一种金刚烷氨基茶皂草精醇及其制备方法与应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102030802 A (43)申请公布日 2011.04.27 CN 102030802 A *CN102030802A* (21)申请号 201010515859.8 (22)申请日 2010.10.21 C07J 63/00(2006.01) A61K 31/56(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 25/16(2006.01) (71)申请人 华南理工大学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 381 号 (72)发明人 叶勇 罗月婷 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有。

2、 限公司 44245 代理人 裘晖 杨晓松 (54) 发明名称 一种金刚烷氨基茶皂草精醇及其制备方法与 应用 (57) 摘要 本发明公开了一种金刚烷氨基茶皂草精醇及 其制备方法与应用。 一种金刚烷氨基茶皂草精醇， 具有如式 I 所示的结构 ； 并由以下步骤制备得到 ： 用三苯基氯甲烷与茶皂苷元反应， 将三苯甲基连 接到茶皂苷元 C28 的伯羟基上 ； 再用乙酸酐与茶 皂苷元反应， 将乙酰基连接到茶皂苷元的仲羟基 上 ； 再加入三苯甲基脱保护剂与茶皂苷元反应， 脱去茶皂苷元上的三苯甲基 ； 在催化剂存在的情 况下， 再将茶皂苷元与金刚烷胺反应、 连接 ； 最后 加入乙酰基脱保护剂， 脱去茶皂苷元。

3、上的乙酰基， 经结晶获得如式 I 所示的金刚烷氨基茶皂草精 醇。本发明的制备工艺简单， 反应条件温和， 产品 纯度高， 可用于工业化生产 ； 所获得的金刚烷氨 基茶皂草精醇结构小， 对中枢神经保护活性显著 提高。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 102030805 A1/1 页 2 1. 一种金刚烷氨基茶皂草精醇， 其特征在于 ： 所述金刚烷氨基茶皂草精醇具有如式 I 所示的结构 ： ( 式 I) 2. 权利要求 1 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于包括以下步骤 ： 用三苯基氯甲烷与茶。

4、皂苷元反应， 将三苯甲基连接到茶皂苷元 C28 的伯羟基上 ； 再用 乙酸酐与茶皂苷元反应， 将乙酰基连接到茶皂苷元的仲羟基上 ； 再加入三苯甲基脱保护剂 与茶皂苷元反应， 脱去茶皂苷元上的三苯甲基 ； 在催化剂存在的情况下， 再将茶皂苷元与金 刚烷胺反应、 连接 ； 最后加入乙酰基脱保护剂， 脱去茶皂苷元上的乙酰基， 经结晶获得如式 I 所示的金刚烷氨基茶皂草精醇。 3. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ： 所述茶皂苷 元是从茶叶、 茶籽或油茶籽中分离获得的茶皂苷元中的任何一种。 4. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ：。

5、 所述三苯基 氯甲烷用量为茶皂苷元的 1 1.5 倍摩尔质量， 三苯基氯甲烷与茶皂苷元的反应温度为 25 50， 反应时间为 8 16h。 5. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ： 所述乙酸酐 用量为茶皂苷元的 2 4 倍摩尔质量， 乙酸酐与茶皂苷元的反应温度为 50 80， 反应时 间为 8 15h。 6. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ： 所述三苯甲 基脱保护剂为甲酸， 其用量为三苯基氯甲烷的等摩尔质量。 7. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ： 所述催化剂 为三苯基膦 (PPh3。

6、) 和偶氮二甲酸乙酯 (DEAD) 的混合物， 三苯基膦 (PPh3) 和偶氮二甲酸乙 酯 (DEAD) 的用量分别为茶皂苷元质量的 0.5 10。 8. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ： 所述金刚烷 胺为茶皂苷元的等摩尔质量， 连接反应时间为 3 9h， 反应温度为 20 30。 9. 根据权利要求 2 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 其特征在于 ： 所述乙酰基 脱保护剂为碳酸钾， 其用量为乙酸酐的等摩尔质量。 10. 权利要求 1 所述金刚烷氨基茶皂草精醇的应用， 其特征在于 ： 所述金刚烷氨基茶皂 草精醇用于制备抗神经退化性疾病的药物制剂。 权。

7、 利 要 求 书 CN 102030802 A CN 102030805 A1/5 页 3 一种金刚烷氨基茶皂草精醇及其制备方法与应用 技术领域 0001 本发明涉及医药领域， 具体涉及一种具有神经保护作用的茶皂苷元衍生物金刚烷 氨基茶皂草精醇及其制备方法， 以及其作为抗神经退化性疾病药物的应用。 背景技术 0002 神经退行性疾病是由多种原因导致的神经组织变性而产生的疾病， 病理上可见脑 和脊髓神经元的减少和变性。 典型的神经退行性疾病有帕金森病、 阿尔茨海默病等， 其发病 机制尚不十分清楚， 目前主要有兴奋毒性、 氧化应激、 细胞凋亡等几种学说用于解释其发病 机理。实验中常采用中毒、 缺血。

8、性损伤等模型来研究药物的神经保护作用。 0003 迄今为止， 对于神经退行性疾病尚无十分有效的治疗药物。帕金森病治疗药主要 有拟多巴胺类或多巴胺增效药， 但是它们在长期使用后疗效会下降或丧失， 并有精神类副 作用。与化学药不同， 中药的副作用小， 许多中药具有延缓衰老的作用， 也具有神经保护作 用。用中药预防和治疗此类疾病已取得显著进展。 0004 皂苷类是中药的有效成分之一， 许多皂苷具有神经保护作用。杨东海等 ( 人参皂 苷Rg1对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元保护作用研究， 解放军药学学报， 2007， 23(1) ： 17 21) 发现， Rg1 可逆转 MPTP 所致的神经。

9、递质的改变。徐琲琲 ( 人参皂苷 Re 对 帕金森病小鼠保护作用， 中国天然药物， 2004， 2(3) ： 171 175) 报道， 人参皂苷 Re 对 MPTP 诱致小鼠黑质神经元凋亡有明显的保护作用。韩玉霞等 ( 绞股蓝总皂苷对谷氨酸所致大鼠 海马组织损伤的保护作用， 山东大学学报， 2008， 46(5) ： 449 452) 发现， 绞股蓝总皂苷可 通过增强抗氧化酶活性， 抑制羟自由基和脂质过氧化物生成而减轻 Glu 介导的氧化性神经 损伤， 发挥神经保护作用。 0005 茶皂苷是存在于茶籽或油茶籽中一种主要的五环三萜化合物， 由皂苷元、 糖体和 有机酸三部分组成， 类似于人参皂苷。。

10、 目前尚没有关于茶皂苷具有神经 保护作用的报道。 发明内容 0006 本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足， 提供一种具有神经保护作用 的茶皂苷元衍生物金刚烷氨基茶皂草精醇。 0007 本发明的另一目的在于提供上述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法。 0008 本发明的再一目的在于提供上述金刚烷氨基茶皂草精醇的应用。 0009 本发明的目的通过下述技术方案实现 ： 0010 一种金刚烷氨基茶皂草精醇， 具有如式 I 所示的结构， 0011 说 明 书 CN 102030802 A CN 102030805 A2/5 页 4 0012 ( 式 I) 0013 上述金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方。

11、法， 其特征在于包括以下步骤 ： 0014 用三苯基氯甲烷与茶皂苷元反应， 将三苯甲基连接到茶皂苷元 C28 的伯羟基上 ； 再用乙酸酐与茶皂苷元反应， 将乙酰基连接到茶皂苷元的仲羟基上 ； 再加入三苯甲基脱保 护剂与茶皂苷元反应， 脱去茶皂苷元上的三苯甲基 ； 在催化剂存在的情况下， 再将茶皂苷元 与金刚烷胺反应、 连接 ； 最后加入乙酰基脱保护剂， 脱去茶皂苷元上的乙酰基， 经结晶获得 如式 I 所示的金刚烷氨基茶皂草精醇。 0015 所述茶皂苷元是从茶叶、 茶籽或油茶籽中分离获得的茶皂苷元中的任何一种。 0016 所述三苯基氯甲烷用量为茶皂苷元的 1 1.5 倍摩尔质量， 三苯基氯甲烷与。

12、茶皂 苷元的反应温度为 25 50， 反应时间为 8 16h。 0017 所述乙酸酐用量为茶皂苷元的 2 4 倍摩尔质量， 乙酸酐与茶皂苷元的反应温度 为 50 80， 反应时间为 8 15h。 0018 所述三苯甲基脱保护剂为甲酸， 其用量为三苯基氯甲烷的等摩尔质量。反应温度 是 100 110， 反应时间为 1h。 0019 所述催化剂为三苯基膦 (PPh3) 和偶氮二甲酸乙酯 (DEAD) 的混合物， 三苯基膦 (PPh3) 和偶氮二甲酸乙酯 (DEAD) 的用量分别为茶皂苷元质量的 0.5 10 ； 0020 所述金刚烷胺为茶皂苷元的等摩尔质量， 连接反应时间为 3 9h， 反应温度为。

13、 20 30。 0021 所述乙酰基脱保护剂为碳酸钾， 其用量为乙酸酐的等摩尔质量。 0022 上述金刚烷氨基茶皂草精醇的应用， 其特征在于 ： 所述金刚烷氨基茶皂草精醇用 于制备抗神经退化性疾病的药物制剂。 0023 所述金刚烷氨基茶皂草精醇可与药用辅料或药学上可配伍的药物制成抗神经退 化性疾病的药物制剂。 0024 所述药物制剂为外用、 口服或注射用药剂型的任何一种。 0025 所述药物制剂为含有金刚烷氨基茶皂草精醇的单方或复方制剂。 0026 茶皂苷的糖体部分亲水性强， 不利于其透过血脑屏障， 如将糖体部分除去， 可缩减 其结构， 增加其脂溶性， 有利于其进入中枢。 将其结构改造， 衍生。

14、新的茶皂苷元化合物， 更加 利于其对中枢神经的作用， 提高其神经保护作用。 0027 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果 ： 0028 (1) 本发明以茶皂苷元为原料， 经过衍生化处理后， 获得的金刚烷氨基茶皂草精醇 结构小， 对中枢神经保护活性显著提高。 0029 (2) 本发明金刚烷氨基茶皂草精醇的制备方法， 采用伯羟基和仲羟基分别保护， 实 说 明 书 CN 102030802 A CN 102030805 A3/5 页 5 现活性基团的定向连接， 保证了结构的一致性。 0030 (3) 本发明金刚烷氨基茶皂草精醇的制备工艺简单 ； 采用全羟基保护， 中间体无 需精制， 反应条件温。

15、和， 产品纯度高， 可用于工业化生产。 具体实施方式 0031 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述， 但本发明的实施方式不限于此。 0032 实施例 1 0033 将茶皂苷元固体 100g， 加入到 300mL 吡啶中， 加热至 50使之溶解 ； 按茶皂苷元 等摩尔量加入三苯基氯甲烷 (56.7g)， 保温 50搅拌反应 8h ； 加入茶皂苷元 2 倍摩尔质量 的乙酸酐(41.6g)， 50搅拌反应15h ； 加入甲酸9.4mL， 反应温度是100， 回流1h ； 冷却至 20后， 加入金刚烷胺盐酸45.6g、 三苯基膦0.5g、 偶氮二甲酸二甲酯0.5g， 搅拌反应9h ； 加 入碳酸。

16、钾 56g， 搅拌 1h， 减压 蒸去吡啶后， 加入 1000mL 水洗涤， 水不溶物再加入甲苯洗涤， 剩余物用甲醇溶解并结晶， 真空干燥， 制得 28g 的产物。 0034 对 产物的结构分析显示， MS ： m/z 623 ； 元素组成为 ： C77.00， H10.50， N2.24， 010.26， 其分子式为 C40H65NO4， 1H-NMR 与13C-NMR 的氢和碳信号显示比茶皂苷元 增加了 1 个氨基氢和具 10 个碳的金刚烷结构。证明最后产物的结构是如式 I 所示。 0035 实施例 2 0036 将茶皂苷元固体 100g， 加入到 300mL 吡啶中， 室温 (25 ) 。

17、使之溶解， 按茶皂苷元 1.5 倍摩尔质量加入三苯基氯甲烷 (85g)， 保温 25搅拌反应 12h ； 加入茶皂苷元 3 倍摩尔 质量的乙酸酐 (83.2g)， 70搅拌反应 10h ； 加入甲酸 14mL， 反应温度是 105， 回流 1h ； 冷 却至 25后， 再加入金刚烷胺 45.6g、 三苯基膦 10g、 偶氮二甲酸二甲酯 10g， 搅拌反应 6h ； 加入碳酸钾 112g， 搅拌 1h， 减压蒸去吡啶后， 加入 1000mL 水洗涤， 再加入甲苯洗涤， 剩余物 用甲醇溶解并结晶， 真空干燥， 制得 45g 的产物。 0037 产物结构的分析数据同实施例 1， 证明最后产物的结构是。

18、如式 I 所示。 0038 实施例 3 0039 将茶皂苷元固体 100g， 加入到 300mL 吡啶中， 加热到 40使之溶解， 按茶皂苷元 1.2 倍摩尔质量加入三苯基氯甲烷 (68g)， 保温 40搅拌反应 16h ； 加入茶皂苷元 4 倍摩尔 质量的乙酸酐(62.4g)， 80搅拌反应8h ； 加入甲酸11.3mL， 反应温度是110， 回流1h ； 冷 却至 30后， 再加入金刚烷胺 45.6g、 三苯基膦 3g、 偶氮二甲酸二甲酯 3g， 搅拌反应 3h ； 加 入碳酸钾84g， 搅拌1h， 减压蒸去吡啶后， 加入1000mL水洗涤， 再加入甲苯洗涤， 剩余物用甲 醇溶解并结晶， 。

19、真空干燥， 制得 37g 的产物。 0040 产物结构的分析数据同实施例 1， 证明最后产物的结构是如式 I 所示。 0041 实施例 4 0042 金刚烷氨基茶皂草精醇对谷氨酸 (Glu) 损伤大鼠海马组织的保护性实验 0043 方法 ： 取 4 5 月龄雄性 Wistar 大鼠 ( 购自广州中医药大学动物中心 )50 只， 体 重 (20020)g， 随机分为假手术组、 Glu 损伤组、 金刚烷氨基茶皂草精醇低中高剂量组， 每 组 10 只。给药组预先灌胃给药 10d， 其余组灌胃等量生理盐水。 0044 鼠经尾静脉注射硫喷妥钠麻醉后， 固定于脑立体定位仪， 切开颅顶正中皮肤及骨 膜， 清。

20、晰暴露前囟， 在前囟后 0.8mm， 矢状缝右侧旁 1.5mm 处钻开颅骨， 用微量注射器行侧脑 说 明 书 CN 102030802 A CN 102030805 A4/5 页 6 室注射 Glu 4L(1mg/kg)， 进针深度 3.8mm， 留针 5min。取针后观察大鼠行为学改变， 以出 现癫痫样发作的表现为模型成功。 0045 注射 Glu 溶液 2h 后， 将大鼠断头处死， 迅速取全脑， 分离出海马， 称重后加入生理 盐水配制成 1 10( 重量体积比 ) 的海马组织匀浆。取各组海马组织匀浆， 严格按照试剂 盒说明书操作， 用多功能酶标仪检测其中 MDA 含量、 SOD 和 GSH。

21、-Px 活性及产生羟自由基的 能力。 0046 结果 ： 侧脑室注射Glu可引起大鼠海马组织中MDA含量升高， SOD和GSH-Px的活性 降低 (P 0.05) ； 与 Glu 损伤组比较， 3 个剂量金刚烷氨基茶皂草精醇组 MDA 含量均降低， SOD 和 GSH-Px 的活性均显著升高 (P 0.01)， 且随剂量增加， 效果越明显， 表明金刚烷氨基 茶皂草精醇可提高脑内抗氧化酶的活性而拮抗 Glu 的神经毒性， 具有神经保护作用。结果 见表 1。 0047 表 1 金刚烷氨基茶皂草精醇对海马组织中抗氧化酶活性影响 0048 0049 实施例 5 0050 金刚烷氨基茶皂草精醇对 MPT。

22、P 所致小鼠多巴胺神经元损伤的保护实验 0051 方法 ： 取 5 6 月龄雄性小鼠 ( 昆明种， 购自广州中医药大学动物中心 )50 只， 体 重 (202)g， 随机分为正常对照组、 MPTP 组、 金刚烷氨基茶皂草精醇低中高剂量组， 每组 10 只。给药组预先腹腔注射给药 3d， 每天 1 次， 其余组腹腔注射等量生理盐水。第 4d 除正常 组外， 其它均注射 MPTP 溶液 4mg/kg。7d 后， 将小鼠断头处死， 迅速取全脑， 分离出纹状体， 称重后加入 PE 缓冲液配制成 1 10( 重量体积比 ) 的组织匀浆。匀浆液离心后， 经 HPLC 测定多巴胺 (DA) 含量。 0052。

23、 结果 ： MPTP 组 DA 含量较正常组显著降低 (P 0.05)， 表明 MPTP 造成了多巴胺神 经元的损伤。金刚烷氨基茶皂草精醇高、 中剂量给药组 DA 含量与 MPTP 照组比显著提高 (P 0.05)， 说明高中剂量金刚烷氨基茶皂草精醇对 MPTP 所致多巴胺神经元的损伤有较好的 保护作用。结果见表 2。 0053 表 2 金刚烷氨基茶皂草精醇对纹状体 DA 含量的影响 0054 说 明 书 CN 102030802 A CN 102030805 A5/5 页 7 0055 实施例 6 0056 取实施例 1 3 的金刚烷氨基茶皂草精醇 10g， 加入正丁醇 10g， 表面活性剂。

24、 AEO-65g， 加水制成 1乳剂， 为外用消毒乳剂。 0057 实施例 7 0058 取实施例13的金刚烷氨基茶皂草精醇10g， 与乳糖、 结晶纤维素按质量比37 组成的混合物 30g、 1硬脂酸镁混合均匀， 经压片机制成每片 200mg 的片剂。 0059 实施例 8 0060 称取实施例 1 3 制得的金刚烷氨基茶皂草精醇 10g， 加入药用微晶纤维素 30g， 混合均匀， 湿法制粒， 用乙醇调节， 制得颗粒松散过 20 目筛， 晾干。干燥后填充胶囊， 即得金 刚烷氨基茶皂草精醇的胶囊剂。 0061 实施例 9 0062 取实施例13的金刚烷氨基茶皂草精醇10g， 用多乙氧基醚1000mL溶解后， 灌入 小瓶， 制成注射针剂。 0063 实施例 10 0064 称取实施例 1 3 制得的金刚烷氨基茶皂草精醇物 10g， 加入 50g PEG6000， 加热 至 60熔化后混合均匀， 置于滴丸机内， 用液体石蜡致冷， 滴丸。冷却即得金刚烷氨基茶皂 草精醇的滴丸剂。 0065 上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 102030802 A 。