泰万菌素的纯化方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810494053.1 (22)申请日 2018.05.22 (71)申请人 中牧实业股份有限公司 地址 100070 北京市丰台区南四环西路188 号总部基地八区16-19号楼 申请人 内蒙古中牧生物药业有限公司 (72)发明人 梁景乐赵学朋靳连标张刚 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 王文君黄爽 (51)Int.Cl. C07H 1/06(2006.01) C07H 17/08(2006.01) (54)发明名称 泰万菌素的纯化方。

2、法 (57)摘要 本发明提供泰万菌素的纯化方法， 该方法是 以酒石酸泰万菌素为原料， 用水溶解后， 加入有 机溶剂， 调节至合适的pH值， 使泰万菌素进入有 机相， 有机相减压浓缩后静置析晶； 固液分离后 干燥， 固体用有机溶剂溶解， 再加入溶析剂， 控制 搅拌速度和温度进行二次析晶， 即得泰万菌素精 品。 本方法可以有效地去除杂质， 克服了现有泰 万菌素提纯工艺制得的产品纯度低的问题。 利用 本发明方法制得的泰万菌素纯度均在97以上。 权利要求书2页 说明书4页 CN 108358979 A 2018.08.03 CN 108358979 A 1.泰万菌素的纯化方法， 其特征在于， 以酒石酸。

3、泰万菌素为原料， 用水溶解后， 加入有 机溶剂， 调节至合适的pH值， 使泰万菌素进入有机相， 有机相减压浓缩后静置析晶； 固液分 离后干燥， 固体用有机溶剂溶解， 再加入溶析剂， 控制搅拌速度和温度进行二次析晶， 即得 泰万菌素精品。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： (1)m克酒石酸泰万菌素原料中加5-20m毫升水溶解， 进行脱色， 得溶液I； (2)向溶液I中加入5-20m毫升的有机溶剂， 用碱液调体系pH至3.0-5.5， 搅拌后静置分 液， 有机相经干燥处理， 得溶液II； (3)溶液II经抽滤， 浓缩至1-4m毫升， 降温至0-10， 静置析晶1-16h。

4、； 然后抽滤， 用0.5- 2m毫升冷有机溶剂洗滤饼， 然后将滤饼干燥， 得泰万菌素粗品； (4)向泰万菌素粗品中加入2-5m毫升有机溶剂， 加热至40-60， 搅拌至完全溶解， 然后 加入7-10m毫升溶析剂， 0-15搅拌析晶， 然后抽滤， 用1-2m毫升冷溶析剂洗滤饼， 滤饼经干 燥后， 即得泰万菌素精品。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)具体为： m克酒石酸泰万菌素加5- 20m毫升水溶解， 然后加入0.3-0.5m氧化铝， 搅拌0.5-3h后过滤， 得溶液I。 4.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)具体为： 向溶液I中加入5-20m毫升 的有。

5、机溶剂， 用20氢氧化钠或氢氧化钾溶液调体系pH至3.0-5.5， 搅拌后静置分液， 取有 机相， 向有机相中加入2-3m无水硫酸钠， 静置0.5-1h后过滤， 得溶液II。 5.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)和(4)中， 滤饼在40-60条件下干 燥。 6.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 1)m克酒石酸泰万菌素原料中加5-20m毫升水溶解， 温度控制在20-60， 转速50- 300rpm搅拌0.5-2h； 2)将0.3-0.5m氧化铝加入上述溶液中， 搅拌0.5-3h后过滤； 3)将5-20m毫升有机溶剂加入上述滤液中， 滴加20氢氧化钠或氢。

6、氧化钾溶液调体系 pH至3.0-5.5， 再搅拌0.5-2h； 静置后分液， 取有机相加入2-3m无水硫酸钠， 静置0.5-1h后过 滤； 4)滤液减压浓缩至1-4m毫升， 降温至0-10， 静置析晶1-16h后抽滤； 5)用0.5-2m毫升冷有机溶剂洗滤饼， 得湿滤饼； 6)湿滤饼在40-60条件下干燥10-30h， 得泰万菌素粗品； 7)向泰万菌素粗品中加入2-5m毫升有机溶剂， 加热至40-60， 转速50-300rpm搅拌至 完全溶解； 8)向步骤7)所得溶液中加入7-10m毫升溶析剂， 温度控制在0-15， 转速50-300rpm搅 拌析晶0.5-6h， 然后抽滤； 9)用1-2m毫。

7、升冷溶析剂洗滤饼， 得湿滤饼； 10)湿滤饼在40-60条件下干燥10-30h， 即得泰万菌素精品。 7.根据权利要求1-6任一项所述的方法， 其特征在于， 所述有机溶剂选自乙酸乙酯、 乙 酸丁酯、 苯、 甲苯中的至少一种。 8.根据权利要求1-6任一项所述的方法， 其特征在于， 所述溶析剂选自甲基叔丁基醚、 权利要求书 1/2 页 2 CN 108358979 A 2 乙醚、 石油醚中的至少一种。 9.根据权利要求1-6任一项所述的方法， 其特征在于， 原料中酒石酸泰万菌素的含量在 80以上。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述酒石酸泰万菌素是耐热链霉菌 (Streptom。

8、yces thermotolerans)发酵生产得到的泰万菌素的酒石酸盐。 权利要求书 2/2 页 3 CN 108358979 A 3 泰万菌素的纯化方法 技术领域 0001 本发明涉及化工领域， 具体地说， 涉及泰万菌素的纯化方法。 背景技术 0002 泰万菌素又称超级泰乐菌素， 化学名为3-O-乙酰-4” -O-异戊酰泰乐菌素， 是畜禽 专用抗生素。 泰万菌素是泰乐菌素经耐热链霉菌(Streptomyces thermotolerans)生物转 化， 在3位乙酰化和4” 位异戊酰化得到的新型大环内酯类抗生素， 因其化学结构发生变化使 其在抗菌谱、 抗菌活性、 耐药性、 化学稳定性、 口服。

9、吸收性和血药浓度等方面与泰乐菌素相 比较具有明显的优势。 0003 CN101381756A公开了一种利用酸提碱沉二次结晶的方法提纯超级泰乐菌素(即泰 万菌素)的方法， 由于泰万菌素含有结构类似的物质较多， 而酸提碱沉二次结晶的方法对结 构类似物选择性低， 因此通过该方法不能有效去除结构类似的相关物质， 因此该方法得到 的泰万菌素纯度仅为81-83， 纯度较低。 同样地， CN102659882A公开了一种酒石酸乙酰异 戊酰泰乐菌素(即泰万菌素)的提纯方法， 由于也采用酸碱置换的方式进行纯化， 也存在不 能有效分离结构类似物的缺点， 其得到的泰万菌素纯度最高也仅为92.1。 0004 上述两种。

10、方法得到的无论是泰万菌素还是酒石酸泰万菌素， 其纯度都较低， 由于 杂质过高， 不能用于注射等高品质兽药产品中， 而且由于杂质过多， 易造成产品质量难以满 足生产需要的问题。 0005 CN104610403A公开了一种利用硅胶层析纯化泰万菌素的方法， 该方法是以柱层析 硅胶为分离介质， 制备泰万菌素产品纯度可以达到97以上。 但是由于使用柱层析的制备 方法， 生产工艺复杂， 不易于工业生产， 且生产成本高、 产品制备规模少， 不能满足大规模生 产的需要； 而且由于柱层析的手段难以提高纯度并同时兼顾纯化产品的收率， 不能满足市 场应用需求。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种利用结晶法。

11、纯化泰万菌素的新方法， 以克服现有泰万菌 素提纯工艺制得的产品纯度过低的问题。 0007 为了实现本发明目的， 本发明提供的泰万菌素纯化方法， 以酒石酸泰万菌素为原 料， 用水溶解后， 加入有机溶剂， 调节至合适的pH值， 使泰万菌素进入有机相， 有机相减压浓 缩后静置析晶； 固液分离后干燥， 固体用有机溶剂溶解， 再加入溶析剂， 控制搅拌速度和温 度进行二次析晶， 即得泰万菌素精品。 0008 所述方法包括以下步骤： 0009 (1)m克酒石酸泰万菌素原料中加5-20m毫升水溶解， 进行脱色， 得溶液I； 0010 (2)向溶液I中加入5-20m毫升的有机溶剂， 用碱液调体系pH至3.0-5。

12、.5， 搅拌后静 置分液， 有机相经干燥处理， 得溶液II； 0011 (3)溶液II经抽滤， 浓缩至1-4m毫升， 降温至0-10， 静置析晶1-16h； 然后抽滤， 用 说明书 1/4 页 4 CN 108358979 A 4 0.5-2m毫升冷有机溶剂洗滤饼， 然后将滤饼干燥， 得泰万菌素粗品； 0012 (4)向泰万菌素粗品中加入2-5m毫升有机溶剂， 加热至40-60， 搅拌至完全溶解， 然后加入7-10m毫升溶析剂， 0-15搅拌析晶， 然后抽滤， 用1-2m毫升冷溶析剂洗滤饼， 滤饼 经干燥后， 即得泰万菌素精品。 0013 优选地， 步骤(1)具体为： m克酒石酸泰万菌素加5-。

13、20m毫升水溶解， 然后加入0.3- 0.5m氧化铝， 搅拌0.5-3h后过滤， 得溶液I。 0014 优选地， 步骤(2)具体为： 向溶液I中加入5-20m毫升的有机溶剂， 用20氢氧化钠 或氢氧化钾溶液调体系pH至3.0-5.5， 搅拌后静置分液， 取有机相， 向有机相中加入2-3m无 水硫酸钠， 静置0.5-1h后过滤， 得溶液II。 0015 优选地， 步骤(3)和(4)中， 滤饼在40-60条件下干燥。 0016 进一步地， 所述方法包括以下步骤： 0017 1)m克酒石酸泰万菌素原料中加5-20m毫升水溶解， 温度控制在20-60， 转速50- 300rpm搅拌0.5-2h； 00。

14、18 2)将0.3-0.5m氧化铝加入上述溶液中， 搅拌0.5-3h后过滤； 0019 3)将5-20m毫升有机溶剂加入上述滤液中， 滴加20氢氧化钠或氢氧化钾溶液调 体系pH至3.0-5.5， 再搅拌0.5-2h； 静置后分液， 取有机相加入2-3m无水硫酸钠， 静置0.5-1h 后过滤； 0020 4)滤液减压浓缩至1-4m毫升， 降温至0-10， 静置析晶1-16h后抽滤； 0021 5)用0.5-2m毫升冷有机溶剂洗滤饼， 得湿滤饼； 0022 6)湿滤饼在40-60条件下干燥10-30h， 得泰万菌素粗品； 0023 7)向泰万菌素粗品中加入2-5m毫升有机溶剂， 加热至40-60，。

15、 转速50-300rpm搅 拌至完全溶解； 0024 8)向步骤7)所得溶液中加入7-10m毫升溶析剂， 温度控制在0-15， 转速50- 300rpm搅拌析晶0.5-6h， 然后抽滤； 0025 9)用1-2m毫升冷溶析剂洗滤饼， 得湿滤饼； 0026 10)湿滤饼在40-60条件下干燥10-30h， 即得泰万菌素精品。 0027 若无特殊说明， 本发明中减压浓缩的条件为： -0.08-0.095MPa， 温度40-60。 0028 本发明所述有机溶剂选自乙酸乙酯、 乙酸丁酯、 苯、 甲苯中的至少一种。 0029 本发明所述溶析剂选自甲基叔丁基醚、 乙醚、 石油醚中的至少一种。 0030 本。

16、发明所用原料中酒石酸泰万菌素的含量在80以上。 所述酒石酸泰万菌素是耐 热链霉菌(Streptomyces thermotolerans)发酵生产得到的泰万菌素的酒石酸盐， 有关酒 石酸泰万菌素的生产方法参见CN201710673410.6和CN201310265454.7以及US4522919。 0031 利用上述提纯方法， 得到的泰万菌素产品纯度均在97以上。 0032 借由上述技术方案， 本发明至少具有下列优点及有益效果： 0033 与现有工艺相比， 本发明提供的泰万菌素纯化方法， 不使用硅胶柱层析纯化方法， 操作更简单， 更容易满足大规模生产的需要， 同时解决了现有工艺制备的产品纯度低。

17、的问 题， 纯化后的泰万菌素纯度在97以上， 比现有纯化方法的纯度有明显提高。 具体实施方式 说明书 2/4 页 5 CN 108358979 A 5 0034 以下实施例用于说明本发明， 但不用来限制本发明的范围。 若未特别指明， 实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段， 所用原料均为市售商品。 0035 实施例1泰万菌素的纯化方法 0036 称取纯度为84.1酒石酸泰万菌素100g， 加入2000mL水， 保持温度25， 用速度为 80转/分钟的机械搅拌进行匀速搅拌， 搅拌时间1小时。 加入30g氧化铝， 体系浑浊， 呈淡棕黄 色。 搅拌脱色1小时后， 抽滤， 得淡黄色透。

18、明溶液。 加入2000mL乙酸丁酯， 用20氢氧化钠溶 液调pH4.6， pH稳定后搅拌0.5小时， 静置分液。 乙酸丁酯相中加入300g无水硫酸钠， 干燥 0.5小时后抽滤， 滤液在真空度0.085-0.090Mpa， 45减压浓缩至400mL， 转入冰箱中(4左 右)静置过夜。 抽滤， 用50mL 4左右的乙酸丁酯洗涤滤饼， 转入真空干燥箱中干燥(- 0.1Mpa， 60， 20小时)， 得到白色泰万菌素粗品40.2g。 0037 将白色晶体40.2g加入300mL乙酸丁酯中， 40下搅拌溶解。 加入700mL甲基叔丁基 醚， 转入恒温循环装置中， 外温-5， 用80转/分钟的速度进行匀速。

19、机械搅拌， 搅拌2小时后 抽滤， 用100mL 4左右冷甲基叔丁基醚洗滤饼， 湿滤饼转入真空干燥箱中干燥(-0.1Mpa， 60， 10小时)， 得到白色晶体30.9g， 泰万菌素纯度为97.5。 0038 实施例2泰万菌素的纯化方法 0039 称取纯度为84.5的酒石酸泰万菌素300g， 加入5600mL水， 保持温度25， 用速度 为100转/分钟的机械搅拌进行匀速搅拌， 搅拌时间1.5小时。 加入150g氧化铝， 体系浑浊， 呈 淡棕黄色。 搅拌脱色1小时后， 抽滤， 得黄色透明溶液。 加入6000mL甲苯， 用20氢氧化钠溶 液调pH3.7， pH稳定后搅拌0.5小时， 静置分液。 甲。

20、苯相中加入600g无水硫酸钠， 干燥0.5小 时后抽滤， 滤液在真空度0.085-0.090Mpa， 50减压浓缩至800mL， 转入冰箱中(4左右)静 置过夜。 抽滤， 用150mL 4左右的甲苯洗涤滤饼， 转入真空干燥箱中干燥(-0.1Mpa， 60， 26小时)， 得到白色泰万菌素粗品147.7g。 0040 将白色晶体147.7g加入700mL甲苯中， 60下搅拌溶解。 加入2500mL石油醚， 转入 恒温循环装置中， 外温-2， 用110转/分钟的速度进行匀速机械搅拌， 搅拌3.5小时后抽滤， 用300mL 4左右石油醚洗滤饼， 湿滤饼转入真空干燥箱中干燥(-0.1Mpa， 55， 。

21、16小时)， 得到白色晶体104.3g， 泰万菌素纯度为97.9。 0041 实施例3泰万菌素的纯化方法 0042 称取纯度为83.4酒石酸泰万菌素150g， 加入2700mL水， 保持温度20， 用速度为 200转/分钟的机械搅拌进行匀速搅拌， 搅拌时间1.5小时。 加入50g氧化铝， 体系浑浊， 呈棕 黄色。 搅拌1小时后， 抽滤， 得黄色透明溶液。 加入2500mL甲苯， 用20氢氧化钠溶液调pH 4.2， pH稳定后搅拌1.5小时， 静置分液。 甲苯相中加入400g无水硫酸钠， 干燥0.5小时后抽 滤， 滤液在真空度0.085-0.090Mpa， 55减压浓缩至600mL， 转入冰箱中。

22、(4左右)静置过 夜。 抽滤， 用75mL 4左右的甲苯洗涤滤饼， 转入真空干燥箱中干燥(-0.1Mpa， 60， 18小 时)， 得到白色泰万菌素粗品61.6g。 0043 将白色晶体61.6g加入500mL乙酸丁酯中， 40下搅拌溶解。 加入1100mL乙醚， 转入 恒温循环装置中， 外温-12， 用170转/分钟的速度进行匀速机械搅拌， 搅拌3小时后抽滤， 用150mL 4左右乙醚洗滤饼， 湿滤饼转入真空干燥箱中干燥(-0.1Mpa， 60， 27小时)， 得 到白色晶体49.8g， 泰万菌素纯度为97.2。 0044 实施例4泰万菌素的纯化方法 说明书 3/4 页 6 CN 10835。

23、8979 A 6 0045 称取酒石酸泰万菌素100g(纯度81.5)， 加入1800mL水， 保持温度50， 用速度为 150转/分钟的机械搅拌进行匀速搅拌， 搅拌时间1小时。 加入50g氧化铝， 体系浑浊， 呈棕色。 搅拌3小时后， 抽滤， 得淡黄色透明溶液。 加入2000mL乙酸乙酯， 用20氢氧化钠溶液调pH 5.0， pH稳定后搅拌1.5小时， 静置分液。 乙酸乙酯相中加入200g无水硫酸钠， 干燥0.5小时后 抽滤， 滤液在真空度0.085-0.090Mpa， 40减压浓缩至400mL， 转入冰箱中(4左右)静置过 夜。 抽滤， 用50mL 4左右的乙酸乙酯洗涤滤饼， 转入真空干燥。

24、箱中干燥(-0.1Mpa， 40， 15 小时)， 得到白色泰万菌素粗品45.5g。 0046 将粗品45.5g加入400mL甲苯中， 50下搅拌溶解。 加入800mL乙醚， 转入恒温循环 装置中， 外温-10， 用150转/分钟的速度进行匀速机械搅拌， 搅拌2.5小时后抽滤， 用100mL 4左右乙醚洗滤饼， 湿滤饼转入真空干燥箱中干燥(-0.1Mpa， 40， 21小时)， 得到白色晶 体32.3g， 泰万菌素纯度为97.0。 0047 实施例5泰万菌素的纯化方法 0048 称取产品纯度为82.3酒石酸泰万菌素300kg， 加入5600L水， 保持温度25， 用速 度为45转/分钟的机械搅。

25、拌进行匀速搅拌， 搅拌时间1.5小时。 加入150kg氧化铝， 体系浑浊， 呈淡棕黄色。 搅拌脱色1小时后， 抽滤， 得黄色透明溶液。 加入6500L甲苯， 用20氢氧化钠溶 液调pH3.65， pH稳定后搅拌1小时， 静置分液。 甲苯相中加入600kg无水硫酸钠， 干燥1.5小 时后抽滤， 滤液在真空度0.085-0.090Mpa， 40减压浓缩至850L， 降温到4， 10rpm搅拌24 小时。 抽滤， 用150L4左右的甲苯洗涤滤饼， 转入双锥干燥器中真空干燥(-0.1Mpa， 60， 35小时)， 得到白色泰万菌素粗品157.6kg。 0049 将白色晶体157.6kg加入750L甲苯。

26、中， 60下搅拌溶解。 加入2500L石油醚， 降温 至-2左右， 用110转/分钟的速度进行匀速机械搅拌， 搅拌3.5小时后抽滤， 用330L4左右 石油醚洗滤饼， 湿滤饼转入真空双锥干燥器中-0.1Mpa， 55-60， 干燥16小时， 得到白色晶 体107.4kg， 泰万菌素纯度为97.1泰万菌素。 0050 虽然， 上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述， 但在 本发明基础上， 可以对之做一些修改或改进， 这对本领域技术人员而言是显而易见的。 因 此， 在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进， 均属于本发明要求保护的范围。 说明书 4/4 页 7 CN 108358979 A 7 。