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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810831993.5 (22)申请日 2018.07.26 (83)生物保藏信息 CGMCC No. 15370 2018.03.23 (71)申请人 云南大学 地址 650091 云南省昆明市五华区翠湖北 路2号 (72)发明人 李国红阳帮炬祝明亮张克勤 (74)专利代理机构 昆明今威专利商标代理有限 公司 53115 代理人 杨宏珍 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) A01N 63/04(2006.01) A01P 5/00(2006.01。
2、) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种真菌发酵液及其应用 (57)摘要 一种真菌发酵液及其应用， 属于应用微生物 学领域。 本发明使用的真菌菌株是Stereum complicatumYMF1.5060， 菌株已于2018年3月23 日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心； 保藏单位地址： 北京市朝阳区北辰 西路1号院3号中国科学院微生物研究所； 保藏 号： CGMCCNo.15370。 该发酵液作为生防菌制剂 在防治南方根结线虫(Meloidogyneincognita) 中的 应 用。 本发明的 优 点 在于 ： S te re um compli。
3、catumYMF1.5060使用马铃薯葡萄糖培养 基和综合马铃薯葡萄糖培养基培养所得发酵液 活性好， 48小时对南方根结线虫(M.incognita) 的校正致死率分别为94.7、 95.1， 能够作为 生防菌制剂在防治南方根结线虫(M.incognita) 中应用。 权利要求书1页 说明书3页 CN 109055231 A 2018.12.21 CN 109055231 A 1.一种真菌发酵液， 其特征在于该发酵液中使用的真菌菌株是Stereum complicatum YMF1.5060， 保藏号： CGMCC No.15370。 2.权利要求1所述的真菌发酵液作为生防菌制剂在防治南方根结。
4、线虫(Meloidogyne incognita)中的应用。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109055231 A 2 一种真菌发酵液及其应用 技术领域: 0001 本发明涉及一种真菌Stereum complicatum YMF1.5060发酵液及其应用， 属于应 用微生物学领域。 背景技术: 0002 植物线虫引起的病害已成为农业生产中的第二大类病害， 每年给全世界造成严重 的经济损失。 其防治以化学农药为主， 随着长期使用各种化学农药所带来的环境污染问题 的日趋严重， 部分化学杀线虫剂被禁用， 因此利用线虫天敌对线虫进行生物防治越来越受 到重视。 微生物由于易培养， 生长周期短， 因。
5、此利用微生物及其代谢产物防治线虫受到人们 的关注。 南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是危害最为严重的植物病原线虫之一， 所 引起的病害是一种极难防治的土传性病害。 真菌Stereum complicatum是担子菌门， 伞菌 纲， 红菇目， 韧革菌科， 韧革菌属真菌。 目前没有该种真菌杀线虫活性的报道。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种真菌Stereum complicatum YMF1.5060发酵液及其应 用。 0004 本发明是这样实现的： 0005 1.本发明使用的真菌菌株是Stereum complicatum YMF1.5060， 该菌株已于2。
6、018 年3月23日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心； 保藏单位地址： 北京市 朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所； 保藏号： CGMCC No.15370。 0006 2.Stereum complicatum YMF1.5060发酵液的制备 0007 培养基： 马铃薯葡萄糖培养基、 综合马铃薯葡萄糖培养基。 培养基的组成和配制方 法如下: 0008 马铃薯葡萄糖培养基： 马铃薯200g切成小块加水煮沸半小时后， 过滤取滤液用自 来水定容至1L， 加入葡萄糖20g， pH自然， 121灭菌20分钟。 0009 综合马铃薯葡萄糖培养基： 马铃薯200g切成小块加水煮。
7、沸半小时后， 过滤取滤液 用自来水定容至1L， 加入葡萄糖20g、 KH2PO4 3.0g、 MgSO4 1.5g、 柠檬酸0.1g、 维生素B1 10mg,pH自然， 121灭菌20分钟。 0010 用马铃薯葡萄糖培养基、 综合马铃薯葡萄糖培养基， 对Stereum complicatum YMF1.5060进行液体摇床150rpm-180rpm， 25-28培养14天后， 取部分发酵液， 将其过滤， 除 去其中的绝大部分菌丝， 然后用2mL的离心管(8000rpm， 10min)离心除去剩余菌丝或颗粒杂 质， 用移液枪吸取上清， 将上清液收集于无菌小瓶中， 4保存备用。 0011 3.真菌。
8、发酵液杀线虫活性测定方法 0012 a.用移液枪吸取上述已处理好的发酵液， 加入到直径为3cm培养皿中， 每个培养皿 中加入1.5mL， 作为实验组； 对照组为加入等体积(1.5mL)已灭菌的同种培养基液体。 最后向 每个平板中加入约150条测试线虫， 实验组和对照组各做三个平行。 说明书 1/3 页 3 CN 109055231 A 3 0013 b.观察真菌发酵液的活性测试： 不同时间段对活性测试结果进行观察， 在显微镜 下进行计数， 记录线虫死亡数和线虫总数。 0014 c.致死率和校正致死率的计算方法： 0015 致死率(实验组线虫死亡数/实验组线虫总数)； 0016 校正致死率致死率。
9、-(对照组线虫死亡数/对照组线虫总数)。 0017 本发明的优点在于： Stereum complicatum YMF1.5060使用马铃薯葡萄糖培养基 和综合 马铃薯葡萄糖培养基培养所得发酵液活性好 ， 48小时 对南方根结线虫 (M.incognita)的校正致死率分别为94.7、 95.1， 能够作为生防菌制剂在防治南方根结 线虫(M.incognita)中应用。 具体实施方式： 0018 以下是本发明的实施例， 但本发明的内容并不局限于此。 0019 实施例的Stereum complicatum YMF1.5060使用马铃薯葡萄糖培养基和综合马铃 薯葡萄糖培养基分别培养的发酵液， 杀。
10、线虫活性测定方法同发明内容部分的描述。 0020 实施例1： 0021 用马铃薯葡萄糖培养基， 在28对Stereum complicatum YMF1.5060进行液体摇 床150rpm培养14天后， 将部分发酵液过滤， 除去其中的绝大部分菌丝， 然后用2mL的离心管 (8000rpm， 10min)除去剩余菌丝或颗粒杂质， 用移液枪吸取上清， 将上清液收集于20mL无菌 小瓶中。 0022 按照上文所述的发酵液杀线虫活性测定方法进行Stereum complicatum YMF1.5060发酵液的毒杀南方根结线虫(M.incognita)的活性实验， 结果用百分率表示。 0023 表1马铃。
11、薯葡萄糖培养基发酵液的毒杀线虫活性 0024 0025 结果表明： 真菌Stereum complicatum YMF1.5060于马铃薯葡萄糖培养基， 28， 150rpm条件下培养14天的发酵液对南方根结线虫(M.incognita)有强的毒杀作用， 发酵液 在48小时对南方根结线虫(M.incognita)的校正致死率达到94.7。 0026 实施例2： 0027 用综合马铃薯葡萄糖培养基， 在25对Stereum complicatum YMF1.5060进行液 体摇床180rpm培养14天后， 将部分发酵液过滤， 除去其中的绝大部分菌丝， 然后用2mL的离 心管(8000rpm， 1。
12、0min)除去剩余菌丝或颗粒杂质， 用移液枪吸取上清， 将上清液收集于20mL 无菌小瓶中。 0028 按照同实施例1所用的发酵液杀线虫活性测定方法进行Stereum complicatum YMF1.5060发酵液的毒杀南方根结线虫(M.incognita)的活性实验， 结果用百分率表示。 0029 表2综合马铃薯葡萄糖培养基发酵液的毒杀线虫活性 说明书 2/3 页 4 CN 109055231 A 4 0030 0031 结果表明： 真菌Stereum complicatum YMF1.5060于综合马铃薯葡萄糖培养基， 25 ， 180rpm条件下培养14天的发酵液对南方根结线虫(M.incognita)有强的毒杀作用， 发酵 原液在48小时对南方根结线虫(M.incognita)的校正致死率达到95.1。 说明书 3/3 页 5 CN 109055231 A 5 。