简单芽孢杆菌和菌剂及它们的应用以及钝化重金属的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510563223.3 (22)申请日 2015.09.07 CGMCC No. 10853 2015.05.22 C12N 1/20(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/07(2006.01) C02F 101/20(2006.01) (71)申请人 粮华生物科技 （北京） 有限公司 地址 102300 北京市门头沟区石龙经济开发 区永安路 20 号 3 号楼 A-3564 室 (72)发明人 林森 徐粲然 任立伟 王培红 (74)专利代理机构 北京润平知识产。

2、权代理有限 公司 11283 代理人 严政 李婉婉 (54) 发明名称 简单芽孢杆菌和菌剂及它们的应用以及钝化 重金属的方法 (57) 摘要 本发明涉及微生物领域， 具体公开了一种简 单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 及其应用， 该简 单芽孢杆菌的保藏编号为 CGMCC No.10853。还公 开了一种含有该简单芽孢杆菌的菌剂和钝化重金 属的方法。本发明的菌株能够在 Cd2+高达 300mg/ L 的培养基中生长， 低于 100mg/L 的 Cd2+对其生长 无明显影响， 表现出了极强的耐镉特性 ； 该菌株 的活、 死菌体在水体中对低浓度的 Cd2+的去除率 可分别达 70和 。

3、90以上， 对 300mg/L 的高浓度 Cd2+的去除率可达30和50以上 ； 在土相中， 该 菌株的死、 活菌体均能够有效地将重金属镉从可 交换态转变为其它稳定形态， 对重金属镉具有良 好的钝化效果。 并且， 本发明的简单芽孢杆菌对重 金属钝化， 操作简便， 能耗小， 不会造成二次污染， 周期较短， 具有较高的经济效益和社会效益。 (83)生物保藏信息 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图1页 CN 106497812 A 2017.03.15 CN 106497812 A 1/1 页 2 1.一株。

4、简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 其特征在于， 所述简单芽孢杆菌的保藏编 号为 CGMCC No.10853。 2.一种菌剂， 其特征在于， 该菌剂含有权利要求 1 所述的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的菌体。 3.根据权利要求 2 所述的菌剂， 其中， 该菌剂含有所述简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的死菌体和 / 或活菌体。 4.根据权利要求 2 所述的菌剂， 其中， 该菌剂含有所述简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的死菌体。 5.权利要求 1 所述的简单芽孢杆菌、 权利要求 2-4 中任意一项所述的菌剂在重金属。

5、钝 化中的应用。 6.根据权利要求 5 所述的应用， 其中， 所述重金属为镉。 7.一种钝化重金属的方法， 该方法包括 ： 将权利要求1所述的简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)， 和/或权利要求2-4中任意一项所述的菌剂加入到含有重金属的环境中， 以对环 境中的重金属进行钝化。 8.根据权利要求 7 所述的方法， 其中， 所述重金属为镉。 9.根据权利要求 7 或 8 所述的方法， 其中， 所述含有重金属污染的环境包括土壤或水 体。 权 利 要 求 书 CN 106497812 A 2 1/7 页 3 简单芽孢杆菌和菌剂及它们的应用以及钝化重金属的方法 技术领域 0001 本发明。

6、涉及一株简单芽孢杆菌， 具体地， 涉及一株具有钝化重金属功能的简单芽 孢杆菌及其应用， 以及含有该简单芽孢杆菌的菌剂和一种钝化重金属的方法。 背景技术 0002 我国重金属污染问题日益突出， 成为环境科学领域关注的热点问题之一。由于长 期的金属冶炼， 矿山开采以及污水灌溉农田， 导致土壤中富集了大量的重金属污染物， 对耕 地土壤质量和民生健康安全造成了极大的威胁。据 2014 年我国环境保护部和国土资源部 对全国土壤污染情况的调查结果显示， 部分地区土壤重金属污染严重， 受镉、 砷、 铅、 铬等重 金属污染场地面积近 2 万公顷， 约占耕地总面积的 1/5， 其中全国土壤重金属镉超标率达 7，。

7、 污染最为严重。 0003 重金属镉作为机体生长发育非必需元素， 是对植物、 动物及人类毒性最强的重金 属元素之一。 重金属镉经过食物链产生生物放大作用， 在较高级的生物体中富集起来， 然后 通过食物等渠道进入人体。当重金属镉在人体内积累到一定限度， 会造成人体急性或慢性 中毒， 对人体器官特别是肾脏造成很大的危害。 0004 重金属镉污染问题亟待解决。 目前常用的物理修复法主要有气相抽提技术和热脱 附技术 ； 化学修复法主要有淋洗技术、 固定 / 稳定化技术以及氧化 - 还原技术 ； 生物修复方 法主要有植物修复技术和微生物修复技术。 0005 物理化学方法虽然见效快， 但存在二次污染、 资。

8、金不足等一系列问题 ； 生物修复 方法中的植物法是一种环境友好的修复技术， 但其修复周期过长， 无法满足快速治理的需 求。微生物修复技术利用微生物自身及其代谢过程中的产物将重金属钝化于环境中， 降低 重金属生物可利用度， 对环境扰动小， 相比其它修复技术具有环境友好的绝对优势， 被认为 是在重金属污染方面最具前景的修复技术。 0006 筛选对重金属具有较强抗性及钝化能力的菌株， 对重金属的生物钝化至关重要。 虽然目前已报道了较多的镉抗性菌株， 但真正能够大规模直接用于镉污染土壤生物修复的 却不多。 0007 因此， 急需开发一株能够强力高效降解环境中的重金属， 尤其是镉的微生物菌株。 发明内容。

9、 0008 本发明的目的为了克服现有技术修复重金属污染工程量及能耗大， 或者是容易造 成二次污染， 或者修复周期长的缺陷， 提供一株能够在简单操作的条件下， 无污染的且修复 周期短的对重金属进行钝化的菌株及其应用。 0009 为了实现上述目的， 一方面， 本发明提供了一种简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 其中， 所述简单芽孢杆菌的保藏编号为 CGMCC No.10853。 0010 第二方面， 本发明提供了一种菌剂， 其中， 该菌剂含有如上所述的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的菌体。 说 明 书 CN 106497812 A 3 2/7 页 4 001。

10、1 优选的， 所述菌剂含有所述简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的死菌体 0012 第三方面， 本发明提供了如上所述的简单芽孢杆菌和 / 或如上所述的菌剂在重金 属钝化中的应用。 0013 优选的， 所述重金属为镉。 0014 第四方面， 本发明提供了一种钝化重金属的方法， 该方法包括 ： 将如上所述的简单 芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 和 / 或如上所述的菌剂加入到含有重金属的环境中， 以对 所述重金属进行钝化。 0015 优选的， 所述重金属为镉。 0016 本发明提供的菌株能够在 Cd2+浓度高达 300mg/L 的培养基中生长， 浓度低于 100m。

11、g/L的Cd2+对该菌株的生长无明显影响， 表现出了极强的耐镉特性 ； 该菌株的活菌体和 死菌体在水体中对低浓度的Cd2+的去除率可分别达70和90以上， 对300mg/L的高浓度 Cd2+的去除率可达30和50以上 ； 在土相实验中， 该菌株的死菌体、 活菌体均能够有效地 将重金属镉从可交换态转变为其它稳定形态， 对重金属镉具有良好的钝化效果。 并且， 采用 本发明的简单芽孢杆菌对重金属钝化， 操作简便， 能耗小， 不会造成二次污染， 并且周期较 短， 具有较高的经济效益和社会效益。 0017 本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。 0018 生物保藏 0019 本发。

12、明的菌株为简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 并于 2015 年 5 月 22 日被保 藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 ( 地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号 院 3 号， 中国科学院微生物研究所， 邮政编码 ： 100101)( 保藏单位的缩写为 CGMCC)， 保藏编 号为 CGMCC No.10853。 附图说明 0020 附图是用来提供对本发明的进一步理解， 并且构成说明书的一部分， 与下面的具 体实施方式一起用于解释本发明， 但并不构成对本发明的限制。在附图中 ： 0021 图 1 是本发明提供的简单芽孢杆菌在不同镉浓度下的水相中的生长曲线。 具。

13、体实施方式 0022 以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是， 此处所描述的具体 实施方式仅用于说明和解释本发明， 并不用于限制本发明。 0023 第一方面， 本发明提供了一种简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 其中， 所述简单 芽孢杆菌的保藏编号为 CGMCC No.10853。 0024 本发明的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 分离自安徽宣城的烟植土壤。 0025 所述分离的方法可以为本领域常规的用于新菌株筛选的方法， 例如， 液相富集法 或土壤环流法。 0026 液相富集法具体可以包括 ： 称取适量镉污染土壤样品加入到装有 LB 液体培。

14、养基 的三角瓶中， 加入适量玻璃珠。将三角瓶在 28-30， 150-170rpm 下振荡 ； 将土壤混合液转 入离心管， 取离心后的上清液作为镉钝化微生物的来源。将所述上清液接种到含有镉的 LB 液体培养基中， 在 28-30， 150-170rpm 下振荡培养。用无菌吸管吸取 1-2mL， 移入另一个 说 明 书 CN 106497812 A 4 3/7 页 5 富集培养三角瓶中。如此转移三次后， 在不同 Cd2+浓度的 LB 固体培养基上进行平板划线， 分离单菌落。其中， LB 固体培养基中分别含有 50mg/L、 100mg/L、 200mg/L、 300mg/L 浓度的 Cd2+。 。

15、0027 土壤环流法具体可以包括 ： 称取镉污染土壤与适量粒径约为 3mm 的砂粒混合均 匀， 置于环流装置的上层。下层装入 LB 培养基作为环流液。启动空气压缩机， 开始驯化过 程， 期间根据环流液的蒸发情况定期补加环流液。驯化结束后， 取上层土壤和下层环流液， 将驯化后的微生物在不同 Cd2+浓度的 LB 固体培养基上进行平板划线， 分离单菌落。其中， LB 固体培养基中分别含有 50mg/L、 100mg/L、 200mg/L、 300mg/L 浓度的 Cd2+。 0028 本发明从筛选出的菌株中获得了一株对重金属镉耐抗性最强的细菌进行了 DNA 提取与鉴定， 鉴定结果显示， 该菌株的 。

16、16S rDNA 序列 gb|KM817245.1( 如 SEQ ID No ： 1 所 示)与简单芽孢杆菌(Bacillus simplex) 有100的同源性， 可确定为简单芽孢杆菌简单 芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 并于 2015 年 5 月 22 日被保藏在中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心， 保藏编号为 CGMCC No.10853。 0029 本发明提供的简单芽孢杆菌经过培养能够产生大量简单芽孢杆菌的活菌体， 所 述培养的方法没有特别的要求， 只要是能使所述简单芽孢杆菌增殖即可， 例如可以按照 107CFU/mL 的接种量将简单芽孢杆菌的活菌体接种于 。

17、LB 培养基中， 并且在好氧条件下， 在 25-38的温度下培养 8-72 小时后， 得到培养液。 0030 本发明可以进一步分离上述培养液中的简单芽孢杆菌的菌体， 所述分离的方法没 有特别的限制， 只要是能从培养液中富集菌体即可， 例如可以通过离心和 / 或过滤的方法 实现， 所述离心和所述过滤的条件可以为公知的条件， 本发明在此不再赘述。 0031 第二方面， 本发明提供了一种菌剂， 其中， 该菌剂含有如上所述的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的菌体。 0032 本发明的发明人在研究的过程中意外的发现， 本发明的简单芽孢杆菌的死菌体和 活菌体均能够有效对金属进行钝化。 。

18、因此， 如上所述的简单芽孢杆菌的菌体可以为活菌体， 也可为死菌体， 还可以为活菌体和死菌体的混合菌体。 但更令人惊奇的是， 本发明的发明人 发现， 本发明提供的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 的死菌体对重金属的钝化效果更 佳。 0033 根据本发明， 对于以上死菌体的制备方法没有特别的限制， 例如但不限于， 可以通 过自然裂解制备， 也可以通过热致死制备。 0034 根据本发明， 所述菌剂中所述简单芽孢杆菌的浓度没有特别的限制， 可以根据具 体的情况进行具体的选择， 在此不再详细赘述。 0035 另外， 根据预定的用途不同， 本发明提供的菌剂可以制备为不同的剂型， 并添加相。

19、 应的赋形剂等成分。其中， 在何种剂型的菌剂中添加何种赋形剂为 本领域技术人员所公 知， 在此不再详细赘述。 0036 本发明的发明人发现， 虽然本发明提供的简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)是在 高 Cd2+浓度下筛选得到的， 但其对土壤中常规的污染重金属， 例如， 镍、 砷、 铜、 铅、 汞等均有 一定的钝化作用。 0037 基于以上发现， 第三方面， 本发明提供了如上所述的简单芽孢杆菌和 / 或如上所 述的菌剂在重金属钝化中的应用。 说 明 书 CN 106497812 A 5 4/7 页 6 0038 本发明提供的简单芽孢杆菌对重金属， 例如， 镉、 镍、 砷、 铜、 铅。

20、、 汞等均有一定的钝 化作用， 但其更适用于对重金属镉进行钝化。 0039 本申请中， 术语 “钝化” 是指使重金属固定在污染土壤的表面， 降低重金属的生物 有效性， 减少植物对其吸收利用， 从而达到修复重金属污染的环境的目的。 0040 第四方面， 本发明提供了一种钝化重金属的方法， 该方法包括 ： 将如上所述的简单 芽孢杆菌 (Bacillus simplex)， 和 / 或如上所述的菌剂加入到含有重金属的环境中， 以对 所述重金属进行钝化。 0041 本发明中的所述重金属的具体选择可以为如上所述的， 此处不再重复。 0042 根据本发明， 所述含有重金属污染的环境可以包括任何含有重金属的。

21、环境， 例如， 所述含有重金属污染的环境可以包括含有重金属， 优选镉， 的土壤或水体。 0043 根据本发明， 加入至所述含有重金属污染的环境中的简单芽孢杆菌的形式并没有 特别的限定， 只要保证加入后所述简单芽孢杆菌能够在所述含有重金属污染的环境中起作 用并且对所述重金属有效钝化即可， 加入的所述简单芽孢杆菌的形式， 例如， 可以为活菌 体， 也可以为死菌体， 或者可以为菌液或干粉的形式。如上所述的， 本发明提供的简单芽孢 杆菌的死菌体对重金属的钝化效果更好， 因此， 本发明优选加入所述简单芽孢杆菌的死菌 体。 0044 本发明对加入的简单芽孢杆菌的量也没有特别的限制， 这可以根据所述 含有重。

22、 金属污染的环境中的重金属的含量以及钝化难易程度来决定， 例如， 当所述环境中的重金 属含量较高或较难钝化时， 可以提高所述简单芽孢杆菌的加入量 ； 当所述环境中的重金属 含量较低或较易钝化时， 可以减少所述简单芽孢杆菌的加入量。 0045 另外， 当加入到环境中的为本发明的简单芽孢杆菌的活菌体时， 还可以向环境中 添加适量的适于所述简单芽孢杆菌生长的营养物质， 例如， LB 培养液， 或者是无机盐培养 液。所述无机盐培养液例如可以含有 0.1-0.2的 KH2PO4， 0.1-0.2的 K2HPO4， 0.05-0.1 的 NH4NO3， 0.05-0.1的 MgSO4， 0.001-0.0。

23、02的 CaCl2， 0.01-0.02的 FeSO47H2O ； pH 6.8-7.0。其中， 各成分含量以重量份计。 0046 根据本发明， 当所述含有重金属的环境为土壤时， 为了进一步促进本发明提供的 简单芽孢杆菌对重金属的钝化效率， 优选的， 将土壤中的水含量控制在至少 15 重量， 更 优选为 18-30 重量。 0047 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。 0048 以下实施例中 ： 0049 LB 液体培养基 ： 0.8-1的蛋白胨， 0.5-0.8的酵母粉， 1-1.5的氯化钠， pH 6.8-7.0。其中， 各成分含量以重量份计。 0050 本发明的菌株为简单芽孢杆菌 (。

24、Bacillus simplex) 并于 2015 年 5 月 22 日被保 藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 ( 地址 ： 北京市朝阳区北辰西路 1 号 院 3 号， 中国科学院微生物研究所， 邮政编码 ： 100101)( 保藏单位的缩写为 CGMCC)， 保藏编 号为 CGMCC No.10853。 0051 参 比 蜡 状 芽 孢 杆 菌 (Bacillus cereus)， Huang F,Dang Z,Guo C L,et al.Biosorption of Cd(II)by live and dead cells of Bacillus cereus RC-1iso。

25、lated from cadmium-contaminated soilJ.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces,2013, 说 明 书 CN 106497812 A 6 5/7 页 7 107:11-18。 0052 制备例 0053 将本发明的简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)以及参比的蜡状芽孢杆菌在LB液 体培养基中活化 2 次， 所述活化在 28-30下进行 10-12 小时， 菌体浓度达到 109CFU/mL， 分 别得到活化的本发明的简单芽孢杆菌 ( 菌株 Cd-w) 和活化的参比的蜡状芽孢杆菌 ( 菌株 D)， 分别于 4保存备。

26、用。 0054 实施例 1 0055 本实施例用于说明本发明的简单芽孢杆菌镉对镉的耐性 0056 将活化的菌株 Cd-w 接种于 LB 液体培养基中， 28-30下培养至 10-12h， 然后取一 定量的菌液(1-2体积接种量)接入不同镉浓度(分别为0mg/L、 50mg/L、 100mg/L、 200mg/ L和300mg/L)的液体培养基， 28-30， 150-170rpm振荡培养， 不同时间取样， 用紫外分光光 度计测定该菌株在 600nm 波长处的 OD 值， 以确定其不同镉浓度下菌体的生长曲线。每个处 理设置三个重复。生长曲线见图 1。 0057 由图 1 可以看出， Cd2+浓度。

27、低于 100mg/L 时， 该菌株可正常生长， 生长曲线未受到 影响， 在 Cd2+浓度高达 300mg/L 时， 该菌株的最大 OD600 值仍可达到 4.660.24， 表现出了 该菌株对极端环境的适应性和对重金属镉极强的耐受能力。 0058 对比例 1 0059 本实施例用于说明参比的蜡状芽孢杆菌镉对镉的耐性 0060 按照实施例 1 的方法对菌株 D 的耐镉特性进行测试。结果显示， 该菌株 D 只能够 在 300mg/L 的 Cd2+浓度下的 OD 值最高只能够达到 2.31。并且 Cd 2+ 浓度为 100mg/L 时， 已 经影响了该蜡状芽孢杆菌的生长。 0061 实施例 2 00。

28、62 本实施例用于说明本发明提供的简单芽孢杆菌镉对镉的钝化性能 0063 (1) 在水体中 0064 将活化的菌株 Cd-w 按 1-2 体积的接种量接种于液体 LB 培养基中， 28-30， 150-170rpm 下振荡培养 16-18h。其中， 0065 一组菌体细胞先115-121下进行灭活处理15-20min， 然后6000-8000rpm低温离 心 15-20min， 收集死菌体， 以作死细胞钝化剂。 0066 另一组菌体细胞直接 6000-8000rpm 低温离心 15-20min， 收集活菌体， 并用无菌水 洗涤 2-3 次， 以作活细胞钝化剂。 0067 将两组细胞分别以 0.。

29、1g/L 的量加入到含镉 (0mg/L、 50mg/L、 100mg/L、 200mg/L、 300mg/L) 水溶液中进行吸附实验， 处理 3 天后测定水体中的 Cd2+浓度。结果见表 1。 0068 其中， 镉含量的检测方式为 ： 取适量处理后的水体， 8000rpm 离心 5min， 取上清液， 用 ICP-AES 检测上清液中 Cd2+浓度。 0069 (2) 在土壤中 0070 按照 (1) 中方法制备死、 活细胞钝化剂， 分别将两种钝化剂以 1g/L 的量加入到含 重金属镉的过筛风干土壤中， 搅拌均匀， 20-24下钝化 10d， 期间保持含水量为 20-30。 钝化完成后， 用 。

30、BCR 连续提取法提取土壤中各形态的重金属镉， 结果见表 2。步骤如下 ： 0071 1. 可交换态 ： 准确称取通过 100 目筛的风干土壤样品 1g， 加 40mL 0.1mol/L 的 说 明 书 CN 106497812 A 7 6/7 页 8 HAc， 放在恒温振荡器中 241下连续振荡 16h， 然后 3000-5000rpm 下离心 15-20min。取 上清液， 用 ICP-AES 测定 Cd2+含量。 0072 2. 可还原态 ： 加入无菌水清 1 中的洗残余物， 振荡 20-30min， 离心， 弃去清洗液。 向残渣中加入40mL 0.5mol/L的盐酸羟胺， 放在恒温振荡。

31、器中22-24下连续振荡15-16h， 然后 3000-5000rpm 下离心 15-20min。其余步骤同 1。 0073 3. 可氧化态 ： 向 2 的残渣中加入 10mL H2O2， 搅拌均匀， 室温下静置 1h 左右后用水 浴加热保持 80-85 1h 左右， 再加入 10mL H2O2， 在恒温水浴箱中加热保持 80-85 1h 左 右。冷却后， 加入 50mL 1mol/L 的 NH4Ac， 放在恒温振动器中 22-24下连续震荡 16h， 然后 3000-5000rpm 下离心 15-20min。其余步骤同 1。 0074 4. 残余态 ： 向 3 的残渣中加入 10mL HNO。

32、3， 使酸和样品充分混合均匀。进行微波消 解， 用 ICP-AES 测定 Cd2+含量。 0075 对比例 2-1 0076 本对比例用于说明参比的菌种对镉的钝化性能 0077 按照实施例 2 中的方法对水体和土壤中镉进行钝化， 不同的是， 所使用的菌株为 菌株 D。水中对镉的钝化性能结果见表 1， 土壤中对镉的钝化性能结果见表 2。 0078 对比例 2-2 0079 本对比例用于说明自然状态下镉的钝化性能 0080 按照实施例 2 中的方法对水体中和土壤中的镉进行测试， 不同的是， 不加入任何 菌株。水中对镉的钝化性能结果见表 1， 土壤中对镉的钝化性能结果见表 2。 0081 表 1 0。

33、082 0083 由表1可以看出， 本发明的简单芽孢杆菌(Bacillus simplex)死细胞对水体中重 金属镉的钝化效果要优于活细胞， 但二者菌对重金属镉具有较大的钝化量。并且本发明提 供的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 对重金属镉的钝化效果要明显优于现有技术中的 同属的蜡状芽孢杆菌对重金属镉的钝化效果。 0084 表 2 0085 说 明 书 CN 106497812 A 8 7/7 页 9 0086 由表 2 可以看出， 本发明的简单芽孢杆菌的死、 活细胞钝化剂均能够有效地将可 交换态的镉转化成为更稳定的可还原态、 可氧化态和残渣态。 并且， 死细胞钝化剂的效果优。

34、 于活细胞钝化剂， 这与水体钝化结果相一致。并且本发明提供的简单芽孢杆菌 (Bacillus simplex) 对重金属镉的钝化效果要明显优于现有技术中的同属的蜡状芽孢杆菌对重金属 镉的钝化效果。 0087 同样的， 本发明的菌种对土壤或水体中镍、 砷、 铜、 铅、 汞均有一定的的钝化效果。 0088 以上详细描述了本发明的优选实施方式， 但是， 本发明并不限于上述实施方式中 的具体细节， 在本发明的技术构思范围内， 可以对本发明的技术方案进行多种简单变型， 这 些简单变型均属于本发明的保护范围。 0089 另外需要说明的是， 在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征， 在不矛 盾的情况下， 可以通过任何合适的方式进行组合。 为了避免不必要的重复， 本发明对各种可 能的组合方式不再另行说明。 0090 此外， 本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合， 只要其不违背本 发明的思想， 其同样应当视为本发明所公开的内容。 说 明 书 CN 106497812 A 9 1/2 页 10 0001 0002 序 列 表 CN 106497812 A 10 2/2 页 11 序 列 表 CN 106497812 A 11 1/1 页 12 图 1 说 明 书 附 图 CN 106497812 A 12 。