技术领域
本发明属于分离纯化技术领域，涉及一种巨大戟醇及其制备方法。
背景技术
Picato凝胶是目前第一个也是唯一一个可用于治疗日光性角化病(AK)的制剂，对皮肤癌的早期发现和治疗有一定的作用，该制剂市场前景广阔。Picato凝胶的主要成分为巨大戟醇甲基丁烯酸酯，其主要获取途径是由来源于植物续随子种子中的巨大戟醇和当归酸苷合成而来。巨大戟醇的制备目前已有相关文献进行报道，但制备规模都停留在实验室阶段，工业化制备成本较高。
例如，CN 103694096 A公开了一种巨大戟醇单体的分离纯化方法，该发明是以大戟科大戟属传统中药千金子为原料，通过乙醇溶液提取、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析、甲醇溶解过滤、高效制备液相色谱分离、产品回收得到巨大戟醇单体。该发明虽然能够实现巨大戟醇单体的分离纯化，但是利用该分离方法，20kg的原料只能获得0.33克左右的巨大戟醇单体产品，产率较低，而且在分离纯化过程中必须应用高效制备液相色谱进行分离，仪器比较贵重，成本较高，对操作人员的操作技术具有一定要求，高效制备液相色谱的进样量较小，不适合大规模的工业生产。
CN 103974926 A公开了一种分离巨大戟醇的方法，该方法将水解巨大戟醇酯和从所述混合物中提取/分离巨大戟醇的阶段合并于单一步骤中，所述方法包括以下步骤：a)将植物原料在甲醇钠的甲醇溶液中进行机械搅拌；b)用冰醋酸或高氯酸溶液中和前面的反应；c)过滤或抽滤前面的溶液；d)用甲醇洗涤剂前一阶段得到的沉淀物；e)利用真空技术浓缩所述沉淀物；f)用石油醚从沉淀物中提取含有巨大戟醇酯的级分；g)利用酸化的水和THF处理，从前面阶段f)得到的级分中包含的剩余化合物中分离巨大戟醇；h)任选地纯化分得的巨大戟醇。该发明虽然能够实现巨大戟醇的分离，但是其步骤较复杂，步骤a水解效率低下，需使用大量强碱溶液并且在分离过程中用到大量THF这种高挥发性的有毒溶剂，易对人体造成损害，对环境造成污染，不适合于工业生产，不符合绿色环保的要求，并且在利用重力硅胶柱色谱进行产品的纯化过程中需要用梯度石油醚-乙酸乙酯进行洗脱，溶剂无法回收再用，成本较高，不利于工业化生产，并且产品纯度要达到99％以上，要经过多次硅胶柱分离，多次梯度洗脱才能实现。
因此，在本领域中，需要开发一种可应用于工业化生产的巨大戟醇的制备方法。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种巨大戟醇及其制备方法。该方法可用于工业化生产，制备方法简单，产率高，产品纯度高。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种巨大戟醇的制备方法，所述方法以续随子种子为原料，经提取、萃取、水解反应以及硅胶柱层析制备得到巨大戟醇。
本发明先提取出含有巨大戟醇及巨大戟醇酯的成分，而后对提取液进行萃取，去除掉提取液中能够溶于石油醚的杂质成分，而后利用水解反应使巨大戟醇酯水解转化成巨大戟醇，这一方面能够避免提取液中存在的与巨大戟醇酯结构类似的成分进行水解而生成比较难与巨大戟醇分离的成分，加重后续分离的困难，其次将巨大戟醇酯转化成巨大戟醇，提高了巨大戟醇的含量，经过柱层析色谱的纯化能够制备得到纯度较高的巨大戟醇产品。
本发明所述的巨大戟醇的制备方法包括以下步骤：
(1)将续随子种子粉碎，加入甲醇，冷浸提取；
(2)向步骤(1)的提取液中加入石油醚进行萃取，取下层甲醇溶液，浓缩得浓缩物；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入强碱溶液，搅拌反应，反应结束后加入弱酸进行中和，而后浓缩得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品溶于甲醇中，加入硅胶拌样，进行第一次硅胶柱层析分离，收集富含巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将步骤(3)浓缩后的样品溶于甲醇，加入硅胶拌样，进行第二次硅胶柱层析分离，收集富含巨大戟醇的流分，得到巨大戟醇。
本发明所述的巨大戟醇的制备方法中，步骤(1)所述甲醇的加入量按体积/质量计为续随子种子质量的2～5倍，例如2倍、3倍、4倍或5倍。
优选地，步骤(1)加入甲醇冷浸提取2～5次，例如冷浸提取2次、3次、4次或5次，每次6～12小时，例如每次6.5小时、7小时、7.5小时、8小时、8.5小时、9小时、10小时、11小时或12小时，合并提取液。
在本发明中，可以将步骤(1)得到的提取液浓缩，目的是去除一部分甲醇，回收甲醇进行重复利用，另外，通过浓缩减少提取液的体积，使得提取物浓度增加，以便在而后的萃取中使用较少的萃取溶剂来完成萃取。
本发明所述的巨大戟醇的制备方法中，步骤(2)所述石油醚与提取液的体积比为1～5:1，例如1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1或5:1。
优选地，步骤(2)所述萃取的次数为2～5次，例如2次、3次、4次或5次。
优选地，将步骤(2)所得下层甲醇溶液减压浓缩得浓缩物。
本发明所述的巨大戟醇的制备方法中，步骤(3)所述强碱为氢氧化锂、氢氧化钾或氢氧化钠中的任意一种或至少两种的组合，优选氢氧化锂；氢氧化锂反应选择性好，使得产物杂质含量低，巨大戟醇收率高。
优选地，步骤(3)所述强碱溶液的浓度为0.1～0.5mol/L，例如0.1mol/L、0.15mol/L、0.2mol/L、0.25mol/L、0.3mol/L、0.35mol/L、0.4mol/L、0.45mol/L或0.5mol/L，优选0.2mol/L。
优选地，步骤(3)所述强碱溶液的加入量按体积/质量计为浓缩物质量的5～10倍，例如5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
优选地，步骤(3)所述反应的时间为10～15小时，例如10小时、10.5小时、11小时、11.3小时、11.5小时、11.8小时、12小时、12.5小时、12.8小时、13小时、13.5小时、13.8小时、14小时、14.3小时、14.5小时、14.8小时或15小时，优选12小时。
优选地，步骤(3)所述弱酸为醋酸、柠檬酸或枸橼酸中的任意一种或至少两种的组合，优选醋酸。
优选地，步骤(3)所述弱酸与强碱的摩尔比≥1:1，例如1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1或5:1等。
本发明所述的巨大戟醇的制备方法中，步骤(4)和步骤(5)所述用于拌样的硅胶与样品的质量比为0.5～1:1，例如0.5:1、0.6:1、0.7:1、0.8:1、0.9:1或1:1。
本发明所述的巨大戟醇的制备方法中，步骤(4)和步骤(5)所述硅胶柱层析分离所用的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合液，二氯甲烷与甲醇体积比为20～40:1，例如20:1、22:1、25:1、28:1、30:1、32:1、35:1、38:1或40:1，优选30:1。
优选地，步骤(4)所述第一次硅胶柱层析分离所用样品与层析硅胶的质量比为1:3～10，例如1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、1:5、1:5.5、1:6、1:6.5、1:7、1:7.5、1:8、1:8.5、1:9、1:9.5或1:10，优选1:5。
优选地，和步骤(5)所述第二次硅胶柱层析分离所用样品与层析硅胶的质量比为1:30～60，例如1:30、1:35、1:38、1:40、1:43、1:45、1:48、1:50、1:52、1:55、1:58或1:60，优选1:40。
本发明所用的硅胶柱层析为正相色谱，避免了使用高压反相层析系统，降低成本，简化了分离步骤。
本发明使用的柱层析硅胶均为200～300目的硅胶。
利用本发明的方法制备得到巨大戟醇之后，可以利用分析型高效液相色谱进行检测得到的产品的纯度，样品浓度1mg/ml，进样体积10μL，柱温30℃，检测波长210nm，C18色谱柱，色谱条件为：A相水，B相乙腈，0～20min 30％B-35％B；20～60min 35％B-100％B。经检测发现本发明可以制备得到纯度大于98％的巨大戟醇。
作为本发明的优选技术方案，本发明所述的巨大戟醇的制备方法包括以下步骤：
(1)将续随子种子粉碎，加入按体积/质量计为续随子种子质量的2～10倍的甲醇，冷浸提取2～5次，每次6～12小时，合并提取液；
(2)向步骤(1)提取液中加入与提取液的体积比为1～5:1的石油醚萃取2～5次，取下层甲醇溶液，浓缩得浓缩物；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入按按体积/质量计为浓缩物质量的3～10倍的0.1～0.5mol/L的氢氧化锂溶液，搅拌反应10～15小时，反应结束后加入与氢氧化锂的摩尔比≥1:1的醋酸进行中和，而后浓缩得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品溶于甲醇中，加入与样品的质量比为0.5～1:1的硅胶拌样，利用体积比为20～40:1的二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相进行第一次硅胶柱层析分离，所用样品与层析硅胶的质量比为1:3～10，收集富含巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将步骤(4)浓缩后的样品溶于甲醇，加入与样品的质量比为0.5～1:1的硅胶拌样，利用体积比为20～40:1的二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相进行第二次硅胶柱层析分离，所用样品与层析硅胶的质量比为1:30～60收集富含巨大戟醇的流分，得到巨大戟醇。
作为本发明进一步优选的技术方案，本发明所述的巨大戟醇的制备方法包括以下步骤：
(1)将续随子种子粉碎，加入按体积/质量计为续随子种子质量的2～10倍的甲醇，冷浸提取2～5次，每次6～12小时，合并提取液；
(2)向步骤(1)提取液中加入与提取液的体积比为1～5:1的石油醚萃取2～5次，取下层甲醇溶液，浓缩得浓缩物；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入按按体积/质量计为浓缩物质量的3～10倍的0.2mol/L的氢氧化锂溶液，搅拌反应12小时，反应结束后加入与氢氧化锂的摩尔比≥1:1的醋酸进行中和，而后浓缩得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品溶于甲醇中，加入与样品的质量比为0.5～1:1的硅胶拌样，利用体积比为20～40:1的二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相进行第一次硅胶柱层析分离，所用样品与层析硅胶的质量比为1:5，收集富含巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将步骤(4)浓缩后的样品溶于甲醇，加入与样品的质量比为0.5～1:1的硅胶拌样，利用体积比为30:1的二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相进行第二次硅胶柱层析分离，所用样品与层析硅胶的质量比为1:40收集富含巨大戟醇的流分，得到巨大戟醇。
另一方面，本发明提供了如第一方面所述的制备方法制备得到的巨大戟醇。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明的整个制备工艺使用的溶剂种类较少，提取溶剂和萃取溶剂均为甲醇，溶剂可以反复利用，降低了生产成本，简化了生产工艺。本发明方法利用强碱进行巨大戟醇酯化物的水解反应，通过此反应可以将巨大戟醇的酯化物转化为巨大戟醇，简化了分离工艺。本发明方法利用简单的硅胶柱层析正相色谱分离即可获取纯度大于98％的巨大戟醇，避免使用高压反相层析系统，简化了分离条件。利用本发明的制备方法可以实现巨大戟醇的工业制备，在提取、萃取和水解反应后只需进行两次柱层析就可以实现较高的制备产率，使得产物纯度达到98％以上。
附图说明
图1为实施例1制得的巨大戟醇的核磁共振1H谱图；
图2为实施例1制得的巨大戟醇的核磁共振13C谱图；
图3为实施例1制得的巨大戟醇的液相色谱图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
本发明所用的测试仪器及测试条件如下：
液相色谱仪：型号为Agilent 1260，色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相:乙腈:水，柱温：30℃，进样体积：10μL，检测波长：210nm。
核磁共振波谱仪(400MHZ，瑞士布鲁克公司)，内标四甲基硅烷(TMS)，测定温度303K。
实施例1
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将10kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入30L工业甲醇溶剂，冷浸提取3次，每次12小时，合并提取液，将提取液浓缩至4L，回收甲醇；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入10L石油醚萃取3次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约220g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入2.2L 0.1mol/L的LiOH搅拌反应15小时，反应结束后加入2.2L 0.1mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品220g溶于甲醇中，然后与220g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为1100g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将将步骤(4)浓缩后的样品5g溶于甲醇中，然后与5g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为300g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物2.8g。
利用核磁共振1H谱和核磁共振13C谱对产物的结构进行表征，图1为实施例1所得的巨大戟醇核磁共振1H谱图，图3为实施例1所得的巨大戟醇核磁共振13C谱图，结合核磁共振1H谱和核磁共振13C谱可以证实本实施例得到的产物为巨大戟醇。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B。图1为实施例1所得的巨大戟醇的液相色谱图，利用面积归一法计算其纯度为98.5％。
实施例2
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将20kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入60L工业甲醇溶剂，冷浸提取2次，每次12小时，合并提取液，将提取液浓缩至4L，回收甲醇；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入20L石油醚萃取2次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约440g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入4.4L 0.2mol/L的LiOH搅拌反应12小时，反应结束后加入4.4L 0.2mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品440g溶于甲醇中，然后与440g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为1.3kg，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将步骤(4)浓缩后的样品10g溶于甲醇中，然后与10g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为400g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物4.8g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为98.2％。
实施例3
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将50kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入150L工业甲醇溶剂，冷浸提取3次，每次12小时，合并提取液，将提取液浓缩至10L；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入50L石油醚萃取3次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约1100g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入11L 0.4mol/L的LiOH搅拌反应10小时，反应结束后加入11L 0.4mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品1100g溶于甲醇中，然后与1100g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为11kg，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将浓缩后的样品30g溶于甲醇中，然后与30g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为1200g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物11.4g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为98.4％。
实施例4
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将70kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入210L工业甲醇溶剂，冷浸提取3次，每次12小时，合并提取液，将提取液浓缩至20L；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入70L石油醚萃取3次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约1540g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入15.4L 0.2mol/L的LiOH搅拌反应10小时，反应结束后加入15.4L 0.2mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品1500g溶于甲醇中，然后与1500g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为4500g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将浓缩后的样品50g溶于甲醇中，然后与50g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为2000g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物14.6g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为98.6％。
实施例5
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将10kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入50L工业甲醇溶剂，冷浸提取5次，每次6小时，合并提取液，将提取液浓缩至4L，回收甲醇；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入20L石油醚萃取5次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约300g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入1.5L 0.1mol/L的LiOH搅拌反应15小时，反应结束后加入2.0L 0.1mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品250g溶于甲醇中，然后与125g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为750g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将步骤(4)浓缩后的样品10g溶于甲醇中，然后与5g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为300g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物2.6g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为98.5％。
实施例6
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将20kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入40L工业甲醇溶剂，冷浸提取3次，每次10小时，合并提取液，将提取液浓缩至4L，回收甲醇；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入4L石油醚萃取5次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约500g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入4L 0.5mol/L的LiOH搅拌反应12小时，反应结束后加入4L 0.5mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品480g溶于甲醇中，然后与380g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为4.8kg，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将步骤(4)浓缩后的样品12g溶于甲醇中，然后与10g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为480g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物4.8g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为99.3％。
实施例7
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将50kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入150L工业甲醇溶剂，冷浸提取3次，每次12小时，合并提取液，将提取液浓缩至10L；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入10L石油醚萃取5次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约1500g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入12L 0.2mol/L的KOH溶液搅拌反应10小时，反应结束后加入12L 0.2mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品1300g溶于甲醇中，然后与650g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为6.5kg，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将浓缩后的样品40g溶于甲醇中，然后与40g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为1600g，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物10.9g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为98.6％。
实施例8
在本实施例中，通过以下方法制备巨大戟醇，具体包括以下步骤：
(1)将70kg续随子种子粉碎，向粉碎后的续随子种子中加入210L工业甲醇溶剂，冷浸提取5次，每次6小时，合并提取液，将提取液浓缩至20L；
(2)向步骤(1)得到的提取液中加入20L石油醚萃取5次，取下层甲醇溶液，浓缩，得浓缩物约1890g；
(3)向步骤(2)得到的浓缩物中加入9.5L 0.5mol/L的LiOH搅拌反应10小时，反应结束后加入9.5L 0.5mol/L醋酸中和，而后浓缩蒸干得到含有巨大戟醇的样品；
(4)将步骤(3)所得样品1680g溶于甲醇中，然后与840g硅胶一起混匀，研磨均匀，干燥，进行层析分离，柱层析硅胶为16.8kg，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集含有巨大戟醇的流分，浓缩；
(5)将浓缩后的样品60g溶于甲醇中，然后与60g硅胶一起混匀，干燥，层析分离，所用层析硅胶为3kg，流动相比例为二氯甲烷：甲醇＝30：1，收集流分，可获得巨大戟醇单体化合物15.2g。
利用分析型液相色谱对得到的巨大戟醇的纯度进行检测，色谱条件为C18，进样体积10μL，柱温30℃，样品浓度1mg/mL，A相水，B相乙腈，0～30min35％B-35％B；30～60min 35％B，经检测确定其纯度为99％。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的巨大戟醇及其制备方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。