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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610046333.7 (22)申请日 2016.01.01 C12Q 1/68(2006.01) (71)申请人 河南科技学院 地址 453003 河南省新乡市华兰大道东段 (72)发明人 李卫海 王颖 曹进军 王荣凤 刘瑞君 (54) 发明名称 一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的 方法 (57) 摘要 本发明公开了一种利用分子检索表对昆虫进 行分类鉴定的方法， 包括如下步骤 ： 读取所构建 的带探针矩阵的芯片载体上的数据， 建立昆虫分 子物理模型和该物理模型的动态硬点表 ； 根据硬 点表建立昆虫分子的参数化模型 ； 将固定在。
2、固相 芯片载体上的探针与动态硬点表建立连接 ； 将来 自待分类昆虫的带有荧光标记物的 PCR 目标产物 加在芯片上， 使 PCR 产物与芯片上探针杂交， 通过 固定在芯片上的 DNA 探针检测杂交信号， 并将检 测到的杂交信号发送到动态硬点表， 从而构建待 分类昆虫的参数化模型 ； 将所得两个参数化模型 进行重合对比， 确定昆虫所属的分类地位。 本发明 实现了昆虫分子快速种类鉴定， 其鉴定结果可通 过计算机自动输出， 使用便捷， 且输出结果精确度 高。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书3页 CN 105624294 A 。
3、2016.06.01 CN 105624294 A 1.一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 其特征在于， 包括如下步骤： S1、 将能区分昆虫某一类群的一组DNA探针以点阵的形式固化在固相芯片载体上； S2、 读取所得芯片载体上的数据， 构建昆虫分子物理模型， 通过Matlab读取昆虫分子物 理模型中各硬点的坐标数值， 从而形成一个动态硬点表； 硬点表中包括各硬点坐标名称， 以 及每一硬点对应的坐标数值； S3、 根据硬点表建立昆虫分子的参数化模型； S4、 将固定在固相芯片载体上的DNA探针与动态硬点表建立连接； S5、 将来自待分类昆虫的带有荧光标记物的PCR目标产物加在步骤S1。
4、所得的芯片上， 使 PCR产物与芯片上DNA探针杂交， 通过固定在芯片上的DNA探针检测杂交信号， 并将检测到的 杂交信号发送到动态硬点表； S6、 根据步骤S5生成的动态硬点表构建待分类昆虫的参数化模型； S7、 将所得待分类昆虫的参数化模型与步骤S3所得的昆虫分子的参数化模型进行重合 对比， 确定昆虫所属的分类地位。 2.根据权利要求1所述的一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 其特征在 于， 所述DNA探针为通用探针和特异探针。 3.根据权利要求1所述的一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 其特征在 于， 所述步骤S5中PCR目标产物通过以下步骤添加： 将通用引物PCR扩。
5、增所得到的一种或多 种带荧光标记物的PCR产物， 加上适量的杂交缓冲液， 混合， 85-95变性加入有探针的固相 芯片载体， 在3555杂交13h， 洗片洗去多余的杂交液。 4.根据权利要求1所述的一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 其特征在 于， 所述步骤S1的具体步骤为利用点样仪将各类探针固化在固相的芯片载体表面上， 经过 水合、 固定和洗片， 获得带探针矩阵的芯片。 5.根据权利要求1所述的一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 其特征在 于， 所述步骤S2中各硬点的坐标数值通过以下步骤获得： 使用Matlab读取物理模型中各硬 点的坐标数值导入一EXCEL文件中， 在所。
6、述EXCEL文件的第一表单中存放有所述各硬点名 称、 坐标数值以及相邻两个坐标之间的距离； 在所述EXCEL文件的第二表单的第一列放置硬 点坐标名称， 第二列链接到第一表单中相应的坐标数值， 所述EXCEL文件即为所述可修改的 硬点表。 6.根据权利要求1所述的一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 其特征在 于， 所述硬点为物理模型中的各个连接点。 权利要求书 1/1 页 2 CN 105624294 A 2 一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种昆虫分类鉴定方法， 具体涉及一种利用分子检索表对昆虫进行分 类鉴定的方法。 背景技术 0002 昆虫。
7、是世界上已知种类最多的生物类群， 数量达到100多万种。 种类繁多的昆虫与 其它人类认识的生物类群一样都是通过生物分类系统来认知的。 目前， 公认的生物分类系 统主要包括7个分类阶元： 界Kingdom、 门Phylum、 纲Class、 目Order、 科Family、 属Genus、 种 Species。 从界到种， 分类阶元依次变小， 种是分类的基本单元。 当然在各个基本分类阶元之 间还会细分一些其它分类位如总纲Superclass、 总科Superfamily、 亚科Subfamily、 亚属 Subgenus、 亚种Subspecies等。 如桔小实蝇Bactrocera(Bactr。
8、ocera)dorsalis属双翅目 Diptera、 实蝇科Tephritidae、 寡鬃实蝇亚科Dacinae、 寡鬃实蝇族Dacini、 果实蝇属 Bactrocera、 果实蝇亚属Bactrocera。 0003 昆虫(狭义六足动物)属动物界Animal、 节肢动物门Arthropoda、 六足总纲 Hexapoda、 昆虫纲Insecta。 昆虫的识别和鉴定通常是通过一种称为检索表Key来实现的， 检 索表编制原理简单， 就是严格的二分法： 即A类和非A类。 传统的检索表一般利用昆虫形态上 的特征来分类， 将昆虫分成两类时， 所选用的形态特征绝不能存在着 “似是而非” 和中间状 态。。
9、 编制检索表是反复使用二分法的过程。 0004 根据使用目的不同， 昆虫检索表会分至不同的分类阶元。 检索表将某一类群昆虫 依照某些稳定且易于观察和鉴别的形态特征进行一系列的二分， 最终指向目、 科、 属、 种.， 由于检索表以稳定而显著的特征进行分类， 因此， 使用检索表鉴定生物物种一般能 够得到比较准确的结果。 0005 但是， 采用这种传统形态学鉴定方法需要扎实的昆虫分类学基础知识和丰富的分 类鉴定经验， 而且大部分昆虫类群的分类鉴定主要以成虫的形态特征为依据， 而对卵、 幼虫 和蛹通常无法进行种类鉴定， 存在很大的局限性。 发明内容 0006 为解决上述问题， 本发明提供了一种利用分子。
10、检索表对昆虫进行分类鉴定的方 法， 实现了昆虫分子快速种类鉴定， 其鉴定结果可通过计算机自动输出， 使用便捷， 且输出 结果精确度高。 0007 为实现上述目的， 本发明采取的技术方案为： 0008 一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 包括如下步骤： 0009 S1、 将能区分昆虫某一类群的一组DNA探针以点阵的形式固化在固相芯片载体上； 0010 S2、 读取所得芯片载体上的数据， 构建昆虫分子物理模型， 通过Matlab读取昆虫分 子物理模型中各硬点的坐标数值， 从而形成一个动态硬点表； 硬点表中包括各硬点坐标名 称， 以及每一硬点对应的坐标数值； 说明书 1/3 页 3 CN 。
11、105624294 A 3 0011 S3、 根据硬点表建立昆虫分子的参数化模型； 0012 S4、 将固定在固相芯片载体上的DNA探针与动态硬点表建立连接； 0013 S5、 将来自待分类昆虫的带有荧光标记物的PCR目标产物加在步骤S1所得的芯片 上， 使PCR产物与芯片上DNA探针杂交， 通过固定在芯片上的DNA探针检测杂交信号， 并将检 测到的杂交信号发送到动态硬点表； 0014 S6、 根据步骤S5生成的动态硬点表构建待分类昆虫的参数化模型； 0015 S7、 将所得待分类昆虫的参数化模型与步骤S3所得的昆虫分子的参数化模型进行 重合对比， 确定昆虫所属的分类地位。 0016 优选地，。
12、 所述DNA探针为通用探针和特异探针。 0017 优选地， 所述步骤S5中PCR目标产物通过以下步骤添加： 将通用引物PCR扩增所得 到的一种或多种带荧光标记物的PCR产物， 加上适量的杂交缓中液， 混合， 85-95变性加入 有探针的固相芯片载体， 在3555杂交13h， 洗片洗去多余的杂交液。 0018 优选地， 所述步骤S1的具体步骤为利用点样仪将各类探针固化在固相的芯片载体 表面上， 经过水合、 固定和洗片， 获得带探针矩阵的芯片。 0019 优选地， 所述步骤S2中各硬点的坐标数值通过以下步骤获得： 使用Matlab读取物 理模型中各硬点的坐标数值导入一EXCEL文件中， 在所述EX。
13、CEL文件的第一表单中存放有所 述各硬点名称、 坐标数值以及相邻两个坐标之间的距离； 在所述EXCEL文件的第二表单的第 一列放置硬点坐标名称， 第二列链接到第一表单中相应的坐标数值， 所述EXCEL文件即为所 述可修改的硬点表。 0020 优选地， 所述硬点为物理模型中的各个连接点。 0021 本发明具有以下有益效果： 0022 实现了昆虫分子快速种类鉴定， 其鉴定结果可通过计算机自动输出， 使用便捷， 且 输出结果精确度高。 具体实施方式 0023 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白， 以下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。 应当理解， 此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 。
14、并不用于限定本发 明。 0024 本发明实施例提供了一种利用分子检索表对昆虫进行分类鉴定的方法， 包括如下 步骤： 0025 S1、 将能区分昆虫某一类群的一组DNA探针以点阵的形式固化在固相芯片载体上； 0026 S2、 读取所得芯片载体上的数据， 构建昆虫分子物理模型， 通过Matlab读取昆虫分 子物理模型中各硬点的坐标数值， 从而形成一个动态硬点表； 硬点表中包括各硬点坐标名 称， 以及每一硬点对应的坐标数值； 0027 S3、 根据硬点表建立昆虫分子的参数化模型； 0028 S4、 将固定在固相芯片载体上的DNA探针与动态硬点表建立连接； 0029 S5、 将来自待分类昆虫的带有荧光。
15、标记物的PCR目标产物加在步骤S1所得的芯片 上， 使PCR产物与芯片上DNA探针杂交， 通过固定在芯片上的DNA探针检测杂交信号， 并将检 测到的杂交信号发送到动态硬点表； 说明书 2/3 页 4 CN 105624294 A 4 0030 S6、 根据步骤S5生成的动态硬点表构建待分类昆虫的参数化模型； 0031 S7、 将所得待分类昆虫的参数化模型与步骤S3所得的昆虫分子的参数化模型进行 重合对比， 确定昆虫所属的分类地位。 0032 所述DNA探针为通用探针和特异探针。 0033 所述步骤S5中PCR目标产物通过以下步骤添加： 将通用引物PCR扩增所得到的一种 或多种带荧光标记物的PC。
16、R产物， 加上适量的杂交缓冲液， 混合， 85-95变性加入有探针的 固相芯片载体， 在3555杂交13h， 洗片洗去多余的杂交液。 0034 所述步骤S1的具体步骤为利用点样仪将各类探针固化在固相的芯片载体表面上， 经过水合、 固定和洗片， 获得带探针矩阵的芯片。 0035 所述步骤S2中各硬点的坐标数值通过以下步骤获得： 使用Matlab读取物理模型中 各硬点的坐标数值导入一EXCEL文件中， 在所述EXCEL文件的第一表单中存放有所述各硬点 名称、 坐标数值以及相邻两个坐标之间的距离； 在所述EXCEL文件的第二表单的第一列放置 硬点坐标名称， 第二列链接到第一表单中相应的坐标数值， 所述EXCEL文件即为所述可修改 的硬点表。 0036 所述硬点为物理模型中的各个连接点 0037 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以作出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。 说明书 3/3 页 5 CN 105624294 A 5 。