富硒灵芝菌丝粉的制备方。
10、法， 利用灵芝对硒的富集能力 超强， 而且能够在高粱种子上很好的生长的特性， 以富硒高粱种子、 富硒螺旋藻粉制作灵芝 固体发酵培养基， 接种灵芝并当菌丝长满培养容器之后， 升温促进灵芝菌丝自溶， 释放蛋白 分解酶、 纤维素酶和淀粉酶对培养基中大分子物质进行降解， 获得高吸收效率的有机硒和 大量灵芝功能性成分。 直接烘干和粉碎即可制备口感很好的富硒食品添加剂。 0007 本发明是通过以下技术方案实现的。 0008 本发明所述的一种富硒灵芝菌丝粉的制备方法， 包括以下步骤。 0009 步骤1、 灵芝母种制备。 0010 从中国工业微生物菌种保藏管理中心购买灵芝菌株， 以PDA培养基进行活化。 使用。
11、 活化用PDA培养基配方如下： 去皮马铃薯200g （煮汁） ， VB10.01g/l、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 水 1000ml， 高压蒸汽灭菌， pH自然。 葡萄糖20g、 琼脂18g、 水1000ml， pH自然。 在30， 遮光培 养。 0011 从活化好的优势菌落的边沿挖取菌丝， 接种到驯化培养基中。 使用驯化用斜面培 说明书 1/3 页 3 CN 109234171 A 3 养基斜面培养基： 富硒高粱种子粉、 富硒螺旋藻粉各10g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 葡萄糖5g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， 。
12、pH自然。 在28， 遮光培养。 0012 从驯化培养基中挑选长势旺盛的菌丝体接种到母种培养斜面上， 在1830下， 遮 光培养到菌丝铺满3/4斜面， 放入4冷藏柜， 避光保存备用。 母种斜面培养基： 富硒高粱种 子粉、 富硒螺旋藻粉各15g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽 灭菌， pH自然。 步骤2、 灵芝液态发酵菌种制备。 0013 在2000ml大锥形瓶中装如1200ml液体培养基， 接种3个母管驯化好的灵芝母种， 摇 床上以最小的摇动频率， 在2830下， 遮光培养， 直到形成密集的菌丝球即可用于固态发 酵的。
13、接种剂。 液体培养基配方： 富硒高粱种子粉、 富硒螺旋藻粉各15g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 葡萄糖5g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， 调节pH6.0。 0014 步骤3、 灵芝固体发酵培养基制备。 0015 灵芝固体发酵培养基配方： 富硒高粱种子粉6575份、 富硒螺旋藻粉2535份， 水35 45份， 充分混合均匀装入底部铺垫3层无菌纱布的不锈钢蒸笼中， 厚度4cm， 摊平覆盖3层无 菌纱布， 100蒸汽蒸煮30min， 冷却， 搬入无菌培养室。 0016 步骤4、 灵芝培养与菌丝溶解。 0017 在无菌培养室中， 严格按照无菌。
14、接种要求， 掀开表层覆盖纱布、 向灭菌后的固体发 酵培养基中接种液态发酵菌种， 接种量为固体培养基重量的15%20%。 重新覆盖纱布。 在28 30下， 遮光培养到菌丝全面覆盖培养基， 整个过程持续35天。 0018 将发酵充分的灵芝培养料装入灭菌好的陶瓷大罐中， 保鲜膜封口， 移入无菌加工 车间智能培养箱中， 把温度升高到45， 保温46小时， 酶解充分后， 立即转入热热风干燥箱 中80下鼓风干燥到含水率低于12%。 0019 步骤5、 富硒灵芝粉制备。 0020 将步骤4制备的灵芝干发酵料以锤片式粉碎机过80120目网； 再以超微粉碎机粉 碎过250300目筛网， 得到有机硒含量30050。
15、0mg/kg的超微化富硒灵芝粉， 以100ml塑料瓶 或棕色玻璃瓶灌装密封。 产品可以用于食品有机硒的安全添加。 0021 本发明的优点。 0022 （1） 富硒灵芝菌粉的生产全部建立在有机硒转化的基础上， 确保了硒源的绝对安 全。 0023 （2） 产品中不仅含有丰富的有机硒、 同时还含有灵芝的功能性成分、 酶降解的各种 低聚糖类、 多肽等膳食纤维。 0024 （3） 本发明工艺中， 原料所含的有机硒全部转化进入产品中， 有机硒转化利用率较 之于利用固体发酵获得富硒灵芝子实体的生产工艺大大提高。 具体实施方式 0025 本发明将通过以下实施例作进一步说明。 0026 实施例1。 0027 一。
16、种以富硒灵芝粉生产方法， 其主要工艺步骤包括： 步骤1、 灵芝母种制备。 说明书 2/3 页 4 CN 109234171 A 4 0028 从中国工业微生物菌种保藏管理中心购买灵芝菌株CICC 14002， 以PDA培养基进 行活化。 使用活化用PDA培养基配方如下： 去皮马铃薯200g （煮汁） ， VB10.01g/l、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， pH自然。 葡萄糖20g、 琼脂18g、 水1000ml， pH自然。 在 30， 遮光培养。 0029 从活化好的优势菌落的边沿挖取菌丝， 接种到驯化培养基中。 使用驯化用斜面培 养基斜面。
17、培养基： 富硒高粱种子粉、 富硒螺旋藻粉各10g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 葡萄糖5g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， pH自然。 在28， 遮光培养。 0030 从驯化培养基中挑选长势旺盛的菌丝体接种到母种培养斜面上， 在28下， 遮光 培养到菌丝铺满3/4斜面， 放入4冷藏柜， 避光保存备用。 母种斜面培养基： 富硒高粱种子 粉、 富硒螺旋藻粉各15g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭 菌， pH自然。 步骤2、 灵芝液态发酵菌种制备。 0031 在20。
18、00ml大锥形瓶中装如1200ml液体培养基， 接种3个母管驯化好的灵芝母种， 摇 床上以最小的摇动频率， 在28下， 遮光培养， 直到形成密集的菌丝球即可用于固态发酵的 接种剂。 液体培养基配方： 富硒高粱种子粉、 富硒螺旋藻粉各15g、 VB10.01g、 MgSO40.2g、 KH2PO41.0g、 葡萄糖5g、 琼脂18g、 水1000ml， 高压蒸汽灭菌， 调节pH6.0。 0032 步骤3、 灵芝固体发酵培养基制备。 0033 灵芝固体发酵培养基配方： 富硒高粱种子粉65份、 富硒螺旋藻粉35份， 水40份， 充 分混合均匀装入底部铺垫3层无菌纱布的不锈钢蒸笼中， 厚度4cm， 摊。
19、平覆盖3层无菌纱布， 100蒸汽蒸煮30min， 冷却， 搬入无菌培养室。 0034 步骤4、 灵芝培养与菌丝溶解。 0035 在无菌培养室中， 严格按照无菌接种要求， 掀开表层覆盖纱布、 向灭菌后的固体发 酵培养基中接种液态发酵菌种， 接种量为固体培养基重量的20%。 重新覆盖纱布。 在28下， 遮光培养到菌丝全面覆盖培养基， 整个过程持续5天。 0036 将发酵充分的灵芝培养料装入灭菌好的陶瓷大罐中， 保鲜膜封口， 移入无菌加工 车间智能培养箱中， 把温度升高到45， 保温6小时， 酶解充分后， 立即转入热热风干燥箱中 80下鼓风干燥到含水率低于12%。 0037 步骤5、 富硒灵芝粉制备。 0038 将步骤4制备的灵芝干发酵料以锤片式粉碎机过120目网； 再以超微粉碎机粉碎过 250目筛网， 得到有机硒含量900mg/kg的超微化富硒灵芝菌粉， 以100ml塑料瓶或棕色玻璃 瓶灌装密封。 产品可以用于食品有机硒的安全添加。 说明书 3/3 页 5 CN 109234171 A 5 。