一种酪醇的制备方法.pdf

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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510002805.4 (22)申请日 2015.01.05 C07C 39/11(2006.01) C07C 37/68(2006.01) (73)专利权人 康美 （北京） 药物研究院有限公司 地址 102629 北京市大兴区生物医药基地永 旺路 31 号 专利权人 广东康美药物研究院有限公司 康美药业股份有限公司 (72)发明人 乐智勇 闵建华 黄静 董婧婧 孟亚会 许冬瑾 马兴田 (74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限 公司 11212 代理人 杨立 (54) 发明名称 一种酪醇的制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一。

2、种高纯度酪醇的制备方法 , 包 括以下步骤 ： 步骤 (1) ： 取红景天药材， 采用煎煮、 超声、 微波、 回流、 渗漏、 浸渍或温浸工艺提取 ； 提 取液中边加入絮凝澄清边搅拌、 静置后， 过滤 ； 过 滤后的滤液过纳滤膜， 纳滤膜的孔径为 1 2nm， 截留分子量在 100 1000 道尔顿 ； 膜过滤液过高 分子微球， 微球粒径 300um 以下 ； 经高分子微球的 滤液用水或 0.5-5乙醇洗脱除杂， 10 -25乙 醇洗脱， 从酪醇被洗脱下来开始时收集洗脱液， 合 并洗脱液获得收集液 ； 减压浓缩， 干燥获得纯度 为 80以上的酪醇。本发明艺操作过程简单， 适 合工业化生产 ； 提。

3、取分离纯化过程中所有材料都 是可以重复利用的， 成本低， 且本发明方法采用了 纳滤膜及高分子微球分离纯化， 死吸附较少， 酪醇 转移率高。 (51)Int.Cl. 审查员 周付科 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 CN 104628528 B 2016.06.15 CN 104628528 B 1.一种酪醇的制备方法,其特征在于， 包括以下步骤： 步骤(1)： 取红景天药材， 采用煎煮、 超声、 微波、 回流、 渗漏、 浸渍工艺提取； 步骤(2)： 将步骤(1)制备的提取液中边加入絮凝澄清剂边搅拌、 静置后， 过滤； 步骤(3)将步骤(2)过滤。

4、后的滤液通过纳滤膜， 纳滤膜的孔径为12nm， 截留分子量在 1001000道尔顿； 步骤(4)经过步骤(3)处理的膜过滤液过高分子微球， 微球粒径300um以下； 步骤(5)经步骤(4)高分子微球的滤液用水或0.55乙醇洗脱除杂， 10-25乙醇 洗脱， 从酪醇被洗脱下来开始时收集洗脱液， 合并洗脱液获得收集液； 步骤(6)将步骤(5)获得的收集液减压浓缩， 干燥获得纯度为80以上的酪醇。 2.根据权利要求1所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 步骤(1)提取液为水或1 100乙醇， 提取13次， 溶剂用量为320倍。 3.根据权利要求1所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述絮凝剂选择醋。

5、酸壳聚糖 溶液、 ZTC1+1溶液、 果汁澄清剂或中药澄清剂中的一种或任意几种。 4.根据权利要求3所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述果汁澄清剂选择KBT- GZC果汁澄清剂或101果汁澄清剂； 所述中药澄清剂选择KBT-ZTC系列中药澄清剂； 所述醋酸 壳聚糖溶液中壳聚糖与1醋酸的质量体积分数为13。 5.根据权利要求3所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述纳滤膜为NE18、 NE25、 NE40或NE80中任一种。 6.根据权利要求1至5任一项所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 高分子微球材料 选自聚苯乙烯型或二乙烯基苯聚合物型或聚甲基丙烯酸甲酯型或聚丙烯酸脂型中任意一 种。。

6、 7.根据权利要求1至5任一项所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述微球粒径范 围为5200 m。 8.根据权利要求5所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述微球粒径范围为100 150um。 9.根据权利要求1至5任一项所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述絮凝剂加入 量为0.56wt， 搅拌时间为5分钟2小时， 静置时间为624小时。 10.根据权利要求1至5任一项所述一种酪醇的制备方法,其特征在于， 所述絮凝剂加入 量为2.55wt， 搅拌时间为30分钟60分钟， 静置时间为624小时。 权利要求书 1/1 页 2 CN 104628528 B 2 一种酪醇的制备方法 技术领域。

7、 0001 本发明涉及一种酪醇的制备方法， 属于属于红景天中酪醇提取、 分离纯化及精制 领域。 背景技术 0002 酪醇是一种天然的抗氧化剂， 是红景天药材中的主要活性成分之一， 是苯乙醇的 一种衍生物。 其具有极强的抗心肌缺血、 缩小心肌梗死面积， 减少心肌细胞凋亡数， 降低缺 血再灌注动物室性心动过速和室颤的发生率及严重度。 同时还能提高喂高胆固醇饲料的敲 除低密度脂蛋白受体小鼠的抗氧化能力， 并降低被升高的血胆固醇和甘油三酯水平。 0003 酪醇可以显著提高柯萨奇病毒性心肌炎小鼠心脏中的超氧化物歧化酶和谷胱甘 肽过氧化物酶活性， 降低血清乳酸脱氢酶活性和过氧化脂质含量， 对心脏有很好的保。

8、护作 用， 临床上主要用于治疗心血管方面疾病。 0004 目前提取分离酪醇的方法主要有： 0005 高山红景天中红景天苷、 苷元酪醇、 香豆素的生产工艺(王化田， 东北农业大学硕 士论文)公开了一种红景天中酪醇提取方法， 具体是： 采用超临界萃取后的粉渣， 用40乙 醇浸泡提取， 提取液过滤浓缩， 浓缩液上大孔树脂， 乙醇-二氯甲烷(37)洗脱后， 浓缩至干， 少量蒸馏水溶解， 过滤， 浓缩至小体积， 真空冻干， 得到红景天苷和酪醇的提取物， 其中红景 天苷和酪醇含量之和约为80， 收率为0.27。 该方法提取过程中大量使用了二氯甲烷， 其 毒性较大， 导致产品存在安全隐患， 且酪醇收率较低，。

9、 极大的浪费药材。 0006 橄榄多酚中酪醇等成分的分离纯化研究(黄北川.西北大学硕士论文)公开了一种 酪醇提取分离方法， 具体是： 采用了超声提取， 提取条件为： 温度为60， 时间为20min， 料液比 为125。 提取液采用硅胶柱层析法分离酪醇， 分出的酪醇纯度为85.81。 用氧化铝吸附法 分离酪醇纯度为40。 该方法提取酪醇是采用硅胶柱层析法进行分离， 由于硅胶柱死吸附 较严重， 导致酪醇损失较多， 且产业化过程中会用到大量的有机溶剂， 对操作工人身体不 利； 由于大量的使用有机溶剂且分离过程使用的硅胶柱无法重复利用， 导致酪制备过程中 成本较高。 0007 红景天苷和红景天苷元标准。

10、品的制备方法研究(丁朝武.分析测试学报， 1997， 16 (1)： 38-41)公开了酪醇标准品的制备方法， 其具体是采用了超声提取， 提取液加醋酸铅溶 液除鞣质、 黄酮等， 后用活性炭吸附除色素， 最后经膜过滤后用制备色谱柱进行分离， 得到 的酪醇纯度为97。 该方法采用制备色谱来进行分离， 仅仅只能适应实验室的分离， 无法实 现产业化。 0008 红景天中红景天苷和酪醇提取工艺研究(李辰， 陈东生， 陈娟等.中药材， 2006， 29 (11)： 1239-1241)公开了酪醇提取工艺， 其是采用了80乙醇回流提取， 溶剂用量为6倍， 提 取2次， 每次2小时。 贺美艳， 张小龙.唐古特。

11、发表的红景天提取工艺研究(中国现代应用药 学， 2012， 29(6)： 495-497)公开了酪醇提取方法， 其是采用了8倍量50乙醇80时回流提 取， 提取2次， 每次1小时。 马涛， 熊春媚， 张忠华发表的正交试验法提取云南大花红景天中的 说明书 1/5 页 3 CN 104628528 B 3 红景天苷和酪醇(昆明师范高等专科学校学报， 2006， 28(4)： 14-16)公开了酪醇的提取方 法， 其实采用了65时用90甲醇或无水甲醇超声提取， 提取时间为15分钟， 料液比为1 20。 得到的酪醇含量为0.015。 专利名称为一种乙醇为夹带剂的苷元酪醇CO2超临界萃取 方法开了一种提。

12、取酪醇的方法， 其实采用超临界萃取的方法提取酪醇， 得到酪醇的提取率 为1.637。 这些方法均是初步的提取研究， 其分别采用了回流提取、 超声提取和超临界萃 取， 没有进一步分离纯化酪醇， 因此纯度均较低。 0009 专利名称名称为一种提纯橄榄多酚粗品中酪醇的方法公开了另一种提取酪醇的 方法， 具体是将橄榄多酚粗粉用酸水溶液溶解， 将氯化钠加入上述橄榄多酚溶液中， 制得食 盐饱和的橄榄多酚溶液； 用乙酸乙酯萃取食盐饱和的橄榄多酚溶液中的酪醇； 除去乙酸乙 酯萃取相中的水分。 液相法测得乙酸乙酯相中酪醇含量为70-90。 该方法得到的酪醇纯 度较低， 其所述70-90为采用峰面积归一化法所得，。

13、 真实纯度应该是50-70。 0010 专利名称为酪醇及酪醇副产物红景天苷植物提取物及其制剂与用途公开了另外 一种提取酪醇的方法， 具体是将原材料用乙醇回流、 浸渍或渗漏提取， 收集提取液， 浓缩至 无醇味， 加水冷藏， 去沉淀， 水溶液用酸性溶液调PH至2-4， 冷藏， 去沉淀， 澄清液上弱极性大 孔树脂， 先用水洗脱至流出液呈中性， 再以碱性溶液洗脱大孔树脂， 然后再以去离子水洗至 中性， 再以酸性溶液洗脱， 再以去离子水洗脱至偏中性， 以上洗脱液均弃去； 再以5-30 乙醇洗脱， 收集洗脱液， 洗脱液浓缩， 干燥后用有机溶剂溶解， 去除不溶物， 澄清液浓缩， 加 沉淀用有机溶剂， 充分搅。

14、拌， 冷藏， 去沉淀， 取澄清液浓缩后， 加入层析硅胶进行拌样， 蒸干， 上硅胶层析柱； 采用有机溶剂或者混合有机溶剂进行除杂和洗脱或者梯度洗脱， 采用薄层 检测， 收集主斑点为酪醇的洗脱液， 回收洗脱液， 得固体物质以重结晶有机溶剂进行重结 晶， 即得。 该方法操作复杂繁琐， 分离纯化时间长， 且硅胶柱死吸附严重， 酪醇损失较多； 洗 脱液用薄层来监测酪醇， 收集主斑点为酪醇的洗脱液合并， 浓缩， 这种方式不适用与大规模 的生产上； 由于硅胶柱无法重复利用， 成本较高， 并且不利于环保及节能减排。 发明内容 0011 本发明为了解决上述的技术问题是提供一种酪醇的制备方法， 操作步骤简单， 适。

15、 合工业化生产， 成本低， 死吸附少， 酪醇转移率高， 无有毒溶剂的使用， 安全性高。 0012 本发明解决上述技术问题的技术方案如下： 一种酪醇的制备方法， 包括以下步骤： 0013 步骤(1)： 取红景天药材， 采用煎煮、 超声、 微波、 回流、 渗漏、 浸渍或温浸工艺提取； 0014 步骤(2)： 将步骤(1)制备的提取液中边加入絮凝澄清边搅拌、 静置后， 过滤； 0015 步骤(3)将步骤(2)过滤后的滤液过纳滤膜， 纳滤膜的孔径为12nm， 截留分子量 在1001000道尔顿； 0016 步骤(4)经过步骤(3)处理的膜过滤液过高分子微球， 微球粒径300um以下； 0017 步骤(。

16、5)经步骤(4)高分子微球的滤液用水或0.5-5wt乙醇洗脱除杂， 10- 25wt乙醇洗脱， 从酪醇被洗脱下来开始时收集洗脱液， 合并洗脱液获得收集液； 优选高分 子微球的滤液0.5-5wt乙醇洗脱除杂， 除杂效果好， 再用25wt乙醇洗脱， 酪醇转移率高。 0018 步骤(6)将步骤(5)获得的收集液减压浓缩， 干燥获得纯度为80以上的酪醇。 0019 在上述技术方案的基础上， 本发明还可以做如下改进。 0020 本发明如上所述一种酪醇的制备方法， 进一步， 步骤(1)提取液为水或1100乙 说明书 2/5 页 4 CN 104628528 B 4 醇， 提取13次， 溶剂用量为320倍。。

17、 0021 本发明如上所述一种酪醇的制备方法， 进一步， 所述絮凝剂选择醋酸壳聚糖溶液、 ZTC1+1溶液、 果汁澄清剂或中药澄清剂中的一种或任意几种。 0022 本发明如上所述一种酪醇的制备方法， 进一步， 所述果汁澄清剂选择KBT-GZC果汁 澄清剂或101果汁澄清剂。 所述中药澄清剂选择KBT-ZTC系列中药澄清剂中的一种或任意几 种。 所述醋酸壳聚糖溶液中壳聚糖与1醋酸的质量/体积分数为13。 0023 本发明如上所述一种酪醇的制备方法， 进一步， 高分子微球材料选自聚苯乙烯型 或二乙烯基苯聚合物型或聚甲基丙烯酸甲酯型或聚丙烯酸脂型中任意一种。 0024 本发明如上所述一种酪醇的制备方。

18、法， 进一步， 所述微球粒径范围5200um。 0025 本发明如上所述一种酪醇的制备方法， 进一步， 所述微球粒径范围100150um。 采 用该粒径范围的高分子微球可获得较高纯度酪醇， 其纯度达90以上。 0026 本发明如上所述一种酪醇的制备方法， 进一步， 所述絮凝剂加入量0.55wt， 搅 拌时间为5分钟2小时， 静置时间为624小时。 0027 本发明与现有技术相比存在以下优势： 0028 1、 艺操作过程简单， 适合工业化生产； 0029 2、 提取分离纯化过程中所有材料都是可以重复利用的， 成本低； 0030 3、 本发明方法采用了纳滤膜及高分子微球分离纯化， 死吸附较少， 酪。

19、醇转移率高； 0031 4、 本发明方法制备酪醇的过程中仅用水、 乙醇， 均属于无毒试剂， 对操作人员身体 危害小。 具体实施方式 0032 结合以下实施例对本发明的原理和特征进行描述， 所举实例只用于解释本发明， 并非用于限定本发明的范围。 0033 本发明实施例所用的果汁澄清剂及中药澄清剂均购自科立尔生物科技公司。 0034 实施例1 0035 取红景天药材1kg， 加8倍量水， 微波提取2次， 每次5分钟， 提取液合并到一起， 加入 2.5量(V/V， 体积比)的1醋酸壳聚糖溶液， 边加边搅， 30分钟后停止搅拌， 室温放置6小 时， 过滤， 滤液过NE40膜(型号为纳滤膜， 4.0英寸。

20、)， 收集膜过滤液， 膜过滤液上高分子微球 (微球为聚苯乙烯型， 型号为NM100， 粒径为150um)， 先用水洗脱至流出液几乎不含其它成 分， 后换成15乙醇洗脱， 液相检测， 当酪醇被洗脱下来时开始收集， 至酪醇不再下来， 合并 收集液， 减压浓缩至小体积， 真空干燥， 得到酪醇。 纯度检测为90， 酪醇转移率为73。 0036 实施例1使用的1醋酸壳聚糖溶液是实验室现配产品， 具体的配制方法是： 1壳 聚糖溶液的配制： 先用冰醋酸和水配制1的醋酸溶液， 然后用少量1醋酸溶液溶解1g壳 聚糖粉， 搅拌均匀， 再加入剩下量的1醋酸溶液， 充分溶解成胶体溶液， 即得。 0037 实施例2 0。

21、038 取红景天药材1kg， 加10倍量水， 煎煮提取3次， 每次2小时， 提取液合并到一起， 加 入4量(V/V， 体积比)的ZTC1+1溶液， 边加边搅， 3分钟后停止搅拌， 室温放置12小时， 过滤， 滤液过NE80膜(型号为纳滤膜， 8.0英寸)， 收集膜过滤液， 膜过滤液上高分子微球(微球为聚 苯乙烯型， 型号为UniPs5-100， 粒径为5um)， 先用水洗脱至流出液几乎不含其它成分， 后换 说明书 3/5 页 5 CN 104628528 B 5 成10乙醇洗脱， 液相检测， 当酪醇被洗脱下来时开始收集， 至酪醇不再下来， 合并收集液， 减压浓缩至小体积， 微波干燥， 得到酪醇。

22、。 纯度检测为81， 酪醇转移率为67。 0039 实施例2中ZTC1+1溶液是实验室现配产品， 具体的配制方法是： 0040 ZTC1+1澄清剂 0041 1A溶液的配制： 称取1g， 加水到100ml配制方法： 先用少量水溶解， 搅拌， 再加入 剩下量的溶剂， 搅拌均匀， 溶胀24小时后， 滤过， 即得。 0042 1B溶液的配制： 称取1g， 加1醋酸溶剂100ml 0043 配制方法： 先用冰醋酸和水配制1的醋酸溶液， 然后用少量1醋酸溶液溶解1gB 组分， 并搅成糊状， 再加入剩下量的1醋酸溶液， 溶胀24小时， 滤过， 即得。 0044 使用时先加入A， 搅拌3分钟， 后加入B， 。

23、搅拌均匀， 60水浴条件下15min。 0045 实施例3 0046 取红景天药材1kg， 加6倍量水， 超声提取2次， 每次30分钟， 提取液合并到一起， 加 入5量(V/V， 体积比)的中药澄清剂(现配)， 边加边搅， 3分钟后停止搅拌， 放置24小时， 过 滤， 滤液过NE25膜(型号为纳滤膜， 2.5英寸)， 收集膜过滤液， 膜过滤液上高分子微球(微球 为聚苯乙烯型， 型号为UniCoreS10， 粒径为10um)， 先用水洗脱至流出液几乎不含其它成 分， 后换成20乙醇洗脱， 液相检测， 当酪醇被洗脱下来时开始收集， 至酪醇不再下来， 合并 收集液， 减压浓缩至小体积， 喷雾干燥， 。

24、得到酪醇。 纯度检测为83， 酪醇转移率为70。 0047 实施例3中药澄清剂是实验室现配产品， 具体的配制方法是： 0048 5A的配制： 量取5mlA组分， 加水至100ml， 搅拌均匀， 即得。 0049 5B的配制： 称取5gB组分， 加水至100ml， 搅拌均匀， 即得。 0050 使用时， 向待澄清液中先加入A剂的5稀释液， 搅拌均匀(加入澄清剂时搅拌速度 宜为60-100r/min， 搅拌时间2-3min， 均匀即可)， 50-60保温静置30-60分钟， 在搅拌下 加入B剂的5稀释液， 添加量与A剂相同， 搅拌2-3min混匀后， 停止搅拌， 静待5-10min。 0051 实。

25、施例4 0052 取红景天药材1kg， 加20倍量40乙醇， 连续渗漏提取， 浸渍24小时， 开始收集浸渍 液， 边收集边加入新的40乙醇至20倍量， 提取液合并到一起， 加入6量(V/V， 体积比)的 果汁澄清剂， 边加边搅， 2分钟后停止搅拌， 放置12小时， 过滤， 滤液过NE18膜(型号为纳滤 膜， 1.8英寸)， 截留分子量在1001000道尔顿， 收集膜过滤液， 膜过滤液上高分子微球(微 球为聚苯乙烯型， 型号为UniPMM50-300， 粒径为50um)， 先用水洗脱至流出液几乎不含其它 成分， 后换成25乙醇洗脱， 液相检测， 当酪醇被洗脱下来时开始收集， 至酪醇不再下来， 合。

26、 并收集液， 减压浓缩至小体积， 真空干燥， 得到酪醇。 纯度检测为87。 酪醇转移率为76。 0053 实施例4果汁澄清剂是实验室现配产品， 具体的配制方法是： 称取适量A剂， 加水稀 释为5的溶液； 称取适量B剂， 加水稀释为5的溶液。 使用时向待澄清溶液中先加入A剂的 5稀释液， 搅拌均匀(加入澄清剂时搅拌速度宜为60-100r/min， 搅拌时间1-2min混合均匀 即可)， 静置10-30分钟， 再搅拌下加入B剂的5稀释液， 添加量与A剂相同， 加入B剂混匀后， 停止搅拌， 静待2-10min即可见絮状沉淀生成并逐渐沉降。 0054 实施例5 0055 取红景天药材1kg， 加8倍量。

27、水， 微波提取2次， 每次5分钟， 提取液合并到一起， 加入 2.5量(V/V， 体积比)的1醋酸壳聚糖溶液， 边加边搅， 30分钟后停止搅拌， 室温放置6小 说明书 4/5 页 6 CN 104628528 B 6 时， 过滤， 滤液过NE40膜(型号为纳滤膜， 4.0英寸)， 收集膜过滤液， 膜过滤液上高分子微球 (微球为聚苯乙烯型， 型号为NM100， 粒径为100um)， 先用水洗脱至流出液几乎不含其它成 分， 后换成15乙醇洗脱， 液相检测， 当酪醇被洗脱下来时开始收集， 至酪醇不再下来， 合并 收集液， 减压浓缩至小体积， 真空干燥， 得到酪醇。 纯度检测为91， 酪醇转移率为73。

28、。 0056 实施例6 0057 取红景天药材1kg， 研磨成粗粉， 加8倍量水， 微波提取2次， 每次5分钟， 提取液合并 到一起， 加入2.5量(V/V， 体积比)的1醋酸壳聚糖溶液， 边加边搅， 30分钟后停止搅拌， 室温放置12小时， 过滤， 滤液过NE40膜(型号为纳滤膜， 4.0英寸)， 收集膜过滤液， 膜过滤液 上高分子微球(微球为聚苯乙烯型， 型号为NM100， 粒径为150um)， 先用水洗脱至流出液几乎 不含其它成分， 后换成15乙醇洗脱， 液相检测， 当酪醇被洗脱下来时开始收集， 至酪醇不 再下来， 合并收集液， 减压浓缩至小体积， 真空干燥， 得到酪醇。 纯度检测为92.5， 酪醇转 移率为74。 0058 以上所述仅为本发明的较佳实施例， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精神和 原则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说明书 5/5 页 7 CN 104628528 B 7 。