N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺及其制法 本发明涉及一种新的化合物N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺及其合成方法，本发明还涉及所述化合物的药物新用途，属于药物领域。
内皮素是国际上最新报道的一种生物活性物质。许多心脑血管疾病的发生发展与内皮素有着密切的关系，如高血压、冠心病、脑血管意外、心力衰竭等，内皮素参与这些疾病的病理、生理过程。许多国家已经把内皮素作为高血压、冠心病、脑血管意外、心力衰竭等疾病的一项病理指标，并通过调节内皮素的生物作用来治疗上述疾病。另外内皮素还与其他疾病如器官移植后的慢性排异反应、子痫、肝炎等有关。因此，筛选一种能够拮抗内皮素生物活性的药物是目前非常重要而有意义的事情。发明人在筛选拮抗内皮素生物活性药物的实验过程中，发现了一种新的物质结构，并研究出了四种合成该化合物的方法，从而完成了本发明。
因此，本发明目的是提供一种新的化学物质N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺。
本发明的另一个目的是提供N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺的四种制备方法。
本发明的另一个目的是提供了N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺的新制药用途。
对本发明发现的新物质，通过化学实验方法进行了鉴定，熔点用WRS-1型数字熔点仪测定(上海物理光学仪器厂生产，温度未经校正)；质谱仪为VG ZabSpec型高分辨磁质谱；FAB：反应基质为甘油。核磁共振仪为JNM-GX400型。各种硅胶均为青岛海洋化工厂产品；试剂、溶剂均为市售AR级。测定结果为：熔点180.2-182.5℃。1HNMR(DMSO-d6)δ：2.17(3H，s，＝C-CH3)，3.08(3H，s，N-CH3)，3.82(3H，s，CH3O)，6.82-7.54(10H，m，Ph-8H，CH＝CH)，9.19(1H，s，NH)。MS m/e(％)：401.1(M-1+Na，43)，380.1(M+1，17)，317.2(14)，276.1(14)，225.1(100)，185.3(19)。
根据上述实验结果得出结论，本发明新化合物的化学结构式为：
化学名称为：N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺。
发明人通过实验研究，发明了制备本发明新化合物的四种方法，它们分别是用N，N-二环己基碳二酰亚胺(DCC)法、酰氯法、活性酯法和六甲基磷酰三胺(HMPT)/SOCl2法制备N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺。
发明人通过药理实验研究，证明了本发明的新化合物具有拮抗内皮素地新用途，包括N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺在制备对内皮素引起小鼠急性死亡的保护作用的药物中的应用；N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺在制备对内皮素引起缩血管效应具有拮抗作用的药物中的应用；N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺在制备对内皮素引起升血压效应具有拮抗作用的药物中的应用；N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺在制备对内皮素引起的血管平滑肌增殖效应具有拮抗作用的药物中的应用。
下面通过实施例和实验例的方式，对本发明化合物的制备方法和药物新用途进行更为详细的描述。
实施例1 N，N-二环己基碳二酰亚胺(DCC)法制备N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺
将4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(阿魏酸)194.2mg(1mmol)，4-氨基安替比林203.3mg(1mmol)，N，N-二环己基碳二酰亚胺(DCC)226mg(1.1mmol)，加8ml无水THF溶解，反应体系呈棕色透明液，搅拌过夜。滤除白色固体二环己基脲(DCU)，减压除THF，用60ml乙酸乙酯溶解剩余物，分别用10％NaHCO3、水、15％HCl和水洗涤，洗完后即出现黄色固体沉淀。滤出，丙酮-乙酸乙酯重结晶得黄色粉状固体345mg。
实施例2 酰氯法制备N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺
取4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(阿魏酸)194.2mg(1mmol)，，加无水CH2Cl2溶解后搅拌下滴加SOCl2约150μl(1.2mmol)，室温搅拌4小时，水泵减压除溶剂等，产物呈粘稠状固化物。加10ml CH2Cl2溶解，并加入4-氨基安替比林203.3mg(1mmol)，室温搅拌4小时，经常规处理得到白色粉状固体312mg，熔点180.4-182.5℃，产率82％。
实施例3 六甲基磷酰三胺(HMPT)/SOCl2法制备N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺
取4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(阿魏酸)194.2mg(1mmol)，加六甲基磷酰三胺(HMPT)5ml和SOCl2约150μl(1.2mmol)，冰盐浴下搅拌反应3小时，随后加入4-氨基安替比林203.3mg(1mmol)，继续反应2小时，此后经常规处理得到白色粉状固体338mg，熔点179.8-181.6℃，产率89％。
实施例4 对硝基苯酯法制备N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺
取4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(阿魏酸)194.2mg(1mmol)，加对硝基苯酚139mg(1mmol)，三氯氧磷(POCl3)50mg，干燥苯15ml将反应物溶解后加热搅拌反应2小时，TLC检测表明已形成对硝基苯酯。加入4-氨基安替比林203.3mg(1mmol)，继续反应2小时，经常规处理得到白色粉状固体326mg，熔点180.8-182.3℃，产率86％。
实施例5 制备含有N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺的片剂
配方(每片含量)
N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺 40mg
淀粉 20mg
藻酸 20mg
藻酸钠 20mg
硬脂酸镁 1.3mg
片剂的制备方法：
在混合搅拌器中将前4种组分混合；向上述混合物中分批加入足量的水，每次加水后充分混合，直至混合达到粘性状态，以便制成湿粒；用造粒机造粒；在干燥箱中将湿粒60℃干燥至干，用硬脂酸镁润滑干燥颗粒，入压片机压片。
.实验例1 N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺对内皮素(ET-1)引起缩血管相应的拮抗作用实验研究
雄性SD大鼠，体重230±10g，将大鼠击昏后快速摘取胸主动脉，经分离结缔组织后，剪成2～3mm宽的血管环，分别置于KrebsHenseleit生理溶液(K-H液，pH7.40±0.05，95％O2+5％CO2，37.0±0.5℃)中，加2g基础张力、用10-7mol/L去甲肾上腺素预激二次、平衡、稳定后，加入ET-1 10-9mol/L，待达到最大收缩效应后，加入不同浓度的N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺(用2％DMSO为溶媒，实验用2％DMSO作对照)，经张力换能器连台式平衡记录仪(上海大华仪表厂)，记录血管等张收缩与舒张情况。
N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺能明显地拮抗ET-1的缩血管效应，且给拮抗作用具剂量依赖性；药物剂量-效应曲线经sigmiodal方法拟合后，得N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺拮抗ET-1缩血管效应动力学参数(参见表1和图1)。
表1.N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺拮抗ET-1缩血管效应动力学参数药物 动力学参数
Emax(％) IC50(×10-8mol/L)
92.1±32.8 6.33±0.74
实验例2 N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺对ET-1致血管平滑肌细胞增殖效应的拮抗作用
取第5代已长成致密单层的兔主动脉平滑肌细胞(RAVSMC)以传代培养法调整细胞数为1×105·ml-1，接种于96孔培养板(100μ1·孔-1)，37℃、5％CO2孵育24h，吸去培养液，换以1％小牛血清的DMEM培养液，加入ET-1(10nmol·L-1)后继续孵育不同时间后，得到ET-1作用与RAVSMC的时间-效应曲线；加入N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺后考察其对ET-1致平滑肌细胞的增殖作用。以结晶紫染色后用酶标检测仪在570nm处测定各孔光密度(OD)值。6.1 细胞形态观察
经结晶紫固定染色的培养板晾干后，直接在倒置显微镜下观察，未见明显的细胞形态改变。6.2 ET-1刺激RAVSMC增殖的时间-效应关系
表2.ET-1引起RAVSMC增殖的时间效应
时间 增殖率
(d) (％)
1 33.3±25.0**
2 50.0±13.6***
7 40.0±9.28**
*p＞0.05；**p＜0.05；***p＜0.01
由表可见，ET-1可刺激RAVSMC增殖，于第2天达峰值，第1、2和第7天的数值与对照组相比，细胞增殖率的增加有显著性意义；该作用呈时间依赖性。6.3 观察N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺拮抗ET-1引起RAVSMC增殖的作用
根据ET-1引起RAVSMC增殖的时间-效应关系，将10nmol·L-1ET-1与N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺共孵第2天测定OD(570nm)值，结果见表3。表3.N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺对ET-1引起RAVSMC增殖的抑制作用
组别 OD值(×102)
10-11 10-10 10-9 10-8
空白 1.6±0.5
ET-1 2.4±0.2ΔN4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺 2.0±0.8*** 1.8±0.7** 1.7±0.3*** 1.2±0.2***Δ与空白组相比，与对照组相比*p＞0.05；**p＜0.05；***p＜0.01
由表3可见，N4-安替比林基-4羟基-3-甲氧基肉桂酰胺可显著性地拮抗ET-1引起的RAVSMC增殖，且该作用具剂量依赖性。