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1、(10)申请公布号 CN 102171232 A (43)申请公布日 2011.08.31 CN 102171232 A *CN102171232A* (21)申请号 200880131393.2 (22)申请日 2008.12.09 12/245,755 2008.10.05 US C07H 15/24(2006.01) (71)申请人 苏洛克股份有限公司 地址 美国加利福尼亚州 (72)发明人 亚历山大扎布德金 维克托马特维安科 阿列克埃马特维韦 亚历山大伊特金 (74)专利代理机构 北京康信知识产权代理有限 责任公司 11240 代理人 李丙林 张英 (54) 发明名称 热稳定的结晶盐酸。
2、表柔比星 (57) 摘要 本文提供了一种结晶形式的盐酸表柔比星， 在本文中称为 “II 型” 结晶盐酸表柔比星， 具有优 异的热稳定性。II 型结晶盐酸表柔比星具有如图 1的表1中提供的衍射角(2)和相对强度P() 的平均值的粉末 X- 射线衍射图。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2011.04.02 (86)PCT申请的申请数据 PCT/US2008/086102 2008.12.09 (87)PCT申请的公布数据 WO2010/039159 EN 2010.04.08 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1。
3、 页 说明书 6 页 附图 25 页 CN 102171238 A1/1 页 2 1. 一种结晶盐酸表柔比星， 具有基本如下表中所示的衍射角 (2) 和相对强度 (P( ) 的平均值的粉末 X- 射线衍射图 ： 2. 一种制备根据权利要求 1 所述的结晶盐酸表柔比星的方法， 包括在 50 -90之间 的温度下使盐酸表柔比星结晶化。 3.根据权利要求2所述的方法， 包括使盐酸表柔比星从包含具有C1-C3碳链的醇的亲水 有机溶剂， 和在水、 或亲水有机溶剂在水中的混合物之一中的盐酸表柔比星的溶液结晶化。 4. 一种制备根据权利要求 1 所述的结晶盐酸表柔比星的方法， 包括 ： a. 将盐酸表柔比星。
4、溶解在水中或在亲水性有机溶剂在水中的混合物中从而形成溶 液 ； b. 将所述溶液的 pH 调节为在 3 至 4 之间的值 ； c. 在约 40的温度下蒸发所述溶液直至所述溶液为凝胶状态 ； 和 d. 通过在 50 -90之间的温度下加入亲水性有机溶剂， 使盐酸表柔比星结晶化。 权 利 要 求 书 CN 102171232 A CN 102171238 A1/6 页 3 热稳定的结晶盐酸表柔比星 0001 相关申请 0002 本申请是 2004 年 6 月 25 日提交的美国专利申请第 10/877,221 号 ( 现在的美国 专利第 _ 号 ) 的部分继续申请， 其要求于 2003 年 7 月。
5、 2 号提交的美国临时申 请第 60/484,132 号的权益。根据 35U.S.C.119、 120 在此明确要求前述申请的优先权， 并且任何其他适用法规和每一前述申请的内容均以其整体结合于本文作为参考。 技术领域 0003 本发明的领域总体上涉及结晶 ( 晶体 ) 形式的盐酸表柔比星， 其是一种可用作抗 癌化疗药物的化合物。尤其是， 本发明的领域涉及特征为改善的热稳定性的特定结晶形式 的盐酸表柔比星。 此外， 本发明涉及前述结晶形式的盐酸表柔比星的制造方法， 以及利用前 述结晶形式的盐酸表柔比星来治疗人和 / 或动物癌症的方法。 背景技术 0004 蒽环类抗生素形成了天然存在的生物活性化合。
6、物大家族之一。 该家族的一些成员 已显示出是临床有效的抗肿瘤剂。它们包括， 例如， 柔红霉素、 多柔比星、 伊达比星、 表柔比 星、 吡柔比星、 佐柔比星、 阿柔比星、 和洋红霉素。 例如， 这些化合物已显示可用于骨髓移植、 干细胞移植、 治疗乳腺癌、 急性淋巴细胞性白血病或非淋巴细胞性白血病、 慢性淋巴细胞性 白血病、 非霍奇金淋巴瘤或其他实体癌肿瘤。美国专利第 4,112,076 号、 第 4,345,068 号、 第 4,861,870 号、 第 5,945,518 号和第 5,874,550 号公开了盐酸表柔比星的制备和其作为 抗癌剂的应用， 其由下式表示 ： 0005 0006 用于。
7、制造人类药物的活性药物成分 (API) 必须是作为纯的和稳定的产物。对于 API 的纯度和稳定性的要求对于制药工业是极其重要的。达到产物纯度的最重要方法之一 是以特定结晶形式生产该产物。 一种具体的结晶方法是通过参数如溶剂的组合或溶剂、 pH、 体积、 温度和反应时间的组合来实现的。这些参数的变化导致产生相同物质的不同结晶形 式， 即所谓的多晶型物。 0007 目前， 主要有两种从溶液回收盐酸表柔比星的方法。第一种方法涉及用氯化氢的 说 明 书 CN 102171232 A CN 102171238 A2/6 页 4 甲醇溶液处理表柔比星类的有机溶液。参见， 例如美国专利第 4,112,076。
8、 号。可替代地， 第 二种方法涉及借助于丙酮使盐酸表柔比星从水溶液或有机 - 水溶液中沉淀出来。参见， 例 如美国专利第 4,861,870 号。 0008 美国专利第 6,087,340 号 (“ 340 专利” ) 公开了一种包含盐酸表柔比星的即用 型注射液。更具体地，340 专利公开了一种稳定的、 可注射的、 无菌的、 无热原的、 蒽环类抗 生素糖苷溶液， 其主要由溶解在生理学可接受溶剂中的蒽环糖苷的生理学可接受盐构成， pH 为 2.5 至 3.5， 并且优选被装在密封玻璃容器中。虽然 340 专利公开了可注射的即用型 制剂， 但是第 6,087,340 号专利未公开盐酸表柔比星本身作。
9、为原料药的稳定性。 0009 美国专利第 6,376,469 号公开了 - 型形式的结晶蒽环类盐酸氨柔比星， 其是通 过从丙酮、 乙腈和异丙醇中沉淀的方式产生的， 并且其被认为具有改善的热稳定性。但是， 在一段时间之后， 美国专利第 7,091,469 号公开了这样的氨柔比星的稳定性更可能与溶剂 化物的形成更相关而不是物质的晶体结构。美国专利第 7,091,469 号公开了证实 - 型结 晶氨柔比星的不稳定性和在其干燥过程中去糖基化和去氨基化产物的形成的数据。 0010 因此， 具有改善的热稳定性的结晶形式的盐酸表柔比星是合乎需要的。在本文中 首次描述了不同结晶形式的盐酸表柔比星的热稳定性的变。
10、化。 发明内容 0011 本发明涉及一种新型的、 严格定义的结晶形式的盐酸表柔比星， 本文中将其称为 “II 型” 结晶盐酸表柔比星， 其具有优异的热稳定性。在本文中描述了不同结晶形式的盐酸 表柔比星的热稳定性的变化。 0012 本发明的主题的发明人在相关的美国专利申请第 10/877,221 号和美国临时专利 第 60/484,132 号中在先公开了热稳定的 “II 型” 结晶盐酸表柔比星和其制造方法。在这些 申请之后， 如本文更详细描述的， 发明人开发了新的 II 型结晶盐酸表柔比星和制造这样的 新的 II 型盐酸表柔比星的方法。 0013 II型结晶盐酸表柔比星的特征在于具有如图1的表中。
11、所示的衍射角(2)和相对 强度P()的平均值的粉末X-射线衍射图。 图1表示比相关的美国专利申请第10/877,221 号中在先描述的更详细的 X- 射线衍射谱。但是， 所有的主衍射最大值和其相对强度是与在 先公开相同的比例。 0014 因此， 本发明实现了几个目的， 包括 ： 0015 (1) 提供结晶形式的盐酸表柔比星 ( 及其制造方法 )， 其特征为改善的热稳定性。 0016 (2) 证明了盐酸表柔比星的产物纯度对结晶方法的依赖性。 0017 (3) 提供了一种提取方法， 其中盐酸表柔比星从有机 - 水溶液的含水部分结晶。 0018 (4) 提供了一种提取方法， 其中结晶化作用在 2 至。
12、 5 的 pH 范围内进行。 0019 (5) 提供了一种提取方法， 其中结晶化作用在 50 -90的温度下进行。 0020 (6) 提供了一种提取方法， 其中结晶化作用是利用亲水有机溶剂， 如具有 C1-C3的 碳链的醇来进行的。 0021 因此， 本发明的一个目的是提供结晶形式 ( 即， II 型 ) 的盐酸表柔比星， 其与其他 结晶形式的盐酸表柔比星的区别在于其具有改善的热稳定性和显著更高的纯度， 例如， 参 见表 7、 以及图 24 和图 25。本发明的另一个目的是提供前述的 II 型结晶形式的盐酸表柔 说 明 书 CN 102171232 A CN 102171238 A3/6 页 。
13、5 比星的合成方法。 附图说明 0022 图1是II型结晶盐酸表柔比星的衍射角(2)和相对强度P()的平均值的表。 0023 图 2- 图 4 包括分别示出了 3 个独立商购批次的 II 型结晶盐酸表柔比星 XRD 分 析 - 衍射角 (2)vs. 相对强度 (P ) 的表 2- 表 4。 0024 图5包括示出了I型结晶盐酸表柔比星XRD分析-衍射角(2)对相对强度(P) 的表 5。 0025 图 6 包括示出了色谱性能的表 6。 0026 图 7 包括示出了 I 型盐酸表柔比星和 II 型盐酸表柔比星的检验比较结果的表 7， 和示出了其各自性能比较的表 8。 0027 图 8 包括示出了 。
14、II 型结晶盐酸表柔比星的热稳定性研究结果的表 9。 0028 图 9 包括示出了 I 型结晶盐酸表柔比星的热稳定性研究结果的表 10。 0029 图 10 示出了本发明的一种实施方式的 II 型结晶盐酸表柔比星的温度 vs. 热流量 的图。 0030 图 11 示出了本发明的一种实施方式的 I 型结晶盐酸表柔比星的温度 vs. 热流量 的图。 0031 图 12 示出了本发明的一种实施方式的 II 型结晶盐酸表柔比星的 IR 谱图。 0032 图 13 示出了本发明的一种实施方式的 I 型结晶盐酸表柔比星的 IR 谱图。 0033 图 14 示出了 I 型结晶盐酸表柔比星 (ESP04) 的。
15、粉末 X- 射线衍射谱。 0034 图 15 和图 16 示出了分别在室温和加速的储存条件 (40， 3 个月 ) 下储存的 II 型结晶盐酸表柔比星 ( 批次 181104) 的粉末 X- 射线衍射谱。 0035 图 17 和图 18 示出了分别在室温和加速的储存条件 (40， 3 个月 ) 下储存的 II 型结晶盐酸表柔比星 ( 批次 191104) 的粉末 X- 射线衍射谱。 0036 图 19 和图 20 示出了分别在室温和加速的储存条件 (40， 3 个月 ) 下储存的 II 型结晶盐酸表柔比星 ( 批次 201104) 的粉末 X- 射线衍射谱。 0037 图 21 示出了制备之后。
16、立即进样的 I 型结晶盐酸表柔比星的测试溶液的 HPLC 图 谱。 0038 图 22 示出了制备之后 70 分钟进样的 I 型结晶盐酸表柔比星的测试溶液的 HPLC 图谱。 0039 图 23 示出了制备之后 140 分钟进样的 I 型结晶盐酸表柔比星的测试溶液的 HPLC 图谱。 0040 图 24 示出了制备之后立即进样的 II 型结晶盐酸表柔比星的测试溶液的 HPLC 图 谱。 0041 图25示出了制备之后140分钟进样的II型结晶盐酸表柔比星的测试溶液的HPLC 图谱。 具体实施方式 0042 本发明涉及能够通过从合适的溶剂(例如， 水、 或水和亲水有机溶剂的混合物)结 说 明 书。
17、 CN 102171232 A CN 102171238 A4/6 页 6 晶盐酸表柔比星而产生的 II 型结晶盐酸表柔比星。优选地， 在 50 -90的温度进行 II 型盐酸表柔比星的结晶化。 0043 通过向盐酸表柔比星在水中或在溶剂 - 水混合物中的溶液加入具有 C1-C3碳链的 醇来进行结晶化。该溶液的 pH 优选保持在 2 至 5 之间。 0044 溶剂的体积优选超过盐酸表柔比星溶液体积的 2 至 20 倍。在 50至 90， 优选 50至 70的温度进行结晶化过程。 0045 通过所属领域普通技术人员已知的标准方法 ( 例如， 经过滤器的真空过滤或离心 过滤 ) 提取通过该方法获得。
18、的 II 型盐酸表柔比星， 随后干燥该晶体。产生的 II 型结晶盐 酸表柔比星可被用于制备盐酸表柔比星的最终剂型。以下两个实施例公开了产生 II 型结 晶盐酸表柔比星的方法。 0046 实施例 1 0047 (1) 使盐酸表柔比星 (10.0 克 ) 在水或乙醇 - 水混合物中的溶液 (pH3-4) 在 40 经受低压蒸发直至处于溶液的凝胶状态。 0048 (2) 然后向剩余的溶液中加入剩余溶液体积 12 倍的量的 1- 丙醇， 并在 60的温 度搅拌 3 小时。 0049 (3) 然后通过过滤收集沉淀的盐酸表柔比星晶体， 在 10ml 的丙酮中进行洗涤并在 室温干燥。 0050 (4) 产物。
19、是 9.3 克的 II 型盐酸表柔比星晶体。 0051 (5) 如图 10 所示， II 型结晶盐酸表柔比星的熔点大约是 207伴有分解 ( 热阶 (hot stage)2 / 分钟 )。图 12 示出了 II 型结晶盐酸表柔比星的 IR 谱图 (IR(KBr)。 在 3415、 2928、 1720、 1620、 1576、 1510、 1413、 1371、 1284、 1239、 1210、 1162、 1115、 1068、 1019、 991、 930、 908、 880、 814、 768、 719、 693 和 595cm-1处观察到峰 / 谷。 0052 实施例 2 0053 。
20、(1) 使盐酸表柔比星 (10.0 克 ) 在水或乙醇 - 水混合物中的溶液 (pH3-4) 在 40 经受低压蒸发直至达到溶液的凝胶状态。 0054 (2)然后向剩余的溶液中加入原溶液体积10倍量的纯乙醇， 并在60的温度搅拌 2 小时。 0055 (3)然后通过过滤收集沉淀的盐酸表柔比星晶体， 在10ml的乙醇和10ml的丙酮中 进行洗涤并在室温干燥。 0056 (4) 产物是 7.5 克的 II 型盐酸表柔比星晶体。 0057 以下的实施例 ( 实施例 3) 公开了生产 I 型盐酸表柔比星晶体的方法， 也就是美国 专利第 4,861,870 号公开的盐酸表柔比星晶体。 0058 实施例 。
21、3 0059 (1) 此步骤与上文实施例 1 的步骤 1 相同。 0060 (2) 在盐酸表柔比星的凝胶溶液中倒入 300ml 丙酮。 0061 (3) 然后通过过滤收集沉淀的盐酸表柔比星晶体， 并在 50ml 丙酮中进行洗涤。 0062 (4) 产物是 9.7 克的 I 型盐酸表柔比星晶体。 0063 如图 12 所示， I 型结晶盐酸表柔比星的熔点大约是 196伴有分解 ( 热台 2 / 分钟 )。图 13 示出了 I 型盐酸表柔比星的 IR 谱图 (IR(KBr)。在 3430、 2934、 2027、 1724、 说 明 书 CN 102171232 A CN 102171238 A5。
22、/6 页 7 1617、 1583、 1508、 1445、 1412、 1284、 1236、 1211、 1162、 1121、 1064、 1018、 992、 931、 909、 876、 814、 792、 767、 738、 721、 693、 588 和 465cm-1处看到峰 / 谷。 0064 实施例 4 0065 如下所述， 对 I 型和 II 型结晶盐酸表柔比星进行光学显微观察 ： 0066 所使用的显微镜 ： 具有偏振滤光片的Labomed CXRIII光学显微镜。 在实施例1(II 型 ) 和参比例 (I 型 ) 中获得的盐酸表柔比星样品都显示出双折射， 并因此它们都。
23、是各向异 性晶体。 0067 实施例 5 0068 在本实施例中， 获得了I型和II型的结晶盐酸表柔比星的粉末X-射线衍射谱。 使 用 Rigaku Cu 阳极 X- 射线衍射仪 (MiniFlex) 测量粉末 X- 射线衍射谱。样品的分析条件 如下 ： 0069 起始角 ： 3 0070 结束角 ： 90 0071 取样 ： 0.02 0072 扫描速度 ： 1.00 0073 通过铜 K(入射 X- 射线 ) 进行 X- 射线粉末衍射 0074 垂直 ： 2 布伦塔诺促聚焦衍射仪 (Bertrano ParafocusingDiffractometer) 0075 Nil 闪烁 ( 脉冲高。
24、度 PMT) 检测器 0076 K 镍过滤器 0077 粉末 X- 射线衍射谱的测量结果如下 ： 0078 在实施例1(II型)和参比例3(I型)中获得的样品的X-射线衍射图是不相似的。 图 2- 图 4 包括了举例说明 3 个商购批次 (181104、 191104、 201104) 的 II 型结晶盐酸表柔 比星 XRD 分析 - 衍射角 (2-) 对相对强度 (P ) 的表 2- 表 4。相对而言， 图 5 所示的表 5 示出了基于实施例 3( 参考 ) 描述的方法的样品 ESP04 的 I 型结晶盐酸表柔比星 XRD 分 析 - 衍射角 (2-) 对相对强度 (P )。 0079 I 。
25、型结晶盐酸表柔比星在大约 24.6 度处产生单独的强信号。相对而言， II 型结晶 盐酸表柔比星在整个光谱中产生多个强信号。图 15- 图 20 示出了基于实施例 1( 参考 ) 描 述的方法的表柔比星的 3 个连续商购批次的 II 型结晶表柔比星的粉末 X- 射线衍射谱。图 14 示出了在实施例 3( 参考 ) 中得到的 I 型结晶盐酸表柔比星的粉末 X- 射线衍射谱。 0080 实施例 6 0081 研究了盐酸表柔比星 I 型结晶形式 ( 实施例 3 描述的方法 ) 和盐酸表柔比星 II 型结晶形式 ( 实施例 1 描述的方法 ) 的特性， 并与 EDQM 化学基准物质 (CRS) 盐酸表。
26、柔比星 进行了比较。EPHPLC 用于该研究。在图 6 所示的表 6 中提供了该方法的参数。 0082 得到了以下结果 ： 0083 A. 相关物质 0084 在盐酸表柔比星 II 型结晶形式的色谱图上， 只检测到了由相关物质 ( 多柔比星 ) 导致的单个峰 (0.25-0.30 )。在盐酸表柔比星 I 型结晶形式的色谱图上有 7 个杂质峰 ； 它们的总面积百分比在 1.35至 2.34之间变化。 0085 盐酸表柔比星 I 型结晶形式的另一特征是 EP 系统中的 #4 峰的不稳定性， RRT 说 明 书 CN 102171232 A CN 102171238 A6/6 页 8 1.15(Pi。
27、c 1， 2)。在每一盐酸表柔比星 I 型溶液的第一次进样的色谱图上， 其面积百分比是 0.55 至 0.97。第二次进样时， 其面积百分比几乎是可忽略的， 并且在第三次进样时， 它消失 了。每一种其他杂质峰的面积百分比实际上保持不变， 但是第二次进样的表柔比星峰的面 积总是大于第一次进样。在 II 型盐酸表柔比星中未观察到具有这样行为的峰。我们可以 得出结论认为该峰是由于表柔比星与丙酮的不稳定复合物造成的， 该复合物在溶液中分解 并转换成表柔比星。 0086 B. 检验 0087 对 I 型盐酸表柔比星和 II 型盐酸表柔比星进行了定量比较。对于两个样品， 都针 对于 EDQM CRS 进行。
28、计算。 0088 在图 7 所示的表 7 给出了结果。 0089 因此， II 型结晶表柔比星中的盐酸表柔比星的量差不多比 I 型表柔比星高 10。 由于相关物质的量从 1.35变化到 2.34， 因此剩余的差异由未检测到的杂质组成。 0090 图 7 所示的表 8 比较和对照了 I 型表柔比星和 II 型表柔比星的特征。 0091 实施例 7 0092 以下实施例示出了与 I 型结晶盐酸表柔比星相比， II 型结晶盐酸表柔比星具有改 善的热稳定性。 0093 将实施例 1 得到的 II 型结晶盐酸表柔比星和参比实施例 3 得到的 I 型结晶盐酸 表柔比星分别在 40下保存六个月， 从而模拟加。
29、速的储存条件。通过研究以下参数来调查 和测量热稳定性 ： (1) 检验 (HPLC 方法 )， (2) 阿霉素酮的量 ( 阿霉素酮是表柔比星的糖苷 配基， 其是主要的表柔比星降解产物 )， 和 (3) 总杂质。在图 8 所示的表 9 和图 9 所示的表 10 中提供了该研究的结果。 0094 正如表 9 和表 10 证实的结果， II 型结晶盐酸表柔比星表现出比 I 型盐酸表柔比 星高得多的热稳定性。这是尤其有利的， 因为由于 II 型结晶盐酸表柔比星比 I 型结晶盐酸 表柔比星具有更少降解和杂质， 因此其能够在更长时间内保持其效力。这也意味着 II 型结 晶盐酸表柔比星的货架期比 I 型结晶。
30、盐酸表柔比星的货架期要长。 0095 图 16、 图 18 和图 20 示出了经历了 6 个月的加速储存条件 (40 ) 的上述 3 个商 品批次的 X- 射线衍射谱。该数据明确证实了 II 型结晶表柔比星是热稳定的。 0096 虽然已显示和描述了本发明的实施方式， 但可不偏离本发明范围的前提下进行各 种改进。因此， 除了以下的权利要求和其等效物之外， 本发明不应受到限制。 说 明 书 CN 102171232 A CN 102171238 A1/25 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A2/25 页 10 图 2 说 明 书 附 图 。
31、CN 102171232 A CN 102171238 A3/25 页 11 图 3 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A4/25 页 12 图 4 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A5/25 页 13 图 5 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A6/25 页 14 图 6 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A7/25 页 15 图 7 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A8/25 页。
32、 16 图 8 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A9/25 页 17 图 9 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A10/25 页 18 图 10 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A11/25 页 19 图 11 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A12/25 页 20 图 12 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A13/25 页 21 图 13 说 明 书 附 图 CN 102171。
33、232 A CN 102171238 A14/25 页 22 图 14 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A15/25 页 23 图 15 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A16/25 页 24 图 16 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A17/25 页 25 图 17 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A18/25 页 26 图 18 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A19/25。
34、 页 27 图 19 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A20/25 页 28 图 20 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A21/25 页 29 图 21 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A22/25 页 30 图 22 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A23/25 页 31 图 23 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A24/25 页 32 图 24 说 明 书 附 图 CN 102171232 A CN 102171238 A25/25 页 33 图 25 说 明 书 附 图 CN 102171232 A 。