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本申请要求于2010年5月3日提交的系列号为61/330,522的美 国临时专利申请的权益。
技术领域
本发明涉及化合物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲 基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺、含有该化合物的药物组合物、 合成该化合物的方法，并提供用该化合物治疗由脂肪酸酰胺水解酶 (FAAH)活性介导的疾病状态、失调和病症的方法。
背景技术
数个世纪以来一直认为大麻植物具有药用价值。大麻的主要生物 活性组分是Δ9-四氢-大麻酚(THC)。THC的发现最终导致鉴定了两个 负责其药理作用的内源大麻素受体，即CB1和CB2(Goya等人，Exp. Opin.Ther.Patents(《治疗术专利专家评论》)，2000，10，1529)。 这些发现不仅确定了THC的作用位点，也激发了人们对这些受体的 内源激动剂或“内源性大麻素”进行探索。第一种鉴定出的内源性大 麻素是花生四烯酸乙醇酰胺(arachidonyl ethanolamide或anandamide (AEA))这种脂肪酸酰胺。AEA自身会引起外源大麻素的许多药理效应 (Piomelli等人，Nat.Rev.Neurosci.(《自然评论-神经科学》)，2003， 4(11)，873)。
AEA的分解代谢可主要归因脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)这种膜内 结合蛋白，该酶将AEA水解为花生四烯酸和乙醇胺。Cravatt和同事 于1996年表征了FAAH(Cravatt等人，Nature(《自然》)，1996，384， 83)。随后确定，FAAH另外负责大量重要的脂质信号传导脂肪酸酰 胺的分解代谢，这些脂肪酸酰胺包括：另一种主要内源性大麻素2-花 生四烯酸甘油(2-AG)(Devane等人，Science(《科学》)，1992，258， 1946-1949)；致眠物质油酰胺(Cravatt等人，Science(《科学》)，1995， 268，1506)；食欲抑制剂N-油酰乙醇胺(OEA)(Rodriguez de Fonesca， Nature(《自然》)，2001，414，209)；和抗炎剂棕榈酰乙醇酰胺(PEA) (Lambert等人，Curr.Med.Chem.(《当今医药化学》)，2002，9(6)， 663)。
FAAH的小分子抑制剂应提高这些内源信号传导脂质的浓度，从 而产生其相关的有益药理效应。已有一些关于各种FAAH抑制剂在临 床前模型中的效应的报道。
具体地讲，报道了两种基于氨基甲酸酯的FAAH抑制剂在动物模 型中具有镇痛特性。据报道，在大鼠中，具有如下所示结构的BMS-1 (参见WO 02/087569)在神经性疼痛的脊神经结扎(Chung)模型以及 急性热伤害性感受的足底热痛觉测试(Hargreaves test)中具有镇痛效 果。据报道，URB-597在大鼠焦虑的环形十字迷宫模型中具有功效， 以及在大鼠热板和福尔马林测试中具有镇痛功效(Kathuria等人，Nat. Med.(《自然-医学》)，2003，9(1)，76)。已发现4-(3-苯基-[1，2，4] 噻二唑-5-基)-哌嗪-1-甲酸苯基酰胺这种脲在神经性疼痛的脊神经结 扎(Chung)模型和急性烧伤疼痛的轻度热损伤模型中都有效(Karbarz 等人，Anesth Analg(《麻醉与镇痛》)，2009，108(1)，316-329)。 报道了FAAH酶的其他强效脲抑制剂(WO 06/074025)。也证实了磺酰 氟AM374能显著地降低慢性复发性实验性自身免疫性脑脊髓炎 (CREAE)小鼠(一种多发性硬化症的动物模型)中的痉挛状态(Baker 等人，FASEBJ.(《美国实验生物学学会联合会杂志》)，2001，15(2)， 300)。
此外，据报道，噁唑并吡啶酮OL-135是FAAH的强效抑制剂， 在大鼠热伤害性感受的热板测试和尾浸测试中均具有镇痛活性(WO 04/033652)。
关于某些外源性大麻素的效应的研究结果阐明了FAAH抑制剂 可用于治疗多种病症、疾病、失调或症状。这些包括疼痛、恶心/呕吐、 厌食、痉挛、运动失调、癫痫和青光眼。到目前为止，批准的大麻素 治疗用途包括减轻癌症患者中化疗引发的恶心和呕吐以及提高由于 消耗性综合征而体验到厌食的HIV/AID患者的食欲。在一些国家有两 种用于这些适应症的产品可商购获得，即屈大麻酚和大麻 隆。
除了批准的适应症之外，备受关注的使用大麻素的治疗领域是镇 痛，即疼痛的治疗。五个小型随机化对照试验表明THC优于安慰剂， 产生剂量相关的镇痛作用(Robson et al.，Br.J.Psychiatry，2001，178， 107-115(Robson等人，《英国精神病学杂志》，2001年，第178卷， 第107-115页))。据报道，大西洋药品有限公司(Atlantic Pharmaceuticals) 正在开发合成大麻素CT-3，其是四氢大麻酚的羧基代谢物的1，1-二甲 基庚基衍生物，可作为口服活性镇痛和抗炎剂。据报道，使用CT-3 治疗慢性神经性疼痛的II期预试验于2002年5月在德国启动。
很多患有自主活动相关疾病(例如多发性硬化症)的个人声称大 麻对疾病相关的疼痛和痉挛均有改善作用，这得到了小型对照试验的 证实(Croxford et el.，J.Neuroimmunol，2008，193，120-9(Croxford等 人，《神经免疫学杂志》，2008年，第193卷，第120-129页)；Svendsen， Br.Med.J.，2004，329，253(Svendsen，《英国医学杂志》，2004年， 第329卷，第253页))。同样，多名脊髓损伤(例如截瘫)的患者 报道称，在吸食大麻后，其疼痛性痉挛得以缓解。有报道表明在多发 性硬化症的CREAE模型中大麻素似乎能控制痉挛和震颤，证实了这 些效应是由CB1和CB2受体介导的(Baker，Nature，2000，404，84-87 (Baker，《自然》，2000年，第404卷，第84-87页))。已在多 发性硬化症和脊髓损伤的患者中用四氢大麻酚/大麻二酚(THC/CBD) 的窄比例混合物进行3期临床试验。据报道FAAH敲除小鼠始终比野 生型对照恢复到更好的临床评分，并且此改善不是抗炎活性的结果， 而是可能反映缺乏此酶时的一些神经保护或髓鞘再生促进效应(Webb et al，Neurosci Lett.，2008，vol.439，106-110(Webb等人，《神经科学 通讯》，2008年，第439卷，第106-110页))。
已有关于研究大麻素的其他潜在商业用途的小规模对照试验的 报告。据报道，在志愿者中的试验确认了口服、注射和吸食的大麻素 产生了剂量相关的眼内压(IOP)降低，因此可缓解青光眼症状。眼科医 师已为患有青光眼而其他药物不能充分控制眼内压的患者开出大麻 处方(Robson等人，2001年，同上)。
与用直接作用的CB1激动剂治疗相比，用小分子抑制剂抑制 FAAH可能较有利。外源CB1激动剂的给予可产生一系列响应，包括 伤害性感受减低、全身僵硬、体温过低和摄食行为增加。这四种反应 特别地被称为“大麻素四响应”。FAAH-/-小鼠的实验表现出在伤害性 感受测试中响应降低，但不表现出全身僵硬、体温过低或摄食行为增 加(Cravatt et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2001，98(16)，9371(Cravatt 等人，《美国国家科学院院刊》，2001年，第98卷，第16期，第 9371页))。禁食导致大鼠边缘前脑而非其他脑区域中AEA水平增 加，证明了AEA生物合成的刺激可从解剖学上分区到靶CNS途径 (Kirkham et al.，Br.J.Pharmacol.，2002，136，550(Kirkham等人，《英 国药理学杂志》，2002年，第136卷，第550页))。AEA的增加 局限于脑内而不是全身性的，这一发现提示在给定的病理生理学条件 下，用小分子抑制FAAH可增强AEA和其他脂肪酸酰胺在发生这些 信号转导分子的合成和释放的组织区域中的作用(Piomelli等人，2003 年，同上)。
除了FAAH抑制剂对AEA和其他内源性大麻素的作用外，FAAH 对其他脂质介质的分解代谢的抑制剂可用于治疗一些其他治疗适应 症。例如，PEA在炎症的动物模型中表现出生物效应(Holt et al.，Br.J. Pharmacol.，2005，146，467-476(Holt等人，《英国药理学杂志》，2005 年，第146卷，第467-476页))、免疫抑制、镇痛和神经保护(Ueda et al.，J.Biol.Chem.，2001，276 (38)，35552(Ueda等人，《生物化学杂 志》，2001年，第276卷，第38期，第35552页))。FAAH的另 一个底物油酰胺能诱导睡眠(Boger et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 2000，97(10)，5044(Boger等人，《美国国家科学院院刊》，2000年， 第97卷，第10期，第5044页)；Mendelson et al.， Neuropsychopharmacology，2001，25，S36(Mendelson等人，《神经心 理药物学》，2001年，第25卷，第S36页))。FAAH的抑制也被 认为与认知能力(Varvel et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther，2006，317(1)， 251-257(Varvel等人，《药理学与实验治疗学杂志》，2006年，第 317卷，第1期，第251-257页))和抑郁(Gobbi et al.，Proc.Natl.Acad. Sci.USA，2005，102(51)，18620-18625(Gobbi等人，《美国国家科学院 院刊》，2005年，第102卷，第51期，第18620-18625页))有关。
最近的数据证实了FAAH的两个另外的适应症，这些数据表明 FAAH底物激活的受体在能量代谢以及骨稳态中很重要(Overton et al.， Br.J.Pharmacol.，2008，153 Suppl 1，S76-81(Overton等人，《英国药 理学杂志》，2008年，第153卷增刊1，第S76-81页)；和Plutzky et al.，Diab.Vasc.Dis.Res.，2007，4Suppl 3，S12-4(Plutzky等人，《糖尿 病与血管疾病研究》，2007年，第4卷增刊3，第S12-4页))。已 经证明上述被FAAH分解代谢的脂质转导信号脂肪酸酰胺之一OEA， 是最近脱孤的GPCR119(GPR119)(也称为葡萄糖依赖性促胰岛素受 体)的最活跃激动剂之一。此受体在人体中主要表达于胰腺，活化后 通过胰腺β细胞中的葡萄糖依赖性胰岛素释放来改善葡萄糖稳态。 GPR119激动剂当在口服葡萄糖耐量试验中给予时能抑制葡萄糖漂 移，而且还证实OEA当给予啮齿动物时能独立地调控食物摄取和体 重增加，这表明在能量代谢失调如胰岛素抵抗和糖尿病中的可能的益 处。FAAH底物PEA是PPARα受体的激动剂。在PPARα激动剂非诺 贝特的人体研究中来自替代标记物的证据支持这样的观点：PPARα激 动作用提供了诱导协同的PPARα响应的潜在可能性，该响应可在代 谢综合征或2型糖尿病患者中改善血脂异常、抑制炎症和限制动脉硬 化症。花生四烯酸乙醇酰胺是PPARγ受体的激动剂。用花生四烯酸乙 醇酰胺治疗能诱导3T3-L1分化为脂肪细胞，以及甘油三酯微滴堆积 和脂连蛋白的表达(Bouaboula et al.，E.J.Pharmacol.，2005，517， 174-181(Bouaboula等人，《欧洲药理学杂志》，2005年，第517卷， 第174-181页))。已证实低剂量大麻素治疗能减少小鼠的动脉硬化 症，进一步表明FAAH抑制在血脂异常、肝脂肪变性、脂肪性肝炎、 肥胖和代谢综合征中的治疗有益效果(Steffens et al.，Nature，2005，434， 782-6(Steffens等人，《自然》，2005年，第434卷，第782-786页))。
骨质疏松是最常见的退行性疾病之一。其特征为骨矿物密度 (BMD)降低，骨折风险增加。CB2缺陷型小鼠具有明显加速的年龄相 关的骨小梁骨质流失和皮质膨胀。CB2选择性激动剂能增强皮质内成 骨细胞数量和活性，抑制骨小梁破骨细胞生成并减轻卵巢切除诱导的 骨质流失(Ofek et al.，Proc.Natl.Acad. Sci.U.S.A.，2006，103，696-701 (Ofek等人，《美国国家科学院院刊》，2006年，第103卷，第696-701 页))。尽管涉及人骨质疏松症发病机制的遗传因素大部分未知，但 存在对BMD的实质性遗传贡献。遗传研究表明了对人BMD的适用 性，在该研究中发现了单多态性和单倍型的显著相关性涵盖了人染色 体1p36上的CNR2基因，证明了外周表达的CB2受体在骨质疏松的 病因中的作用(Karsak et al.，Hum.Mol.Genet，2005，14，3389-96 (Karsak等人，《人类分子遗传学》，2005年，第14卷，第3389-3396 页))。
因此，小分子FAAH抑制剂应当可用于治疗各种病因的疼痛、焦 虑症、多发性硬化症和其他运动失调、恶心/呕吐、饮食失调、癫痫、 青光眼、炎症、免疫抑制、神经保护、抑郁、认知增强和睡眠失调， 并且与用外源大麻素治疗相比可能副作用更少。
在各种出版物中报道了多个杂芳基取代的脲类。某些哌嗪基和哌 啶基化合物作为FAAH调节剂在国际专利申请号WO 2006/074025、 国际专利申请系列号PCT/US2009/065757、国际专利申请系列号 PCT/US2009/065752、美国申请公开号US 2009/0062294和美国临时 申请系列号61/263,477中描述。某些哌嗪-1-甲酰胺和哌啶-1-甲酰胺衍 生物在国际专利申请号WO 2008/023720中描述。某些芳基氧代丁基 哌啶、芳基氧代丁基吡咯烷和芳基氧代丁基哌嗪在国际专利申请号 WO 2001/005763中描述。某些哌啶衍生物在国际专利申请号WO 99/50247中报道。某些哌嗪衍生物在国际专利申请号WO 99/42107中 描述。某些N-芳烷基哌嗪在国际专利申请号WO 98/37077中描述。 某些芳基取代的杂环脲衍生物在美国临时申请号61/184606中描述。 然而，仍然存在对具有适当药学性质的强效FAAH调节剂的需求。
本发明的特征和优点对本领域普通技术人员而言是显而易见的。 基于此公开(包括发明内容、具体实施方式、背景技术、实例和权利 要求)，本领域普通技术人员将能够对多种条件和用法作出修改和适 应性调整。本文所述的出版物全文以引用方式并入。
发明内容
本文描述了4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪 -1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺及其可药用盐，已发现它们具有FAAH 调节活性。本发明涉及一般和优选的实施例，这些实施例分别由本文 随附的独立和从属权利要求(以引用方式并入本文中)限定。
本发明提供实验证据，证实本发明的化学实体与比较化合物相比 在CYP2D6抑制中表现出更高的IC50值。另外，与比较化合物相比， 4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶 -3-基)-酰胺在大鼠的初步观察(Irwin)测试中表现出化合物给予所致的 行为和生理机能副作用得到改善。
4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺抑制CYP2D6的IC50活性与此前描述的哌嗪基脲类化 合物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸吡啶 -3-基酰胺(参见PCT已公布的专利申请号WO 2006/074025，实例150) 相比有改善，后者在本文中描述为比较化合物。用丁呋洛尔和右美沙 芬分别作为底物时，4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺表现出相对于比较化合物高7.5至5.5 倍的IC50值。
此外，与比较化合物相比，本发明的化学实体在大鼠的初步观察 (Irwin)测试中表现出出乎意料的特性。具体地，比较化合物4-(2，2-二 氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸吡啶-3-基酰胺在 10mg/kg的剂量下增加了所有测试的大鼠对触摸的反应性，而4-(2，2- 二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)- 酰胺在相同的剂量下仅在四只测试的大鼠中的一只中诱导了反应性。 比较化合物在60mg/kg下在所有测试的大鼠中在处理后15至120分 钟时间间隔诱导了镇静，在处理后15分钟诱导了异常步态(摇摆)， 而这些观察结果在4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪 -1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺处理的大鼠中不明显。在60mg/kg剂量 下同样明显的是，比较化合物在60至120分钟时间间隔降低了肌肉 紧张度，而4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸 (4-氯-吡啶-3-基)-酰胺仅在四只测试的大鼠中的一只中增加了腹肌紧 张度。最后，在60mg/kg剂量下，比较化合物在15至60分钟和180 分钟间隔在受试大鼠中引起体温过低，而此观察结果在用本发明的化 合物测试的大鼠中没有出现。
在一个总体方面，本发明涉及化合物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂 环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺。在一个具体实施 例中，该化合物是4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪 -1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的盐酸盐。
本发明还涉及4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用盐、4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二 氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用前 药和4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺的可药用代谢物。
在另一个总体方面，本发明涉及药物组合物，其各自包含：(a) 治疗有效量的以下至少一者：4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5- 基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺、4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧 杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用盐、 4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶 -3-基)-酰胺的可药用前药和4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基 甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用代谢物；和(b)可药用 赋形剂。
在另一个方面，本发明的实施例可用作FAAH调节剂。因此，本 发明涉及调节FAAH活性的方法，所述方法包括将FAAH暴露于治疗 有效量的以下至少一者：4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲 基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺、4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环 戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用盐、4-(2，2- 二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)- 酰胺的可药用前药和4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的药物活性代谢物。
在另一个总体方面，本发明涉及治疗罹患或被诊断患有由脂肪酸 酰胺水解酶(FAAH)活性介导的疾病、失调或医学病症的受试者的方 法，所述方法包括给予需要这种治疗的受试者有效量的至少一种选自 以下的药剂：4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺及其可药用盐、药物活性前药和药物活性代谢 物。在本发明方法的优选实施例中，所述疾病、失调或医学病症选自： 焦虑、抑郁、疼痛、睡眠失调、饮食失调、炎症、多发性硬化症和其 他运动失调、HIV消耗综合征、闭合性头部外伤、中风、学习和记忆 失调、老年痴呆症、癫痫、妥瑞氏综合征、尼曼-皮克病、帕金森氏病、 亨廷顿氏舞蹈病、视神经炎、自体免疫性葡萄膜炎、毒品或酒精戒除 综合征、恶心、呕吐、性功能障碍、焦虑、创伤后精神压力失调、脑 血管痉挛、青光眼、过敏性肠综合征、炎性肠疾病、免疫抑制、疥疮、 胃食管反流性疾病、麻痹性肠梗阻、分泌性腹泻、胃溃疡、类风湿性 关节炎、意外怀孕、高血压、癌、肝炎、过敏性呼吸道疾病、自身免 疫性糖尿病、难治性瘙痒、神经炎症、糖尿病、代谢综合征、骨质疏 松、血脂异常、肝脂肪变性和脂肪性肝炎。
在另一个总体的方面，本发明涉及用2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环 戊烯-5-甲醛和哌嗪在单步氢化反应中合成4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧 杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的方法。
由以下具体实施方式和通过本发明的实施，本发明的其他实施 例、特征和优点将会是显而易见的。
具体实施方式
由以下描述，包括以下术语表和结论性实例在内，可更完全地理 解本发明。为简单起见，将本说明书所引用的出版物的公开内容以引 用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“包括”、“含有”和“包含”在本文中是以 其开放的、非限制性的意思使用。
本文给出的结构式还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素 标记形式。同位素标记的化合物具有本文给定的式子所描绘的结构， 不同的是一个或多个原子被具有选定的原子量或质量数的原子所代 替。可掺入到本发明化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧或 氟的同位素，如分别为2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O和18F。 这种同位素标记的化合物可用于代谢研究(优选用14C)，用于反应 动力学研究(用例如2H或3H)，用于检测或成像技术[如正电子发射 断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)，包括药物或底 物组织分布测定，或者用于患者的放射治疗。具体来讲，18F-或11C标 记的化合物可优选用于PET或SPECT研究。此外，用较重的同位素 如氘(即2H)进行置换可以提供由更大的代谢稳定性所带来的某些治 疗优势，例如体内半衰期延长或需要的剂量减少。同位素标记的本发 明化合物及其前药通常可以通过用容易获得的同位素标记试剂取代 非同位素标记试剂，经完成“方案”或“实例”中所公开的程序和下 面描述的制备法来制备。
在一个一般实施例中，本发明涉及4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环 戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺及此化合物的可药 用盐、可药用前药和药物活性代谢物。在另一个一般实施例中，本发 明涉及药物组合物，它们各自包含治疗有效量的FAAH调节剂，所述 调节剂选自4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺和此化合物的可药用盐、可药用前药和药物活 性代谢物。
本发明也涉及4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用盐。“可药用盐”旨在表示 4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶 -3-基)-酰胺化合物的游离酸或碱的盐，它是无毒的、生物可耐受的， 或换句话讲在生物学上适于向受试者给予。主要参见G.S.Paulekuhn， et al.，“Trends in Active Pharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange Book Database”，J. Med.Chem.，2007， 50：6665-72(G.S.Paulekuhn等人，“基于橙皮书数据库选择活性药用 成分盐的趋势”，《药物化学杂志》，2007年，第50卷，第6665-6672 页)，S.M.Berge，et al.，“Pharmaceutical Salts”，J Pharm Sci.，1977， 66：1-19(S.M.Berge等人，“药用盐”，《药物科学杂志》，1977年， 第66卷，第1-19页)和Handbook ofPharmaceutical Salts，Properties， Selection，and Use，Stahl and Wermuth，Eds.，Wiley-VCH and VHCA， Zurich，2002(《药用盐特性、选择与应用手册》，Stahl和Wermuth 编辑，Wiley-VCH和VHCA，Zurich，2002年)。优选的可药用盐是 那些药理学上有效且适于与患者组织接触而不会有不当毒性、刺激或 变应性应答的盐。可药用盐的例子包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、 亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸 盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、 辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、 草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马 来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸 盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸 盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸 盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒 石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。
在某些实施例中，化合物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5- 基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺是盐酸盐。
4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺的化合物可具有足够碱性的基团，因而可与多种无机 和有机酸反应，形成可药用盐。
本发明的化合物含有至少一个碱性氮，因此，可通过本领域可用 的任何适当方法制备所需的可药用盐，例如，通过用无机酸如盐酸、 氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、磷酸等；或用有机酸如乙酸、 苯基乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、 羟乙磺酸、琥珀酸、戊酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、 水杨酸、油酸、棕榈酸、月桂酸、吡喃糖醛酸如葡糖醛酸或半乳糖醛 酸、α-羟基酸如扁桃酸、柠檬酸或酒石酸；氨基酸如天冬氨酸或谷氨 酸；芳族酸如苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、萘甲酸或肉桂酸；磺酸如 月桂基磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸或乙磺酸；或按照本领域普通技术 水平被看作同等物或可接受替代物的任何其他酸及其混合物处理该 游离碱来制备。
本发明也涉及4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的可药用前药。术语“前药”是指指 定化合物的前体，其在给予受试者后，通过诸如溶剂分解或酶促裂解 的化学或生理过程，或者在生理条件下，体内产生该化合物(例如， 前药被带到生理pH时被转化成实例1的化合物)。“可药用前药” 是无毒的、生物学上可耐受的和另外来讲在生物学上适于给予受试者 的前药。选择和制备合适的前药衍生物的示例性方法在以下文献中有 描述：例如“Design of Prodrugs”，ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985(“前 药设计”，H.Bundgaard编辑，Elsevier，1985年)。
前药的例子包括这样的化合物，其具有一个氨基酸残基，或2个 或更多个(例如2个、3个或4个)氨基酸残基的多肽链，这些氨基 酸残基通过酰胺或酯键与4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲 基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的游离氨基共价连接。氨基酸残 基的例子包括通常用三个字母符号标识的二十种天然存在的氨基酸 以及4-羟脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链素(demosine)、异锁链素 (isodemosine)、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜 氨酸高半胱氨酸、高丝氨酸、鸟氨酸和甲硫氨酸砜。另外的前药类型 可通过例如将游离胺衍生为酰胺、磺酰胺或磷酰胺来生产。
本发明也涉及4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的药物活性代谢物。“药物活性代谢 物”指4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4- 氯-吡啶-3-基)-酰胺或其盐在体内代谢的药物活性产物。化合物的前药 和活性代谢物可用本领域公知或可利用的常规技术进行确定。参见例 如Bertolini et al.，J.Med.Chem.1997，40，2011-2016(Bertolini等人， 《药物化学杂志》，1997年，第40卷，第2011-2016页)；Shan et al.， J.Pharm.Sci.1997，(7)，765-767(Shan等人，《药物科学杂志》， 1997年，第86卷，第7期，第765-767页)；Bagshawe，Drug Dev.Res. 1995，34，220-230(Bagshawe，《药物开发研究》，1995年，第34卷， 第220-230页)；Bodor，Adv.Drug Res.1984，13，224-331(Bodor，《药 物研究进展》，1984年，第13卷，第224-331页)；Bundgaard，Design of Prodrugs (Elsevier Press，1985)(Bundgaard，《前药设计》，Elsevier 出版社，1985年)；以及Larsen，Design and Application of Prodrugs， Drug Design and Development(Krogsgaard-Larsen et al.，eds.，Harwood Academic Publishers，1991)(Larsen，前药设计与应用，《药物设计与 开发》，Krogsgaard-Larsen等人编辑，Harwood Academic Publishers， 1991年)。
本发明的4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1- 甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺化合物，及其可药用盐、可药用前药和药物 活性代谢物(统称为“活性剂”)可在本发明的方法中用作FAAH抑 制剂。术语“抑制剂”指降低、防止、失活、减敏或下调FAAH表达 或活性的化合物。活性剂可在本发明方法中用于治疗通过FAAH的抑 制或调节而介导的医学病症、疾病或失调，例如本文所描述的那些。 根据本发明的活性剂因而可用作镇痛剂、抗抑郁剂、认知增强剂、神 经保护剂、镇静剂、食欲兴奋剂/抑制剂或避孕药。
由FAAH活性介导的示例性医学病症、疾病和失调包括焦虑、抑 郁、疼痛、睡眠失调、饮食失调、炎症、多发性硬化症和其他运动失 调、HIV消耗综合征、闭合性头部外伤、中风、学习和记忆失调、阿 尔茨海默病、癫痫、妥瑞氏综合征、癫痫、尼曼-皮克病、帕金森氏病、 亨廷顿氏舞蹈病、视神经炎、自体免疫性葡萄膜炎、毒品或酒精戒除 综合征、恶心、呕吐、性功能障碍、创伤后精神压力失调、脑血管痉 挛、糖尿病、代谢综合征、骨关节炎和骨质疏松。
因此，这些活性剂可用来治疗诊断有或患有此类疾病、失调或病 症的受试者。本文所用术语“治疗”意指将本发明的药剂或组合物给 予受试者，其目的是通过抑制FAAH活性实现治疗有益效果。治疗包 括对通过FAAH活性的调节而介导的疾病、失调或病症或者这类疾 病、失调或病症的一种或多种症状进行逆转、改善、减轻、抑制其进 展、减轻其严重程度、降低其发生率或者预防。术语“受试者”指需 要这种治疗的哺乳动物患者，例如人。“调节剂”包括抑制剂和激活 剂，其中“抑制剂”指能降低、防止、失活、减敏或下调FAAH表达 或活性的化合物，而“激活剂”指能提高、激活、促进、致敏或上调 FAAH表达或活性的化合物。
因此，本发明涉及用本文所述的活性剂治疗确诊有或患有通过 FAAH活性介导的疾病、失调或病症的受试者的方法，所述疾病、失 调或病症例如：焦虑、疼痛、睡眠失调、饮食失调、炎症、运动失调 (例如多发性硬化症)、葡萄糖和脂代谢(例如糖尿病)和骨内稳态 (例如骨质疏松)。
症状或疾病状态旨在包括在“医学病症、失调或疾病”的范围内。 例如，疼痛可与各种疾病、失调或病症相关，且可包括各种病因。可 用根据本发明的FAAH调节剂(在本文的一个例子中，用FAAH抑制 剂)治疗的疼痛的示例性类型包括癌痛、术后痛、胃肠道疼痛、脊髓 损伤疼痛、内脏痛觉过敏、丘脑疼痛、头痛(包括压力头痛和偏头痛)、 腰部疼痛、颈部疼痛、肌肉骨髓疼痛、外周神经性疼痛、中枢神经性 疼痛、神经增殖失调相关的疼痛和月经疼痛。HIV消耗综合征包括相 关的症状如食欲丧失和恶心。帕金森氏病包括例如左旋多巴诱导的运 动障碍。多发性硬化症的治疗可包括诸如痉挛、神经性疼痛、中枢性 疼痛或膀胱功能障碍的症状的治疗。毒品解除综合征可由例如对鸦片 剂或尼古丁的上瘾导致。恶心或呕吐可由化疗、手术后或阿片样物质 相关的原因导致。性功能障碍的治疗可包括提高性欲或延迟射精。癌 症的治疗可包括神经胶质瘤的治疗。睡眠失调包括例如睡眠呼吸暂 停、失眠和需要用具有镇静剂或麻醉剂类效果的药剂治疗的失调。饮 食失调包括例如与诸如癌症或HIV感染/AIDS的疾病相关的厌食或食 欲丧失。
在根据本发明的治疗方法中，将有效量的至少一种根据本发明的 活性剂给予患有或诊断有这种疾病、失调或病症的受试者。“治疗有 效量”或“有效量”指足以在需要治疗由FAAH活性介导的疾病、失 调或病症的患者中大体上引起所需治疗有益效果的FAAH调节剂的 量或剂量。本发明活性剂的有效量或剂量可通过常规方法(如建模、 剂量递增研究或临床试验)并通过考虑如下的常规因素进行确定：给 药或药物递送的模式或途径，药剂的药动学，疾病、失调或病症的严 重程度和进程，受试者之前进行的或正在进行的疗法，受试者的健康 状况和对药物的响应，以及主治医师的判断。示例性的剂量在约0.0001 至约200mg活性剂/kg受试者体重/天的范围内，优选约0.001至 100mg/kg/天，或者约0.01至35mg/kg/天，或者约0.1至10mg/kg/天， 按单个剂量单位或分剂量单位(例如每天两次、每天三次、每天四次)。 对于70kg的人，合适剂量的示例性范围为约0.05至约7g/天或者约 0.2至约5g/天。一旦患者的疾病、失调或病症出现改善，可调整剂量 以进行维持性治疗。例如，给予的剂量或频率或者这两方面可根据症 状而降低到能维持所需的治疗作用的水平。当然，如果症状已减轻到 适当的水平，治疗可停止。但是，患者可能需要长期地在症状出现任 何复发时进行间歇性治疗。
另外，本发明的活性剂可与治疗上述病症的另外的活性成分组合 使用。另外的活性成分可与4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲 基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺的活性剂分开共同给予，或与此 药剂一起包括在根据本发明的药物组合物中。在一个示例性实施例 中，另外的活性成分是已知或被发现能有效治疗FAAH活性介导的病 症、失调或疾病的活性成分，如另一种FAAH调节剂或者对另一个与 该特定病症、失调或疾病有关的靶标有活性的化合物。该组合可有助 于提高功效(例如通过在该组合中包括能加强根据本发明的活性剂的 效价或有效性的化合物)，降低一种或多种副作用，或者降低根据本 发明的活性剂的所需剂量。在一个示例性实施例中，根据本发明的组 合物可含有一种或多种另外的活性成分，其选自阿片样物质、非甾族 抗炎药物(NSAID)(例如布洛芬、环加氧酶-2(COX-2)抑制剂和萘普 生)、加巴喷丁、普瑞巴林、曲马多、对乙酰氨基酚和阿司匹林。
本发明的活性剂可单独使用或者与一种或多种另外的活性成分 组合使用以配制本发明的药物组合物。本发明的药物组合物包含：(a) 有效量的至少一种根据本发明的活性剂；和(b)可药用赋形剂。
“可药用赋形剂”指无毒的、生物学上可耐受的或另外来讲在生 物学上适于给予受试者的物质，如惰性物质，其被加到药理组合物或 另外来讲用作介质、载体或稀释剂以促进药剂的给予，且其与该药剂 相容。某些可药用赋形剂在“Handbook of Pharmaceutical Excipients”， 6th ed.，Pharmaceutical Press，2009(《药用赋形剂手册》，第6版，医 药出版社，2009年)中综述。赋形剂的例子包括碳酸钙、磷酸钙、各 种糖类和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
含有一个或多个剂量单位的活性剂的药物组合物的递送形式，可 用本领域技术人员知道的或者可利用的合适药物赋形剂和配混技术 进行制备。所述组合物在本发明方法中可通过合适的递送途径给予， 如通过口服途径、胃肠外途径、直肠途径、局部途径或眼部途径给予， 或者通过吸入给予。
制剂可为片剂、胶囊剂、扁囊剂(sachet)、糖衣丸剂、散剂、颗粒 剂、锭剂、复原用散剂、液体制剂或栓剂的形式。优选地，所述组合 物配制成供静脉输注、局部给予或口服给予。
对于口服给予，本发明的活性剂可以片剂或胶囊剂的形式提供， 或者作为溶液剂、乳剂或混悬剂提供。为制备口服组合物，可配制活 性剂，以得到例如约5mg至5g/天，或者约50mg至5g/天的剂量，以 单个剂量或分剂量的形式。例如，约5mg至5g/天的总日剂量可通过 每天一次、两次、三次或者四次给予完成。
口服片剂可包括与相容的可药用赋形剂如稀释剂、崩解剂、粘合 剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂混合在一起的活性成 分。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、 淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨糖醇等。 示例性的液体口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯 烷酮(PVP)、羟乙酸淀粉钠、微晶纤维素和海藻酸是示例性的崩解剂。 粘合剂可包括淀粉和明胶。润滑剂如果存在的话可以是硬脂酸镁、硬 脂酸或滑石粉。如果需要，片剂可用诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬 脂酸酯的材料进行包衣，以延迟在胃肠道中的吸收，或者可用肠溶衣 进行包衣。
用于口服给予的胶囊剂包括硬明胶胶囊剂或软明胶胶囊剂。为制 备硬明胶胶囊剂，可将活性成分与固体、半固体或液体稀释剂混合。 软明胶胶囊剂可通过将活性成分与水、油(如花生油或橄榄油)、液 体石蜡、短链脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400 或丙二醇混合来制备。
口服给予的液体剂可以为混悬剂、溶液剂、乳剂或糖浆剂的形式， 或者可冻干或作为干燥制品呈现，供临用前用水或其他合适的介质进 行复原。此类液体组合物可以任选含有：可药用赋形剂，如悬浮剂(如 山梨醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维 素、硬脂酸铝凝胶等)；非含水介质，例如油(如杏仁油或分级椰子 油)、丙二醇、乙醇或水；防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯 甲酸丙酯或山梨酸)；润湿剂，例如卵磷脂；以及可根据需要包含矫 味剂或着色剂。
本发明的活性剂还可通过非口服途径给予。例如，组合物可配制 成栓剂供直肠给予。对于胃肠外使用，包括静脉内、肌肉内、腹膜内 或皮下途径，本发明的活性剂可提供在无菌水溶液剂或混悬剂中，缓 冲至适当的pH和等渗性，或者在胃肠外可接受的油中。合适的含水 介质包括林格溶液和等渗氯化钠。这类形式可以单位剂量形式(如安 瓿或一次性注射装置)呈现，以可从中抽取适当剂量的多剂量形式(如 小瓶)呈现，或者以可用来制备可注射制剂的固体形式或预浓缩物呈 现。示例性的输注剂量范围为约1至1000μg/kg/分钟的与药用载体混 合的活性剂，时间为几分钟到几天。
对于局部给予，可将活性剂与药用载体混合成约0.1％至约10％ 的药物/介质浓度。另一种给予本发明活性剂的方式可利用贴剂来影响 透皮递送。
或者，在本发明方法中活性剂可以通过鼻内或口服途径经由吸入 来给予，例如在还含有合适的载体的喷雾制剂中。
现在将参照下面关于其一般制备的示例性合成方案和随后的具 体实例来描述可用于本发明方法的示例性活性剂。
如上所述的化合物可根据本领域技术内的和/或以下方案和实例 所述的方法制备。根据情况而定，某些反应方案可在有或没有保护下 进行。这可通过常规保护基团来实现，如在以下文献中描述的那些保 护基团：“Protective Groups in Organic Chemistry”，ed.J.F.W.McOmie， Plenum Press，1973(“有机化学中的保护基团”，J.F.W.McOmie编 辑，Plenum出版社，1973年)；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts， “Protective Groups in Organic Synthesis”，3rd ed.，John Wiley&Sons， 1999(T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有机合成中的保护基团”，第 3版，John Wiley&Sons，1999年)。可使用本领域已知的方法在方 便的后续阶段移除保护基团。或者，可能需要采用合适的基团代替该 最终需要的取代基，该合适的基团可经历整个反应方案，然后在适当 情况下用所需的取代基替换。这些化合物、前体或前药也在本发明的 范围内。
为了阐述本发明，包括了以下实例。这些实例并不限制本发明。 它们只是为了提出实施本发明的方法。本领域的技术人员可找到其他 实施本发明的方法，这些方法对他们是显而易见的。但是，应将这些 方法视为在本发明的范围内。
现在参考示例性合成方案和有关其制备的具体方案说明4-(2，2- 二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)- 酰胺的合成。技术人员会认识到，为获得本文的各种化合物，可适当 地选择原料，使得最终需要的取代基会在进行保护或不经保护的情况 下经历整个反应方案，以得到需要的产物。或者，可能需要或者希望 采用合适的基团代替该最终需要的取代基，该合适的基团可经历整个 反应方案，然后在适当情况下用所需的取代基替换。
方案A
参见方案A，通过使2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-甲醛和哌 嗪在氢化条件下反应，获得中间体1。反应可用Pd(OH)2、Pt或Pd作 为催化剂，在诸如MeOH、EtOH或AcOH的溶剂中进行。反应可在 20至80℃之间的温度进行。可接受的H2压力可在1至60巴之间。2，2- 二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-甲醛与哌嗪的数量比通常是1至6当 量。反应可在分批氢化装置或流动氢化装置上进行。
方案B
参见方案B，从3-氨基-4-氯吡啶和中间体1制备4-(2，2-二氟-苯 并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺。将 3-氨基-4-氯吡啶在诸如甲苯的溶剂中用氯甲酸苯酯和吡啶处理，得到 中间体2的化合物。使中间体2直接与中间体1反应，得到4-(2，2-二 氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰 胺。
化学分析：
在制备4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺时和在以下的比较实例中，使用以下一般实验 方法和分析方法。
除非另有说明，否则反应混合物在氮气气氛下搅拌。当浓缩溶液 或混合物时，它们通常用旋转蒸发器在减压下进行浓缩。
除非另外指明，否则质谱是在Agilent产品系列1100MSD上使 用电喷雾电离(ESI)以正离子模式获得。
核磁共振谱是用Bruker型号DPX400(400MHz)、DPX500 (500MHz)、DRX600(600MHz)光谱仪获得的。以下1H NMR数据的格 式为：处于四甲基硅烷参照物的低场的化学位移(单位为ppm)(多 重度，耦合常数J(单位为Hz)，积分)。
化学名称是使用ChemDraw Ultra 6.0.2(马萨诸塞州剑桥市剑桥 软件公司(CambridgeSoft Corp.，Cambridge，MA))或ACD/Name版本9 (加拿大安大略省多伦多高级化学发展有限公司(Advanced Chemistry Development，Toronto，Ontario，Canada))来产生。
中间体1：1-((2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪。
将哌嗪(185.1g，2.15mol)、2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-甲醛 (100.0g，0.537mol)和甲醇(1.08L)充入2L锥形瓶。将溶液在室温下搅拌 18小时，然后两次通过H-Cube MidiTM(ThalesNano，匈牙利布达佩斯)， 其具有新的20％Pd(OH)2/C MidiCart筒，设置如下：70℃、1atm压力、 6mL/min流速和10％过量H2产量。醛原料＞90％在第一次通过后消耗， 在第二次通过后完全消耗，如LC分析所示。蒸发甲醇，加入甲苯 (1.20L)，并将混合物在室温下搅拌18小时。过滤所得的白色悬浮液 并用甲苯(200mL)冲洗固体。将合并的滤液用水洗涤(2×300mL)，用 Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到无色油状产物。将油状物溶于庚烷 (100mL)，让产物在室温下结晶。为进行后续的合成实验，采用加入 少量晶种以加速结晶过程。将悬浮液冷却到0℃，过滤，将固体在真 空烘箱下50℃干燥24小时，得到白色固体状的标题化合物(108.0g， 78％)。将庚烷滤液浓缩到约20mL，然后加入产物晶种。然后将溶液 搅拌过夜。在过滤和干燥后获得第二批白色固体状的标题化合物(6.7g， 5％)。合并的收率为(115g，83％)。MS(ESI+)：C12H14F2N2O2m/z计算值 为256.1，实测值为256.9(M+H)+。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：7.11 (d，J＝0.9Hz，1H)，6.99(dd，J＝9.0，0.9Hz，1H)，6.95(d，J＝9.0Hz，1H)， 3.45(s，2H)，2.92-2.83(m，4H)，2.39(s，4H)；13C NMR(101MHz，CDCl3) δ：143.89，142.72，134.68，131.65(t，JC-F＝255.3)，123.88，110.13， 108.82，63.10，54.38，46.07。
实例1：4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺。
在氮气气氛下，向配有机械搅拌器、热电偶和加料漏斗的2L三 颈Morton烧瓶中加入3-氨基-4-氯吡啶(35.0g，272mmol)和甲苯 (740mL)。将棕色溶液冷却到2℃。一次性加入吡啶(25.3mL，310mmol)， 然后在30分钟内滴加氯甲酸苯酯(32.6mL，259mmol)。最高内部温度 为5℃。在2-5℃下搅拌7小时后，反应混合物变成浓黄色悬浮液。在 3分钟内加入冷的K2CO3(53.6g，388mmol)/水(216mL)溶液，期间最高 内部温度为6℃。然后在1分钟内加入固体1-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧 杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪(66.3g，259mmol)。让混合物缓慢升温至室温 并搅拌15小时。加入水(200mL)，分离甲苯层并用盐酸水溶液(1.8M， 600mL)萃取。将含水萃取物用甲苯洗涤(2×300mL)。向水层加入MeOH (500mL)并将溶液冷却到5℃。通过加入NaOH溶液(50重量％，约 50mL)将pH调节到pH 8-9。以使得内部温度不超过17℃的速率加入。 将所得的悬浮液在5℃下搅拌2小时。过滤收集产物并用MeOH/H2O (1∶1，70mL)冲洗。将固体在真空烘箱中在50℃干燥24小时，得到黄/ 绿色固体(73g，69％)的标题化合物。
向配有搅拌棒、热电偶和回流冷凝器的1L三颈Morton烧瓶中加 入粗制4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4- 氯-吡啶-3-基)-酰胺(98g，239mmol)和乙酸异丙酯(318mL)。将悬浮液加 热到65℃，用活性碳(10.0g)处理并在65℃搅拌1小时。然后将混合物 加热到80℃并快速滤过薄硅藻土垫。将滤液缓慢冷却到室温，然后置 于冰浴上30分钟。过滤收集固体，用冷iPrOAc(10mL)冲洗，然后干 燥得到黄色固体产物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌 嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺(72g，73％)。
向配有机械搅拌器、热电偶和回流冷凝器的2L三颈Morton烧瓶 加入粗产物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺(191g，465mmol)和乙酸异丙酯(705mL)。将悬 浮液加热到65℃，用活性碳(11.2g)处理并在65℃搅拌1小时。然后将 混合物加热到75℃并快速过滤。将滤液缓慢冷却到室温过夜，然后置 于冰浴中30分钟。过滤收集固体，用冷iPrOAc(40mL)冲洗，并在真 空烘箱中50℃干燥72小时。得到浅黄色固体产物4-(2，2-二氟-苯并[1，3] 二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺(161g， 84％)。MS(ESI+)：C18H17ClF2N4O3m/z计算值为410.1，实测值为411.1 (M+H)+。C18H17ClF2N4O3计算值为：C：52.63；H：4.17；N：13.64。 实测值为：C：52.73；H：4.15；N：13.62；1H NMR(600MHz，CDCl3) δ：9.36(s，1H)，8.19(d，J＝5.2Hz，1H)，7.29(dd，J＝5.3，0.3Hz，1H)，7.13 (d，J＝0.9Hz，1H)，7.02-6.98(m，2H)，6.84(s，1H)，3.58-3.54(m，4H)， 3.53(s，2H)，2.54-2.48(m，4H)；13C NMR(151MHz，CDCl3)δ：153.49， 144.02，143.88，143.28，142.98，134.05，133.09，131.66(t，JC-F＝ 254.6Hz)，131.55，123.89，123.53，110.03，109.02，62.28，52.47，44.23。
实例1A：4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1- 甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺双盐酸盐。
将由4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺(5.0g，12mmol)和乙醇(200mL)组成的溶液用饱和盐酸 溶液(3.0mL，3当量)处理。真空除去溶剂，加入乙醇(100mL)，将悬 浮液冷却到0℃并过滤。将所得的白色固体用冷乙醇(25mL)冲洗，真 空干燥得到4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺双盐酸盐(4.25g，72％)。1H NMR(400MHz， DMSO)δ11.61(br s，1H)，8.98(s，1H)，8.65(s，1H)，8.37(d，J＝5.4Hz， 1H)，7.78(d，J＝1.4Hz，1H)，7.69(d，J＝5.4Hz，1H)，7.52(d，J＝8.3Hz， 1H)，7.46(dd，J＝8.3，1.5Hz，1H)，4.39(s，2H)，4.28-4.12(m，2H)， 3.49-3.26(m，4H)，3.03(s，2H)。
比较化合物：4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪 -1-甲酸吡啶-3-基酰胺。
吡啶-3-基-氨基甲酸苯酯：向0℃下的由吡啶-3-基-胺(9.49g， 101mmol)和吡啶(8.77g，111mmol)溶于CH3CN(80mL)组成的溶液中滴 加氯甲酸苯酯(15.8g，101mmol)。让反应混合物升温至室温并搅拌2小 时。用H2O(200mL)猝灭反应，过滤所得的沉淀并真空干燥，得到棕 褐色固体的标题化合物(17.34g，80％)。MS(ESI+)：C12H10N2O2m/z计 算值为214.07，实测值为215.3(M+H)+.1H NMR(500MHz，d6-DMSO： 10.46(s，1H)，8.69(d，J＝2.4Hz，1H)，8.27(dd，J＝4.7，1.4Hz，1H)，7.93 (d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.41(m，2H)，7.37(dd，J＝8.4，4.7Hz，1H)， 7.31-7.22(m，3H)。
4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸吡啶 -3-基酰胺：向吡啶-3-基-氨基甲酸苯酯(9.08g，42.4mmol)于DMSO (84mL)中的溶液中加入1-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲 基)-哌嗪(11.4g，44.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然 后用水(130mL)处理。过滤分离所得的固体，用水冲洗(4×50mL)，并 在真空下干燥。将固体重结晶(EtOH-H2O)，得到4-(2，2-二氟-苯并[1，3] 二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸吡啶-3-基酰胺(13.4g，84％)。MS (ESI+)：C18H18F2N4O3m/z计算值为376.13，实测值为377.1M+H+。1H NMR(CDCl3)：8.46(d，J＝2.5Hz，1H)，8.23-8.21(m，1H)，7.99-7.96(m， 1H)，7.22-7.19(m，2H)，7.11(s，1H)，6.99-6.98(m，2H)，3.54-3.52(m， 4H)，3.49(s，2H，2.46-2.44(m，4H)。
生物测试：
●测定方法1
A.用人FAAH转染细胞
使具有铺满的SK-N-MCA细胞单层的10cm组织培养皿在转染前 2天进行分传。使用无菌技术，将培养基除去，并通过加入胰蛋白酶 使细胞从培养皿脱离。然后将五分之一的细胞放到新的10cm培养皿 上。使细胞在含有5％CO2的37℃培养箱中在含有10％胎牛血清的极 限必需培养基Eagle中生长。2天后，细胞约80％铺满。用胰蛋白酶 将这些细胞从培养皿中移取，并在临床离心机中沉淀。将沉淀重悬在 400μL完全培养基中并转移到电极间距为0.4cm的电穿孔杯。将超螺 旋的人FAAH cDNA(1μg)加入细胞并混合。电穿孔的电压设定为 0.25kV，电容设定为960μF。在电穿孔后，将细胞稀释到完全培养基 (10mL)中并接种到四个10cm培养皿上。由于电穿孔效率的波动，接 种了四个不同浓度的细胞。使用的比率为1∶20、1∶10和1∶5，而剩余 的细胞则加到第四个培养皿中。在加入选择培养基(含有600μg/mL G418的完全培养基)之前，让细胞恢复24小时。在10天后，分析 培养皿上存活的细胞集落。使用具有分离良好的集落的培养皿。从各 个集落分离细胞并进行测试。将表现出最高FAAH活性(通过花生四 烯酸乙醇酰胺水解测量)的克隆用于进一步研究。
B.FAAH测定
将T84冷冻细胞沉淀或转染的SK-N-MC细胞(1×15cm培养皿 的内容物)在50mL FAAH测定缓冲液(125mM Tris、1mM EDTA、 0.2％甘油、0.02％Triton X-100、0.4mM Hepes，pH 9)中匀化。测定 混合物由50μL细胞匀浆、10μL测试化合物和40μL花生四烯酸乙醇 酰胺[1-3H-乙醇胺](3H-AEA，铂金埃尔默(Perkin-Elmer)，10.3Ci/mmol) (最后加入)组成，最终示踪剂浓度为80nM。将反应混合物在室温 下温育1小时。在温育期间，向96孔Multiscreen过滤板(目录号 MAFCNOB50；美国马萨诸塞州贝德福德密理博公司(Millipore， Bedford，MA，USA))加入25μL活性碳(Multiscreen装柱器，目录号 MACL09625，密理博公司(Millipore))并用100μL MeOH洗涤一次。 同样在温育期间，向96孔DYNEX MicroLite板(目录号NL510410) 加入100μL MicroScint40(目录号6013641，美国康乃狄克州梅里登帕 卡德生物科学公司(Packard Bioscience，Meriden，CT，USA))。在1小 时的温育后，将60μL反应混合物转移到活性炭板，然后将活性碳板 用Centrifuge Alignment Frame(目录号MACF09604，密理博公司 (Millipore))组装在DYNEX板的顶部上。将未结合的带标记的乙醇胺 离心通过预装了闪烁体(scintillant)的底板(5min，2000rpm)，如上所述。 将板密封并在室温下放置1小时，然后在Hewlett Packard TopCount 上计数。
●测定方法2
A.用大鼠FAAH转染细胞
使具有铺满的SK-N-MCA细胞单层的10cm组织培养皿在转染前 2天进行分传。使用无菌技术，将培养基除去，并通过加入胰蛋白酶 使细胞从培养皿脱离。然后将五分之一的细胞放到新的10cm培养皿 上。使细胞在含有5％CO2的37℃培养箱中在含有10％胎牛血清的极 限必需培养基Eagle中生长。2天后，细胞约80％铺满。用胰蛋白酶 将这些细胞从培养皿中移取，并在临床离心机中沉淀。将沉淀重悬在 400μL完全培养基中并转移到电极间距为0.4cm的电穿孔杯中。将超 螺旋的大鼠FAAH cDNA(1μg)加入细胞并混合。电穿孔的电压设定为 0.25kV，电容设定为960μF。在电穿孔后，将细胞稀释到完全培养基 中(10mL)并接种到四个10cm培养皿上。由于电穿孔效率的波动，接 种了四种不同浓度的细胞。使用的比率为1∶20、1∶10和1∶5，而剩余 的细胞则加到第四个培养皿中。在加入选择培养基(含有600μg/mL G418的完全培养基)之前，让细胞恢复24小时。在10天后，分析 培养皿上存活的细胞集落。使用具有分离良好的集落的培养皿。从各 个集落分离细胞并进行测试。将表现出最高FAAH活性(通过花生四 烯酸乙醇酰胺水解所测量)的克隆用于进一步研究。
B.FAAH测定
将转染的SK-N-MC细胞(1×15cm培养皿的内容物)在50mL FAAH测定缓冲液(125mM Tris、1mM EDTA、0.2％甘油、0.02％Triton X 1mM-100、0.4mM Hepes，pH 9)中匀化。测定混合物由50μL细胞 匀浆、10μL测试化合物和40μL花生四烯酸乙醇酰胺[1-3H-乙醇胺] (3H-AEA，铂金埃尔默(Perkin-Elmer)，10.3Ci/mmol)(最后加入) 组成，最终示踪剂浓度为80nM。将反应混合物在室温下温育1小时。 在温育期间，向96孔Multiscreen过滤板(目录号MAFCNOB50；美 国马萨诸塞州贝德福德密理博公司(Millipore，Bedford，MA，USA))加 入25μL活性碳(Multiscreen装柱器，目录号MACL09625，密理博公 司(Millipore))并用100μL MeOH洗涤一次。同样在温育期间，向96 孔DYNEX MicroLite板(目录号NL510410)加入100μL MicroScint40 (目录号6013641，美国康乃狄克州梅里登帕卡德生物科学公司 (Packard Bioscience，Meriden，CT，USA))。在1小时的温育后，将60μL 反应混合物转移到活性炭板，然后将活性碳板用Centrifuge Alignment Frame(目录号MACF09604，密理博公司(Millipore))组装在DYNEX 板的顶部上。将未结合的带标记的乙醇胺离心通过预装了闪烁体的底 板(5min，2000rpm)，如上所述。将板密封并在室温下放置1小时，然 后在Hewlett Packard TopCount上计数。
这些测定法中测试的化合物的所得结果的平均值汇总于表1中。 化合物以其游离碱或盐酸盐的形式测试。比较化合物4-(2，2-二氟-苯并 [1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸吡啶-3-基酰胺如PCT已公 布的专利申请号WO 2006/074025的实例150中所述进行合成。
表1
化合物 测定1IC50(nM) 测定2IC50(nM) 实例1 75 320 比较化合物 340 450
药物间相互作用(DDI)测定
通过将4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲 酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺和比较化合物4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环 戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸吡啶-3-基酰胺在不同浓度下与人肝微粒 体和特异性CYP探针底物进行温育，研究了所述化合物抑制人细胞色 素P-450同工酶(CYP)的潜力(表2)。CYP抑制可通过干扰其他药物 分子的代谢而影响药物物质的安全性。
该测定是使用Biomek FXp自动液体处理工作站(加利福尼亚州 富勒顿贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter Corp.，Fullerton，CA))设立 并执行，该工作站集成了设为37℃的Cytomat摇动温育器(宾夕法尼 亚州贝尔丰特热电集团(Thermo Electron Corp.，Bellefonte，PA))。使用 一批来自50位供体的由BD Gentest收集并表征的人肝微粒体(目录 号457111，批号01220，20mg/mL于250mM蔗糖中)。将每种底物 在0.1、0.15或0.2mg/mL的蛋白质浓度下以0.16mL的总温育体积温 育。在补充了5mM氯化镁和1mM EDTA的100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中制备温育物。奎尼丁用作CYP2D6的阳性对照抑制剂。将奎尼 丁在有机溶剂(主要是甲醇，含DMSO和乙腈作为辅助溶剂)中配制 为工作溶液，然后掺入微粒体悬浮液中以得到所需的浓度水平。然后 将溶液用另外的微粒体悬浮液进行系列稀释以产生八个浓度水平。最 终有机物含量低于0.07％。如果可能，根据溶解度限制在足量有机溶 剂(DMSO、甲醇或乙腈)中配制50mM或更高浓度的测试化合物的 储备溶液。将储备溶液用甲醇进行系列稀释，然后掺入微粒体悬浮液 中以得到0、0.1、0.3、1、3、10、30和100μM(针对比较化合物) 以及0、0.06、0.18、0.6、1.8、6、18和60μM(针对4-(2，2-二氟-苯 并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺)的 最终温育浓度。最终有机物含量为0.2％。对于每种探针底物，一式三 份地进行温育。
将对照抑制剂(奎尼丁)和标记物底物(右美沙芬或丁呋洛尔) 转移到温育容器中(各60μL等分试样)。在37℃下预温育期后，通 过加入40μL NADPH再生体系(BD Gentest)等分试样引发反应。40μL 等分试样(用温育缓冲液按6∶19稀释)提供1.3mM NADP+、3.3mM 葡萄糖-6-磷酸和0.4U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的最终浓度。对于右 美沙芬和丁呋洛尔两者，温育时间均为12分钟。反应通过直接向温 育混合物中加入乙腈(160μL)，然后转移到含有另外的乙腈(400μL)的 收集板中而终止。
温育反应物以相等的测试化合物或对照抑制剂浓度进行收集，再 转移到Phenomenex StrataTMImpact蛋白质沉淀过滤板，该过滤板含有 乙腈和内标(100μL浓度范围为0.5到2.8μM的以下氘化化合物的混 合物：羟基丁呋洛尔-d9、右美沙芬-d3)。将所得的滤液在氮气流下蒸 发至干，然后在250μL流动相(1∶1甲醇∶水，含0.1％乙酸)中复原。 将样品和标准品在Sciex API4000三重四极杆质谱仪上分析。数据在 Analyst 1.4.1(应用生物系统公司/美迪希实验仪器公司(Applied Biosystems/MDS Sciex))中采集。为进行IC50测定，将代谢物和内标 色谱峰的面积比转移到SigmaPlot(版本8.0)并在半对数标度上作图 (残余活性百分比与抑制剂浓度)以确定IC50值。
4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺抑制了CYP2D6，使用丁呋洛尔作为测试底物时IC50值为24μM，使用右美沙芬作为测试底物时为11μM。4-(2，2-二氟-苯 并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺与 比较化合物相比更有利，后者抑制CYP2D6的情况为：使用丁呋洛尔 作为测试底物时IC50值为3.2μM，使用右美沙芬作为测试底物时为 2.0μM。这些结果证明，4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)- 哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺相对于比较化合物可能降低药物间 相互作用的风险。
表2
大鼠中的初步观察(Irwin)测试
在大鼠初步观察(Irwin)测试中经口给予4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二 氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐和比 较化合物的盐酸盐进行研究，以评估它们对行为和生理功能的总体效 果。此方法检测测试物质对行为和生理功能的第一毒性剂量、活性剂 量范围和主要效果，如Irwin et al.，Psychopharmacologia，1968，13， 222-257(Irwin等人，《精神药理学》，1968年，第13卷，第222-257 页)中所述进行。向大鼠给予测试物质，然后进行观察，同时与给予 介质的对照组(非盲性条件)进行比较。同时观察处理组内的所有动 物。根据源自Irwin的标准化观察表格记录行为变化、生理和神经毒 性症状、直肠温度和瞳孔直径。表格含以下项目：死亡、抽搐、颤动、 Straub尾、活动改变、跳跃、异常步态(摇摆、踮脚尖)、运动不协 调、腹肌紧张度改变、不能抓紧、运动不能、全身僵硬、牵引力丧失、 平衡丧失、前爪行走、蠕动、立毛、刻板症(嗅闻、咀嚼、头动)、 头抽搐、抓搔、呼吸改变、攻击行为、恐惧/惊吓改变、对触摸的反应 性改变、上睑下垂、眼球突出、翻正反射丧失、角膜反射丧失、痛觉 丧失、排便/痢疾、分泌唾液、流泪、直肠温度(体温过低/体温过高) 和瞳孔直径(瞳孔缩小/瞳孔散大)。将测试物质以2个剂量(10和 60mg/kg)评估，在即将测试前经口给予，并与介质对照组进行比较。 在给予测试物质/介质后15、30、60、120和180分钟以及在24小时 后进行观察。
表3
在Irwin测试中，4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)- 哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐在10-60mg/kg的剂量范围 内仅在一只大鼠中导致了微弱短暂的唤醒效应(表3)。在10mg/kg 下，4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐在180min时增加了4只大鼠中的1只对触摸的 反应性。在60mg/kg下，4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)- 哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐在60分钟时增加了4只大鼠 中的1只的腹肌紧张度，并在60和180分钟时增加了4只大鼠中的1 只对触摸的反应性。除了在60mg/kg下短暂和偶尔增加腹肌紧张度外， 在直到给予后24小时也未观察到其他迹象。
4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯- 吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐在Irwin测试中在两个剂量下都表现出较之比 较化合物盐酸盐的有利差异。而4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5- 基甲基)-哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐在10mg/kg下仅导 致了4只大鼠中的1只对触摸的反应下增加，比较化合物盐酸盐则增 加了全部3只大鼠对触摸的反应性。在60mg/kg下，比较化合物盐酸 盐在全部3只大鼠中从15至120分钟诱导了镇静，在15分时诱导了 异常步态(摇摆)。它在30分钟时在1只大鼠中以及从60至120分 钟在全部3只大鼠中降低了肌肉紧张度。它也从15至60分钟以及在 180分钟时诱导了体温过低。这些结果表明，比较化合物盐酸盐在 60mg/Kg经口给予时存在镇静/抑制效应(镇静、运动迹象和体温过 低)，而这些效应未在4-(2，2-二氟-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)- 哌嗪-1-甲酸(4-氯-吡啶-3-基)-酰胺盐酸盐中观察到。