乳酸杆菌NK3181及其用途.pdf

《乳酸杆菌NK3181及其用途.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乳酸杆菌NK3181及其用途.pdf（8页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710269312.6 (22)申请日 2017.04.24 (71)申请人 南开大学 地址 300071 天津市南开区卫津路94号 (72)发明人 杨荣存王恩琳闫慧黄育刚 云欢张园 (74)专利代理机构 天津市三利专利商标代理有 限公司 12107 代理人 李蕊 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A23L 33/135(2016.01) A61K 35/747(2015.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 35/00(200。

2、6.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 乳酸杆菌NK318.1及其用途 (57)摘要 本发明利用现代生物学技术和生物信息学 分析对乳酸杆菌NK318.1的序列及功能进行了初 步研究， 发现小鼠Reg3模型中肠道菌群有所改 变， 通过肠道菌群序列分析发现厚壁菌门， 乳酸 杆菌属细菌明显增多， 利用乳酸菌选择培养基筛 选发现乳酸杆菌NK318.1多的小鼠体重明显低于 正常小鼠， 显示该菌具有抑制体重增长的功能， 未来可以将NK318.1菌设计成为减轻体重的药 物， 具有潜在的巨大应用价值。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图2页 CN 106883999 A。

3、 2017.06.23 CN 106883999 A 1.乳酸杆菌NK318.1， 其特征在于： 所述乳酸杆菌16s rRNA的基因序列为序列表400 所示序列。 2.权利要求1所述乳酸杆菌NK318.1具有抑制体重增长的用途。 3.根据权利要求2所述乳酸杆菌NK318.1的用途， 其特征在于： 所述乳酸杆菌NK318.1用 于制备减肥食品、 减肥保健品或减肥药品。 4.权利要求1所述乳酸杆菌NK318.1在制造糖尿病生物体模型方面的应用。 5.权利要求1所述乳酸杆菌NK318.1在制备胰岛素细胞瘤治疗药物方面的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 106883999 A 2 乳酸杆菌NK。

4、318.1及其用途 技术领域 0001 本发明涉及分子生物学领域， 尤其是乳酸杆菌NK318.1及其用途。 背景技术 0002 随着生活水平的不断提高， 肥胖越来越多地困扰着人们的生活。 肥胖属于一种慢 性代谢性疾病， 主要特征为脂肪细胞的增大、 脂肪组织的大量积累以及与代谢相关的炎症 因子的增高； 其中内脏脂肪的积累是发展成为代谢综合征的危险信号。 越来越多的研究表 明， 低度的慢性炎症影响了肥胖病人代谢紊乱的病理发生过程。 脂肪细胞在炎症方面的主 要特征为伴有巨噬细胞等免疫细胞的浸润， 导致循环系统中促炎症因子和脂肪酸浓度的升 高。 反过来， 炎症进一步促进肥胖及其并发症的恶化， 诱发胰岛。

5、素抵抗和II型糖尿病。 0003 在健康的皮下脂肪组织中， 脂肪组织巨噬细胞(ATMs)占据的比例为约5。 而在饮 食诱导的肥胖患者体内， 脂肪组织巨噬细胞的比例升高至20-30。 根据细胞表面分子， ATMs可分为M1和M2两类。 较肥胖的人体内脂肪组织中的巨噬细胞多为M1型巨噬细胞， 形成 一种促炎的微环境。 瘦人的巨噬细胞表现为M2型巨噬细胞， 发挥抗炎效果。 0004 近些年来， 众多研究指出代谢疾病与机体肠道菌群组成、 机体免疫系统有着密不 可分的关联。 0005 肠道是消化系统的重要器官， 从胃部开始， 依次为十二指肠、 空肠、 回肠、 盲肠、 结 肠、 直肠。 整个肠道主要执行消。

6、化食物、 吸收营养的功能。 哺乳动物肠道内约有1013至1014个 细菌与宿主共生存， 他们通过代谢产物(短链脂肪酸等)和表面抗原(鞭毛蛋白等)调控肠道 的免疫系统和代谢系统。 研究发现， 在同卵和异卵双胞胎有相同的偏瘦或者肥胖表型， 并且 家庭成员对菌群有共享性。 有研究显示， 菌群发挥作用可以相对独立于宿主基因型。 相同饲 养条件下， 接种肥胖鼠粪便的无菌鼠体重增高明显高于接种健康鼠粪便的无菌鼠。 这项研 究让人们更深认识到肠道菌群对机体肥胖的重要作用。 该组研究者后来发现， 肥胖患者的 肠道菌群结构与健康者的有明显不同， 肥胖患者体内拟杆菌减少， 厚壁菌增多。 由于肠道菌 群的差异， 肥。

7、胖患者或许能更有效地吸收食物中的营养和刺激脂肪的生成。 发明内容 0006 本发明所要解决的技术问题在于提供乳酸杆菌NK318.1。 0007 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述乳酸杆菌NK318.1的新用途。 0008 为解决上述技术问题， 本发明的技术方案是： 0009 乳酸杆菌NK318.1， 其16s rRNA的基因序列(V1-V6序列)为序列表400所示序 列。 0010 上述乳酸杆菌NK318.1具有抑制体重增长的用途。 0011 优选的， 上述乳酸杆菌NK318.1的用途， 所述乳酸杆菌NK318.1用于制备减肥食品、 减肥保健品或减肥药品。 0012 上述乳酸杆菌NK31。

8、8.1在制造糖尿病生物体模型方面的应用。 说明书 1/3 页 3 CN 106883999 A 3 0013 上述乳酸杆菌NK318.1在制备胰岛素细胞瘤治疗药物方面的应用。 0014 本发明的有益效果是： 0015 本发明提供了乳酸杆菌NK318.1在抑制体重增长方面的新用途， 对于减轻体重药 物的研发具有重要的应用价值。 附图说明 0016 图1是系统进化树图谱； 0017 图2是两种小鼠粪便中乳酸杆菌属中六种乳酸杆菌含量的差别； 0018 图3是乳酸杆菌NK318.1与对照组同时灌胃并喂食高脂饲料后葡萄糖耐受实验和 胰岛素敏感实验； 0019 图4是乳酸杆菌NK318.1、 对照菌reu。

9、teri与对照组同时灌胃并喂食高脂饲料后体 重的对比图。 具体实施方式 0020 为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案， 下面结合附图及具体实 施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。 0021 实施例1 0022 乳酸杆菌NK318.1菌株的确定 0023 正常饲料喂养： 野生C57小鼠和huREG3转基因小鼠各6只， 同龄同性别； 0024 高脂饲料喂养： 野生C57小鼠和huREG3转基因小鼠各6只， 同龄同性别。 0025 喂养三个月后， 取小鼠粪便提取细菌基因组DNA， 通过16s rRNA分析， 确定了 huREG3转基因小鼠肠道菌群中乳酸杆菌属的比例明显增高。 。

10、取Reg3小鼠新鲜粪便， 在 MRS乳酸菌选择性培养基上均匀涂布， 37培养24hrs。 在生长的200多个单个菌落中， 有超 过35的菌落为同一种细菌。 挑取该单个菌落， 通过16s rRNA测序鉴定， 该株菌序列接近于 Taiwanensis乳酸杆菌(图1)， 命名为乳酸杆菌NK318.1(序列表400所示序列)。 同时C57/ BL6WT小鼠中只有小于5的该菌落。 huREG3转基因小鼠组的粪便中的NK318.1菌增多， 同 时分析了乳酸杆菌属其他种Lactobacillus reuteri ,Lactobacillus gasseri , Lactobacillus animalis,。

11、Lactobacillus rhamnosus和Lactobacillusplantarum都没有 明显变化甚至降低(图2)。 免疫荧光显示除了在粪便中， huREG3转基因小鼠的肠粘膜黏液 层中NK318.1菌也同样增多。 0026 实施例2 0027 乳酸杆菌NK318.1菌液的制备 0028 将乳酸杆菌NK318.1在MRS液体培养基中增菌培养， 37培养24hrs， 梯度稀释后取 适量菌液涂布MRS固体培养基， 37培养24hrs， 计数平板上的菌落数量， 根据细菌计数结果 将培养的菌液稀释到1*109/100ul。 0029 实施例3 0030 用乳酸杆菌NK318.1灌胃野生型C5。

12、7小鼠， 并饲以高脂饲料， 观察对照组与实验组 小鼠的体重差别。 0031 实验组： 6只野生型C57小鼠， 每只鼠灌注0.5ml含有1*109个乳酸杆菌NK318.1的 说明书 2/3 页 4 CN 106883999 A 4 PBS缓冲液； 0032 细菌对照组： 6只野生型C57小鼠， 每只鼠灌注0.5ml含有1*109个乳酸杆菌reuteri 的PBS缓冲液； 0033 阴性对照组： 6只野生型C57小鼠， 每只鼠灌注无菌的0.5mlPBS缓冲液。 0034 一周3次灌注， 一周后将小鼠饲料更换为高脂饲料， 并3天进行一次体重记录。 0035 实验组小鼠出现体重减低， 葡萄糖耐受实验和。

13、胰岛素敏感实验均低于对照组(图 3， 图4)。 实验证实乳酸杆菌NK318.1具有抑制小鼠体重增长的功能。 0036 综上， 利用现代生物学技术和生物信息学分析对乳酸杆菌NK318.1的功能进行研 究， 发现小鼠肠道内乳酸杆菌NK318.1增多使得M2吞噬细胞在各脏器的数量增多， 进而发现 乳酸杆菌NK318.1多的小鼠体重明显低于正常小鼠， 显示该菌具有抑制体重增长的功能， 可 将NK318.1菌设计成为减轻体重的药物， 具有潜在的巨大应用价值。 同时， 由于乳酸杆菌 NK318.1葡萄糖耐受实验低于对照组， 可以利用乳酸杆菌NK318.1制造糖尿病生物体模型以 替代现有的破坏胰腺的造模方式。

14、， 由于乳酸杆菌NK318.1胰岛素敏感实验低于对照组， 因此 对于胰岛素细胞瘤具有一定的治疗作用。 0037 上述参照具体实施方式对该乳酸杆菌NK318.1及其用途进行的详细描述， 是说明 性的而不是限定性的， 可按照所限定范围列举出若干个实施例， 因此在不脱离本发明总体 构思下的变化和修改， 应属本发明的保护范围之内。 说明书 3/3 页 5 CN 106883999 A 5 SEQUENCE LISTING 南开大学 乳酸杆菌NK318.1及其用途 2017 1 PatentIn version 3.3 1 1019 DNA 小鼠粪便 乳酸杆菌NK318.1 (1).(1019) 16s。

15、 rRNA V1-V6序列 1 caccttagac ggctggctcc aaaggttacc ccaccggctt tgggtgttac aaactctcat 60 ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcat gctgatccgc 120 gattactagc gattccgact tcatgtaggc gagttgcagc ctacaatccg aactgagaac 180 ggctttaaga gatttgctaa acctcgcggt cttgcgactc gttgtaccgt ccattgtagc 240 acgtg。

16、tgtag cccaggtcat aaggggcatg atgatttgac gtcatcccca ccttcctccg 300 gtttgtcacc ggcagtcttg ctagagtgcc caacttaatg ctggcaacta acaataaggg 360 ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga caaccatgca 420 ccacctgtca ttttgtcccc gaagggaaag tcctatctct aggattgtca aaagatgtca 480 agacctggta aggttcttcg cgt。

17、tgcttcg aattaaacca catgctccac cgcttgtgcg 540 ggcccccgtc aattcctttg agtttcaacc ttgcggtcgt actccccagg cggaatgctt 600 attgcgttag ctgcagcact gaagggcgga aaccctccaa cacttagcat tcatcgttta 660 cggcgtggac taccagggta tctaatcctg tttgctaccc acgctttcga acctcagcgt 720 cagttacaga ccagagagcc gctttcgcca ctggtgttct t。

18、ccatatatc tacgcatttc 780 accgctacac atggagttcc actctcctct tctgcactca agtctcccag tttccaatgc 840 actactccgg ttaagccgaa aggctttcac atcagactta aaagaccgcc tgcgttccct 900 ttacgcccaa taaatcccgg ataacgcttg ccacctacgt attaccgcgg ctgctggcac 960 gtagttagcc gtgctttctg gttagatacc gtcgaaacgt gaacagttac tctcacgca 1019 序列表 1/1 页 6 CN 106883999 A 6 图1 图2 说明书附图 1/2 页 7 CN 106883999 A 7 图3 图4 说明书附图 2/2 页 8 CN 106883999 A 8 。