技术领域
本发明涉及1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉衍生物和它们的治疗用途特别是作 为抗癌药物的用途。本发明还涉及制备本发明这些化合物的方法和所述方法 中的一些反应中间体。
发明内容
所使用的定义
在本发明上下文中，一些术语的含义如下所述：
·卤素原子(Hal)：氟原子、氯原子、溴原子或碘原子；
·烷基：含有1-6个碳原子(优选为1-4个碳原子)的饱和脂族烃基，其为 直链或支链的且通过从烷烃中除去氢原子而得到。实例包括甲基、乙基、丙 基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基；
·烷氧基：-O-烷基，其中所述烷基如上定义；
·氟代烷基：包含一个或多个氟原子代替一个或多个氢原子的烷基；
·环烷基：包含3-7个碳原子的环状烷基，所有所述碳原子形成环状结构 部分。实例包括环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
·保护基：用于保护化学官能团使其不会发生不期望的化学反应的基团， 所述保护基在保护步骤引入并在然后步骤释放。保护基的实例请参见 T.W.Greene et al.″Protectives in Organic Synthesis″，3rd edition，1999， Wiley-Interscience或J.F.W.McOmie″Protectives in Organic Chemistry″，Plenum Press，1973。保护基的实例包括叔丁基氧基羰基(BOC)或[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基(SEM)。
本发明第一个方面提供式(I)化合物：
R1表示任选被一个或多个卤素原子取代的苯基。其更具体为2，6-二氟苯 基。
R2表示：
-氢原子或卤素原子或氰基；
-基团-C(＝O)Y，其中Y表示氢原子或基团-NH2或-ORa；
-基团-C(＝S)NH2；
-基团-C(＝NH)NH-OH；
-基团-CH2OH或-CH2F；
-基团-CH＝N-OH；
-基团-CH＝CH2或-C≡C-Ra；
-基团(吡唑-4-基)或(三唑-3-基)；
其中Ra表示氢原子或(C1-C4)烷基。更具体地，Ra表示氢原子。R2可更 具体地选自表I中示例的基团R2。
R3表示氢原子或(C1-C4)烷基。更具体地，R3表示氢原子。
R4表示-NH2、(C1-C4)烷基、(C1-C4)氟代烷基或(C3-C7)环烷基。R4可更具 体地选自表I中示例的基团R4。
式(I)化合物尤其包括亚类即式(II)化合物：
其中R2和R4如上定义。
本发明化合物更具体地包括表I中的化合物。
本发明化合物可按碱或酸加成盐形式存在。这些盐有利地用药用酸制 备，尽管可用于例如对所述化合物进行纯化或分离的其它酸的盐也构成本发 明一部分。在适当的情况下，所述化合物也可含有一个或多个不对称碳原子。 在该情况下，它们可按对映异构体或非对映异构体形式存在。这些对映异构 体和非对映异构体及其混合物构成本发明一部分。
本发明第二个方面提供制备本发明化合物的方法及在所述方法中涉及 的一些反应中间体。
式(I)化合物的制备
式(I)化合物根据方案1由P1和P2开始分多步来制备：
方案1
步骤(i)包括使P1与P2进行Büchwald-Hartwig偶联，得到P3。
PG表示针对吡唑环中的NH官能团的保护基及X表示以下基团之一：
-CN、-CHO、-CH＝CH2、-H、-F、-C≡C-SiMe3、-COORa或
该类偶联在钯复合物(呈(0)或(II)氧化态且任选原位制备)存在下进行。可 使用例如Pd(PPh3)4、PdCl2(PPh3)2、Pd(OAc)2、PdCl2(dppf)、Pd2(dba)3或Pd(OAc)2和9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨的混合物。最常用的复合物为钯(0)复 合物。所述偶联有利地在碱存在下进行，所述碱可为例如K2CO3、NaHCO3、 Et3N、K3PO4、Ba(OH)2、NaOH、KF、CsF、Cs2CO3等。所述偶联可在极性 溶剂中进行，所述极性溶剂为例如1，4-二噁烷。基于钯的催化系统的实例可 参见Guram，A.；Rennels，R.；Buchwald，S.ACIEE 1995，34，1348；Louie，J.； Hartwig，J.Tet.Lett.1995，3609；Wolfe，J.；Wagaw，S.；Buchwald，S.J.Am. Chem.Soc.1996，118，7215；Driver，M.；Hartwig，J.J.Am.Chem.Soc.1996，118， 7217；Hamann，B.；Hartwig，J.J.Am.Chem.Soc.1998，120，7369；和Kawatsura， M.；Hartwig，J.J.Am.Chem.Soc.1999，121，1473。
当取代基X表示上述取代基R2中的一种时，在路线1的步骤(ii)中对保 护基PG进行脱保护后，得到式(I)化合物。脱保护条件取决于PG的性质且是 本领域技术人员已知的(参见例如T.W.Greene et al.″Protectives in Organic Synthesis″，3rd edition，1999)。例如，在SEM([β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基) 的情况下，脱保护在酸例如三氟乙酸(TFA)或盐酸存在下进行。
当取代基X不表示取代基R2中的一种时，使用本领域技术人员已知的 一种或多种化学反应将取代基X转化成取代基R2。根据路线2，在步骤(ii’) 中将P3转化成P3*，然后在步骤(iii’)中对PG进行脱保护，由此得到式(I)化合 物。根据可选路线3，直接对式(I)化合物进行转化。
转化的实例如下所述：
(步骤2-实施例4和实施例14)或-C(＝O)OH：通 过例如氢氧化钠对腈官能团进行水解；
(实施例9)：该反应可在微波下用硫化铵/甲醇进 行(参见Synlett 2004，14，2615-2617)；
该还原反应可在二异丁基氢化铝存在下进行(步 骤1-实施例23)；
在NH2OH存在下将醛官能团转化成肟官 能团(实施例20)；
(实施例3)：通过还原醛官能团的试剂例如 NaBH4对醛官能团进行还原；
(步骤4-实施例7)：该反应可在四丁基氟化铵 存在下进行；
(步骤1-实施例17)：用二乙基氨基三 氟化硫(DAST)进行氟化(参见A.H.Fauq，″N，N-Diethylaminosulfur Trifluoride″ in Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，Ed：L.Paquette 2004，J.Wiley & Sons，New York.)；
使炔官能团与三甲基叠氮基甲 硅烷N3SiMe3进行Huisgen环加成反应，由此制备1，2，3-三唑环。
化合物P1的制备
化合物P1(其中X表示-H、-Hal、-COOH或-CN)根据方案2如下得到： 在碱性基质中对P4进行溴化，然后用保护基PG进行保护。所述溴化例如在 极性溶剂例如DMF(二甲基甲酰胺)中在KOH存在下用溴进行。SEM基团或 SO2NMe2基团(参见实施例1)是可使用的保护基实例，所述SEM基团在碱例 如二异丙基乙基胺(DIPEA)存在下通过SEM-Cl来引入，所述SO2NMe2基团 通过Cl-SO2NMe2来引入。
方案2
由上述化合物P5或P1[其中X表示-I且A表示氢原子(P5)或PG(P1)]开始 分一个或多个步骤得到化合物P1(其中X表示-CHO、-CH＝CH2、-C≡C-SiMe3或)(方案3)：
方案3
方案3中的反应细节如下所述：
·对于X＝-CH＝CH2：使用-CH＝CH-SnBu3和钯(0)复合物进行斯蒂尔(Stille) 反应；
·对于X＝-CHO：使用例如四氧化锇进行氧化反应；
·对于X＝-C≡C-SiMe3：在HC≡C-SiMe3、钯(0)或(II)复合物和铜盐存在下 进行Sonogashira反应(该反应的进一步细节请参见Chem.Rev.2007，107(3)， 874-922及步骤2-实施例7)；
·对于在钯(0)或(II)复合物和碱存在下与吡唑-4-硼酸进行 苏楚基(Suzuki)偶联(可使用相应的频那醇酯)。
化合物P1(其中X表示-COO(C1-C4)烷基)本身通过对相应的化合物P1(其 中X＝-COOH)进行酯化来得到。
化合物P4的制备
由P6开始得到化合物P4(其中X表示-H或-Hal)(方案4)，所述P6是商购 的(例如X＝I为CAS No.31827-94-8)或通过在酸性介质中对相应的苯乙酮进 行溴化来制备(参见步骤1-实施例1)：
方案4
步骤(i)：使P6与邻苯二甲酰亚氨钾反应，得到P7。所述反应可在极性溶 剂例如DMF中进行(参见步骤2-实施例1或步骤1-实施例6)；
步骤(ii)：使P7与N，N-二甲基甲酰胺缩二乙醇反应，得到P8。所述反应 可直接在N，N-二甲基甲酰胺缩二乙醇中回流进行(参见步骤1-实施例3)；
步骤(iii)：使P8与水合肼反应，得到P9。所述反应可在极性溶剂例如乙 醇中进行(参见步骤4-实施例1或步骤3-实施例6)；
步骤(iv)：使P9与酰氯R1COCl进行酰化反应，得到P10。所述反应可在 氯化溶剂例如DCM(二氯甲烷)中在亲核催化剂例如吡啶存在下进行；
步骤(v)：使P10进行Bischler-Napieralski环化反应，得到P4。所述反应 可在P2O5和苯基膦酰二氯存在下在＞100℃的温度进行(参见步骤6-实施例1 或步骤5-实施例6)。还可使用POCl3。
化合物P4(其中X表示-CN)通过对相应的经保护的化合物P4(其中X表示 -I)进行氰化来得到。使用例如Zn(CN)2和钯(0)复合物(Rosenmund-Braun反应 请参见Chem.Rev.1951，49，392)。
P2的制备
P2可由胺官能团经保护的氨基哌啶开始根据方案5来制备(也参见WO 2003082871实施例4步骤1-4(第34-36页))：
方案5
PG’表示针对胺官能团的保护基。该保护基有利地为BOC(叔丁氧基羰 基)。
本发明还提供制备下式化合物的方法：
其中R1、R3和R4如上定义且X表示氢原子、氟原子、氰基、-C(＝O)H、 -CH＝CH2、-C≡C-SiMe3、-COORa(其中Ra表示氢原子或(C1-C4)烷基)或基团
所述方法包括：
(i)在钯复合物和任选的碱存在下使方案1中定义的化合物P1和P2偶联，
(ii)对上述步骤(i)中得到的产物进行脱保护。
本发明还提供制备下式化合物的方法：
其中R1、R3和R4如上定义且R2表示以下基团之一：-C(＝O)NH2、 -C(＝S)NH2、-C(＝O)H、-CH＝N-OH、-CH2OH、-CH2F、-C≡CH或
所述方法由下式化合物开始：
其中X表示-CN、-CHO、-CH2OH、-C≡CH或-C≡C-SiMe3且A表示氢原 子或保护基PG，
所述方法包括：
(i)
·将基团X＝-CN水解成R2＝-C(＝O)NH2或-C(＝O)OH；
·在硫化铵存在下通过微波将基团X＝-CN转化成基团R2＝-C(＝S)NH2；
·将基团X＝-CN还原成R2＝-C(＝O)H；
·在NH2OH存在下将基团X＝-C(＝O)H转化成基团R2＝-CH＝N-OH；
·将基团X＝-C(＝O)H还原成基团R2＝-CH2OH；
·将基团X＝-C≡C-SiMe3转化成R2＝-C≡CH；
·将基团X＝-CH2OH氟化成基团R2＝-CH2F；
·通过在三甲基叠氮基甲硅烷N3SiMe3存在下进行环加成反应将基团 X＝-C≡CH转化成基团
(ii)在适当的情况下，对上述步骤(i)中得到的产物进行脱保护。
式(I)化合物也可根据方案6由P1和P’2开始来制备：
方案6
步骤(i)包括使P1与P’2进行Büchwald-Hartwig偶联，得到P’3。PG表示 针对吡唑环中的NH官能团的保护基，PG’表示针对胺官能团的保护基，及X 表示以下基团之一：-CN、-CHO、-CH＝CH2、-H、-F、-C≡C-SiMe3、-COORa 或
在步骤(ii)中对胺官能团进行脱保护，得到P’4，然后使P’4在步骤(iii)中 与R4SO2Cl反应，得到P’5。然后对吡唑环中的NH官能团进行脱保护，得到 式(I)化合物。
因此，本发明还提供制备下式化合物的方法：
其中R1、R3和R4如上定义及X表示氢原子、氟原子、氰基、-C(＝O)H、 -CH＝CH2、-C≡C-SiMe3、-COORa(其中Ra表示氢原子或(C1-C4)烷基)或基团
所述方法包括：
(i’)使下式化合物P’4与R4SO2Cl反应：
(ii’)对上述步骤(i’)中得到的产物进行脱保护。
本发明还提供式化合物(方案1)或式化合物(方案6)，其中
·R1、R2、R3和R4如上定义；
·X表示氢原子、氟原子、氰基、-C(＝O)H、-CH＝CH2、-C≡C-SiMe3、-C≡CH、 -COORa(其中Ra表示氢原子或(C1-C4)烷基)或基团
·PG表示针对吡唑基团中的NH官能团的保护基；
·B表示氢原子或针对胺官能团的保护基PG’。
PG更具体地表示SEM或SO2NMe2；和PG’更具体地表示BOC。
本发明第三个方面提供药物组合物，所述药物组合物包含如上定义的化 合物及药用赋形剂。赋形剂根据药物形式和所需给药方式而选自本领域技术 人员已知的常规赋形剂。
本发明第四个方面提供包含如上定义的化合物的药物及如上定义的化 合物在制备药物中的用途。可将所述化合物与一种或多种其它抗癌药物联合 给药。该治疗可同时、分开或先后进行。执业人员将根据待治疗的疾病和肿 瘤而对治疗进行调整。
本发明第五个方面提供治疗上述病理的方法，所述方法包括向患者给药 有效剂量的本发明化合物或其一种药用盐或水合物或溶剂化物。
具体实施方式
实施例
以下实施例说明了本发明一些化合物的制备。
LC-MS-DAD-ELSD分析
柱：Atlantis T3；3.0×50mm；粒度3μm；Waters 186003721；
洗脱剂流速＝0.8ml/min；
柱温箱温度：LC＝35℃；
DAD波长：200-400nm；
梯度：历时7分钟使用混合物A(水/0.1％甲酸)和乙腈B，其中0分钟为 95％A+5％B；5分钟为5％A+95％B；5.5分钟为5％A+95％B；6.5分钟为 95％A+5％B)；7分钟为95％A+5％B。
1 H NMR分析
1H NMR谱在DMSO-d6中用Bruker 400MHz仪器得到。化学位移的单 位为ppm。
制备表I中的化合物
实施例15-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺
步骤1：向1L三颈烧瓶中加入50g 4-碘苯乙酮/500ml冰醋酸。然后在室 温(RT)滴加10.4ml溴。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后减压(RP)蒸发。 粗产物用约200ml甲苯吸收三次，然后用200ml二氯甲烷(DCM)吸收一次， 每次都减压(RP)浓缩以除去所有痕量的乙酸和溴。将所得橙色固体在干燥器 中在室温真空干燥。得到66g 2-溴-1-(4-碘苯基)乙酮，其为橙色固体形式且按 原样用于以下步骤。质谱(MS)(E/I)：m/z＝404(M+)。1H NMR：4.90(s，2H)；7.74(d， J＝8.5Hz，2H)；7.96(d，J＝8.5Hz，2H)。
步骤2：向500ml圆底烧瓶中加入66g 2-溴-1-(4-碘苯基)乙酮/140ml DMF 和38g邻苯二甲酰亚氨钾。将混合物在室温搅拌4小时，所形成的沉淀物用 玻璃漏斗滤出，用50ml异丙醚洗涤3次。减压干燥，得到80g 2-[2-(4-碘苯 基)-2-氧代乙基]异吲哚-1，3-二酮，其为白色固体形式且按原样用于以下步骤。 MS(E/I)：m/z＝391(M+)。1H NMR：5.21(s，2H)；7.84(d，J＝8.5Hz，2H)；从7.88至 7.98(m，4H)；8.00(d，J＝8.5Hz，2H)。m.p.(Koffer)：230℃。
步骤3：向500ml圆底烧瓶中加入81.6g 2-[2-(4-碘苯基)-2-氧代乙基]异吲 哚-1，3-二酮/134ml N，N-二甲基甲酰胺缩二乙醇。将反应混合物加热回流5小 时，然后用冰浴冷却至0℃。所形成的沉淀物用玻璃漏斗抽吸滤出，然后用 50ml异丙醚洗涤两次，然后用50ml异丙醚进行两次澄清洗涤(在不搅拌的情 况下对滤饼进行洗涤)。减压干燥，得到79g 2-[2-二甲基氨基-1-(4-碘苯甲酰 基)乙烯基]异吲哚-1，3-二酮的E和Z异构体的混合物，其为橙黄色固体形式。 MS(E/I)：m/z＝446(M+)。1H NMR：2.92(宽多重峰，6H)；7.22(d，J＝8.5Hz，2H)； 7.49(宽单峰，1H)；7.80(d，J＝8.5Hz，2H)；7.92(m，4H)。m.p.(Koffer)：226℃。
步骤4：在室温向1L圆底烧瓶中加入78.3g 2-[2-二甲基氨基-1-(4-碘苯甲 酰基)乙烯基]异吲哚-1，3-二酮的E和Z异构体的混合物/535ml乙醇。得到棕 色混悬液，将其与21ml水合肼混合。将混悬液加热回流。加热30分钟后， 观察到混合物变稠并呈柠檬黄色。将该混悬液回流搅拌4小时30分钟，然后 使混合物达到室温。混悬液用漏斗抽吸过滤，沉淀物用100ml乙醇洗涤两次。 蒸发所得滤液后，得到46g黄色固体1，将剩余的初始沉淀物2在40℃减压 干燥，得到39g乳色粉末。将1在300ml AcOEt(乙酸乙酯)中搅拌15分钟。 过滤混合物，将该操作重复13次，每次使用150ml AcOEt。合并各份滤液， 减压浓缩。得到24.3g金黄色固体。将2吸收在300ml AcOEt中。过滤混合 物，将该操作重复7次，每次使用150ml AcOEt。合并各份滤液，减压浓缩。 得到7.3g柠檬黄色固体。将两批合并，得到31.6g 3-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4- 基胺(橙色固体)。MS(E/I)：m/z＝285(M+)。1H NMR：4.04(宽单峰，2H)；7.15(s， 1H)；7.57(宽二重峰，J＝8.5Hz，2H)；7.72(d，J＝8.5Hz，2H)；12.35(宽多重峰，1H)。
步骤5：向2L圆底烧瓶中加入31.5g 3-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基胺/425ml DCM和278ml吡啶。混合物用冰浴冷却至0℃，加入13.9ml 2，6-二氟苯甲酰 氯。历时3小时使温度逐渐恢复到室温。减压蒸发溶剂后，向粗反应产物中 加入水，然后水相用AcOEt萃取。合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥。然后真空蒸发AcOEt，得到2，6-二氟-N-[5-(4-碘苯基)-1H-吡 唑-4-基]苯甲酰胺和N-[1-(2，6-二氟-苯甲酰基)-5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4- 基]-2，6-二氟苯甲酰胺的49.2g混合物，其为橙色泡沫形式且按原样使用。对 粗反应产物进行处理，得到单一的所需产物：在室温在氩气下在3L圆底烧 瓶中将2，6-二氟-N-[5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺和N-[1-(2，6-二氟-苯 甲酰基)-5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟苯甲酰胺的49.2g混合物溶解在 950ml乙醇和470ml THF(四氢呋喃)中，然后加入385ml 5N氢氧化钠水溶液。 在室温搅拌1小时后，将混合物倒入1025ml 2N盐酸中。其用AcOEt萃取， 有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。得到粗产物， 将其混悬在570ml DCM中，在DCM中回流搅拌15分钟。用冰浴冷却后， 抽吸滤出沉淀物，用30ml冰冷的DCM洗涤两次。得到25.8g 2，6-二氟-N-[5-(4- 碘苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺(乳色固体)。MS(E/I)：m/z＝425(M+)。1H NMR： 7.15至7.25(m，2H)；7.51(d，J＝8.5Hz，2H)；7.57(m，1H)；7.79(d，J＝8.5Hz，2H)； 7.93(宽多重峰，1H)；10.2(s，1H)；13.3(宽多重峰，1H)。m.p.(Koffer)：204℃。
步骤6：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的500ml圆底 烧瓶中加入9.2g 2，6-二氟-N-[5-(4-碘苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺、168ml苯 基膦酰二氯和46.3g五氧化二磷。在165℃保持23小时后，将混合物冷却至 室温，然后倒入260ml水和400g冰的混合物中。将温度升至40℃。如下进 行中和：先后缓慢加入930ml浓度为3M的碳酸钠溶液和110ml 28％氨水。 用1150ml AcOEt萃取一次，用550ml AcOEt萃取两次。合并有机萃取物，用 饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。将所得固体在220ml DCM中回流搅拌15分钟，用冰浴冷却，然后过滤，用28ml冰冷的DCM洗 涤两次。在40℃真空干燥，得到7.4g 5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉(乳色固体)。MS(E/I)：m/z＝407(M+)。1H NMR：7.39(t，J＝8.0H，2H)； 7.71(m，1H)；7.99(宽单峰，1H)；8.33(m，2H)；8.45(宽单峰，1H)；14.35(宽单峰， 1H)。m.p.(Koffer)＝260℃。
步骤7：在氩气下向1000ml圆底烧瓶中加入7.4g 5-(2，6-二氟苯基)-7-碘 -1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/190ml四氢呋喃和20ml二甲基甲酰胺(DMF)；用冰 浴冷却至0℃后，加入1g NaH(50％于液体石蜡中的混悬液)，将混合物在0℃ 搅拌30分钟，然后在相同温度与2.7ml二甲基氨磺酰氯混合。在室温保持1 小时后，将粗产物倒入饱和NH4Cl溶液中。水相用300ml AcOEt萃取3次。 合并有机萃取物，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。通过快速硅胶(40-63μm) 色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物(98/02v/v)洗脱)，得到5-(2，6-二氟苯基)-7- 碘吡唑并[4，3-c]异喹啉-1-磺酸二甲基酰胺和5-(2，6-二氟苯基)-7-碘吡唑并 [4，3-c]异喹啉-2-磺酸二甲基酰胺的位置区域异构体的9g混合物，其为固体形 式。MS(E/I)：m/z＝514(M+)。1H NMR：3.02(s，6H)；7.40(t，J＝8.0Hz，2H)；7.74(m， 1H)；7.92(宽单峰，1H)；8.32(dd，J＝1.5和8.5Hz，1H)；8.39(d，J＝8.5Hz，1H)； 9.31(s，1H)。m.p.＝224℃。
步骤8：向配备有磁力搅拌器和冷凝器(顶部安装有氩气进口)的500ml 圆底烧瓶中加入5.4g步骤7中得到的固体/100ml DMF。将氩气鼓泡通过反应 混合物10分钟后，加入1.6g氰化锌和0.28g Pd(PPh3)4，将混合物在搅拌下在 130℃加热1小时30分钟。将粗反应产物倒入体积为100倍的水中，水相用 400ml AcOEt萃取3次，然后合并有机萃取物，用MgSO4干燥，减压浓缩。 将所得残余物在异丙醚中浆化，过滤，在干燥器中在35℃干燥。得到7-氰基 -5-(2，6-二氟苯基)吡唑并[4，3-c]异喹啉-1-磺酸二甲基酰胺的区域异构体的 3.3g混合物(乳色固体)。MS(E/I)：m/z＝413(M+)。1H NMR：3.03(s，6H)；7.39(t， J＝8.0Hz，2H)；7.75(m，1H)；8.24(宽单峰，1H)；8,38(dd，J＝1.5和8.5Hz，1H)； 8.76(d，J＝8.5Hz，1H)；9.41(s，1H)。m.p.：231℃(Koffer)。
步骤9：向250ml圆底烧瓶中加入7-氰基-5-(2，6-二氟苯基)吡唑并[4，3-c] 异喹啉-1-磺酸二甲基酰胺的区域异构体的4g混合物/160ml DCM。用冰浴冷 却至0℃后，加入108ml TFA，将混合物在室温搅拌6小时。减压浓缩混合物， 将所得固体吸收在600ml水中，加入50ml浓度为0.75M的氨溶液。水相用 150ml AcOEt萃取3次。合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，然后用 MgSO4干燥。减压浓缩AcOEt，得到2.6g 5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-甲腈(米色固体)。MS(E/I)：m/z＝306(M+)。1H NMR：7.38(t，J＝8.0Hz， 2H)；7.72(m，1H)；8.24(宽单峰，1H)；8.34(dd，J＝1.5和8.5Hz，1H)；8.59(s，1H)； 8.70(d，J＝8.5Hz，1H)；14.5(非常宽的多重峰，1H)。
步骤10：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆 底烧瓶中加入2.6g 5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈/85ml DMF、0.87ml溴和1.5g KOH。在室温搅拌1小时后，将混合物倒入冰水中。 水相用150ml AcOEt萃取3次。合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥，减压蒸发。得到3.3g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-甲腈，其按原样用于以下步骤(淡黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝385(M+)。 1H NMR：7.39(t，J＝8.0Hz，2H)；7.75(m，1H)；8.34(宽单峰，1H)；8.41(dd，J＝1.5和 8.5Hz，1H)；8.68(d，J＝8.5Hz，1H)；14.85(宽多重峰，1H)。
步骤11：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆 底烧瓶中加入3.3g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈 /85ml DMF、10.6ml N，N-二异丙基乙胺和3.2ml 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲 基氯。在室温保持5小时后，将混合物倒入体积为8倍的冰水中。水相用200ml AcOEt萃取3次，合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 减压浓缩。通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM和甲醇的混合物 (99.5/0.5v/v)洗脱)。在一个方面得到2.1g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基 甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈，其为白色固体形式。 MS(E/I)：m/z＝515(M+)。1H NMR：-0.12(s，9H)；0.87(t，J＝8.0Hz，2H)；3.65(t， J＝8.0Hz，2H)；6.17(s，2H)；7.40(t，J＝8.0Hz，2H)；7.77(m，1H)；8.41(宽单峰，1H)； 8.47(dd，J＝1.5和8.5Hz，1H)；8.77(d，J＝8.5Hz，1H)。在另一个方面得到1.2g 3- 溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-甲腈(白色固体)。MS(E/I)：m/z＝515(M+)。1H NMR：-0.05(s，9H)；0.90(t， J＝8.0Hz，2H)；3.73(t，J＝8.0Hz，2H)；5.92(s，2H)；7.38(t，J＝8.0Hz，2H)；7.76(m， 1H)；8.24(宽单峰，1H)；8.34(dd，J＝1.5和8.5Hz，1H)；8.69(d，J＝8.5Hz，1H)。
步骤12：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的150ml圆 底烧瓶中加入1g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈/27ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应混 合物10分钟后，加入692mg 1-甲磺酰基-哌啶-4-基胺、4g碳酸铯、135mg 9，9- 二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和43mg二乙酸钯(II)。将反应混合物加热回 流4小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液 洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来 纯化(用DCM和AcOEt的混合物(85/15v/v)洗脱)，得到1g 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝596(M+)。1H NMR：-0.05(s，9H)；0.89(t，J＝8.0Hz，2H)；1.61(m，2H)；2.11(m，2H)；2.74(m，2H)； 2.85(s，3H)；3.59(m，2H)；3.68(t，J＝8.0Hz，2H)；4.46(m，1H)；5.69(s，2H)；6.70(d， J＝8.0Hz，1H)；7.34(t，J＝8.0Hz，2H)；7.68(m，1H)；7.97(宽单峰，1H)；8.14(dd， J＝1.5和8.5Hz，1H)；8.48(d，J＝8.5Hz，1H)。
步骤13：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆 底烧瓶中加入1g 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈 /96ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入10.7ml TFA，将混合物在室温搅拌 20小时。减压浓缩反应混合物，将所得固体吸收在100ml水中，用100ml AcOEt 萃取三次，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得到992mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈三氟 乙酸盐，其按原样用于以下步骤。MS(E/I)：m/z＝482(M+)。
步骤14：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆 底烧瓶中加入992mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈三氟乙酸盐、63ml乙醇、30ml THF和10ml 9.3N氢氧化钠。回流3小时后，冷却混合物，倒入250ml 1M磷酸二氢钾水 溶液中。混合物用AcOEt萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩至干。将粗固体溶解在20ml DMF中，然后加入1g苯并三唑 -1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟化物(BOP)、323mg 1-羟基苯并三唑(HOBT)、 170mg氯化铵和1ml N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)。在室温搅拌2小时后，将 反应混合物倒入水中，用AcOEt萃取，先后用1M磷酸二氢钾水溶液和饱和 NaCl水溶液洗涤。用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，然后通过快速硅胶 (40-63μm)色谱法来纯化(用DCM、甲醇和4N氨/甲醇的混合物(90/10/1v/v)洗 脱)，得到321mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡 唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺(柠檬黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝500(M+)。1H NMR： 1.68(m，2H)；2.11(m，2H)；2.88(s，3H)；2.90(m，2H)；3.56(m，2H)；3.80(m，1H)； 6.09(d，J＝8.0Hz，1H)；7.33(t，J＝8.0Hz，2H)；7.57(宽单峰，1H)；7.69(m，1H)； 8.17(宽单峰，1H)；8.23(宽单峰，1H)；8.36(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)；8.45(d， J＝8.5Hz，1H)；12.85(s，1H)。
实施例25-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛肟
步骤1：向配备有隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底烧瓶中加入 2.4g 5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(在实施例1步骤6中制 备)/80ml DMF、0.80ml溴和1.4g KOH。在室温保持1小时后，将混合物倒入 冰水中。有机相用150ml AcOEt萃取3次。合并有机萃取物，用饱和NaCl 溶液洗涤，用MgSO4干燥，减压蒸发。得到2.23g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7- 碘-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(乳色固体)，其按原样用于以下步骤。MS(E/I)： m/z＝486(M+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入2.22g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/11ml DMF。将氩气鼓泡通过混合物10分钟后，加入1.47ml三丁基乙烯基甲锡烷 和481mg二(三苯基膦)二氯化钯(II)。将混合物在100℃加热1小时，冷却后， 真空蒸干。得到油状物，将其吸收在350ml AcOEt和300ml 20％KF水溶液中。 将混合物在室温搅拌30分钟，然后混悬液用带有Clarcel Flo垫的玻璃漏斗过 滤。有机相用AcOEt萃取，然后用饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥， 减压蒸干。得到3.1g粗产物，其通过硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM 和甲醇的混合物(95/5v/v)洗脱)，得到1.44g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-乙烯基 -1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(淡黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝386(M+)。1H NMR： 5.43(d，J＝11.2Hz，1H)；6.00(d，J＝17.6Hz，1H)；6.92(dd，J＝17.6，11.2Hz，1H)； 7.37(t，J＝7.9Hz，2H)；7.65(宽单峰，1H)；7.73(m，1H)；8.33(dd，J＝8.8，1.5Hz，1H)； 8.51(d，J＝8.8Hz，1H)；14.59(宽多重峰，1H)。
步骤3：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的150ml圆底 烧瓶中先后加入1g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-乙烯基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 /13ml THF、7ml水、13ml叔丁醇、0.79ml 2.5％四氧化锇于2-甲基丙-2-醇中 的溶液和1.7g高碘酸钠。将混合物在室温搅拌3小时，然后倒入水中，用 AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得 到1.047g粗产物，其通过硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM和甲醇的混 合物(95/5v/v)洗脱)，得到686mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹 啉-7-甲醛(乳色固体)。MS(E/I)：m/z＝388(M+)。1H NMR：7.41(d，J＝7.9Hz，2H)； 7.77(m，1H)；8.34(宽单峰，1H)；8.47(dd，J＝8.5，1.2Hz，1H)；8.69(d，J＝8.5Hz，1H)； 10.15(s，1H)；14.89(宽多重峰，1H)。
步骤4：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的150ml圆底 烧瓶中加入780mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛 /20ml DMF、2.5ml二异丙基乙基胺和0.75ml 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基 氯。将混合物在室温搅拌24小时，然后倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和 NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得到1.18g粗产物，其通 过硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM和甲醇的混合物(99.5/0.5v/v)洗脱)。 在一个方面得到545mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲 基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛，其为乳色固体形式。MS(E/I)： m/z＝388(M+)。1H NMR：-0.13(s，9H)；0.86(t，J＝7.8Hz，2H)；3.66(t，J＝7.8Hz，2H)； 6.18(s，2H)；7.43(t，J＝7.9Hz，2H)；7.79(m，1H)；8.39(宽单峰，1H)8.48(dd，J＝8.3， 1.5Hz，1H)8.80(d，J＝8.3Hz，1H)10.17(s，1H)。在另一个方面得到354mg 3-溴 -5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 -7-甲醛(乳色固体)。MS(E/I)：m/z＝388(M+)。1H NMR：-0.08(s，9H)；0.90(t， J＝8.0Hz，2H)；3.73(t，J＝8.0Hz，2H)；5.91(s，2H)；7.41(t，J＝7.8Hz，2H)；7.77(m， 1H)；8.22(宽单峰，1H)8.42(dd，J＝8.3，1.5Hz，1H)8.72(d，J＝8.3Hz，1H)10.13(s， 1H)。
步骤5：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入348.4mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲 基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛/12.5ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应 混合物10分钟后，将初始装料与320mg 1-甲磺酰基哌啶-4-基胺、1.1g碳酸 铯、62mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和20mg二乙酸钯(II)混合。将 混合物加热回流4小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱 和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。其通过快速硅胶(20-45μm) 色谱法来纯化(用DCM和AcOEt的混合物(85/15v/v)洗脱)，得到217mg 5-(2，6- 二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧 基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝615(M+)。 1H NMR：0.05(s，9H)；0.89(t，J＝8.1Hz，2H)；1.62(m，2H)；2.12(m，2H)；2.75(m， 2H)；2.85(s，3H)；3.59(m，2H)；3.67(t，J＝8.1Hz，2H)；4.46(m，1H)；5.68(s，2H)； 6.63(d，J＝8.3Hz，1H)；7.37(宽三重峰，J＝7.8Hz，2H)；7.68(m，1H)；8.06(宽单峰， 1H)；8.25(dd，J＝8.4，1.7Hz，1H)；8.52(d，J＝8.4Hz，1H)；10.08(s，1H)。
步骤6：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的100ml圆底 烧瓶中加入211mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛 /8.5ml吡啶和36mg羟胺盐酸盐，将混合物在室温搅拌64小时。将其减压浓 缩，将所得固体吸收在AcOEt中，先后用1M磷酸钾水溶液和饱和NaCl水 溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。通过快速硅胶(20-45μm)色谱 法来纯化(用DCM和AcOEt的混合物(75/25v/v)洗脱)，得到184mg 5-(2，6-二 氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基] 甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛肟(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝630(M+)。 1H NMR：0.04(s，9H)；0.89(m，2H)；1.61(m，2H)；2.11(m，2H)；2.74(m，2H)； 2.85(s，3H)；3.58(m，2H)；3.67(m，2H)；4.46(m，1H)；5.65(s，2H)；6.50(d，J＝8.3Hz， 1H)；7.33(宽三重峰，J＝8.1Hz，2H)；7.65(m，1H)；7.72(宽单峰，1H)；8.01(dd， J＝8.4，1.7Hz，1H)；8.27(s，1H)；8.35(d，J＝8.4Hz，1H)；11.39(s，1H)。
步骤7：向配备有隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底烧瓶中加入 180mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲 硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛肟/15ml DCM。用冰浴 冷却至0℃后，加入1.8ml TFA，将混合物在室温搅拌6小时。减压浓缩混合 物，将所得固体吸收在50ml水和2ml 0.75M氨水溶液中。其用AcOEt萃取， 用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。进行硅胶(20-45μm) 色谱法(用DCM和甲醇的混合物(92.5/7.5v/v)洗脱)，得到63mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛肟(柠 檬黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝500(M+)。1H NMR：1.67(m，2H)；2.11(m，2H)；2.87(s， 3H)；2.89(m，2H)；3.56(m，2H)；3.79(m，1H)；6.06(d，J＝7.8Hz，1H)；7.32(宽三重 峰，J＝7.6Hz，2H)；7.67(m，1H)；7.84(宽单峰，1H)；8.14(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)； 8.30(s，1H)；8.41(d，J＝8.5Hz，1H)；11.43(s，1H)；12.81(s，1H)。
实施例35-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-基甲醇
步骤1：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入45mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛(在 实施例2步骤5中制备)/1.5ml THF和1.5ml甲醇。用冰浴冷却至0℃后，加 入5.5mg NaBH4，将混合物搅拌30分钟。然后加入1.5ml丙酮，将混合物倒 入饱和碳酸氢钠水溶液中。其用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得到46mg[5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌 啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 -7-基]甲醇，其按原样用于以下步骤。MS(E/I)：m/z＝617(M+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入46mg[5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-基]甲醇 /4ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入0.45ml TFA，将混合物在室温搅拌2 小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在25ml水和0.75ml 0.75M氨水溶液 中。其用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压 浓缩。进行硅胶(20-45μm)色谱法(用DCM和甲醇的混合物(92.5/7.5v/v)洗脱)， 得到13mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-7-基甲醇(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝487(M+)。1H NMR：1.67(m， 2H)；2.11(m，2H)；2.87(s，3H)；2.90(m，2H)；3.56(m，2H)；3.79(m，1H)；4.63(d， J＝5.7Hz，2H)；5.34(t，J＝5.7Hz，1H)；5.98(d，J＝7.8Hz，1H)；7.31(m，2H)；7.59(宽 单峰，1H)；7.66(m，1H)；7.83(宽二重峰，J＝8.3Hz，1H)；8.35(d，J＝8.3，1H)； 12.68(s，1H)。
实施例45-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(三氟甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡 唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺
步骤1：操作如实施例1步骤12中那样。向配备有磁力搅拌器和隔板(顶 部安装有氩气进口)的50ml圆底烧瓶中加入200mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯 基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈 /4ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应混合物10分钟后，加入269mg 1-三氟 甲磺酰基哌啶-4-基胺三氟乙酸盐、543mg碳酸铯、22mg 9，9-二甲基-4，5-二(二 苯基膦基)呫吨和8.7mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流2小时。冷却后， 将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩。其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用AcOEt和庚烷 的混合物(40/60v/v)洗脱)，得到272mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(三氟甲磺酰基) 哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹 啉-7-甲腈(淡黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝666(M+)。
(1-三氟甲磺酰基哌啶-4-基)氨基甲酸(1，1-二甲基乙基)酯的合成
在氩气下向配备有磁力搅拌器的150ml圆底烧瓶中加入2g 4-N-boc-氨基 哌啶/35ml DCM、82mg 4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和1.86ml三乙胺。用冰浴 冷却至0℃后，滴加1.6ml三氟甲磺酰氯。将混合物在0℃搅拌30分钟，然 后在室温搅拌1小时。将其倒入100ml饱和碳酸氢钠水溶液中。其用AcOEt 萃取，用饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。进 行硅胶(15-40μm)色谱法(用DCM和甲醇的混合物(98/02v/v)洗脱)，得到 1.5g(1-三氟甲磺酰基哌啶-4-基)氨基甲酸(1，1-二甲基乙基)酯(乳色固体)。 MS(E/I)：m/z＝232(M+)。
向150ml圆底烧瓶中加入1.37g(1-三氟甲磺酰基哌啶-4-基)氨基甲酸(1，1- 二甲基乙基)酯/30ml DCM。加入3ml TFA，将混合物在室温搅拌1小时。将 其减压浓缩，将所得固体吸收在30ml水和2ml 0.75M氨水溶液中。产物用 AcOEt萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得到1.2g 1-三氟甲磺酰基哌 啶-4-基胺三氟乙酸盐(灰白色固体)。MS(E/I)：m/z＝346(M+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入272mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(三氟甲磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈、 10ml乙醇、5ml THF和0.611ml 9.3N NaOH。回流2小时后，冷却混合物， 倒入50ml 1M磷酸二氢钾水溶液。产物用AcOEt萃取，用饱和NaCl水溶液 洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩至干。将所得粗固体溶解在4ml DMF 中，然后加入275mg苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟化物(BOP)、 84mg 1-羟基苯并三唑(HOBT)、44mg氯化铵和2ml N，N-二异丙基乙胺 (DIPEA)。在室温保持3小时后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱 和NaCl水溶液洗涤。用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到300mg 5-(2，6- 二氟苯基)-3-{[1-(三氟甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙 氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺。MS(E/I)：m/z＝684(M+)。
步骤3：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入300mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(三氟甲磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺 /8ml DCM。加入3ml TFA，将混合物在室温搅拌2小时。将其减压浓缩，将 所得固体吸收在30ml水和2ml 0.75M氨水溶液中。产物用AcOEt萃取，用 MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。进行硅胶(15-40μm)色谱法(用AcOEt洗脱)， 得到30mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(三氟甲磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺(淡黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝554(M+)。1H NMR：1.69(m， 2H)；2.17(m，2H)；3.38(m，2H)；3.83(m，2H)；3.93(m，1H)；6.24(m，1H)；7.33(t， J＝8.0Hz，2H)；7.58(宽单峰，1H)；7.69(m，1H)；8.17(宽单峰，1H)；8.23(宽单峰， 1H)；8.36(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)；8.44(d，J＝8.5Hz，1H)；12.9(宽单峰，1H)。
实施例55-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-7-乙烯基 -1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉
步骤1：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入380mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-乙烯基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 (在实施例2步骤2中制备)/10ml DMF、1.2ml二异丙基乙基胺和0.37ml 2-(三 甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯。将混合物在室温搅拌24小时，然后倒入水中， 用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。 得到548mg粗产物，其通过硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM和甲醇的 混合物(99.5/0.5v/v)洗脱)。在一个方面得到198mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-(2- 三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)-7-乙烯基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉，其为乳色固 体形式。在另一个方面得到194mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷 基乙氧基甲基)-7-乙烯基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(乳色固体)。MS(E/I)： m/z＝516(M+)。1H NMR：0.05(s，9H)；0.92(t，J＝7.8Hz，2H)；3.73(t，J＝7.8Hz，2H)； 5.39(d，J＝11.1Hz，1H)；5.87(s，2H)；5.94(d，J＝17.7Hz，1H)6.90(dd，J＝17.7， 11.1Hz，1H)7.39(t，J＝7.8Hz，2H)7.57(宽单峰，1H)7.73(m，1H)8.21(dd，J＝8.5， 1.5Hz，1H)8.51(d，J＝8.5Hz，1H)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入189mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲 基)-7-乙烯基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/5ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应 混合物10分钟后，加入130mg 1-甲磺酰基哌啶-4-基胺、453mg碳酸铯、25mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和8mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流4 小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用 DCM和AcOEt的混合物(85/15v/v)洗脱)，得到96mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-7-乙烯基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝613(M+)。1H NMR：0.04(s，9H)0.89(t，J＝8.3Hz，2H)1.60(m，2H)2.10(m，2H)2.74(m，2H)2.84(s， 3H)3.58(m，2H)3.66(t，J＝8.3Hz，2H)4.44(m，1H)5.33(d，J＝11.0Hz，1H)5.64(s， 2H)5.87(d，J＝17.7Hz，1H)6.47(d，J＝7.8Hz，1H)6.83(dd，J＝17.7，11.0Hz， 1H)7.33(t，J＝7.8Hz，2H)7.42(宽单峰，1H)7.64(m，1H)8.02(dd，J＝8.3，1.5Hz， 1H)8.31(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤3：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入92mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-乙烯基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 /8ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入0.9ml TFA，将混合物在室温搅拌2 小时。减压浓缩混合物，将所得固体吸收在30ml水和1.5ml 0.75M氨水溶液 中。产物用AcOEt萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。其通过快速硅 胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物(95/05v/v)洗脱)。得到14mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-7-乙烯基-2H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝483(M+)。1H NMR：1.67(m，2H)2.11(m， 2H)2.87(s，3H)2.90(m，2H)3.56(m，2H)3.79(m，1H)5.37(d，J＝11.2Hz，1H)5.94(d， J＝17.6Hz，1H)6.01(宽二重峰，J＝8.3Hz，1H)6.87(dd，J＝17.6，11.2Hz，1H)7.32(t， J＝7.8Hz，2H)7.53(宽单峰，1H)7.67(m，1H)8.17(宽二重峰，J＝8.8Hz，1H)8.39(d， J＝8.8Hz，1H)12.73(s，1H)。
实施例65-(2，6-二氟苯基)-7-氟-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H- 吡唑并[4，3-c]异喹啉
步骤1：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入4.2g 2-溴-1-(4-氟苯基)乙酮/10ml DMF和3.6g邻苯二甲酰亚氨钾。 将混合物在室温搅拌4小时，所形成的沉淀物用玻璃漏斗滤出，用50ml异丙 醚洗涤3次。减压干燥后，得到5g 2-[2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基]异吲哚-1，3- 二酮(白色固体)，其按原样用于以下步骤。熔点(Kofler)：140℃。MS(E/I)： m/z＝283(M+)。1H NMR：5.25(s，2H)7.44(t，J＝9.0Hz，2H)7.85-8.00(m，4H)8.19(dd， J＝9.8，5.4Hz，2H)。
步骤2：向配备有隔板(顶部安装有氩气进口)和磁力搅拌器的100ml圆底 烧瓶中加入5g 2-[2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基]异吲哚-1，3-二酮/25ml N，N-二甲基 甲酰胺缩二乙醇。将混合物加热回流15小时，然后用冰浴冷却至0℃。所形 成的沉淀物用玻璃漏斗抽吸滤出，用50ml异丙醚洗涤两次，然后用50ml异 丙醚进行两次澄清洗涤(在不搅拌的情况下对滤饼进行洗涤)。减压干燥，得 到2-[2-二甲基氨基-1-(4-氟苯甲酰基)-乙烯基]异吲哚-1，3-二酮的E和Z异构 体的4.5g混合物(橙黄色固体)。m.p.(Koffer)：228℃。MS(E/I)：m/z＝338(M+)。 1H NMR：2.94(宽多重峰，6H)7.25(t，J＝9.0Hz，2H)7.46-7.57(m，3H)7.86-8.00(m， 4H)。
步骤3：在室温向配备有有效磁力搅拌器和冷凝器(顶部安装有氩气进口) 的1L圆底烧瓶中加入4.5g 2-[2-二甲基氨基-1-(4-氟苯甲酰基)乙烯基]异吲哚 -1，3-二酮/30ml乙醇。得到棕色混悬液，将其与1.62ml水合肼/20ml乙醇混合。 将混悬液加热至回流。加热30分钟后，观察到混合物变稠并呈柠檬黄色。将 该混悬液回流搅拌3小时，然后使混合物达到室温。不溶物用漏斗滤出，用 2×20ml异丙醚洗涤。将滤液浓缩至干，得到6g米色固体。将粗混合物与50ml 水和20ml 2M盐酸混合。加入50ml AcOEt，滤出不溶物。分离出水相，吸收 在3×15ml AcOEt中。通过加入2M氢氧化钠将水相碱化至pH 11，然后用 3×20ml乙酸乙酯萃取。有机相用水洗涤直到得到中性pH。其用AcOEt萃取， 用MgSO4干燥，过滤，浓缩至干。得到1.93g 3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基胺(褐 色油状物)。MS(E/I)：m/z＝177(M+)。1H NMR：(对于该批次观察到互变异构体 的混合物且所有吸收峰都是宽的)3.69-4.15(m，2H)7.09-7.34(m， 3H)7.51-8.08(m，2H)12.10-12.50(m，1H)。
步骤4：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的圆底烧瓶中 加入1.93g 3-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基胺/20ml DCM和15ml吡啶。混合物用 冰浴冷却至0℃，加入1.7ml 2，6-二氟苯甲酰氯。历时3小时将温度逐渐升至 室温。减压蒸发溶剂后，向粗反应混合物中加入水，然后水相用AcOEt萃取。 合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥。然后真空蒸发 AcOEt，得到2，6-二氟-N-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺和N-[1-(2，6- 二氟苯甲酰基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟苯甲酰胺的3g混合物， 其为米色固体形式且按原样使用。对粗反应产物进行处理，得到单一的所需 产物：在室温在氩气下在圆底烧瓶中将2，6-二氟-N-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4- 基]苯甲酰胺和N-[1-(2，6-二氟苯甲酰基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟 苯甲酰胺的3g混合物溶解在20ml甲醇和12ml四氢呋喃中，然后加入6ml 5N 氢氧化钠水溶液。在室温保持1小时后，将混合物倒入6ml 5N盐酸中。其用 AcOEt萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。 得到2.6g 2，6-二氟-N-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺(乳色固体)。 MS(E/I)：m/z＝317(M+)。1H NMR：7.21(t，J＝7.8Hz，2H)7.26(宽多重峰， 2H)7.56(m，1H)7.73(宽多重峰，2H)8.02(宽多重峰，1H)10.21(s， 1H)12.95-13.29(宽多重峰，1H)。m.p.＝112℃。
步骤5：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入2.6g 2，6-二氟-N-[5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺、60ml苯基 二氯化膦和17.5g五氧化二磷。在165℃加热23小时后，将混合物冷却至室 温，然后倒入260ml水和400g冰的混合物中。将温度升至40℃。混合物通 过缓慢加入120ml 28％氨水来中和。其用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗 涤，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来 纯化(用DCM和甲醇的混合物(99/1v/v)洗脱)，得到680mg 5-(2，6-二氟苯基)-7- 氟-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(乳色固体)。MS(E/I)：m/z＝299(M+)。1H NMR：7.34(t， J＝7.8Hz，2H)7.38(宽多重峰，1H)7.70(m，1H)7.96(宽三重峰，J＝9.1Hz， 1H)8.48(宽单峰，1H)8.63(dd，J＝9.1，5.6Hz，1H)14.29(宽单峰，1H)。
步骤6：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入680mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/10ml DMF、0.21ml溴和344mg KOH。在室温保持5小时后，将混合物倒入冰水中。 水相用3×150ml AcOEt萃取。合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用 MgSO4干燥，减压蒸发。得到770mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉(黄色固体)，其按原样用于以下步骤。MS(E/I)：m/z＝378(M+)。1H NMR：7.38(t，J＝8.1Hz，2H)7.45(宽二重峰，J＝9.2Hz，1H)7.74(m，1H)8.03(宽三 组二重峰，J＝9.2，2.9Hz，1H)8.63(dd，J＝9.2，5.4Hz，1H)14.69(宽多重峰，1H)。
步骤7：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入770mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/15ml DMF、2.5ml N，N-二异丙基乙胺和0.76ml 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯。 在室温保持5小时后，将混合物倒入体积为8倍的冰水中。水相用200ml AcOEt萃取3次，合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 减压浓缩。得到520mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙 氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(橙色固体)。MS(E/I)：m/z＝508(M+)。1H NMR：0.12(s，9H)0.85(t，J＝7.9Hz，2H)3.64(t，J＝7.9Hz，2H)6.13(s，2H)7.39(t， J＝7.8Hz，2H)7.51(dd，J＝9.2，2.7Hz，1H)7.75(m，1H)8.06(td，J＝9.2，2.7Hz， 1H)8.71(dd，J＝9.2，5.4Hz，1H)。
步骤8：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入520mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基] 甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/14ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应混合物 10分钟后，加入225mg 1-甲磺酰基哌啶-4-基胺、780mg碳酸铯、92mg 9，9- 二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和40mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流5 小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯 化(用DCM和AcOEt的混合物(95/05v/v)洗脱)，得到94mg 5-(2，6-二氟苯基)-7- 氟-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝605(M+)。1H NMR： -0.13(s，9H)0.84(m，2H)1.69(m，2H)2.10(m，2H)2.88(s，3H)2.90(部分被遮蔽的 多重峰，2H)3.57(m，2H)3.62(m，2H)3.77(m，1H)5.89(s，2H)6.28(d，J＝8.3Hz， 1H)7.28-7.40(m，3H)7.69(m，1H)7.91(td，J＝9.0，2.9Hz，1H)8.60(dd，J＝9.0，5.4Hz， 1H)。
步骤9：向配备有隔板(顶部安装有氩气进口)的圆底烧瓶中加入95mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/10ml DCM。用冰浴冷却至0℃ 后，加入0.173ml TFA，将混合物在室温搅拌20小时。将其减压浓缩，将所 得固体吸收在30ml水和2ml 0.75M氨水溶液中。产物用AcOEt萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM和 甲醇的混合物(95/05v/v)洗脱)，得到6mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-3-{[1-(甲基磺 酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(黄色固体)。MS(E/I)： m/z＝475(M+)。1H NMR：1.67(m，2H)2.10(m，2H)2.87(s，3H).90(m，2H)3.56(m， 2H)3.79(m，1H)6.08(d，J＝8.3Hz，1H)7.29(m，1H)7.33(t，J＝7.8Hz，2H)7.68(m， 1H)7.88(宽三重峰，J＝9.3Hz，1H)8.50(dd，J＝9.3，5.4Hz，1H)12.80(s，1H)。
实施例75-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-7-乙炔基 -1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉
步骤1：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的150ml圆底 烧瓶中加入1.2g 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(在实施 例6步骤1中制备)/24ml DMF、3ml二异丙基乙基胺和0.92ml 2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧基甲基氯。将混合物在室温搅拌24小时，然后倒入水中，用AcOEt 萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。得到1.52g 粗产物，其通过硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物(99.5/0.5v/v) 洗脱)。在一个方面得到832mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-(2-三甲基甲硅烷基乙 氧基甲基)-7-碘-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉，其为白色固体形式。MS(E/I)： m/z＝616(M+)。在另一个方面得到526mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲 硅烷基乙氧基甲基)-7-碘-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(赭色油状物)，其按原样用 于以下步骤。MS(E/I)：m/z＝616(M+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的10ml圆底 烧瓶中加入263mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲 基)-7-碘-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/1.5ml DMF，然后加入1.5ml三乙胺。将氩 气鼓泡通过混合物10分钟后，加入30mg二(三苯基膦)二氯化钯(II)、8.7mg 碘化亚铜(I)和118μl乙炔基三甲基甲硅烷。将混合物在室温搅拌2小时，倒 入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减 压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM和甲醇的混合物 (99.5/0.5v/v)洗脱)，得到140mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙 氧基甲基)-7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(乳色固体)。 MS(E/I)：m/z＝586(M+)。1H NMR：-0.05(s，9H)0.23(s，9H)0.89(m，2H)3.72(m， 2H)5.88(s，2H)7.4(t，J＝8.1Hz，2H)7.6(宽单峰，1H)7.75(m，1H)8.01(dd，J＝8.3， 1.5Hz，1H)8.52(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤3：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入79mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)-7- 三甲基甲硅烷基乙炔基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/5ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡 通过反应混合物10分钟后，加入81mg 1-甲磺酰基哌啶-4-基胺、282mg碳酸 铯、16mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和5mg二乙酸钯(II)。将混合物 加热回流5小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl 溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm) 色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物(95/05v/v)洗脱)，得到54mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉，其为黄色固体。 MS(E/I)：m/z＝683(M+)。
步骤4：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入74mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉/5ml THF，加入0.22cm3四丁基氟化铵，将混合物在室温搅拌 30分钟。将其倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM 和AcOEt的混合物(85/15v/v)洗脱)，得到47mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基 磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-乙炔基-2H- 吡唑并[4，3-c]异喹啉(柠檬黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝611(M+)。
步骤5：向配备有隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底烧瓶中加入 47mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-2-{[2-(三甲基甲 硅烷基)乙氧基]甲基}-7-乙炔基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/4ml DCM。用冰浴冷 却至0℃后，加入0.47ml TFA，将混合物在室温搅拌3小时。将其减压浓缩， 将所得固体吸收在25ml水和0.75ml 0.75M氨水溶液中。其用AcOEt萃取， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯 化(用DCM和甲醇的混合物(92.5/7.5v/v)洗脱)。得到6mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-7-乙炔基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(黄 色固体)。MS(E/I)：m/z＝481(M+)。1H NMR：1.66(m，2H)2.11(m，2H)2.87(s， 3H)2.91(m，2H)3.56(m，2H)3.79(m，1H)4.37(s，1H)6.10(d，J＝8.3Hz，1H)7.34(t， J＝7.9Hz，2H)7.65(宽单峰，1H)7.69(m，1H)7.97(宽二重峰，J＝8.3Hz，1H)8.42(d， J＝8.3Hz，1H)12.88(宽单峰，1H)。
实施例85-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸甲酯
步骤1：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的250ml三颈烧瓶中加入4g 5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(在实施例1步骤6中制 备)/120ml THF和3ml DMF。混合物用冰浴冷却至0℃，然后加入952mg氢 化钠(60％)。在0℃保持15分钟后，加入1.3ml二甲基氨磺酰氯。在室温保持 16小时后，将混合物倒入300ml水中，用乙酸乙酯萃取。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。将所得固体在异丙醚中研磨。减压滤出不溶物，真 空干燥，得到2.94g 5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-N，N-二甲基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹 啉-1-磺酰胺(米色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：515(+)＝(M+H)(+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入2.94g 5-(2，6-二氟苯基)-7-碘-N，N-二甲基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 -1-磺酰胺/90ml DMF。将氩气鼓泡通过反应混合物10分钟后，加入1.81g三 丁基乙烯基甲锡烷和331mg三苯基膦钯(0)。将混合物加热回流3小时，冷却 后，将混合物倒入水中，用乙酸乙酯萃取。有机相用MgSO4干燥，减压蒸干。 得到2.36g 5-(2，6-二氟苯基)-7-乙烯基-N，N-二甲基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-1- 磺酰胺(棕色固体)。产物按原样使用。LC-MS-DAD-ELSD：415(+)＝(M+H)(+)。
步骤3：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的250ml圆底 烧瓶中加入2.36g 5-(2，6-二氟苯基)-7-乙烯基-N，N-二甲基-1H-吡唑并[4，3-c]异 喹啉-1-磺酰胺/30ml THF，然后加入23ml水、30ml叔丁醇、2.14ml 2.5％四氧 化锇于2-甲基丙-2-醇中的溶液和5.04g高碘酸钠。将混合物在室温搅拌4小 时，然后倒入100ml水中，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。粗产物通过硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用 DCM洗脱)，得到1.92g 5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-N，N-二甲基-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-1-磺酰胺(米色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：417(+)＝(M+H)(+)。
步骤4：向250ml圆底烧瓶中加入1.41g 5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-N，N- 二甲基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-1-磺酰胺/124ml丙酮。加入1.07g高锰酸钾于 62ml水中的溶液。在室温保持1小时后，蒸发丙酮，然后通过加入5N盐酸 将混合物酸化至pH 1。混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗 涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到1.46g 5-(2，6-二氟苯基)-1-(二甲 基氨磺酰基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸(黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD： 433(+)＝(M+H)(+)。
步骤5：向250ml圆底烧瓶中加入1.46g 5-(2，6-二氟苯基)-1-(二甲基氨磺 酰基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸/100ml DCM，然后加入20ml TFA。将 混合物在室温搅拌16小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在30ml饱和 NaHCO3水溶液中，用30ml AcOEt萃取三次。通过加入37％HCl将水相酸化 至pH 1，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过 滤，减压浓缩，得到927mg 5-(2，6-二氟苯基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸 (米色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：326(+)＝(M+H)(+)。
步骤6：向100ml圆底烧瓶中加入605mg 5-(2，6-二氟苯基)-2H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-7-羧酸/20ml DMF。先后加入334mg氢氧化钾和595mg溴，将 混合物在室温搅拌1小时。将其倒入100ml水中，用乙酸乙酯萃取。有机相 用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，得到1.2g橙色油 状物，其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物(80/20v/v) 洗脱)，得到562mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸(白 色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：406(+)＝(M+H)(+)。
步骤7：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的25ml三颈烧瓶中加入562mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸/11ml DMF、1.38ml二 异丙基乙基胺和740μl 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯。在室温保持2小时 后，将反应混合物倒入100ml水中。水相用100ml AcOEt萃取3次，合并有 机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩。粗产物通过 快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(先后用环己烷/DCM混合物(50/50v/v)和 DCM洗脱)，得到3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸和3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲 硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸的502mg混合物(淡黄 色油状物)。LC-MS-DAD-ELSD：665(+)＝(M+H)(+)。
步骤8：向配备有磁力搅拌器的25ml圆底烧瓶中加入3-溴-5-(2，6-二氟苯 基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸和 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-羧酸的500mg混合物(在步骤7中得到)/10ml甲醇和1ml 2N氢氧化 钠溶液。在室温保持5分钟后，将混合物倒入10ml AcOEt和5ml水中。有机 相用饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩，得到3-溴-5-(2，6-二 氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧 酸甲酯和3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡 唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸甲酯的336mg混合物(米色固体)。 LC-MS-DAD-ELSD：549(+)＝(M+H)(+)。
步骤9：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的25ml三颈烧瓶中加入3-溴 -5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异 喹啉-7-羧酸甲酯和3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸甲酯的113mg混合物(在步骤8中得 到)/3ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过混合物10分钟后，加入37mg 1-甲磺酰 基哌啶-4-基胺、255mg碳酸铯、18mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和 5mg二乙酸钯(II)。将混合物在110℃加热4小时。冷却后，将混合物倒入水 中，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤， 减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(先后用DCM和 DCM/AcOEt混合物(80/20v/v)洗脱)，得到5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基) 哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹 啉-7-羧酸甲酯和5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸甲 酯的46mg混合物(黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：646(+)＝(M+H)(+)。
步骤10：向配备有磁力搅拌器的25ml圆底烧瓶中加入5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸甲酯和5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰 基)哌啶-4-基]氨基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-羧酸甲酯的46mg混合物(在步骤9中得到)/5ml DCM。用冰浴冷却 至0℃后，加入0.5ml TFA，将混合物在室温搅拌18小时。将其减压浓缩， 将所得固体吸收在20ml水中，用20ml AcOEt萃取三次。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(先后用 DCM和DCM/AcOEt混合物(50/50v/v)洗脱)，得到12mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-羧酸甲酯 (黄色固体)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.67(m，2H)2.11(m，2H)2.88(s， 3H)2.92(m，2H)3.56(m，2H)3.80(m，1H)3.87(s，3H)6.16(d，J＝7.7Hz，1H)7.37(m， 2H)7.71(m，1H)8.23(宽单峰，1H)8.42(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)8.54(d，J＝8.5Hz， 1H)13.01(s，1H)。LC-MS-DAD-ELSD：516(+)＝(M+H)(+)。
实施例95-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-硫代甲酰胺
向容积为5ml的微波管中加入45mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基) 哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(在实施例12中制备)和0.2ml 20％硫化铵水溶液/2ml甲醇。将混合物在100℃微波加热20分钟(功率设定在 100瓦)，然后倒入50ml水中，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。将所得固体在异丙醚中研磨。减压滤出不 溶物，真空干燥，得到36mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基] 氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-硫代甲酰胺(黄色固体)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm：1.66(m，2H)2.11(m，2H)2.88(s，3H)2.90(m， 2H)3.56(m，2H)3.79(m，1H)6.10(d，J＝8.3Hz，1H)7.33(t，J＝7.8Hz，2H)7.68(m， 1H)8.18(宽单峰，1H)8.34(dd，J＝8.3，1.5Hz，1H)8.40(d，J＝8.3Hz，1H)9.74(宽单 峰，1H)10.01(宽单峰，1H)12.87(宽多重峰，1H)。LC-MS-DAD-ELSD： 517(+)＝(M+H)(+)。
实施例105-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉
步骤1：向配备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中加入30g 2-氯苯乙酮 和36.3g邻苯二甲酰亚氨钾/120ml DMF。在室温保持4小时后，真空浓缩混 合物。将所得固体吸收在120ml DCM和100ml 1N氢氧化钠溶液中。有机相 用饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。将所得固体在 异丙醚中研磨。滤出不溶物，真空干燥，得到42.6g 2-(2-氧代-2-苯基乙基)-1H- 异吲哚-1，3(2H)-二酮，其为米色固体形式且按原样用于以下步骤。
步骤2：向配备有磁力搅拌器的100ml圆底烧瓶中加入42.4g 2-(2-氧代-2- 苯基乙基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮/105ml N，N-二甲基甲酰胺缩二乙醇。将混 合物加热回流3小时，然后减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来 纯化(先后用DCM和DCM/甲醇混合物(90/10v/v)洗脱)，得到40.69g 2-[1-(二 甲基氨基)-3-氧代-3-苯基丙-1-烯-2-基]-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮的E和Z异构 体的混合物，其为乳色固体形式。LC-MS-DAD-ELSD：321(+)＝(M+H)(+)。
步骤3：在室温向250ml圆底烧瓶中加入20.5g 2-[1-(二甲基氨基)-3-氧代 -3-苯基丙-1-烯-2-基]-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮的E和Z异构体的混合物/75ml 乙醇。加入7.8ml水合肼。将混悬液在室温搅拌1小时30分钟，然后加热至 回流。加热1小时30分钟后，观察到混合物变稠并呈黄色。混悬液用漏斗趁 热抽吸滤出，沉淀物用乙醇洗涤。减压浓缩滤液。产物通过快速硅胶(15-40μm) 色谱法来纯化(先后用DCM和DCM/甲醇混合物(95/5v/v)洗脱)，得到9.45g 5- 苯基-1H-吡唑-4-基胺(棕色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：163(+)＝(M+H)(+)。
步骤4：向配备有磁力搅拌器的250ml圆底烧瓶中加入10g 5-苯基-1H- 吡唑-4-基胺/45ml DCM和45ml吡啶。反应混合物用冰浴冷却至0℃，加入 17.4ml 2，6-二氟苯甲酰氯。将混合物在室温搅拌3小时。减压蒸发溶剂后， 向粗反应产物中加入50ml水，然后水相用50ml AcOEt萃取两次。合并有机 萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥。然后真空蒸发AcOEt，得 到2，6-二氟-N-[5-苯基-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺和N-[1-(2，6-二氟苯甲酰基)-5- 苯基-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟苯甲酰胺的混合物，其为棕色油状物形式。对粗 反应产物进行处理，得到单一的所需产物：在室温在氩气下在250ml圆底烧 瓶中将2，6-二氟-N-[5-苯基-1H-吡唑-4-基]苯甲酰胺和N-[1-(2，6-二氟苯甲酰 基)-5-苯基-1H-吡唑-4-基]-2，6-二氟苯甲酰胺的混合物溶解在20ml甲醇和 20ml 5N氢氧化钠水溶液中。在室温保持30分钟后，将混合物倒入50ml水 中，用AcOEt萃取，有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，然后减 压浓缩。得到粗产物，将其混悬在DCM中，将DCM回流搅拌15分钟。用 冰浴冷却后，沉淀物用漏斗抽吸滤出，用冰冷的DCM洗涤两次。得到7.7g 2，6- 二氟-N-(5-苯基-1H-吡唑-4-基)苯甲酰胺(赭色固体)。LC-MS-DAD-ELSD： 300(+)＝(M+H)(+)。
步骤5：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的500ml三颈烧瓶中加入12.5g 2，6-二氟-N-(5-苯基-1H-吡唑-4-基)苯甲酰胺、218ml磷酰氯和68.2g P2O5。回 流30分钟后，混合物固化。加入20ml磷酰氯。回流5小时后，将反应混合 物冷却至室温，然后缓慢倒入2L冰水中，将温度维持在低于40℃。通过缓 慢加入碳酸钾来中和，用500ml AcOEt萃取3次。合并有机萃取物，用饱和 NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，然后减压浓缩。所得固体通过快速硅胶 (15-40μm)色谱法来纯化(先后用DCM和DCM/AcOEt混合物(80/20v/v)洗脱)。 得到6.4g 5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(黄色泡沫)。 LC-MS-DAD-ELSD：282(+)＝(M+H)(+)。
步骤6：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入700mg 5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/25ml DMF。先 后加入447mg KOH和0.26ml溴。在室温保持1小时后，将混合物倒入100ml 冰水中。水相用100ml AcOEt萃取3次。合并有机萃取物，用饱和NaCl溶 液洗涤，用MgSO4干燥，减压蒸发。得到950mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1H- 吡唑并[4，3-c]异喹啉(橙色固体)。产物按原样用于以下步骤。 LC-MS-DAD-ELSD：362(+)＝(M+H)(+)。
步骤7：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的50ml圆底 烧瓶中加入890mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉/20ml DMF、2.46ml N，N-二异丙基乙胺和658μl 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯。 在室温保持16小时后，将混合物倒入50ml冰水中。水相用50ml AcOEt萃取 3次，合并有机萃取物，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩。 产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷和DCM的混合物[先后 为(80/20v/v)和(50/50v/v)]洗脱)。在一个方面得到498mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯 基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉，其为白色 胶状物形式。LC-MS-DAD-ELSD：492(+)＝(M+H)(+)。在另一个方面得到 200mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉(白色胶状物)。LC-MS-DAD-ELSD：492(+)＝(M+H)(+)。
步骤8：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的25ml三颈烧瓶中加入200mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉/6ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应混合物10分钟后，加入73mg 1- 甲基磺酰基哌啶-4-基胺、505mg碳酸铯、36mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基) 呫吨和10mg二乙酸钯(II)。将混合物在120℃加热2小时。冷却后，将混合 物倒入水中，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷和 AcOEt的混合物(50/50v/v)洗脱)，得到71mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰 基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉(黄色胶状物)。LC-MS-DAD-ELSD：588(+)＝(M+H)(+)。
步骤9：向10ml圆底烧瓶中加入71mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰 基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉/3ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入0.3ml TFA，将反应混合物在 室温搅拌16小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在20ml水中，用20ml AcOEt萃取三次。有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅 胶(15-40μm)色谱法来纯化(先后用DCM和DCM/甲醇混合物(95/5v/v)洗脱)， 得到9mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉(米色固体)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.67(m， 2H)2.11(m，2H)2，88(s，3H)2.90(m，2H)3.56(m，2H)3.79(宽单峰，1H)6.04(宽多重 峰，1H)7.32(m，2H)7.52-7.74(m，3H)7.92(m，1H)8.40(d，1H)12.76(宽单峰，1H)。 LC-MS-DAD-ELSD：458(+)＝(M+H)(+)。
实施例115-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡 唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈
步骤1：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的25ml三颈烧瓶中加入150mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-甲腈(在实施例1步骤11中制备)/4ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过 混合物10分钟后，加入60mg 1-环丙基磺酰基哌啶-4-基胺、361mg碳酸铯、 25mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和7mg二乙酸钯(II)。将混合物在 120℃加热2小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取。有机相用 饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶 (15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷和AcOEt的混合物(50/50v/v)洗脱)，得到 57mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基 甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色固体)。 LC-MS-DAD-ELSD：639(+)＝(M+H)(+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器的10ml圆底烧瓶中加入57mg 5-(2，6-二氟 苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基] 甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈/5ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入 0.3ml TFA，将混合物在室温搅拌3小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在 20ml水中，用20ml AcOEt萃取三次，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产 物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷和AcOEt的混合物 (80/20v/v)洗脱)，得到16mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基)哌啶-4-基] 氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色固体)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 0.89-1.04(m，4H)1.67(m，2H)2.10(m，2H)2.58(m，1H)3.00(m， 2H)3.62(m，2H)3.82(m，1H)6.21(d，J＝7.8Hz，1H)7.34(t，J＝7.8Hz，2H)7.70(m， 1H)8.19(宽单峰，1H)8.27(dd，J＝8.5，1.5Hz，1H)8.56(d，J＝8.5Hz，1H)13.07(s， 1H)。LC-MS-DAD-ELSD：509(+)＝(M+H)(+)。
实施例125-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈
步骤1：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的25ml三颈烧瓶中加入525mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-甲腈(在实施例1步骤11中制备)/12ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过 反应混合物10分钟后，加入294mg 1-甲基磺酰基哌啶-4-基胺、1.26g碳酸铯、 89mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和23mg二乙酸钯(II)。将反应混合 物在120℃加热2小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取。有机 相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速 硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷/AcOEt混合物[先后为(80/20v/v)和 (50/50v/v)]洗脱)，得到470mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基] 氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈 (黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：613(+)＝(M+H)(+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器的最大容积为20ml的微波管中加入300mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈/12ml 5N盐酸。将反应混合物 在100℃微波加热5分钟，然后倒入20ml水中，通过加入9.3N氢氧化钠溶 液使pH为7，用20ml AcOEt萃取三次。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤， 减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM和AcOEt的 混合物(50/50v/v)洗脱)，得到180mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶 -4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色固体)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ1.67(m，2H)2.11(m，2H)2.87(s，3H)2.90(m，2H)3.56(m，2H)3.80(m， 1H)6.20(宽二重峰，J＝7.7Hz，1H)7.34(m，2H)7.70(m，1H)8.18(宽单峰， 1H)8.28(宽二重峰，J＝8.6Hz，1H)8.56(d，J＝8.6Hz，1H)13.07(s，1H)。 LC-MS-DAD-ELSD：483(+)＝(M+H)(+)。
实施例135-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈
步骤1：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的25ml三颈烧瓶中加入150mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-7-甲腈(在实施例1步骤11中制备)/4ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过 反应混合物10分钟后，加入56mg 1-乙基磺酰基哌啶-4-基胺、361mg碳酸铯、 25mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和7mg二乙酸钯(II)。将混合物在 120℃加热2小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取。有机相用 饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶 (15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷/AcOEt混合物[先后为(80/20v/v)和 (50/50v/v)]洗脱)，得到60mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基] 氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈 (黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：627(+)＝(M+H)(+)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器的10ml圆底烧瓶中加入50mg 5-(2，6-二氟 苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈/5ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入 0.1ml TFA，将混合物在室温搅拌3小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在 20ml水中，用20ml AcOEt萃取三次。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤， 减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(先后用DCM和DCM/ 甲醇混合物(90/10v/v)洗脱)，得到27mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基) 哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色固体)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.23(t，J＝7.3Hz，3H)1.63(m，2H)2.09(m，2H)2.97(m， 2H)3.05(q，J＝7.3Hz，2H)3.61(m，2H)3.81(m，1H)6.23(宽多重峰，1H)7.34(t， J＝7.8Hz，2H)7.70(m，1H)8.18(宽单峰，1H)8.27(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)8.56(d， J＝8.5Hz，1H)13.07(宽单峰，1H)。LC-MS-DAD-ELSD：497(+)＝(M+H)(+)。
实施例145-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡 唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺
向10ml圆底烧瓶中加入29.7mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基) 哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(在实施例11中制备)、1.3ml 乙醇和125μL 9.3N氢氧化钠。回流30分钟后，减压浓缩混合物，将所得固 体吸收在10ml水中，用10ml AcOEt萃取三次。合并的有机相用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩，得到17mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(环丙基磺酰基)哌啶-4- 基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺(黄色固体)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 0.89-1.02(m，4H)1.67(m，2H)2.11(m，2H)2.58(m，1H)3.00(m， 2H)3.63(m，2H)3.80(m，1H)6.09(d，J＝7.3Hz，1H)7.35(d，J＝7.8Hz，2H)7.56(宽单 峰，1H)7.68(m，1H)8.17(宽单峰，1H)8.23(宽单峰，1H)8.35(宽二重峰，J＝8.5Hz， 1H)8.45(d，J＝8.5Hz，1H)12.87(s，1H)。LC-MS-DAD-ELSD：527(+)＝(M+H)(+)。
实施例155-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛
向10ml圆底烧瓶中加入54mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶 -4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7- 甲醛(在实施例2步骤5中制备)/5ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入0.3ml TFA，将混合物在室温搅拌16小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在5ml 饱和NaHCO3水溶液中。其用AcOEt萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓 缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/AcOEt混合物 (50/50v/v)洗脱)。得到9mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛(黄色固体)。1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm 1.68(m，2H)2.11(m，2H)2.88(s，3H)2.90(m， 2H)3.57(m，2H)3.81(m，1H)6.16(宽多重峰，1H)7.36(t，J＝7.8Hz，2H)7.71(m， 1H)8.23(宽单峰，1H)8.34(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)8.57(d，J＝8.2Hz，1H)10.10(s， 1H)13.02(宽单峰，1H)。LC-MS-DAD-ELSD：486(+)＝(M+H)(+)。
实施例165-(2，6-二氟苯基)-N-羟基-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲脒
向10ml圆底烧瓶中加入30mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶 -4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(在实施例12中制备)、1.3ml甲醇、 0.8ml THF和62mg三乙胺。加入44mg羟胺盐酸盐。将混合物在65℃加热3 小时，然后减压蒸发。将所得固体吸收在10ml水中，用AcOEt萃取。有机 相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯 化(先后用DCM和DCM/甲醇混合物(80/20v/v)洗脱)，得到9.7mg 5-(2，6-二氟 苯基)-N-羟基-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7- 甲脒，其为黄色固体形式。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 1.67(m， 2H)2.11(m，2H)2.91(m，2H)2.87(s，3H)3.56(m，2H)3.79(m，1H)5.95(宽单峰， 2H)6.03(d，J＝7.9Hz，1H)7.31(m，2H)7.66(m，1H)7.95(宽单峰，1H)8.18(dd，J＝8.5， 1，6Hz，1H)8.39(d，J＝8.5Hz，1H)9.82(s，1H)12.76(s，1H)。LC-MS-DAD-ELSD： 516(+)＝(M+H)(+)。
实施例175-(2，6-二氟苯基)-7-(氟甲基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]-1H- 吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺
步骤1：由377mg[5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-基]甲醇 (在实施例3步骤1中制备)和7ml DCM开始。混合物用干冰浴冷却至-70℃， 与88μL二乙基氨基三氟化硫(DAST)混合。30分钟后，将混合物倒入饱和碳 酸氢钠水溶液中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM/AcOEt 混合物(85/15v/v)洗脱)，得到90mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-(氟甲基)-N-[1-(甲基磺 酰基)哌啶-4-基]-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹 啉-3-胺(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝619(M+)。1H NMR：-0.05(s，9H)0.88(m， 2H)1.60(m，2H)2.10(m，2H)2.74(m，2H)2.84(s，3H)3.58(m，2H)3.66(m， 2H)4.44(宽多重峰，1H)5.58(d，J＝47.4Hz，2H)5.65(s，2H)6.48(d，J＝7.6Hz， 1H)7.33(t，J＝7.5Hz，2H)7.52(宽单峰，1H)7.64(m，1H)7.82(宽二重峰，J＝8.1Hz， 1H)8.38(d，J＝8.1Hz，1H)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的30ml圆底 烧瓶中加入87mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-(氟甲基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4- 基]-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺/7ml DCM。用冰浴冷却至0℃后，加入0.85ml TFA，将混合物在室温搅拌3小时。 减压浓缩混合物，将所得固体吸收在24ml水和1.1ml 0.75M氨水溶液中。其 用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶 (15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/MeOH(甲醇)混合物(95/05v/v)洗脱)。得到 27mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-(氟甲基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-3-胺(黄色固体)。1H NMR：1.67(m，2H)2.11(m，2H)2.87(s， 3H)2.90(m，2H)3.56(m，2H)3.80(宽多重峰，1H)5.58(d，J＝47.2Hz，2H)6.05(宽二 重峰，J＝8.0Hz，1H)7.33(t，J＝7.7Hz，2H)7.57-7.73(m，2H)7.95(宽二重峰， J＝8.3Hz，1H)8.45(d，J＝8.3Hz，1H)12.81(s，1H)。
实施例185-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺
步骤1：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的100ml圆底 烧瓶中加入600mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈/15ml 1，4-二噁烷。将氩气鼓泡通过反应混 合物10分钟后，加入448mg 1-乙磺酰基哌啶-4-基胺、1.4g碳酸铯、80mg 9，9- 二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和26mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流4 小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯 化(用DCM和AcOEt的混合物(95/05v/v)洗脱)，得到436mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝626(M+)。1H NMR：-0.06(s，9H)；0.88(m，2H)；1.18(t，J＝7.3Hz，3H)；1.58(m，2H)；2.07(m，2H)； 2.82(m，2H)；3.03(q，J＝7.3Hz，2H)；3.56-3.70(m，4H)；4.47(m，1H)；5.67(s，2H)； 6.69(d，J＝8.1Hz，1H)；7.33(t，J＝7.8Hz，2H)；7.66(m，1H)；7.96(d，J＝1.7Hz，1H)； 8.13(dd，J＝8.3和1.7Hz，1H)；8.47(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤2：向配备有磁力搅拌器和隔板(顶部安装有氩气进口)的100ml圆底 烧瓶中加入396mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈 /4ml甲苯。用冰浴冷却至0℃后，加入0.64ml 95％硫酸，将混合物在室温搅 拌15小时。将其冷却至0℃，用9ml 7.5M NH3水溶液中和。产物用AcOEt 萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法 来纯化(用DCM和MeOH的混合物(95/05v/v)洗脱)。得到174mg 5-(2，6-二氟 苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺 (黄色固体)。MS(E/I)：m/z＝514(M+)。1H NMR：1.23(t，J＝7.4Hz，3H)；1.65(m，2H)； 2.09(m，2H)；2.98(m，2H)；3.05(q，J＝7.4Hz，2H)；3.62(m，2H)；3.81(m，1H)； 6.09(d，J＝8.3Hz，1H)；7.33(m，2H)；7.55(宽单峰，1H)；7.68(m，1H)；8.17(宽单峰， 1H)；8.23(宽单峰，1H)；8.35(宽二重峰，J＝8.8Hz，1H)；8.45(d，J＝8.8Hz，1H)； 12.85(s，1H)。
实施例195-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛
步骤1：向配备有磁力搅拌器和氩气进口的50ml三颈烧瓶中加入350mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基)-2H-吡唑并[4，3-c]异 喹啉-7-甲醛(在实施例2步骤5中制备)/7.8ml 1，4-二噁烷。加入195mg 1-乙基 磺酰基哌啶-4-基胺、880mg碳酸铯、59mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫 吨和15mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流2小时。冷却后，将混合物倒入 水中，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤， 减压浓缩。其通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用环己烷和AcOEt的混 合物(75/25v/v)洗脱)，得到195mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4- 基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲 醛(黄色泡沫)。LC-MS-DAD-ELSD：628＝(M-H)(+)。
步骤2：向最大容积为20ml的微波管中加入195mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛和10ml 5N HCl水溶液。将混合物在100℃ 微波加热20分钟，然后倒入水中，用AcOEt萃取。有机相用饱和NaCl溶液 洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱 法来纯化(用DCM和MeOH的混合物(95/5v/v)洗脱)。得到90mg 5-(2，6-二氟 苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛，其 为黄色泡沫形式。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.23(t，J＝7.4Hz， 3H)1.64(m，2H)2.10(m，2H)2.98(m，2H)3.05(q，J＝7.4Hz，2H)3.62(m，2H)3.83(m， 1H)6.18(d，J＝7.7Hz，1H)7.36(t，J＝7.8Hz，2H)7.71(m，1H)8.24(宽单峰， 1H)8.34(宽二重峰，J＝8.4Hz，1H)8.57(d，J＝8.4Hz，1H)10.11(s，1H)13.02(s，1H)。 [M+H]+m/z＝500。
实施例205-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛肟
向25ml圆底烧瓶中加入30mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶 -4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛(在实施例19中制备)/2ml吡啶。加 入7mg羟胺盐酸盐。在室温保持1小时后，减压蒸发混合物。产物通过快速硅 胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物(95/5v/v)洗脱)，得到22mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹 啉-7-甲醛肟(黄色固体)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm(E或Z异构体)： 1.23(t，J＝7.4Hz，3H)1.63(m，2H)2.09(m，2H)2.97(m，2H)3.05(q，J＝7.4Hz， 2H)3.61(m，2H)3.80(m，1H)6.08(宽多重峰，1H)7.33(m，2H)7.66(m，1H)7.86(宽 单峰，1H)8.14(宽二重峰，J＝8.3Hz，1H)8.30(s，1H)8.41(d，J＝8.3Hz，1H)11.45(宽 多重峰，1H)12.82(宽多重峰，1H)。[M+H]+m/z＝515。
实施例215-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑 并[4，3-c]异喹啉-7-基甲醇
向25ml圆底烧瓶中加入30mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶 -4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲醛(在实施例19中制备)/2ml甲醇。 将混合物冷却至5℃。加入12mg硼氢化钠。在5℃保持30分钟后，减压蒸 发混合物。将所得固体吸收在10ml 0.5M HCl水溶液中。其用AcOEt萃取， 有机相用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱 法来纯化(用DCM/甲醇混合物(95/5v/v)洗脱)，得到12mg 5-(2，6-二氟苯 基)-3-{[1-(乙基磺酰基)哌啶-4-基]氨基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-基甲醇(黄 色固体)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 1.23(t，J＝7.3Hz，3H)1.62(m， 2H)2.09(m，2H)2.97(m，2H)3.05(q，J＝7.3Hz，2H)3.61(m，2H)3.79(m，1H)4.63(d， J＝5.5Hz，2H)5.36(t，J＝5.5Hz，1H)6.01(d，J＝7.8Hz，1H)7.32(m，2H)7.59(宽单峰， 1H)7.66(m，1H)7.83(宽二重峰，J＝8.3Hz，1H)8.35(d，J＝8.3Hz，1H)12.68(s，1H)。 [M+H]+m/z＝502。
实施例225-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-氨磺酰基哌啶-4-基)氨基]-2H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺
步骤1：将707mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基] 甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈加到17ml 1，4-二噁烷中。将氩气鼓泡通 过混合物10分钟后，加入846mg 4-氨基哌啶-1-磺酰胺、2.15g碳酸铯、95mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基)呫吨和30mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流 20小时。冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗 涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法 来纯化(用DCM/EtOH(乙醇)/NH3(浓度为7N的MeOH溶液)混合物(90/10/1v/v) 洗脱)，得到407mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-(哌啶-4-基氨基)-2-[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈(黄色油状物)。1H NMR： -0.05(宽单峰，9H)0.88(t，J＝7.9Hz，2H)1.39(m，2H)1.93(m，2H)2.08(宽多重峰， 1H)2.39(m，2H)2.93(m，2H)3.71(t，J＝7.9Hz，2H)4.42(m，1H)5.66(s，2H)6.58(d， J＝8.1Hz，1H)7.33(t，J＝7.9Hz，2H)7.66(m，1H)7.95(宽单峰，1H)8.12(宽二重峰， J＝8.3Hz，1H)8.46(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤2：将375mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-(哌啶-4-基氨基)-2-[2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲腈、2ml DME和84mg硫酰 胺混合，在150℃微波加热1小时。蒸发溶剂后，过量的硫酰胺通过加入乙 醚来沉淀，然后用漏斗抽吸过滤，减压浓缩滤液。得到439mg 4-{[7-氰基 -5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异 喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺(黄色固体)。1H NMR：-0.05(m，9H)0.88(t， J＝7.9Hz，2H)1.61(m，2H)2.09(m，2H)2.53(部分被遮蔽的多重峰，2H)3.49(m， 2H)3.67(t，J＝7.9Hz，2H)4.40(m，1H)5.67(s，2H)6.67(d，J＝8.1Hz，1H)6.73(s， 2H)7.34(t，J＝7.9Hz，2H)7.68(m，1H)7.95(d，J＝1.5Hz，1H)8.13(dd，J＝8.3，1.5Hz， 1H)8.47(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤3：将54mg 4-{[7-氰基-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙 氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺加到0.5ml甲苯 中。用冰浴冷却至0℃后，加入90μl 95％硫酸，将混合物在室温搅拌24小时。 将其冷却至0℃，用9ml 7.5M氨水溶液中和。其用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/ 甲醇混合物(95/05v/v)洗脱)。得到7mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-[(1-氨磺酰基哌啶-4- 基)氨基]-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-7-甲酰胺(黄色固体)。1H NMR：1.67(m， 2H)2.11(m，2H)2.67(m，2H)3.47(m，2H)3.71(m，1H)6.01(d，J＝8.2Hz，1H)6.70(宽 单峰，2H)7.33(t，J＝7.7Hz，2H)7.55(宽单峰，1H)7.68(m，1H)8.17(宽单峰， 1H)8.22(宽单峰，1H)8.35(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)8.45(d，J＝8.5Hz，1H)12.84(s， 1H)。
实施例234-({5-(2，6-二氟苯基)-7-[(E/Z)-(羟基亚氨基)甲基]-1H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-3-基}氨基)哌啶-1-磺酰胺
步骤1：由406mg 4-{[7-氰基-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺(在实施例22 步骤2中制备)和4ml甲苯开始，加入3ml DCM，混合物用冰浴冷却至0℃。 滴加970μl二异丁基氢化铝，将混合物在0℃搅拌2小时。将其倒入0.1M氢 氧化钠中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤， 减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物 (90/10v/v)洗脱)。得到251mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-2-{[2-(三甲基甲 硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺(黄 色油状物)，其按原样用于以下步骤。
步骤2：将250mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-2-{[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺加到5ml甲 苯中。用冰浴冷却至0℃后，加入206μl 95％硫酸，在0℃继续搅拌1小时。 混合物用10ml 7.5M氨水溶液中和。其用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过 滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/乙醇混合 物(90/10v/v)洗脱)。得到38mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-1H-吡唑并[4，3-c] 异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺(黄色固体)。1H NMR：1.62-1.72(m， 2H)2.11(m，2H)2.62-2.71(m，2H)3.47(m，2H)3.67-3.76(m，1H)6.14(宽多重峰， 1H)6.73(s，2H)7.36(t，J＝7.8Hz，2H)7.67-7.75(m，1H)8.23(宽单峰，1H)8.34(宽二 重峰，J＝8.3Hz，1H)8.57(d，J＝8.3Hz，1H)10.09(s，1H)13.04(宽单峰，1H)。
步骤3：将38mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 -3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺加到2ml吡啶中，然后加入9mg羟胺盐酸盐，将混 合物在室温搅拌48小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在AcOEt中，先 后用1M磷酸钾水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减 压浓缩。产物通过快速硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM/EtOH混合物 (80/20v/v)洗脱)，得到19mg 4-({5-(2，6-二氟苯基)-7-[(E/Z)-(羟基亚氨基)甲 基]-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基}氨基)哌啶-1-磺酰胺(黄色固体)。1H NMR： 1.60-1.73(m，2H)2.10(m，2H)2.68(m，2H)3.44-3.53(m，2H)3.70(m，1H)5.97(宽二 重峰，J＝6.4Hz，1H)6.70(s，2H)7.32(t，J＝7.9Hz，2H)7.68(m，1H)7.84(宽单峰， 1H)8.14(宽二重峰，J＝8.7Hz，1H)8.29(s，1H)8.41(d，J＝8.7Hz，1H)11.42(宽单峰， 1H)12.79(宽单峰，1H)。
实施例245-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]-7-(1H-吡唑-4- 基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺
步骤1：将342mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-(2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲 基)-7-碘-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉加到13ml 1，4-二噁烷中。加入74mg吡唑-4- 硼酸、77mg Pd(PPh3)4和165mg碳酸钠。将混合物加热回流4小时30分钟。 冷却后，将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/ 甲醇混合物(95/05v/v)洗脱)，得到136mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-(1H-吡唑-4- 基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(白色泡 沫)，其按原样用于以下步骤。
步骤2：将115mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7-(1H-吡唑-4-基)-2-{[2-(三甲基 甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉加到2ml DMF、0.26ml二异 丙基乙基胺和77μl 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯中。将反应混合物在室 温搅拌18小时，然后倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用 MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过硅胶(20-45μm)色谱法来纯化(用DCM 和甲醇的混合物(98/02v/v)洗脱)，得到116mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三 甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-(1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡 唑-4-基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉(黄色粉末)。1H NMR：-0.01(d，J＝5.9Hz， 4H)0.82-1.00(m，1H)3.60(t，J＝7.8Hz，1H)3.77(t，1H)5.46(s，1H)5.92(s，1H)7.42(t， 1H)7.71-7.83(m，1H)8.03(s，1H)8.28(dd，1H)8.43(s，1H)8.58(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤3：将110mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基] 甲基}-7-(1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-4-基)-2H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉加到5ml 1，4-二噁烷中。将氩气鼓泡通过混合物10分钟后，加 入57mg 1-甲磺酰基哌啶-4-基胺、199mg碳酸铯、16mg 9，9-二甲基-4，5-二(二 苯基膦基)呫吨和5mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流2小时。冷却后，将 混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混 合物(97.5/2.5v/v)洗脱)，得到77mg 5-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶 -4-基]-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-(1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧 基]甲基}-1H-吡唑-4-基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺(黄色泡沫)。1H NMR： -0.07(s，9H)-0.02(s，9H)0.84(t，J＝8.3Hz，2H)0.90(t，J＝8.3Hz，2H)1.56-1.68(m， 2H)2.11(m，2H)2.76(m，2H)2.86(s，3H)3.56(t，J＝8.3Hz，2H)3.61(m，2H)3.68(t， J＝8.3Hz，2H)4.47-4.57(m，1H)5.42(s，2H)5.65(s，2H)6.46(d，J＝8.0Hz，1H)7.34(t， J＝7.9Hz，2H)7.59(宽单峰，1H)7.66(m，1H)7.92(s，1H)8.05(dd，J＝8.3，1.7Hz， 1H)8.31(s，1H)8.34(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤4：将73mg 5-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]-2-{[2-(三 甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-(1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡 唑-4-基)-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺加到5ml DCM中。用冰浴冷却至0℃ 后，加入0.58ml TFA，将混合物在室温搅拌5小时。减压浓缩反应混合物， 将所得固体吸收在23ml水中，用7.5M氨水溶液中和。其用乙酸乙酯萃取， 用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯 化(先后用DCM和DCM/甲醇混合物(90/10v/v)洗脱)，得到5mg 5-(2，6-二氟苯 基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]-7-(1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 -3-胺(黄色固体)。1H NMR：1.61-1.74(m，2H)2.06-2.16(m，2H)2.87(s， 3H)2.89-2.95(m，2H)3.52-3.60(m，2H)3.75-3.84(m，1H)5.98(d， J＝8.2Hz，1H)7.31(t，J＝8.0Hz，2H)7.65-7.71(m，2H)7.82-7.88(宽多重峰， 1H)8.15-8.24(宽多重峰，1H)8.18(宽二重峰，J＝8.3Hz，1H)8.40(d，J＝8.3Hz， 1H)12.66(s，1H)13.05(宽单峰，1H)。
实施例255-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]-7-(2H-1，2，3-三 唑-4-基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺
步骤1：将239mg 5-(2，6-二氟苯基)-3-{[1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基]氨 基}-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-7-乙炔基-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 (在实施例7步骤4中制备)加到4ml甲醇和4ml DMF中，加入208μL三甲基 叠氮基甲硅烷和15mg碘化亚铜(I)。在100℃加热2小时后，加入104μl三甲 基叠氮基甲硅烷和7mg碘化亚铜(I)，在100℃继续加热2小时。冷却后，将 混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥， 过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(40-63μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混 合物(95/05v/v)洗脱)，得到121mg 5-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4- 基]-7-(2H-1，2，3-三唑-4-基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-3-胺(黄色泡沫)。1H NMR：-0.04(s，9H)0.90(m，2H)1.61(m， 2H)2.12(m，2H)2.75(m，2H)2.85(s，3H)3.57(m，2H)3.68(m，2H)4.47(m，1H)5.66(s， 2H)6.49(d，J＝8.4Hz，1H)7.36(t，J＝8.0Hz，2H)7.67(m，1H)8.01(宽单峰， 1H)8.25(宽二重峰，J＝8.5Hz，1H)8.41(d，J＝8.5Hz，1H)8.43(部分被遮蔽的宽多 重峰，1H)15.28(宽多重峰，1H)。
步骤2：将116mg 5-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4- 基]-7-(2H-1，2，3-三唑-4-基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并 [4，3-c]异喹啉-3-胺加到10ml DCM中。用冰浴冷却至0℃后，加入1.1ml TFA， 将混合物在室温搅拌5小时。将其减压浓缩，将所得固体吸收在60ml水中， 用7.5M氨水溶液中和。其用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓 缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物 (92.5/7.5v/v)洗脱)，得到10mg 5-(2，6-二氟苯基)-N-[1-(甲基磺酰基)哌啶-4- 基]-7-(2H-1，2，3-三唑-4-基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺(黄色固体)。1H NMR： 1.62-1.75(m，2H)2.10(m，2H)2.82-2.97(m，5H)3.57(m，2H)3.74-3.86(m， 1H)6.04(d，J＝8.0Hz，1H)7.35(t，J＝8.0Hz，2H)7.63-7.75(m，1H)8.13(宽单 峰，1H)8.39(宽二重峰，J＝8.6Hz，1H)8.45(宽多重峰，1H)8.49(d，J＝8.6Hz， 1H)12.77(s，1H)15.23(宽多重峰，1H)。
实施例264-{[7-氰基-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨 基}哌啶-1-磺酰胺
将306mg 4-{[7-氰基-5-(2，6-二氟苯基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲 基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺加到20ml DCM中。用 冰浴冷却至0℃后，加入1.5ml TFA，将混合物在室温搅拌16小时。将其减 压浓缩，将所得固体吸收在30ml水中，用2ml 7.5M氨水溶液中和。其用乙 酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm) 色谱法来纯化(用DCM/甲醇/NH4OH混合物(92.5/7.5/0.75v/v)洗脱)。得到8mg 4-{[7-氰基-5-(2，6-二氟苯基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰 胺。1H NMR：1.61-1.73(m，2H)2.09(m，2H)2.63-2.72(m，2H)3.47(m， 2H)3.67-3.76(m，1H)6.13(d，J＝7.0Hz，1H)6.70(s，2H)7.34(t，J＝7.8Hz， 2H)7.65-7.74(m，1H)8.18(宽单峰，1H)8.28(宽二重峰，J＝8.6Hz，1H)8.56(d， J＝8.6Hz，1H)13.05(s，1H)。
实施例274-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-(羟基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3- 基]氨基}哌啶-1-磺酰胺
步骤1：将449mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-甲酰基-2-{[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺(在实施例23 步骤1中制备)加到20ml甲醇中。用冰浴冷却至0℃后，加入34mg NaBH4， 将混合物搅拌1小时。加入3ml丙酮，然后将混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶 液中。其用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减 压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇/NH4OH混 合物(95/5/0.5v/v)洗脱)。得到197mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-(羟基甲 基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基} 哌啶-1-磺酰胺(黄色泡沫)。1H NMR：-0.05(s，9H)0.88(t，J＝8.3，2H)1.58(m， 2H)2.09(m，2H)2.52(部分被遮蔽的多重峰，2H)3.48(m，2H)3.66(t，J＝8.3Hz， 2H)4.34-4.43(m，1H)4.58(d，J＝5.7Hz，2H)5.38(t，J＝5.7Hz，1H)5.62(s，2H)6.39(d， J＝8.3Hz，1H)6.70(s，2H)7.30(t，J＝7.8Hz，2H)7.43(宽单峰，1H)7.58-7.67(m， 1H)7.70(dd，J＝8.3，1.5Hz，1H)8.33(d，J＝8.3Hz，1H)。
步骤2：将194mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-(羟基甲基)-2-{[2-(三甲基甲硅 烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺加到 25ml DCM中。用冰浴冷却至0℃后，加入1.9ml TFA，将混合物在室温搅拌 2小时30分钟。将其减压浓缩，将所得固体吸收在50ml水中，用2.5ml 7.5M 氨水溶液中和。其用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物 通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇/NH4OH混合(90/10/1v/v) 洗脱)。得到28mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-(羟基甲基)-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉 -3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺。1H NMR：1.60-1.73(m，2H)2.05-2.16(m， 2H)2.62-2.73(m，2H)3.46(d，J＝11.2Hz，2H)3.64-3.76(m，1H)4.63(d，J＝5.4Hz， 2H)5.34(t，J＝5.9Hz，1H)5.75(s，1H)5.91(d，1H)6.70(s，2H)7.32(t，2H)7.59(s， 1H)7.61-7.71(m，1H)7.84(dd，1H)8.35(d，J＝8.3Hz，1H)12.66(s，1H)。
实施例284-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基} 哌啶-1-磺酰胺
步骤1：使用实施例24步骤3的操作，将310mg 3-溴-5-(2，6-二氟苯基)-7- 氟-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉加到8ml 1，4-二噁烷中。将氩气鼓泡通过混合物10分钟后，加入244mg 4-氨基哌啶-1- 羧酸(2-甲基丙-2-基)酯、755mg碳酸铯、63mg 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦基) 呫吨和20mg二乙酸钯(II)。将混合物加热回流3小时。冷却后，将混合物倒 入水中，用AcOEt萃取，用饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减 压浓缩。产物通过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇混合物 (90/10v/v)洗脱)，得到340mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-2-{[2-(三甲基甲硅烷 基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-羧酸(2-甲基丙 -2-基)酯(黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：628＝(M+H)。
步骤2：将340mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧 基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-羧酸(2-甲基丙-2-基)酯 加到16ml甲醇和1.5ml THF中。用冰浴冷却至0℃后，加入2.7ml 4N盐酸于 二噁烷中的溶液。将混合物在室温搅拌5小时。将其倒入200ml饱和碳酸氢 钠溶液中，然后用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通 过快速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇/氨水混合物(90/10/1v/v)洗 脱)，得到180mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-N-(哌啶-4-基)-2-{[2-(三甲基甲硅烷基) 乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺(黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD： 528＝(M+H)。
步骤3：将180mg 5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-N-(哌啶-4-基)-2-{[2-(三甲基甲 硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-胺、2ml DME和41mg硫酰 胺混合，在150℃微波加热1小时。将混合物倒入水中，用AcOEt萃取，用 饱和NaCl溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快速硅胶 (15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇/氨水混合物(95/05/0.5v/v)洗脱)，得到 183mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-2H-吡 唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺(黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD： 607＝(M+H)。
步骤4：将183mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-2-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧 基]甲基}-2H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶-1-磺酰胺加到24ml DCM 中。用冰浴冷却至0℃后，加入1.9ml TFA，将混合物在室温搅拌2小时30 分钟。将其减压浓缩，将所得固体吸收在50ml水中，用2.5ml 7.5M氨水溶 液中和。其用乙酸乙酯萃取，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。产物通过快 速硅胶(15-40μm)色谱法来纯化(用DCM/甲醇/氨水混合物(90/10/1v/v)洗脱)。 得到28mg 4-{[5-(2，6-二氟苯基)-7-氟-1H-吡唑并[4，3-c]异喹啉-3-基]氨基}哌啶 -1-磺酰胺(淡黄色固体)。LC-MS-DAD-ELSD：477＝(M+H)。1H NMR：1.66(m， 2H)2.11(m，2H)2.67(m，2H)3.46(m，2H)3.70(m，1H)6.03(d，J＝7.7Hz，1H)6.72(s， 2H)7.26-7.40(m，3H)7.68(m，1H)7.88(td J＝9.0，2.5Hz，1H)8.50(dd，J＝9.0，5.5Hz， 1H)12.79(s，1H)。
确定对HeLa细胞(ATCC CCL-2)的IC 50
该试验使用附着肿瘤细胞系来进行。它们的增殖通过引入细胞中的14C- 胸腺嘧啶核苷量来测量。将这些细胞置于含有培养基的96孔Cytostar板中， 在37℃-5％CO2孵育4小时。然后加入试验产物，将板重新置于培养箱中。 处理72小时后，向培养基中加入14C-胸腺嘧啶核苷，然后将细胞孵育24小 时。在该24小时″刺激(pulse)″后，所引入的14C-胸腺嘧啶核苷使用MicroBeta 读数器(Perkin Elmer)来测量。细胞用试验产物处理的总时间为96小时。
对于每次测定，板以所使用的细胞浓度来准备。一式两份地对产物的10 个浓度进行试验。第一浓度通常为10μM，但其可基于产物的活性水平而如 稀释度那样变化。在纯DMSO中进行连续稀释，然后将每个浓度在培养基中 稀释。在两个独立的测定中对所有产物进行试验。
所使用的材料
Dulbecco(Gibco 11960-044)
经灭活的胎牛血清(FCS)(Gibco 10500-056)
青霉素-链霉素-谷氨酰胺(PSG)(Gibco 10378-016)
96孔Cytostar板(Amersham RPNQ0162)
DMSO(Sigma D2650)
14C-胸腺嘧啶核苷(NEN NEC-568)
表I
Me：甲基；Et：乙基；Cy：环丙基。