小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101974008 B (45)授权公告日 2012.11.07 CN 101974008 B *CN101974008B* (21)申请号 201010522960.6 (22)申请日 2010.10.28 C07D 493/04(2006.01) (73)专利权人 中南大学 地址 410083 湖南省长沙市岳麓区麓山南路 932 号 (72)发明人 张杰 周春山 (74)专利代理机构 长沙市融智专利事务所 43114 代理人 颜勇 CN 101108852 A,2008.01.23, 权利要求 1. 张杰等 . 小八角莲中鬼臼毒素的提取工艺研 究. 中药材 .20。

2、07,第30卷(第1期),103-104. (54) 发明名称 小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺 (57) 摘要 小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺。该工 艺是取小八角莲根茎粉碎成粗粉， 通过有机溶剂 对小八角莲粗粉进行预处理， 经热水中回流提取， 滤渣继续热回流提取再次过滤， 合并两次滤液， 回 收有机溶剂后用适量水定容， 得到鬼臼毒素提取 液。用鬼臼毒素提取液制备含生药量为 0.12g/ mL 0.18g/mL 的溶液作为上样液， 选择净化好 的大孔吸附树脂作为上柱树脂， 充分吸附后， 分别 用水、 10乙醇依次洗去杂质， 再用解吸剂进行洗 脱， 收集洗脱部分， 回收解吸剂后用适量水定容， 。

3、得到鬼臼毒素纯化液。本发明工艺使用的均是无 毒有机溶剂， 且有机溶剂还可回收， 再利用， 无污 染环境的 “三废” 产物产生。整个工艺绿色环保， 且操作简单， 易于工业化， 工艺所得鬼臼毒素纯度 在 98以上。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李钊博 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺， 取小八角莲根茎粉碎成粗粉， 通过有机溶剂 对小八角莲粗粉进行预处理 ； 加 5 15 倍量浓度为 60% 90% 的。

4、热回流提取有机溶剂在温 度为 70 95的热水中回流提取 60 120 分钟并过滤， 滤渣在 70 95的温度下加 10 25 倍量浓度为 60% 90% 的相同的热回流提取有机溶剂继续热回流提取 80 150 分 钟后再次过滤， 合并两次滤液， 回收有机溶剂后用适量水定容， 得到鬼臼毒素提取液 ； 用鬼 臼毒素提取液制备含生药量为 0.12g/mL 0.18g/mL 的溶液作为上样液， 选择净化好的大 孔吸附树脂作为上柱树脂， 以1BV/h3BV/h的流速进行上样并充分吸附后， 分别用水、 8 12% 乙醇依次洗去杂质， 再用浓度为 30% 70% 的解吸剂以 3BV/h 6BV/h 的流速。

5、进行洗 脱， 收集洗脱部分， 回收解吸剂后用适量水定容， 得到鬼臼毒素纯化液 ； 对于小八角莲粗粉进行预处理的有机溶剂是乙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丙醇、 丙二醇、 丙三 醇、 乙酸乙酯、 乙酸丁酯中的一种或几种混合 ； 用于热回流提取的有机溶剂是乙醇 ； 用于纯化的解吸剂是乙醇。 2. 根据权利要求 1 所述的工艺， 用于纯化的大孔吸附树脂是 LSA5B、 HPD100、 HPD400、 HPD600、 HPD800、 D101 或 AB-8。 3.根据权利要求1或2所述的工艺， 将得到鬼臼毒素纯化液回收溶剂， 放置， 干燥， 得鬼 臼毒素。 权 利 要 求 书 CN 101974008 B。

6、 2 1/3 页 3 小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺 技术领域 0001 本发明涉及一种从天然植物小八角莲中提取纯化鬼臼毒素的工艺。 背景技术 0002 鬼臼毒素属于木脂素类， 主要存在于小檗科足叶草属、 鲜黄莲属、 山荷叶属和八角 莲属植物中， 1820 年美国药典收载， 被用于治疗尖锐湿疣。0.5鬼臼毒素酊剂是世界卫生 组织 (WHO) 推荐的治疗性病尖锐湿疣的首选药物。鬼臼毒素几乎能治疗所有的疣， 而且比 其他的方法疗程短、 疗效显著、 副作用少。鬼臼毒素和其类似化合物还具有对抗麻疹、 单纯 疱疹和抗细胞巨化病毒等作用， 还被用作生物农药。 但抗肿瘤和抗病毒是其最重要的作用， 鬼臼毒素。

7、衍生物依托泊苷、 替尼泊苷已被成功用于临床治疗各种肿瘤。 通常， 鬼臼毒素是从 足叶草属根茎中提取分离， 然而， 从此单一植物资源中提取鬼臼毒素作为药物和合成依托 泊苷和新衍生物的半合成物的原料药是十分有限的。 0003 目前， 鬼臼毒素获得主要有两条途径， 一条途径是化学全合成， 另一条途径是从天 然植物中提取分离。化学全合成技术难度高， 合成成本高， 很不经济。从植物中直接提取鬼 臼毒素， 在目前看来还是最有效、 最经济、 最迅速的办法， 但也有许多亟待解决的问题， 如资 源持续供给、 分离纯化步骤繁多、 复杂， 也是最难解决的问题之一。 0004 由于鬼臼毒素主要存在于小檗科多年生草本类。

8、群鬼臼亚科八角莲属 (Dysosma Woodson)、 桃儿七属 (Sinopodophyllum Ying)、 山荷叶属 (Diphylleia Michx) 及足叶草属 (Podophyllum) 植物中。这些植物由于都具有盾状着生的叶， 茎中具有多数散生微管束， 花 不具蜜腺， 浆果含鬼臼毒素等一些共同特征而被看作一个自然而相对独立的类群， 习惯上 称为鬼臼类植物。由于， 鬼臼类植物不仅具有药用价值， 而且具有良好的花卉观赏价值。所 以， 受到多年来人类采挖的影响， 作为提取鬼臼毒素的八角莲、 六角莲、 中华山荷叶、 东北山 荷叶、 桃儿七等原植物已濒临灭绝。目前， 八角莲已被列为国家。

9、二级保护植物。 0005 发明人通过专利检索和文献查阅表明， 目前鬼臼毒素提纯化工艺是甲醇、 乙醇等 有机溶剂回流或超声加热提取八角莲、 六角莲、 桃儿七等植物中的鬼臼毒素， 得鬼臼毒素浸 膏， 然后采用溶剂萃取， 重结晶工艺分离得鬼臼毒素， 如 200710018473.4 发明专利关于鬼 臼毒素分离纯化工艺采用苯为溶剂对鬼臼毒素浸膏回流进一步提取， 回收溶剂后， 对析出 的晶体采用苯 - 乙醇重结晶， 得鬼臼毒素 - 苯加合物， 再加热分解加合物， 得鬼臼毒素白色 粉未 ； 200410052833.9 发明专利关于鬼臼毒素分离工艺改进采用石油醚萃取， 再用硅胶柱 层析分离纯化， 以醇类或。

10、酮类与氯仿的混合液进行洗脱， 得到鬼臼毒素 ； 200910047696.2 发明专利关于鬼臼毒素分离纯化工艺采用二氯甲烷萃取， 再以硅胶柱层析分离纯化， 以丙 酮 + 二氯甲烷混合洗脱剂洗脱， 得到鬼臼毒素。但以上工艺也存在着不够环保， 分离纯化步 骤繁多、 复杂的问题。 发明内容 0006 本发明的目的是为了提供一种可避开现有已濒临灭绝的可提取鬼臼毒素植物， 开 说 明 书 CN 101974008 B 3 2/3 页 4 辟一个新原料供应渠道， 并提供一种可有效的从该原料中提取并纯化鬼臼毒素的新工艺， 整个工艺具有绿色环保， 且操作简单， 易于工业化， 工艺所得鬼臼毒素纯度高的特点。 0。

11、007 本发明的目的可以通过如下措施来实现 ： 0008 本发明包括如下步骤 ： 0009 取小八角莲根茎粉碎成粗粉， 通过有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理 ； 加 5 15倍量浓度为6090的热回流提取有机溶剂在温度为7095的热水中回流提取 60120分钟并过滤， 滤渣在7095的温度下加1025倍量浓度为6090相同 的热回流提取有机溶剂继续热回流提取 80 150 分钟后再次过滤， 合并两次滤液， 回收有 机溶剂后用适量水定容， 得到鬼臼毒素提取液 ； 用鬼臼毒素提取液制备含生药量为 0.12g/ mL 0.18g/mL 的溶液作为上样液， 选择净化好的大孔吸附树脂作为上柱树脂， 以 。

12、1BV/h 3BV/h 的流速进行上样并充分吸附后， 分别用水、 8 12乙醇依次洗去杂质， 再用浓度为 3070的解吸剂以3BV/h6BV/h的流速进行洗脱， 收集洗脱部分， 回收解吸剂后用适 量水定容， 得到鬼臼毒素纯化液 ； 0010 对于小八角莲粗粉进行预处理的有机溶剂是乙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丙醇、 丙二醇、 丙三醇、 乙酸乙酯、 乙酸丁酯中的一种或几种混合 ； 0011 用于热回流提取的有机溶剂是乙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丙醇、 丙二醇、 丙三醇、 乙酸 乙酯或乙酸丁酯 ； 0012 用于纯化的解吸剂是乙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丙醇、 丙二醇、 丙三醇、 乙酸乙酯、 乙酸 。

13、丁酯中的一种或几种混合。 0013 上述方案中用于纯化的大孔吸附树脂是 LSA5B、 HPD100、 HPD400、 HPD600、 HPD800、 D101 或 AB-8。 0014 将得到鬼臼毒素纯化液回收有机溶剂， 放置， 干燥， 得鬼臼毒素。 0015 本发明所述新工艺具有如下优点 ： 本发明采用的原料为小八角莲， 为小檗科八角 莲属植物， 在我国湖南等地有广泛分布， 是八角莲属植物在湖南省分布最普遍的一种。 其根 及根茎入药， 具有清热解毒、 散结祛瘀的功效。 但目前对小八角莲化学成分的研究在国内外 均未见报道。因而， 发明人对从小八角莲中提取分离鬼臼毒素进行研究， 并获取从小八角 。

14、莲中提取并纯化鬼臼毒素的新工艺， 可为医药工业生产依托泊干等抗肿瘤药物创造新的条 件。 另外， 本发明采用的是乙醇、 丙酮、 正丁醇、 异丙醇、 丙二醇、 丙三醇、 乙酸乙酯、 乙酸丁酯 等无毒有机溶剂及其混合有机溶剂对小八角莲粗粉进行预处理， 使小八角莲粗粉处于强渗 促溶环境下。本发明工艺简便可行， 所需设备简单， 成本低。本发明利用木质素类物质的溶 解特性， 将原料中的鬼臼毒素能够比较完全地提取并纯化。本发明所采用的溶剂均是无毒 有机溶剂， 且有机溶剂还可回收， 再利用 ； 所采用的大孔吸附树脂无毒、 安全、 价廉、 可重复 利用。无污染环境的 “三废” 产物产生。整个工艺绿色环保， 且操。

15、作简单， 易于工业化， 工艺 所得鬼臼毒素纯度可达 98以上。 附图说明 0016 图 1 为本发明的工艺流程图。 具体实施方式 说 明 书 CN 101974008 B 4 3/3 页 5 0017 本发明还将结合实施例做进一步详述， 但本发明不仅限于所述实施例。 0018 实施例一 ： 0019 取小八角莲根茎粉碎成粗粉， 以乙醇为有机溶剂， 对小八角莲粗粉进行预处理， 使 小八角莲粗粉处于强渗促溶环境， 再加9倍量浓度为80的乙醇在90的热水中热回流提 取60分钟并过滤， 滤渣加7倍量浓度为80的乙醇继续在100的热水中热回流提取45分 钟后再次过滤， 合并两次滤液， 回收乙醇后用适量水。

16、定容， 得到鬼臼毒素提取液。取鬼臼毒 素提取液制备成含小八角莲生药量为 0.121g/mL 的溶液作为上样液， 选择净化好的 LSA5B 大孔吸附树脂作为上柱树脂， 以 2BV/hr 流速进行上样并充分吸附后， 分别用水、 10乙醇 各 5BV 依次洗去杂质， 再用 5BV 的浓度为 70乙醇作为解吸剂进行洗脱， 流速控制在 4BV/ h， 接取 70乙醇的洗脱液， 回收乙醇后用适量水定容， 得到鬼臼毒素纯化液。回收有机溶 剂， 放置， 干燥， 得鬼臼毒素。鬼臼毒素纯度在 98.2以上。 0020 实施例二 ： 0021 取小八角莲根茎粉碎成粗粉， 以乙醇和丙酮 7 3 比例混合有机溶剂， 对。

17、小八角 莲粗粉进行预处理， 使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境， 再加 12 倍量浓度为 70的乙醇在 95的热水中热回流提取 80 分钟并过滤， 滤渣加 15 倍量浓度为 70的乙醇继续在 95的 热水中热回流提取 120 分钟后再次过滤， 合并两次滤液， 回收乙醇后用适量水定容， 得到鬼 臼毒素提取液。取鬼臼毒素提取液制备成含小八角莲生药量为 0.152g/mL 的溶液作为上样 液， 选择净化好的 HPD100 大孔吸附树脂作为上柱树脂， 以 2BV/h 流速进行上样并充分吸附 后， 分别用水、 10乙醇各 5BV 依次洗去杂质， 再用 5BV 的浓度为 50乙醇作为解吸剂进行 洗脱， 流速控。

18、制在 4BV/h， 接取 50乙醇的洗脱液， 回收乙醇后用适量水定容， 得到鬼臼毒 素纯化液。回收有机溶剂， 放置， 干燥， 得鬼臼毒素。鬼臼毒素纯度在 98.9以上。 0022 实施例三 ： 0023 取小八角莲根茎粉碎成粗粉， 以乙醇和乙酸乙酯91比例混合有机溶剂， 对小八 角莲粗粉进行预处理， 使小八角莲粗粉处于强渗促溶环境， 再加 15 倍量浓度为 90的乙醇 在90的热水中热回流提取60分钟并过滤， 滤渣加20倍量浓度为90的乙醇继续在90 的热水中热回流提取 100 分钟后再次过滤， 合并两次滤液， 回收乙醇后用适量水定容， 得到 鬼臼毒素提取液。取鬼臼毒素提取液制备成含小八角莲生药量为 0.152g/mL 的溶液作为上 样液， 选择净化好的 HPD400 大孔吸附树脂作为上柱树脂， 以 3BV/h 流速进行上样并充分吸 附后， 分别用水、 10乙醇各 5BV 依次洗去杂质， 再用 6BV 的浓度为 30乙醇作为解吸剂进 行洗脱， 流速控制在 3BV/h， 接取 30乙醇的洗脱液， 回收乙醇后用适量水定容， 得到鬼臼 毒素纯化液。回收有机溶剂， 放置， 干燥， 得鬼臼毒素。鬼臼毒素纯度在 99.3以上。 说 明 书 CN 101974008 B 5 1/1 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 101974008 B 6 。