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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710243547.8 (22)申请日 2017.04.14 (83)生物保藏信息 CCTCC NO:M2013283 2013.06.24 (71)申请人 江南大学 地址 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大 道1800号 (72)发明人 廖祥儒窦欣田乔鹏蔡宇杰 管政兵 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A01N 63/02(2006.01) A01P 7/04(2006.01) A01P 21/00(2006.01) C12R 1/07(2。
2、006.01) (54)发明名称 一种以苦楝为原料经微生物发酵制备杀虫 剂的方法 (57)摘要 本发明提供了一种制备生物源杀虫剂的技 术。 其工艺特点是以苦楝为原料， 利用保存于中 国 典 型 培 养 物 保 藏中 心的 ， 保 藏 编号 为 ： CCTCCNO： M2013283的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47和市售短小芽孢杆菌及 市售苏云金杆菌混合发酵。 原料适当打碎后加菌 种100mL， 加水10L， 2530发酵3-12d， 过滤 后获得成品。 本发明制备方法及过程中无污染安 全可靠， 发酵时间周期短， 工艺环节少， 简单易操 作， 可节省。
3、投资和运行费用。 与传统化学药剂相 比， 其具绿色安全， 环境友好等优势， 且促生菌本 身还有较好的杀虫防病和促生作用， 拥有广阔的 应用前景。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106867947 A 2017.06.20 CN 106867947 A 1.一种发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法。 其特征是以苦楝为原料， 添加菌种发酵制 备杀虫剂， 该方法包括以下步骤： 1)菌种准备： 将解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、 市售苏云金 杆菌分别接种于种子培养基， 于30， 250r/min震荡培养12h； 所述种子培养基成分按g/L计 为： 蛋白胨10， 酵母膏5。
4、， NaCl 10， 其余成分为水， 121高压灭菌15min， 调整pH至7.0。 按一 定比例混合做种子。 2)发酵液准备： 选用质量优良的苦楝， 用水冲洗， 7075酒精浸泡3min， 用水洗净， 经搅碎机搅碎后待用。 3)发酵罐空消及空气管道消毒： 按相关说明书进行发酵罐空消。 4)发酵液实消： 将步骤2所得苦楝放入发酵罐中， 补充自来水至终体积为10L， 按相关说 明书进行实消灭菌。 5)接种培养： 当发酵罐温度降至37时， 将步骤1所得种子按体积比1的接种量， 接种 至装有苦楝的发酵罐中， 2530条件下培养312天， 设置工艺要求的通气量并保持罐 压， 设置各其他培养参数培养。 。
5、6)出料： 培养完毕， 放出发酵液， 过滤， 过滤后所得发酵液即为杀虫剂成品。 2.根据权利要求1所述的发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法， 其特征是： 所述菌种单独 种子培养基培养12h按一定比例混合后做为发酵用种子。 3.根据权利要求1所述的发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法， 其特征是： 菌种(解淀粉 芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、 市售苏云金杆菌)用种子培养基配方为 (g/L)： 蛋白胨10， 酵母膏5， NaCl 10， 其余成分为水， 121高压灭菌15min， 调整pH至7.0。 4.根据权利要求1所述的发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法， 其特征是： 苦楝处理。
6、方法 为： 选用质量优良的苦楝， 用水冲洗， 7075酒精浸泡3min， 用水洗净， 经搅碎机搅碎后 待用。 5.根据权利要求1所述的发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法， 其特征是： 菌种的加入量 为发酵体系的1。 6.根据权利要求1所述的发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法， 其特征是： 原料及菌种混 合均匀， 发酵温度2530， 发酵时间3-12d。 7.根据权利要求1所述的发酵苦楝制备生物源杀虫剂的方法， 其特征是： 发酵时间周期 短， 工艺环节少， 发酵后可获得较好的杀虫防病和促生作用的杀虫剂。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106867947 A 2 一种以苦楝为原料经微生物发酵制备杀虫剂。
7、的方法 技术领域 0001 本发明涉及到解一株淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽 孢杆菌及苏云金杆菌微生物发酵苦楝制备植物源杀虫剂的生产方法， 属于微生物和发酵技 术领域。 背景技术 0002 苦楝(Melia azedarach)为楝科落叶乔木植物， 高10-20m； 树皮灰褐色， 纵裂。 分枝 广展， 小枝有叶痕。 叶为2-3回奇数羽状复叶， 长20-40cm； 小叶对生， 卵形、 椭圆形至披针形， 顶生一片通常略大， 长3-7cm， 宽2-3cm， 先端短渐尖， 基部楔形或宽楔形， 多少偏斜， 边缘有 钝锯齿， 幼时被星状毛， 后两面均无毛，。
8、 侧脉每边12-16条， 广展， 向上斜举。 圆锥花序约与叶 等长， 无毛或幼时被鳞片状短柔毛； 花芳香； 花萼5深裂， 裂片卵形或长圆状卵形， 先端急尖， 外面被微柔毛； 花瓣淡紫色， 倒卵状匙形， 长约1cm， 两面均被微柔毛， 通常外面较密； 雄蕊管 紫色， 无毛或近无毛， 长7-8mm， 有纵细脉， 管口有钻形、 2-3齿裂的狭裂片10枚， 花药10枚， 着 生于裂片内侧， 且与裂片互生， 长椭圆形， 顶端微凸尖； 子房近球形， 5-6室， 无毛， 每室有胚 珠2颗， 花柱细长， 柱头头状， 顶端具5齿， 不伸出雄蕊管。 核果球形至椭圆形， 长1-2cm， 宽8- 15mm， 内果皮木。
9、质， 4-5室， 每室有种子1颗； 种子椭圆形。 花期4-5月， 果期10-12月。 生于旷野 或路旁， 常栽培于屋前房后。 该植物在湿润的沃土上生长迅速， 对土壤要求不严， 在酸性土、 中性土与石灰岩地区均能生长， 是平原及低海拔丘陵区的良好造林树种， 在村边路旁种植 更为适宜。 0003 该种是材用植物， 亦是药用植物， 其花、 叶、 果实、 根皮均可入药， 用根皮可驱蛔虫 和钩虫， 但有毒， 用时要严遵医嘱， 根皮粉调醋可治疥癣， 用苦楝子做成油膏可治头癣。 此 外， 果核仁油可供制润滑油和肥皂等。 根据各家对苦楝的研究， 发现苦楝也有杀虫的效果， 其中的的川楝素对菜青虫等具有很强的胃毒。
10、作用， 可以破坏中肠组织， 阻断神经传导而导 致害虫麻痹、 昏迷、 死亡， 因而可用于制备植物源杀虫剂。 0004 植物源杀虫剂是直接利用或提取植物的根、 茎、 叶、 花、 果、 种子等或利用其次生代 谢物质制成具有杀虫作用的活性物质。 与生物农药一样， 植物源杀虫剂源于天然， 与环境相 容， 可在环境中降解或代谢为简单的天然化合物。 利用合适的植物促生菌发酵苦楝， 不仅有 利于生理活性物质的提取， 还不易造成活性物质的失活， 促生菌本身还有较好的杀虫防病 和促生作用。 有利于改善植物生长和增强杀虫效果， 有利于环境保护和苦楝植物本身的有 效利用。 发明内容 0005 针对现有技术存在的上述缺。
11、陷， 本发明利用苦楝植物为原料， 用2013年6月24日保 存于中国典型培养物保藏中心的， 保藏编号为： CCTCCNO： M2013283的解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens) H47 (该菌株以 下简称 ： 解淀粉芽孢杆菌 H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢杆菌及市售苏云金杆菌发酵制备植物源杀虫剂， 有利 说明书 1/3 页 3 CN 106867947 A 3 于改善植物生长和增强杀虫效果， 有利于环境保护。 0006 本发明的发酵技术方案： 0007 1)菌种准备： 将解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、 。
12、市售苏 云金杆菌分别接种于种子培养基， 于30， 250r/min震荡培养12h； 所述种子培养基成分按 g/L计为： 蛋白胨10， 酵母膏5， NaCl 10， 其余成分为水， 121高压灭菌15min， 调整pH至7.0。 按一定比例混合做种子。 0008 2)发酵液准备： 选用质量优良的苦楝， 用水冲洗， 7075酒精浸泡3min， 用水 洗净， 经搅碎机搅碎后待用。 0009 3)发酵罐空消及空气管道消毒： 按相关说明书进行发酵罐空消。 0010 4)发酵液实消： 将步骤2所得苦楝放入发酵罐中， 补充自来水至终体积为10L， 按相 关说明书进行实消灭菌。 0011 5)接种培养： 当发。
13、酵罐温度降至37时， 将步骤1所得种子按体积比1的接种量， 接种至装有苦楝的发酵罐中， 2530条件下培养312天， 设置工艺要求的通气量并保持 罐压， 设置各其他培养参数培养。 0012 6)出料： 培养完毕， 放出发酵液， 过滤， 过滤后所得发酵液即为杀虫剂成品。 0013 本发明的有益效果： 0014 本发明提供了发酵苦楝制得一种生物源杀虫剂的方法。 本发明制备方法及过程中 无污染安全可靠， 发酵时间周期短， 工艺环节少， 简单易操作， 可节省投资和运行费用。 与传 统化学药剂相比， 其具绿色安全， 环境友好等优势， 且促生菌本身还有较好的杀虫防病和促 生作用， 拥有广阔的应用前景。 0。
14、015 具体实施方法： 0016 下面结合实施例对本发明进行进一步描述。 以下实施例仅为本发明的几个具体实 施例， 但本发明的设计构思并不局限于此， 凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动， 均 应属于侵犯本发明保护范围的行为。 0017 实施例1 0018 1)菌种准备： 将解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、 市售苏 云金杆菌分别接种于种子培养基， 于30， 250r/min震荡培养12h； 所述种子培养基成分按 g/L计为： 蛋白胨10， 酵母膏5， NaCl 10， 其余成分为水， 121高压灭菌15min， 调整pH至7.0。 按1:1:2混合做种子。 。
15、0019 2)发酵液准备： 选用质量优良的苦楝， 用水冲洗， 7075酒精浸泡3min， 用水 洗净， 经搅碎机搅碎后待用。 0020 3)发酵罐空消及空气管道消毒： 按相关说明书进行发酵罐空消。 0021 4)发酵液实消： 将步骤2所得苦楝放入发酵罐中， 补充自来水至终体积为10L， 按相 关说明书进行实消灭菌。 0022 5)接种培养： 当发酵罐温度降至37时， 将步骤1所得种子按体积比1的接种量， 接种至装有苦楝的发酵罐中， 25条件下培养6天， 设置工艺要求的通气量并保持罐压， 设 置各其他培养参数培养。 0023 6)出料： 培养完毕， 放出发酵液， 过滤， 过滤后所得发酵液即为杀虫。
16、剂成品。 0024 实施例2 说明书 2/3 页 4 CN 106867947 A 4 0025 1)菌种准备： 将解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、 市售苏 云金杆菌分别接种于种子培养基， 于30， 250r/min震荡培养12h； 所述种子培养基成分按 g/L计为： 蛋白胨10， 酵母膏5， NaCl 10， 其余成分为水， 121高压灭菌15min， 调整pH至7.0。 按1:1:2混合做种子。 0026 2)发酵液准备： 选用质量优良的苦楝， 用水冲洗， 7075酒精浸泡3min， 用水 洗净， 经搅碎机搅碎后待用。 0027 3)发酵罐空消及空气管道消。
17、毒： 按相关说明书进行发酵罐空消。 0028 4)发酵液实消： 将步骤2所得苦楝放入发酵罐中， 补充自来水至终体积为10L， 按相 关说明书进行实消灭菌。 0029 5)接种培养： 当发酵罐温度降至37时， 将步骤1所得种子按体积比1的接种量， 接种至装有苦楝的发酵罐中， 25条件下培养9天， 设置工艺要求的通气量并保持罐压， 设 置各其他培养参数培养。 0030 6)出料： 培养完毕， 放出发酵液， 过滤， 过滤后所得发酵液即为杀虫剂成品。 0031 实施例3 0032 1)菌种准备： 将解淀粉芽孢杆菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢杆菌、 市售苏 云金杆菌分别接种于种子培养基。
18、， 于30， 250r/min震荡培养12h； 所述种子培养基成分按 g/L计为： 蛋白胨10， 酵母膏5， NaCl 10， 其余成分为水， 121高压灭菌15min， 调整pH至7.0。 按1:1:2混合做种子。 0033 2)发酵液准备： 选用质量优良的苦楝， 用水冲洗， 7075酒精浸泡3min， 用水 洗净， 经搅碎机搅碎后待用。 0034 3)发酵罐空消及空气管道消毒： 按相关说明书进行发酵罐空消。 0035 4)发酵液实消： 将步骤2所得苦楝放入发酵罐中， 补充自来水至终体积为10L， 按相 关说明书进行实消灭菌。 0036 5)接种培养： 当发酵罐温度降至37时， 将步骤1所得种子按体积比1的接种量， 接种至装有苦楝的发酵罐中， 25条件下培养12天， 设置工艺要求的通气量并保持罐压， 设 置各其他培养参数培养。 0037 6)出料： 培养完毕， 放出发酵液， 过滤， 过滤后所得发酵液即为杀虫剂成品。 说明书 3/3 页 5 CN 106867947 A 5 。