一种对氧化损伤高敏感性的面包酵母及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102120968 A (43)申请公布日 2011.07.13 CN 102120968 A *CN102120968A* (21)申请号 201010594171.3 (22)申请日 2010.12.18 C12N 1/19(2006.01) C12N 15/09(2006.01) C12R 1/85(2006.01) (71)申请人 中国科学院水生生物研究所 地址 430072 湖北省武汉市武昌区东湖南路 7 号 (72)发明人 戴和平 肖伟 张超 张敏 张晓华 (74)专利代理机构 武汉荆楚联合知识产权代理 有限公司 42215 代理人 王健 (54) 发明名。

2、称 一种对氧化损伤高敏感性的面包酵母及其制 备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种对氧化损伤高敏感性的面 包酵母及其制备方法， 涉及经过遗传基因改造的 微生物对环境化学污染物的监测。该酵母通过基 因技术改造， 提高了对氧化损伤试剂的敏感性， 使 其对环境污染物的检测范围更广、 灵敏度更高。 其特点是在原有的高通透性面包酵母基础上， 对 氧化损伤响应与修复基因的上游调控基因 YAP1 进行了敲除， 获得了一株不仅可以对大分子量化 学物有超高通透性， 且对氧化损伤高度敏感的 yap1cwp1cwp2snq2pdr5五基因敲除酵母突变株。 将DNA损伤检测元件RNR3-lacZ转入该面包酵母， 大。

3、大提高了检测系统对氧化型遗传毒性致癌物的 灵敏度， 更适用于环境中低剂量存在的化学致癌 物的检测。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 5 页 附图 2 页 CN 102120974 A1/2 页 2 1. 一种对氧化损伤高敏感性的面包酵母， 其特征在于， 该高敏感性面包酵母为缺失 yap1cwp1cwp2pdr5snq2五个基因的面包酵母。 2. 实现权利要求 1 所述的一种对氧化损伤高敏感性的面包酵母的制备方法， 其特征在 于， 该方法包含下列步骤 ： （1） 、 从野生面包酵母中提取基因组 DNA ： 1a、 取。

4、面包酵母， 接种于YPD培养液中， 在30， 200转/分钟条件下， 振荡培养16小时， 得到面包酵母菌液 ； 其中 ： YPD 培养液配方的重量百分比为 ： 酵母膏 1%， 蛋白胨 2%， 葡萄糖 2%， 余者为水 ； 1 、 取面包酵母菌液 1.5 毫升， 用 4000 转 / 分钟离心 2 分钟， 沉淀物悬于 200 微升提 取缓冲液中 ； 其中 ： 提取缓冲液的配方为 ： 曲拉通 X-100 2%, 十二烷基磺酸钠 1%, 氯化钠 0.1 摩 尔 , 乙二胺四乙酸 1 毫摩尔 , 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 10 毫摩尔 , 余者为水， pH 8.0 ； 1c、 再加入 0.3 克酸洗玻璃。

5、珠、 100 微升酚、 100 微升氯仿， 震荡 3 分钟后， 以 12000 转 / 分钟离心 10 分钟， 吸取上层液体 ； 1d、 加入所取液体体积 2 倍的无水乙醇， 在 -20静置 30 分钟， 以 12000 转 / 分钟离心 15 分钟， 去上清， 取沉淀物 ； 1e、 将沉淀物溶解于 20 微升无菌水， 即为酵母基因组 DNA 溶液 ； （2） 、 构建 yap1: hisG-URA3-hisG 基因敲除组件 ： 2a、 首先利用PCR技术， 通过上游引物YAP1-1: GGA TGC GTA AGG TCT TAA GAG和下游 引物 YAP1-2: CAG TGG TTC 。

6、TGC AGG TAC GG， 将一段 2.5Kb 的酵母基因组 DNA 片段扩增出 来， 其中包含有 YAP1 的开放阅读框和 0.2Kb 的上游同源片段和 0.35Kb 的下游同源片段 ； 其中 ： PCR 的条件为 ： 94 5 分钟 ； 94 45 秒， 52 1 分钟， 72 1 分钟， 30 个循环 ； 72 10 分钟 ； 2b、 将上述含有 YAP1 基因的 PCR 扩增片段克隆到 pGEM-T 载体上 , 用BamHI内切酶和 BstEII内切酶切下一段 1.8kb 的片断， 替换上含 BamHI 内切酶位点的接头 ； 2c、 用BamHI内切酶和BglII 内切酶从 pNK。

7、Y51 载体上切下一段含有 hisG-URA3-hisG 的 3.8kb 片断， 将该片断插入到步骤 2b 接头中的 BamHI 位点 ； 2d、用AflII 以 及 EcoRI内 切 酶 酶 切，得 到 YAP1 基 因 敲 除 组 件 ： yap1: hisG-URA3-hisG ； （3） 、 将基因敲除组件 yap1: hisG-URA3-hisG 转入超高通透性面包酵母， 筛选得到 yap1cwp1cwp2pdr5snq2 五基因敲除面包酵母 ： 3a、 将超高通透性面包酵母接种到 2 毫升 YPD 培养液， 30， 200 转 / 分钟条件下， 振荡 培养 16 小时 ； 3b、 。

8、再加入 YPD 培养液 3 毫升 , 30， 200 转 / 分钟 , 培养 4 小时， 得到超高通透性面 包酵母菌液 ； 3c、 取 1.5 毫升超高通透性面包酵母菌液， 以 2500 转 / 分钟离心 2 分钟， 取沉淀物 ； 3d、 将沉淀物悬于 100 毫摩 / 升的 400 微升醋酸锂中， 以 2500 转 / 分钟离心 2 分钟， 取 沉淀物 ； 3e、 将沉淀物悬于 100 毫摩 / 升的 100 微升醋酸锂中 ； 权 利 要 求 书 CN 102120968 A CN 102120974 A2/2 页 3 3f、 将 2.0 毫克 / 毫升的鲑鱼精单链 DNA 2 微升煮沸 5。

9、 分钟 , 冰浴后与 yap1: hisG-URA3-hisG基因敲除组件0.11微克一起加入到步骤3e的醋酸锂中， 室温放置5分 钟 ； 3g、 再加入 280 微升浓度为 50% 的聚乙二醇 4000 ； 3h、 振荡至混匀， 30静置 30 分钟 ； 3i、 加入 39 微升二甲基亚砜， 42热激 5 分钟 ； 3j、 4000 转 / 分钟离心 2 分钟， 取沉淀物， 并将沉淀物悬于 200 微升无菌水中 ； 3k、 4000转/分钟离心2分钟， 取沉淀物， 悬于100微升无菌水中， 再悬于非选择性培养 基中， 生长过夜， 然后再涂于 5- 氟乳清酸选择性培养基平板， 30培养箱中培养。

10、 3 天， 生长 出单菌落， 即为yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除面包酵母， 也就是本发明的一种对氧化 损伤高敏感性的面包酵母 ； 其中 5- 氟乳清酸选择性培养基平板的制备 ： 将酵母膏 1%， 蛋白胨 2%， 葡萄糖 2%， 琼 脂粉 2%， 余者为水置于 121高压下灭菌 20 分钟， 待温度降到 50时， 加入 5- 氟乳清酸 0.1% ； 其中非选择性培养基的制备 ： 将酵母膏 1%， 蛋白胨 2%， 葡萄糖 2%， 琼脂粉 2%， 余者为水 置于 121高压下灭菌 20 分钟。 权 利 要 求 书 CN 102120968 A CN 102120974 A1/5 。

11、页 4 一种对氧化损伤高敏感性的面包酵母及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及生物技术， 尤其涉及经过遗传基因改造的微生物对环境化学污染物的 监测。 背景技术 0002 面包酵母是一种简单真核生物， 单细胞， 遗传改造操作简单， 培养简便快速且环境 友好， 适合作为一种模式生物应用于生命科学研究中。 目前在环境污染检测技术领域中， 面 包酵母作为一种简单真核生物越来越被受到重视， 一些以面包酵母为模式生物的检测系统 得到了发展。 0003 我们在一种超高通透性的面包酵母 （申请号为 200910272505.2） 的基础上， 对酵母 氧化损伤响应与修复基因的上游调控基因 YAP1 进行了。

12、敲除， 获得了一株不仅可以对大分 子量化学物有超高通透性、 而且也对氧化损伤化学物高度敏感的酵母突变株。YAP1 是一类 在氧化应激反应中起重要作用的转录调控因子， 是一种 b-zip （Basic leucine zipper） 蛋 白， 为转录活化因子 AP-1 家族中的一员， 调控着许多关键抗氧化基因的表达。在氧自由基 胁迫下， YAP1 蛋白会在细胞核中聚集， 调控将近 70 多种基因的转录， 其中包括与维持细胞 中氧化还原环境的一系列蛋白， 如硫氧还蛋白还原酶 (TRR), 过氧化氢酶 (CTT1), 硫氧还 蛋白 (TRX2), 超氧化物歧化酶 (SOD1), 细胞色素c氧化酶 (。

13、CCP1) 和一系列与谷胱苷肽 合成及循环有关基因 (GSH1, GTT1 and GPX2) 的表达。因此在 YAP1 基因缺失后， 可有效 提高酵母细胞对氧化性损伤的敏感度， 同时 YAP1 作为重要的转录调控因子， 在 DNA 损伤应 答中起着关键作用， YAP1 基因缺失的面包酵母也表现出了对许多非氧化性 DNA 损伤的敏感 性。因此我们决定在超高通透性酵母的基础上， 利用基因敲除技术敲除 YAP1 基因， 建立一 种对氧化损伤高敏感性的面包酵母突变株， 应用于环境污染中氧化型遗传毒性致癌物的检 测。 0004 基因敲除是自 80 年代末发展起来的一种成熟的分子生物学技术， 是通过一定。

14、的 途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用 DNA 同源重 组原理， 用设计的同源片段替代靶基因片段， 从而达到基因敲除的目的。 由于面包酵母的全 基因测序已经完成， 所以可以根据目的基因的序列， 设计同源基因序列， 对目的基因进行敲 除。本发明分析了酵母中重要的转录调控因子 YAP1 的作用， 应用基因敲除技术在超高通透 性面包酵母 （专利申请号为 200910272505.2） 的基础上， 对 YAP1 基因进行敲除， 大大提高了 酵母对氧化损伤试剂的敏感性。 发明内容 0005 本发明的目的是， 提供一种对氧化损伤高敏感性的面包酵母， 该面包酵母是在超 高通。

15、透性酵母 （专利申请号为 200910272505.2） 的基础上， 具有对氧化损伤高敏感性的新菌 株， 主要用于检测环境中的氧化型遗传毒性致癌物。这种酵母突变株不仅对大分子量化学 物有高度通透性、 也对化学物的氧化损伤效应有高敏感性， 用以提高环境化学污染物的 DNA 说 明 书 CN 102120968 A CN 102120974 A2/5 页 5 氧化损伤效应的检测灵敏度。本发明的另一个目的是， 提供一种对氧化损伤高敏感性面包 酵母的制备方法。 0006 为了达到上述目的， 本发明采用如下技术方案 ： 在超高通透性面包酵母 （专利申请号为 200910272505.2） 的基础上， 敲。

16、除 YAP1 基因， 获 得缺失yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因的面包酵母。 0007 一种对氧化损伤高敏感性面包酵母的制备方法为 ： 提取面包酵母基因组 DNA， 通 过特异性引物， 以面包酵母基因组 DNA 为模板， PCR 扩增得到 YAP1 基因， 构建得到 yap1: hisG-URA3-hisG 敲除组件， 并将该组件转入超高通透性面包酵母， 发生同源重组， 通过筛选 得到五基因缺失高敏感性的菌株。由于 hisG 序列之间的同源重组， URA3 基因可被切除， URA3 基因可继续做为选择性标记。再将携带 URA3 基因 （尿嘧啶合成酶基因） 作为选择性标 记的RNR。

17、3-LacZ基因融合质粒转入到yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除面包酵母突变株 中， 得到可用于检测氧化型遗传毒性致癌物的高敏感性面包酵母。 0008 本发明所使用的遗传毒性检测元件为RNR3-lacZ。该检测系统以面包酵母为模式 生物， 以面包酵母 RNR3 基因的启动子与报告基因 lacZ（- 半乳糖苷酶） 的融合体作为检 测元件， 使RNR3基因表达水平可以通过测定酶学颜色反应来监控和定量。 RNR3是面包酵母 核苷酸还原酶的大亚基， 而核苷酸还原酶则是催化 DNA 合成所需的脱氧核苷酸产生的限速 酶。RNR3 的 mRNA 转录水平在通常条件下较低， 却有较高的诱导表达。

18、水平。它的诱导表达 只与DNA损伤有关， 而与通常的细胞生长周期无关。 许多环境遗传毒性致癌物是通过致DNA 损伤而诱发癌症的， 因此该检测系统被发展为一种环境化学致癌物的新型检测系统。本发 明通过测定RNR3-lacZ的诱导表达水平来判断酵母细胞对氧化型遗传毒性致癌物灵敏度 的提高。 0009 本发明的优点与效果 ： 本发明的酵母与野生型酵母及超高通透性面包酵母相比， 对氧化型遗传毒性致癌物的 敏感度明显提高。野生型酵母和高通透性酵母都不能检测到的叔丁基过氧化氢 (t-BHP) 损 伤， 而yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除面包酵母可以检测到叔丁基过氧化氢(t-BHP)损 伤。

19、 ；yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除面包酵母对于腐草霉素 (Phleomycin) 的检测灵敏 度比野生型酵母提高了 3 倍， 比高通透性酵母提高了 2 倍。因此yap1cwp1cwp2pdr5snq2五 基因敲除面包酵母提高了RNR3-lacZ系统的检测灵敏度， 使其更有利于对环境中以低浓度 存在的遗传毒性致癌物的监测。 附图说明 0010 图1、 不同面包酵母基因突变株的RNR3-lacZ检测系统对DNA氧化损伤试剂叔丁基 过氧化氢 （t-BHP） 检测灵敏度的比较。 0011 ：yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除酵母 ； ： 超高通透性面包酵母 ； ： 。

20、yap1单基因敲除酵母 ； ： 野生型酵母。 0012 图2、 不同面包酵母基因突变株的RNR3-lacZ检测系统对大分子量DNA氧化损伤试 剂腐草霉素 （Phleomycin） 检测灵敏度的比较。 0013 ：yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除酵母 ； ： 超高通透性面包酵母 ； ： yap1单基因敲除酵母 ； ： 野生型酵母。 说 明 书 CN 102120968 A CN 102120974 A3/5 页 6 具体实施方式 0014 制备一种对氧化损伤高敏感性面包酵母的方法包含下列步骤 ： (1)、 从野生面包酵母中提取基因组 DNA ： 1a、 取面包酵母， 接种于YP。

21、D培养液中， 在30， 200转/分钟条件下， 振荡培养16小时， 得到面包酵母菌液 ； 其中 ： YPD 培养液的配方重量百分比为 ： 酵母膏 1%， 蛋白胨 2%， 葡萄糖 2%， 余者为水 ； 1 、 取面包酵母菌液 1.5 毫升， 用 4000 转 / 分钟离心 2 分钟， 沉淀物悬于 200 微升提 取缓冲液中 ； 其中 ： 提取缓冲液的配方为 ： 曲拉通 X-100 2%, 十二烷基磺酸钠 1%, 氯化钠 0.1 摩 尔 , 乙二胺四乙酸 1 毫摩尔 , 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 10 毫摩尔 , 余者为水， pH 8.0 ； 1c、 加入 0.3 克酸洗玻璃珠、 100 微升酚、 。

22、100 微升氯仿， 震荡 3 分钟后， 以 12000 转 / 分 钟离心 10 分钟， 吸取上层液体 ； 1d、 加入所取液体体积 2 倍的无水乙醇， 在 -20静置 30 分钟， 以 12000 转 / 分钟离心 15 分钟， 去上清， 取沉淀物 ； 1e、 将沉淀物溶解于 20 微升无菌水， 即为酵母基因组 DNA 溶液 ； (2)、 构建 yap1: hisG-URA3-hisG 基因敲除组件 ： 2a、 首先利用PCR技术， 通过上游引物YAP1-1: GGA TGC GTA AGG TCT TAA GAG和下游 引物 YAP1-2: CAG TGG TTC TGC AGG TAC 。

23、GG， 将一段 2.5Kb 的酵母基因组 DNA 片段扩增出 来， 其中包含有 YAP1 的开放阅读框和 0.2Kb 的上游同源片段和 0.35Kb 的下游同源片段。 0015 其中 ： PCR 的条件为 ： 94 5分钟 ； 94 45秒， 52 1分钟， 72 1分钟， 30个循 环 ； 72 10 分钟 ； 2b、 将上述含有 YAP1 基因的 PCR 扩增片段克隆到 pGEM-T 载体 （日本 Takara 公司） 上 , 用BamHI内切酶和BstEII内切酶切下一段 1.8kb 的片断， 替换上含 BamHI 内切酶位点的接 头 ； 2c、 用BamHI内切酶和BglII内切酶从p。

24、NKY51载体 (参考文献 ： Selectable cassettes for simplified construction of yeast gene disruption vectors. Earley, Marie C.and Crouse, Gray F.Gene. 1996,196(1):111-113.) 上切下一段含有 hisG-URA3-hisG 的 3.8-kb 片断， 插入 2b 接头中的 BamHI 位点 ； 2d、 用AflII 以及 EcoRI 内切酶酶切， 得到 yap1: hisG-URA3-hisG 基因敲除组件 ； (3)、 将 yap1: hisG-UR。

25、A3-hisG 基因敲除组件转入超高通透性面包酵母， 筛选得到 yap1cwp1cwp2pdr5snq2 五基因敲除面包酵母 ： 3a、 将超高通透性面包酵母接种到 2 毫升 YPD 培养液， 30， 200 转 / 分钟振荡条件下， 培养 16 小时 ； 3b、 再加入 YPD 培养液 3 毫升 , 30， 200 转 / 分钟 , 培养 4 小时， 得到超高通透性面 包酵母菌液 ； 3c、 取 1.5 毫升超高通透性面包酵母菌液， 以 2500 转 / 分钟离心 2 分钟， 取沉淀物 ； 3d、 将沉淀物悬于 100 毫摩 / 升的 400 微升醋酸锂中， 以 2500 转 / 分钟离心 。

26、2 分钟， 取 沉淀物 ； 说 明 书 CN 102120968 A CN 102120974 A4/5 页 7 3e、 将沉淀物悬于 100 毫摩 / 升的 100 微升醋酸锂中 ； 3f、 将 2.0 毫克 / 毫升的鲑鱼精单链 DNA 2 微升煮沸 5 分钟 , 冰浴后与 yap1: hisG-URA3-hisG基因敲除组件0.11微克一起加入到步骤3e的醋酸锂中， 室温放置5分 钟 ； 3g、 再加入 280 微升浓度为 50% 的聚乙二醇 4000 ； 3h、 振荡至混匀， 30静置 30 分钟 ； 3i、 加入 39 微升二甲基亚砜， 42热激 5 分钟 ； 3j、 4000 转 。

27、/ 分钟离心 2 分钟， 取沉淀物， 并将沉淀物悬于 200 微升无菌水中 ； 3k、 4000转/分钟离心2分钟， 取沉淀物， 悬于100微升无菌水中， 再悬于非选择性培养 基中， 生长过夜， 然后再涂于 5- 氟乳清酸选择性培养基平板， 30培养箱中培养 3 天， 生长 出单菌落， 即为yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除面包酵母， 也就是本发明的一种对氧化 损伤高敏感性面包酵母 ； 其中 5- 氟乳清酸选择性培养基平板的制备方法为 ： 酵母膏 1%， 蛋白胨 2%， 葡萄糖 2%， 琼脂粉 2%， 余者为水置于 121下高压灭菌 20 分钟， 待温度降到 50时， 加入 5。

28、- 氟乳清酸 0.1%。 0016 其中非选择性培养基的制备方法为 ： 酵母膏 1%， 蛋白胨 2%， 葡萄糖 2%， 琼脂粉 2%， 余者为水置于 121下高压灭菌 20 分钟。 0017 用本发明的一种对氧化损伤高敏感性面包酵母构建RNR3-lacZ检测系统， 用于检 测氧化型遗传毒性致癌物， 其方法按下列步骤进行 ： 1、 由于 hisG 序列之间的同源重组，yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除面包酵母中作 为选择标记的 URA3 基因 （尿嘧啶合成酶基因） 会被切除掉， URA3 可用于下一步骤的选择性 标记， 将携带 URA3 基因 （尿嘧啶合成酶基因） 作为选择性标记。

29、的RNR3-LacZ基因融合质粒 pZZ2（参考文献 ： Isolation of crt mutants constitutive for transcription of the DNA damage inducible gene RNR3 in Saccharomyces cerevisiae. Zhou Z, Genetics. 1992 Aug;131(4):851-66.） 通过醋酸锂转化方法转入yap1cwp1cwp2pdr5snq2五基因敲除 面包酵母菌中， 并通过 SD-Ura 选择性平板筛选阳性菌株， 即得到对氧化型遗传毒性致癌物 的高敏感性酵母检测菌株。 0018 其中 。

30、： SD-Ura 选择性平板的配方为 ： 酵母氮源无氨基酸无硫酸铵 0.17 %, 硫酸铵 0.5%， 葡萄糖 2%, 腺嘌呤 0.2%, 色氨酸 1%, 组氨酸 1%, 亮氨酸 1%, 赖氨酸 1%， 琼脂粉 2%， 余 者为水 ； 2、 将本发明的一种对氧化损伤高敏感性酵母检测菌株接种于 SD-Ura 选择性培养液 中， 30， 200 转 / 分钟下振荡培养 16 小时， 得到一种对氧化损伤高敏感性面包酵母液 ； 3、 将酵母菌液0.5毫升接种到2.5毫升SD-Ura选择性培养液中， 30， 200转/分钟下 振荡培养至 OD600的值在 0.15 0.20 之间 ； 其中 ： SD-U。

31、ra 选择性培养液的配方为 ： 酵母氮源无氨基酸无硫酸铵 0.17 %, 硫酸铵 0.5%， 葡萄糖 2%, 腺嘌呤 0.2%, 色氨酸 1%, 组氨酸 1%, 亮氨酸 1%, 赖氨酸 1%， 余者为水 ； 4、 在 SD-Ura 选择性培养液中加入氧化性 DNA 损伤试剂叔丁基过氧化氢， 培养 4 小时 ； 5、 用分光光度计测定密度 OD600值 ； 6、 取 2 毫升酵母菌液， 2500 转 / 分钟 离心 2 分钟， 取沉淀物 ； 说 明 书 CN 102120968 A CN 102120974 A5/5 页 8 7、 将沉淀物悬于 1 毫升 Z 缓冲液中， 加入 0.1% 十二烷基。

32、磺酸钠 50 微升 , 50 微升氯 仿 , 高速涡旋 10 秒， 使酵母菌细胞破裂 ； 其中 ： Z 缓冲液的配方为 ： Na2HPO4 60 毫摩尔， NaH2PO4 40 毫摩尔， KCl 10 毫摩尔， MgSO4 1 毫摩尔， 2- 巯基乙醇 40 毫摩尔， 余者为水 ； pH 7.0 ； 8、 加入 4 毫克 / 毫升的邻硝基苯 -D- 硫代半乳糖苷 200 微升 , 在 30下保温 20 分 钟 ； 9、 再加入 1 摩尔 Na2CO3 500 微升终止反应 ； 10、 3500 转 / 分钟离心 10 分钟， 取上清， 测定 OD420 吸收值 ； 11、 根据步骤5测得的OD。

33、600值和步骤10测得的OD420 吸收值， 用下面的公式计算-半 乳糖苷酶活力 ： SA-gal=(1000OD420)/( 反应时间 菌液体积 OD600)， 其中 ： SA-gal表示 - 半乳糖苷酶活力 ； 12、 按照以上方法平行测定未经 DNA 损伤试剂处理的面包酵母菌液 - 半乳糖苷酶活 力， 作为对照， 当经DNA损伤试剂处理的面包酵母菌液-半乳糖苷酶活力值与对照的面包 酵母菌液-半乳糖苷酶活力值之比大于2时为阳性， 表明检测物中含有遗传毒性致癌物， 在检测物中含有遗传毒性致癌物比例相同的情况下， 比值越大， 表明面包酵母RNR3-lacZ 系统的检测灵敏度越高。 说 明 书 CN 102120968 A CN 102120974 A1/2 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 102120968 A CN 102120974 A2/2 页 10 图 2 说 明 书 附 图 CN 102120968 A 。