技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种吲哚类化合物及其作为HIV-1逆转录酶抑制剂的应 用。
背景技术
获得性免疫缺陷病综合症（AIDS）在世界和我国流行，是引起全球范围死亡的重大流行 疾病。世界卫士组织最近的数据表明全球大约有三百万人已经死于艾滋病，目前仍有三千万 的患者正在与艾滋病进行抗争。因此高效价廉的治疗药物的研制仍是防治艾滋病的当务之急。 人免疫缺陷性病毒1型（HIV-1）是引起获得性免疫缺陷综合症的致病因子，该病毒感染宿主 后，主要利用逆转录酶，整合酶和蛋白酶完成其复制周期。因为艾滋病毒在复制过程中，不 断产生变异，因此给药物的开发和疫苗的研制带来了巨大的挑战。目前临床上主要采用不同 作用机制的几种药物组合使用，即高效抗逆转录病毒疗法。高效抗逆转录病毒疗法的推广使 用有效缓解了患者的病情，延长了艾滋病人的平均寿命，但其治疗费用较高，长期使用产生 了难以忍受的不良反应和耐药性。目前我们仍然缺乏有效的抗艾滋病疫苗，高效价廉的治疗 药物的研制仍是防治艾滋病的当务之急。
根据作用靶点不同，可以将上市的艾滋病药物分为：逆转录酶抑制剂，整合酶抑制剂， 蛋白酶抑制剂，进入抑制剂。其中，逆转录酶抑制剂在艾滋病的治疗中占有重要的地位，其 作用靶点为HIV-1的逆转录酶（RT）。根据作用机制的不同，可以将逆转录酶抑制剂分为核 苷类逆转录酶抑制剂（NRTs）和非核苷类逆转录酶抑制剂（NNRTS）。核苷类逆转录酶抑制 剂通过与病毒复制过程中正常的核苷酸底物进行竞争，被掺入病毒的逆转录产物中，从而终 止病毒基因组的延伸。非核苷类逆转录酶抑制剂通过作用距离催化中心大约的疏水口袋， 通过异构作用调节或影响逆转录酶的构象，破坏其合成DNA的活性。
非核苷类逆转录酶抑制已经研究了20多年，目前已经发现至少50多种结构各异的非 核苷类逆转录酶抑制剂。第一代非核苷类药物为奈韦拉平（nevirapine）和地拉韦啶 （delavirdine）,第二代非核苷类药物依法韦仑（efavirenz）、依曲韦林(etravirine)和利匹韦林 (rilpivirine)。另有多个非核苷类候选药物处于临床研究阶段。上述非核苷类药物具有活性强， 特异性好的优点，不影响细胞或线粒体的DNA合成，但因为耐药突变株的出现而限制其临 床使用。因此急切需要开发出新型的非核苷类抑制剂，拓宽临床用药的选择。近来有文献报 道部分吲哚类化合物具有一定的抗HIV逆转录酶活性，但大多结构复杂、合成难度大，而且 活性也不是特别好，从而限制其成药的可能。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种吲哚类化合物及其作为HIV-1逆转录酶抑制剂的 应用。
本发明所提供的吲哚类化合物，具有以下通式所示的结构：
其中，
R1为H、2-Me、4-OH、4-NO2、4-COOMe、5-CHO、5-CN、5-F、5-Br、5-Cl、5-NO2、 5-COOMe或6-F；
R2为Me或Et；
R3为H、Boc、Me或Isopentyl（异戊基）。
本发明通过体外抗HIV-1活性实验，发现上述吲哚类化合物可以用作HIV-1非核苷类逆 转录酶抑制剂，用于制备抗艾滋病药物。优选的，尤其是下列化合物:
2-（5-硝基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX1)、
2-（5-氟-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX2)、
2-（5-氯-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX3)、
2-（6-氟-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX4)、
2-（5-溴-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX5)、
2-（5-氰基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX7)或
2-（1-甲基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯(HX12)。
本发明还提供前面结构式所表示的吲哚类化合物的制备方法。
当R1=H,R3=Isopentyl，通过下面式i所示反应合成得到带R1，R3的吲哚衍生物。具体 操作步骤可以为：
取吲哚（232mg，2mmol）溶解在10mL DMF中，在5°C下加入8mL溶有96mg（2.4 mmol）NaH（60%分散于矿物油中dispersion in mineral oil）的DMF溶液,混合液在室温下搅 拌30min后冷却到5°C，然后滴加5mL溶有362.5mg异戊基溴（2.4mmol）的DMF溶液， 室温下反应，TLC监测。16h以后，混合液冷却到5°C，加入15mL水淬灭反应，用乙醚提 取产物，柱层析分离得到反应产物作为反应（iii）的原料。
当R1=H,R3=Boc（叔丁氧羰基）,通过下面式ii所示反应合成得到带R1，R3的吲哚衍 生物。具体操作步骤可以为：
取吲哚（232mg，2mmol）溶解在10mL二氯甲烷中，室温下滴加(Boc)2(480.15mg,2.2 mmol),加入1mL三乙胺室温下搅拌反应。TLC监测反应，5h后，柱层析分离得到反应的 产物作为反应（iii）的原料。
除上面2种以外的带R1，R3的吲哚衍生物，均可以在市场上购买。
通过合成或购买商品，获得带R1，R3的吲哚衍生物，然后取等当量的带R1，R3的吲哚 衍生物和三氟丙酮酸酯溶解在二氯甲烷中充分溶解，后加入足量的AlCl3催化傅克反应，TLC 监测反应进行，原料基本反应完全后，柱层析分离即为目标化合物。
反应式如下面（iii）式所示。
R1为H、2-Me、4-OH、4-NO2、4-COOMe、5-CHO、5-CN、5-F、5-Br、5-Cl、5-NO2、 5-COOMe或6-F；
R2为Me或Et；
R3为H、Boc、Me或Isopentyl。
具体操作过程可以如下：
取0.2mmol的反应1或反应2或者商品化的带R1，R3的吲哚衍生物和0.2mmol的三氟 丙酮酸酯加入到一含有磁子的单口圆底烧瓶中，加入5mL的二氯甲烷使其溶解，搅拌均匀， 加入0.2mmol的AlCl3催化傅克反应进行，TLC监测反应进行。原料基本反应完全后，柱层 析分离得到纯净的目标化合物。
本发明所述的化合物可以作为HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂用于制备抗艾滋病药物。 所以，本发明也提供了一种抗艾滋病药物组合物，包含本发明所述的化合物和一种或多种药 学上可接受载体或赋形剂，其可以按照现有的常规医药技术来制备。
具体实施方式
实施例1：2-（5-硝基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX1）的制备
取0.2mmol的5-硝基吲哚和0.2mmol的三氟丙酮酸酯加入到一含有磁子的单口圆底烧 瓶中，加入5mL的二氯甲烷使其溶解，搅拌均匀，加入0.2mmol的AlCl3催化傅克反应进 行，TLC监测反应进行。原料充分反应完全后，柱层析分离得到纯净的固体化合物HX1，产 物为黄色固体，产率为88%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ11.09(s,1H),8.85(d,J=1.7Hz, 1H),7.96(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),7.74(s,1H),7.53(d,J=9.0Hz,1H),4.33–4.23(m,2H),1.20 (t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ168.69,142.80,140.78,129.76,129.60, 126.41,125.72,119.27,118.07,113.13,112.07,64.07,14.20。
实施例2：2-（5-氟-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX2）的制备
制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为90%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.38 (s,1H),7.57(d,J=10.3Hz,1H),7.42(s,1H),7.20(s,1H),6.95(t,J=9.0Hz,1H),4.40(dq,J= 20.9Hz,3H),1.33(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.19,159.28,132.90, 126.16,125.57,125.47,124.93,122.08,112.14,112.04,111.38,111.12,108.67,108.62,106.40, 106.15,64.42,13.86。
实施例3：2-（5-氯-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX3）的制备
制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为87%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34 (s,1H),8.00(s,1H),7.35(s,1H),7.18(d,J=10.3Hz,1H),7.11(d,J=8.6Hz,1H),4.40–4.27 (m,2H),1.28(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.09,135.03,126.78,125.70, 125.63,124.82,123.90,121.97,113.91,112.81,108.28,64.51,13.89。
实施例4：2-（6-氟-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX4）的制备
制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为100%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 10.60(s,1H),7.90(dd,J=8.8,5.6Hz,1H),7.59(d,J=2.4Hz,1H),7.19(dd,J=9.8,2.3Hz,1H), 6.91(d,J=1.9Hz,1H),4.37(dd,J=7.0,6.0Hz,2H),1.29(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101 MHz,Acetone-d6)δ169.17,161.74,137.73,126.52,123.18,123.12,109.93,109.19,108.95,98.53, 98.27,63.71,14.24。
实施例5：2-（5-溴-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX5）的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为85%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34 (s,1H),8.00(s,1H),7.35(s,1H),7.18(d,J=10.3Hz,1H),7.11(d,J=8.6Hz,1H),4.40–4.27 (m,3H),1.28(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.09,135.03,126.78,125.70, 125.63,124.82,123.90,121.97,113.91,112.81,108.28,64.51,13.89。
实施例6：2-（1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX6）的制备
制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为99%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28 (s,1H),7.89(d,J=8.1Hz,1H),7.43(d,J=2.5Hz,1H),7.34(d,J=8.1Hz,1H),7.28–7.10(m, 2H),4.65–4.27(m,3H),1.33(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.42,136.35, 125.13,124.99,124.44,122.70,121.15,121.14,120.53,111.39,108.65,64.25,13.93。
实施例7：2-（5-氰基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX7）的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为92%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6) δ11.12(s,1H),8.36(s,1H),7.81(d,J=2.0Hz,1H),7.66(d,J=8.5Hz,1H),7.48(dd,J=8.5, 1.3Hz,1H),4.40(dt,J=7.1,3.7Hz,2H),1.32(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz, Acetone-d6)δ168.76,139.45,128.61,127.69,126.44,126.28,125.37,123.60,121.00,114.05, 110.58,103.87,63.96,14.22。
实施例8：2-（1-Boc-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX8）的制备
取吲哚（232mg，2mmol）溶解在10mL二氯甲烷中，室温下滴加(Boc)2(480.15mg,2.2 mmol),加入1mL三乙胺室温下搅拌反应。TLC监测反应，5h后，柱层析分离得到1-Boc 吲哚，后面的制备方法如实施例1，产物无色油状物，产率为95%。1H NMR(400MHz, Acetone-d6)δ8.19(d,J=8.4Hz,1H),7.86(d,J=6.3Hz,2H),7.37(t,J=7.7Hz,1H),7.27(t,J= 7.6Hz,1H),3.90(s,3H),1.70(s,9H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ168.86,149.92,136.46, 128.56,126.51,126.20,125.65,123.79,122.31,115.94,115.16,103.32,85.37,54.13,28.15。
实施例9：2-（1-异戊基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX9）的制备
取吲哚（232mg，2mmol）溶解在10mL DMF中，在5°C下加入8mL溶有96mg（2.4 mmol）NaH（60%分散于矿物油中）的DMF溶液,混合液在室温下搅拌30min后冷却到5°C， 然后滴加5mL溶有362.5mg异戊基溴（2.4mmol）的DMF溶液，室温下反应，TLC监测。 16h以后，混合液冷却到5°C，加入15mL水淬灭反应，用乙醚提取产物，柱层析分离得到 1-异戊基吲哚，后面的制备方法如实施例1，产物为淡黄色油状物，产率为93%。1H NMR(400 MHz,Acetone-d6)δ7.89(d,J=8.1Hz,1H),7.53(s,1H),7.45(d,J=8.3Hz,1H),7.19(t,J=7.6 Hz,1H),7.07(t,J=7.6Hz,1H),4.40–4.30(m,2H),4.29–4.21(m,2H),1.73(dd,J=14.8,7.0 Hz,2H),1.60(dt,J=13.3,6.6Hz,1H),1.28(t,J=7.1Hz,3H),0.96(d,J=6.6Hz,6H).13C NMR (101MHz,Acetone-d6)δ169.22,137.41,128.87,126.99,125.40,123.81,122.61,122.30,120.40, 110.72,108.61,63.54,45.29,39.70,26.50,22.72,22.70,14.28。
实施例10：2-（5-氯-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX10）的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为88%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6) δ10.63(s,1H),7.78(d,J=1.3Hz,1H),7.50(d,J=2.6Hz,1H),7.33(d,J=8.7Hz,1H),7.01(dd, J=8.7,2.0Hz,1H),3.77(s,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ169.54,136.21,127.52, 126.53,125.95,123.69,122.96,121.22,113.99,109.39,78.25,53.95。
实施例11：2-（5-硝基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX11）的制备
制备方法如实施例1，产物为黄色固体，产率为89%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 11.13(s,1H),8.82(s,1H),7.95(d,J=9.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.53(d,J=9.0Hz,1H),3.80(s, 3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ169.22,142.83,140.72,129.68,126.38,125.77,123.54, 119.12,118.10,113.14,111.96,54.19。
实施例12：2-（1-甲基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX12）的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色油状物，产率为92%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6) δ7.88(d,J=8.1Hz,1H),7.47(s,1H),7.40(d,J=8.3Hz,1H),7.20(dd,J=11.3,4.0Hz,1H), 7.08(t,J=7.4Hz,1H),4.40–4.29(m,2H),3.85(d,J=3.8Hz,3H),1.28(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ169.25,138.25,129.91,126.86,126.65,123.81,122.67,122.11, 120.44,110.56,108.55,63.58,33.05,14.24。
实施例13：2-（5-甲酸甲酯基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX13） 的制备
制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为86%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 10.90(s,1H),8.77(s,1H),7.86(d,J=8.6Hz,1H),7.73(d,J=2.3Hz,1H),7.54(d,J=8.6Hz, 1H),4.45–4.34(m,2H),3.89(s,3H),1.33(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ 169.07,168.27,140.35,127.75,126.56,125.99,125.08,123.93,123.72,122.85,112.46,111.14, 63.87,52.02,14.22。
实施例14：2-（4-硝基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX14）的制备
制备方法如实施例1，产物为黄色固体，产率为83%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 11.28(s,1H),7.86(dd,J=11.2,3.0Hz,2H),7.62(d,J=7.7Hz,1H),7.31(t,J=7.9Hz,1H), 4.38–4.28(m,2H),1.26(q,J=6.8Hz,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ168.56,145.00, 139.52,129.62,129.58,126.66,123.80,121.91,118.09,117.60,108.96,63.63,14.17。
实施例15：2-（4-甲酸甲酯基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX15） 的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为86%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6) δ10.94(s,1H),7.72(dd,J=8.1,0.5Hz,1H),7.66(s,1H),7.51(d,J=7.4Hz,1H),7.23(t,J=7.8 Hz,1H),3.89(d,J=4.5Hz,3H),3.77(s,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ171.79,169.80, 138.45,128.02,127.98,125.71,123.42,123.11,121.94,116.90,110.38,106.62,53.71,53.00。
实施例16：2-（5-氟-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX16）的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固，产率为91%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 10.54(s,1H),7.50(d,J=2.6Hz,1H),7.42(dd,J=10.6,2.1Hz,1H),7.32(dd,J=8.9,4.6Hz, 1H),6.82(td,J=9.1,2.5Hz,1H),3.77(s,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ169.63,159.78, 134.40,127.77,126.71,123.77,113.60,111.23,110.97,106.44,78.25,53.91。
实施例17：2-（5-氰基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX17）的制备
制备方法如实施例1，产物为白色固体，产率为81%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 11.12(s,1H),8.36(s,1H),7.82(d,J=1.6Hz,1H),7.67(d,J=8.5Hz,1H),7.49(dd,J=8.5,1.3 Hz,1H),3.94(s,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ169.34,139.44,128.62,127.57,126.41, 126.28,125.45,123.57,121.06,114.07,110.51,103.94,54.18。
实施例18：2-（4-羟基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX18）的制备
制备方法如实施例1，产物为黄色固体，产率为100%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6)δ 10.60(s,1H),7.49(s,1H),7.07–6.94(m,2H),6.54(dd,J=7.4,1.0Hz,1H),4.39(dt,J=7.1,4.2 Hz,2H),1.32(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ168.16,150.26,139.93, 126.18,124.68,124.44,115.85,108.18,106.08,104.43,104.38,63.72,14.20。
实施例19：2-（2-甲基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX19）的制备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为96%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.02 (s,1H),7.79(d,J=7.9Hz,1H),7.21(s,1H),7.11(dd,J=16.7,7.8Hz,2H),4.37(dd,J=24.4, 7.2Hz,2H),4.02(s,1H),2.48(s,3H),1.32(t,J=7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ 169.38,135.30,134.66,126.83,125.40,122.56,121.61,120.45,120.23,110.38,103.89,63.58, 13.89,13.74。
实施例20：2-（5-甲酰基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸乙酯（HX20）的制 备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为92%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6) δ11.04(s,1H),10.05(s,1H),8.54(s,1H),7.75(s,2H),7.62(d,J=7.9Hz,1H),4.39(d,J=4.8 Hz,2H),1.31(d,J=7.0Hz,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ191.72,166.67,140.21, 130.10,128.79,127.16,126.60,125.40,122.76,121.67,112.45,110.67,62.98,13.34。
实施例21：2-（5-甲酰基-1H-吲哚-3-基）-2-羟基-3,3,3-三氟丙酸甲酯（HX21）的制 备
制备方法如实施例1，产物为淡黄色固体，产率为91%。1H NMR(400MHz,Acetone-d6) δ11.07(s,1H),10.05(s,1H),8.51(s,1H),7.74(d,J=5.8Hz,2H),7.63(d,J=8.5Hz,1H),3.93 (s,3H).13C NMR(101MHz,Acetone-d6)δ191.81,168.53,140.02,130.17,127.15,127.00,126.57, 125.58,125.41,121.60,112.45,99.99,53.15。
表1 本发明方法合成的目标化合物HX1-21的化学结构
Compound R1 R2 R3
HX1 5-NO2 Et H HX2 5-F Et H HX3 5-Cl Et H HX4 6-F Et H HX5 5-Br Et H HX6 H Et H HX7 5-CN Et H HX8 H Me Boc HX9 H Et isopentyl HX10 5-Cl Me H HX11 5-NO2 Me H HX12 H Et Me HX13 5-COOMe Et H HX14 4-NO2 Et H HX15 4-COOMe Me H HX16 5-F Me H HX17 5-CN Me H HX18 4-OH Et H HX19 2-Me Et H HX20 5-CHO Et H HX21 5-CHO Me H
实验例22：吲哚类化合物药理实验
（1）吲哚类化合物细胞毒性测定:
黄色的噻唑兰，简称MTT，可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能 使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶物可被 20%（质量比体积）SDS溶解，用酶联免疫检测仪在595nm波长处测定其光吸收值，可间接 反映细胞数量。
实验时，将TZM-bl（美国健康研究院提供）细胞传至96孔板中，24小时后将化合物按 一定的稀释度加入细胞在37°C培养72小时后，吸走上清100μl，加入20μl MTT，37°C继续 培养4小时后，加入100μl20%SDS培养18小时后，用酶标仪测定595nm波长下的OD值。 化合物的抑制率（%）=[1-（E-N）/(P-N)]×100,其中“E”代表给药组的OD值，“P”代表 未给药组的OD值，“N”代表空白组OD值。化合物的半数抑制浓度（CC50）作为该化合物细胞 毒性的指标。
（2）吲哚化合物体外抗HIV-1活性:
HIV-ⅢB（美国健康研究院提供）是经典的HIV药物筛选实验毒株，TZM-bl（美国健康 研究院提供）细胞是经改造过的Hela（美国典型物保藏中心提供）细胞株，细胞膜稳定表达 HIV受体和辅助受体，细胞核稳定整合了艾滋病毒长末端重复序列启动的荧光素酶基因。HIV- ⅢB感染TZM-b1细胞后，病毒表达的TAT蛋白可以激活细胞中荧光素酶基因的表达，通过检 测细胞中荧光素酶的活性，可判断病毒的复制水平。通过检测药物处理后细胞中荧光素酶， 可精确定量药物抑制HIV-1病毒的活性。
实验时，将HIV-ⅢB病毒与药物混合加入到TZM-bl细胞中（60％（面积比）铺满），待 病毒吸附细胞2小时后，吸去病毒和药物的混合物，加入新鲜培养基（DMEM，90％(体积比)， 胎牛血清，10％（体积比），G418，500μg/ml;潮霉素，100μg/ml;嘌呤霉素，1μg/ml.其中 的百分含量为体积百分含量）继续培养，每个稀释度做8个重复孔。37°C孵育24小时后， 检测细胞中荧光素酶的活性。化合物的抑制率（%）=[1-（E-N）/(P-N)]×100,其中“E”代 表实验组中荧光素酶的活性，“P”代表阳性组中荧光素酶的活性，“N”代表阴性组中荧光素 酶的活性。化合物的半数抑制浓度（IC50）作为其抗病毒活性的指标。
本发明以地拉韦啶（DEV）和依法韦仑（EFV）韦对照，对合成的21个化合物进行细胞毒 性和抗HIV-1活性检查，并计算了化合物的选择性指数SI，结果见表2。
表2 本发明合成的目标化合物HX1-21的细胞毒性和抗HIV-1活性结果
上述实验结果表明：合成的化合物大多数都具有很好抗HIV-1活性，例如化合物HX1 （IC50=0.045μM，SI=1404.6）、HX3（IC50=0.249μM，SI=552.6）、HX4（IC50=0.147μM， SI=757.8）、HX12（IC50=0.309μM，SI=752.0）等。