一种死谷芽孢杆菌的发酵培养及复合微生物肥料生产方法.pdf

《一种死谷芽孢杆菌的发酵培养及复合微生物肥料生产方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种死谷芽孢杆菌的发酵培养及复合微生物肥料生产方法.pdf（11页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(10)申请公布号 CN 102533594 A (43)申请公布日 2012.07.04 CN 102533594 A *CN102533594A* (21)申请号 201110425464.3 (22)申请日 2011.12.16 C12N 1/20(2006.01) C05F 11/08(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (71)申请人 上海绿乐生物科技有限公司 地址 201108 上海市闵行区金都路4299号C 幢 1 楼 212 室 (72)发明人 闫龙翔 陈芳 陈露 (74)专利代理机构 上海三和万国知识产权代理 事务所 31230 代理人 刘立平 (54) 。

2、发明名称 一种死谷芽孢杆菌的发酵培养及复合微生物 肥料生产方法 (57) 摘要 本发明提供了一种死谷芽孢杆菌的发酵培养 方法， 包括种子培养和发酵培养工序， 在所述发酵 培养工序中， 培养基的初始 pH 为 6.0 7.0， 菌株 温度 30 37， 氮源用量为 5 10g/L， 碳源 用量为 15 25g/L。此外， 还提供了用发酵得到 的菌液利用水解渣为原料生产复合微生物肥料的 方法， 利用死谷芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌和胶质芽 孢杆菌单独发酵后制成复合微生物菌剂， 再生产 复合微生物肥料。本发明的发酵培养方法得到的 48h 发酵液中活菌或芽孢为 3.4 5.11010CFU/ mL 以上，。

3、 比常规方法至少高一个数量级， 且微生 物肥料的生产方法有效地利用了废弃资源， 具有 环保、 经济的优点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 8 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 8 页 附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 包括种子培养和发酵培养工序， 其特征在于 ： 在所述发酵培养工序中， 培养基的初始pH为6.07.0， 菌株温度3037， 氮源用量为 5 10g/L， 碳源用量为 15 25g/L。 2. 根据权利要求 1 所述的死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 其特征。

4、在于 ： 所述氮源为酵 母膏。 3. 根据权利要求 1 所述的死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 其特征在于 ： 所述碳源为蔗 糖或糖化玉米粉。 4. 根据权利要求 1 所述的死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 其特征在于 ： 所述发酵培养 工序中的装液量为 20 30。 5.根据权利要求1所述的死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 其特征在于 ： 48h发酵液中活 菌或芽孢为 3.41010CFU/mL 以上。 6. 一种含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 包括原料的处理和菌剂与原料 的混合， 其特征在于 ： 该方法包括以下步骤 ： (1) 原料的处理 ： 将氨基酸生产过程产生的水解渣敲碎成粉末或小颗粒。

5、， 与碱性物质 混合， 使处理后的水解渣原料 pH 达到 5.5-8.0 ； (2) 采用权利要求 1-5 任一项所述的发酵培养方法发酵死谷芽孢杆菌， 发酵液用吸附 介质吸附后得到菌剂 ； 将枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌利用发酵设备单独发酵生产， 发酵 液用吸附介质分别吸附后得到菌剂， 将三种菌剂混合、 粉碎 ； (3) 在步骤 (1) 的原料中， 加入混合菌剂， 得到成品复合微生物肥料， 所述混合菌剂占 成品复合微生物肥料质量比的 5 -20。 7. 根据权利要求 1 所述的含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 其 特征在于 ： 所述死谷芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌三种菌剂的质。

6、量比为 1-15 1-10 1-8。 8. 根据权利要求 7 所述的含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 其 特征在于 ： 所述死谷芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌三种菌剂的质量比为 8-12 2-7 2-7。 9. 根据权利要求 6 所述的含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 其特征在 于 ： 所述碱性物质为石灰、 KOH 或 NaOH 的一种。 10. 根据权利要求 6 所述的含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 其特征在 于 ： 所述步骤 (2) 中还可加入无机肥料和 / 或微量元素肥料。 权 利 要 求 书 CN 102533594 A 2 1/8 页 3 一种。

7、死谷芽孢杆菌的发酵培养及复合微生物肥料生产方法 技术领域 0001 本发明涉及一种微生物的发酵培养方法， 具体涉及一种芽孢杆菌的发酵培养方 法、 及由该发酵液制得微生物肥料的方法。 背景技术 0002 近年来， 极端天气状况频发， 尤其是干旱气候， 全国各地几乎都不能幸免。2009 年 连续3个多月， 华北、 黄淮、 西北、 江淮等地15个省、 市未见有效降水， 冬小麦告急， 大小牲畜 告急， 农民生产生活告急 ； 2011 年， 受长江中下游 50 年来最严重旱情影响， 长江水位走低， 使上海在 5 月份出现了原本在冬季才会出现的罕见严重咸潮， 部分供水区域因之告急。干 旱对农业生产的影响显。

8、而易见， 虽然国家出台各种有效措施来平抑物价过快上涨， 但是旱 情犹如 “蝴蝶效应” ， 对主要农产品价格的推高作用逐渐显现。 此外， 全国大范围推广节水灌 溉农业，“十二五” 规划中已明确， 未来五年将完成 70以上的大型灌区和 50以上的重点 中型灌区续建配套和节水改造任务 ； 净增农田有效灌溉面积 4000 万亩 ； 新增高效节水灌溉 面积 5000 万亩。但是如何提高土壤田间持水量和植物对水分的利用率， 仅仅靠改变灌溉方 式是不够的。所以开展抗旱、 保水农业研究不仅势在必行， 而且已经迫在眉睫。 0003 - 聚谷氨酸 ( 简称 -PGA) 是自然界中微生物发酵产生的水溶性多聚氨基酸，。

9、 其结构为谷氨酸单元通过 - 氨基和 - 羧基形成肽键的高分子聚合物， 分子量分布在 100kDa 到 10000kDa 之间。-PGA 具有优良的水溶性、 超强的吸附性和生物可降解性， 降 解产物为无公害的谷氨酸， 是一种优良的保水剂。另外， -PGA 可以作为植物增产营养素， 在淹水条件下， -PGA 会在植株根毛表层形成一层薄膜， 不但具有保护根毛的功能， 更是土 壤中养份、 水份与根毛亲密接触的最佳输送平台， 能很有效率的提高肥料中养分的溶解、 存 储、 输送与吸收 ； 阻止硫酸根、 磷酸根、 草酸根与金属元素产生沉淀作用， 使作物能更有效的 吸收土壤中磷、 钙、 镁及微量元素 ； 促。

10、进作物根系的发育， 加强抗病性。-PGA 还可以平衡 土壤酸碱值， 避免长期施用化学肥料所造成的酸性土质 ； 有效螯合有毒重金属 ； 增强植物 抗病及抗逆能力 ； 可使茶叶、 瓜果、 蔬菜等农产品快速增产， 增产量可达 10 20。 0004 肥料与保水剂复合一体化使用是水肥调控的重要技术， 是肥料研究的国际前沿。 目前， 多数研究集中在将保水剂与无机矿物和尿素结合， 制成保水缓控释化肥。 毛小云等利 用淀粉-丙烯酸盐接枝共聚物和无机矿物复合， 制成有机-无机复合保水肥， 不仅有助于作 物对营养的吸收， 更减少了矿质元素的淋溶作用。有机抗旱肥料 BGA 是一种由城乡有机废 弃物经资源化处理后制。

11、得的有机肥料， 其抗旱机理主要是增加土壤中有机碳， 促进了土壤 中有机无机复合胶体的形成， 以胶体的吸水性来提高土壤中水分含量。对于保水型生物肥 料的研究， 在国内外都尚少。 但是农业生产长期过分依赖于化学肥料， 造成大量不可再生能 源的浪费， 农田土质变坏， 肥力下降， 农作物产品残留、 品质降低以及食品和环境污染的问 题日益突出。 因此， 单一依靠保水剂与无机肥料结合生产保水缓控释肥料， 不能满足可持续 农业和绿色农业发展的要求。 0005 -PGA 生产菌株按照是否需要外源性的 L- 谷氨酸， 可分成 L- 谷氨酸依赖型和 说 明 书 CN 102533594 A 3 2/8 页 4 L。

12、- 谷氨酸非依赖型。我国目前的研究对象主要是 L- 谷氨酸依赖型菌株。L- 谷氨酸作为 -PGA发酵生产的前体， 对发酵液中-PGA的积累具有重要的影响。 目前， 产-PGA的菌 株主要集中在芽孢杆菌不同菌株之间， 如枯草芽孢杆菌 IFO3335 和 TAM-4 以及部分短小芽 孢杆菌和地衣芽孢杆菌菌株。-PGA 产生菌大部分是从豆制品等材料中获得的芽孢杆菌， 而从土壤和氨基酸废料堆中筛选的并不多见。中国专利申请 201010258517.2 公开了一种 从土壤中分离得到的死谷芽孢杆菌以及其发酵培养方法， 用这种方法得到的发酵液中菌体 含量 1109个 /mL。 发明内容 0006 因此， 本。

13、发明要解决的技术问题是提供一种可以得到更大菌体含量的死谷芽孢杆 菌的发酵培养方法。 0007 本发明的技术方案是， 一种死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 包括种子培养和发酵 培养其特征在于 ： 在所述发酵培养工序中， 培养基的初始pH为6.07.0， 菌株温度30 37， 氮源用量为 5 10g/L， 碳源用量为 15 25g/L。 0008 所述死谷芽孢杆菌的培养基采用常规的基础培养基， 一般为谷氨酸钠 10g/L， MgSO47H2O 0.25g/L， CaCl22H2O 0.1g/L， K2HPO4 2g/L。上述死谷芽孢杆菌 (Bacillus vallismortis) 在中国微生物菌种。

14、保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏号为 CGMCC No.3478( 在专利申请 201010258517.2 中首次提及 )。主要生物学特性为菌株为长杆状， 有 荚膜和鞭毛， 芽孢中生， 革兰氏染色为阳性， 具有葡萄糖产酸， 好氧， 接触酶阳性， 石蕊牛奶 还原阳性， 明胶液化， 分解酪素， 不分解酪氨酸。 0009 根据本发明所述的死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 优选的是， 所述氮源为酵母膏。 0010 根据本发明所述的死谷芽孢杆菌的发酵培养方法， 优选的是， 所述碳源为蔗糖或 糖化玉米粉。 0011 优选的是， 所述发酵培养工序中的装液量为 20 30。该装液量可以更好地保 持发酵罐。

15、的通气性。 0012 优选的是， 48h 发酵液中活菌或芽孢为 3.4 5.11010CFU/mL。 0013 本发明要解决的另一个技术问题是提供一种利用上述死谷芽孢杆菌生产微生物 肥料的方法。 0014 一种含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 包括原料的处理和菌剂与原 料的混合， 其特征在于 ： 该方法包括以下步骤 ： 0015 (1) 原料的处理 ： 将氨基酸生产过程产生的水解渣敲碎成粉末或小颗粒， 与碱性 物质混合， 使处理后的水解渣原料 pH 达到 5.5-8.0 ； 0016 (2) 采用上述的发酵培养方法发酵死谷芽孢杆菌， 发酵液用吸附介质吸附后得到 菌剂 ； 将枯草芽孢杆。

16、菌和胶质芽孢杆菌利用发酵设备单独发酵生产， 发酵液用吸附介质分 别吸附后得到菌剂， 将三种菌剂混合、 粉碎 ； 0017 (3) 在步骤 (1) 的原料中， 加入混合菌剂， 得到成品复合微生物肥料， 所述混合菌 剂占成品复合微生物肥料质量比的 5 -20。 0018 根据本发明所述的含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 优选的是， 所 述死谷芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌三种菌剂的质量比为 1-15 1-10 1-8。 说 明 书 CN 102533594 A 4 3/8 页 5 上述吸附介质可采用微生物领域常用的吸附介质， 如草炭或稻壳粉等， 吸附比例采用常规 操作， 如可采用。

17、菌液与吸附介质的质量比为 1 3-5. 0019 更优选的是， 所述死谷芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌三种菌剂的质量 比为 8-12 2-7 2-7。 0020 根据本发明所述的含死谷芽孢杆菌的复合微生物肥料的生产方法， 在一个优选的 实施方案中， 所述碱性物质为石灰、 KOH 或 NaOH 的一种。碱性物质的作用是调节水解渣原 料的 pH 值， 使其达到微生物肥料要求的范围。 0021 进一步地， 所述步骤 (2) 中还可加入无机肥料和 / 或微量元素肥料。如果需要制 造更高养分含量或者含微量元素的微生物肥料， 可以在上述得到的微生物肥料中加入无机 肥料或微量元素肥料， 也可以同时加。

18、入无机肥料和微量元素肥料。 0022 氨基酸生产过程中的发酵产物水解渣 ( 水解滤饼 ) 由于其强酸性， 随水流失或弃 于土壤会造成水质、 土壤酸化而造成污染， 国家严禁排放 ； 同时强酸性亦使得其无法有效利 用而造成积压。由于其产出量大， 堆放场地大， 是长期困扰氨基酸生产企业的难题。经过检 测， 水解渣除酸性强外， 还含有大量的有机质、 谷氨酸、 腐殖酸和中微量元素， 其中谷氨酸是 生产 -PGA 的重要前体， 因此， 氨基酸水解渣是生产保水型微生物肥料的优质原料。 0023 本发明的技术原理是利用可产 -PGA 菌株发酵特性获得大量菌体， 与其他微生 物复合成为保水型复合微生物菌剂， 再。

19、与含有大量谷氨酸的有机原料混合成为保水型复合 微生物肥料。施入土壤后， 除保水型微生物肥料中本身所含 -PGA 外， 微生物在土壤中利 用有机物料以及养分继续代谢过程， 尤其是位于根际的微生物。这些微生物活动不断产生 -PGA， 从而增加土壤保水抗旱能力。 0024 本发明的发酵培养方法通过优化发酵培养参数， 可使发酵产生最大菌量， 较以往 芽孢杆菌 48h 发酵菌株量大约为 1.0 5.0109 CFU/mL 增加了一个数量级。上述保水型 复合微生物肥料是根据根际土壤微生态学和植物营养学原理， 以产 -PGA 菌株为核心， 与 多种有益微生物(固氮菌、 解磷菌、 钾细菌)复合， 以优质氨基酸。

20、有机质为载体， 再配以少量 的无机养分及微量元素加工而成的具有无污染、 无公害， 适于生产绿色食品的新型抗旱肥 料。 0025 死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis)与枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌抑制作 用测试试验。 0026 (1) 菌液及发酵液制备 ： 将三种菌株分别在适宜条件下摇瓶培养 36h， 获得菌液。 取菌悬液于 10000 转 / 分离心 2min， 上清液过 0.02m 细菌滤膜， 即为无菌发酵液。 0027 (2) 抑制作用测定 ： 利用混合平板法 ( 将融化的培养基冷却至 45后加入菌液混 合后制平板)将PGA23菌液加入培养基中， 在冷凝后的平板中央放置。

21、两个牛津杯， 加入另外 两种菌株的无菌发酵液100L。 以加入无菌水处理为对照， 每个处理设3个重复， 静置培养 24h， 观察有无抑菌圈。试验结果表明， 原有菌株发酵液对 PGA23 无抑制作用。同理， 将原有 菌株菌液加入培养基中， 将 PGA23 发酵液加入牛津杯中， 观察有无抑菌圈。试验结果表明， 三种菌株发酵液对其他菌株的生长没有抑制作用。 0028 利用混合平板测试菌体间有无抑制作用 ： 在加入菌液的培养基平板上点接另外两 株菌株， 培养后 24h 后观察有无抑菌圈。试验结果表明 ： 三种菌株菌体间也没有抑制作用， 因此可将三者复合为新型保水型菌剂。 说 明 书 CN 102533。

22、594 A 5 4/8 页 6 0029 采取每个菌种单独发酵， 发酵后的菌液分别与常用吸附剂， 按菌液吸附剂 1 3 5 的比例吸附， 按照一定比例进行混合的生产方法。该混合比例也不需固定， 根据 实际土壤的缺水情况， 缺水多的可以增大该死谷芽孢杆菌的比例， 反之则减小死谷芽孢杆 菌的比例。其他两种菌剂的比例也可以根据需要确定。经过多年试验 ： 枯草芽孢杆菌吸附 后单一菌剂的活菌数量可以达到10亿/克以上， 胶质芽孢杆菌吸附后单一菌剂的活菌数量 可以达到 2 亿 / 克以上， 死谷芽孢杆菌吸附后单一菌剂的活菌数量可以达到 5 亿 / 克以上。 按照存放时间对样品进行保存期的测定， 试验在 2。

23、011 年 4 月 28 日开始， 到目前为止已经有 4个月的时间， 复合菌剂的有效活菌数量基本在4.5-5.0亿个/克， 菌数稳定， 含水量基本保 持在 30以内， 达到了预期的复合菌剂的数量要求， 可作为生产复合微生物肥料和生物有 机肥的菌剂产品。 0030 本发明较现有技术的优势在于 ： 0031 (1) 从氨基酸废料堆及其堆放土壤中筛选产 -PGA 菌株， 并首次用于生产氨基酸 微生物肥料， 使微生物在与自然态相似的环境中定殖， 解决了菌株难以存活的问题， 也为微 生物肥料生产提供了新的菌种资源。 0032 (2) 通过对死谷芽孢杆菌发酵条件优化， 保证菌株发酵过程可以高效获得大量 菌。

24、体。以大量菌株为基础， 确保在肥料施入土壤后有充足的微生物进行代谢活动以获得 -PGA。 0033 (3) 以富含谷氨酸的水解渣作为生产保水型复合微生物肥料的原料， 确保微生物 有充足谷氨酸前体利用。肥料中所含微生物在土壤中， 可以利用谷氨酸为前体， 代谢产生 -PGA， 从而达到增加土壤水分含量， 抗旱保水的作用。 0034 (4) 保水型复合微生物肥料养分全面， 不仅供给作物适量的无机营养， 而且提供有 效活菌、 有机质、 氨基酸、 腐殖酸以及矿质元素。 在为作物生长提供全面营养物质的同时， 还 起到抗旱、 防病、 促生和改良土壤的作用。 0035 (5) 以味精生产废料作为复合微生物原料。

25、， 为氨基酸废料资源化提供了一条崭新 的处置途径， 而且可获得附加值较高的保水型复合微生物肥料， 从而降低了水解渣处置成 本。 附图说明 0036 图 1 是氨基酸水解渣的制造工艺流程图。 0037 图 2 是保水型微生物菌剂的制备流程图。 0038 图 3 是粉状保水型复合微生物肥料的制备流程图。 具体实施方式 0039 实施例 1 0040 1、 菌株发酵 ： 基础培养基为谷氨酸钠 10g/L， MgSO47H2O 0.25g/L， CaCl22H2O 0.1g/L， K2HPO4 2g/L 时， 死谷芽孢杆菌菌株发酵条件为 ： 温度 32， 装液量为 20， 培养基 初始 pH 为 6.。

26、5， 以酵母膏为氮源， 用量为 5g/L， 糖化玉米粉为碳源， 用量为 15g/L 时发酵， 发 酵 48h 后可获得菌量为 3.91010CFU/mL ； 0041 2、 氨基酸废料取样 ： 水解渣取自河南省莲花氨基酸股份有限公司 ； 说 明 书 CN 102533594 A 6 5/8 页 7 0042 3、 pH 调理 ： 在水解渣中加入氢氧化钾 8混合， 用链条粉碎机碎至 80 目后堆放 8-12h， 让其充分反应。处理后水解渣的基本性状见表 1 ； 0043 表 1 处理后水解渣 ( 粉状 ) 的基本性状 0044 0045 4. 倒翻 ： 用铲车或人工翻堆， 让反应后的物料温度冷却。

27、到常温， 使其 pH 达到 5.5-8.0 ； 0046 5、 保水型复合微生物菌剂制备 ： 用步骤 1 的方法生产得到死谷芽孢杆菌菌液， 将 枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌利用发酵设备单独发酵生产， 发酵后的菌液分别用 80 目的 稻壳粉按菌液稻壳粉 1 3 的质量比例吸附 ； 将三种分别吸附后的单一菌剂按照死谷 芽孢杆菌枯草芽孢杆菌胶冻样芽孢杆菌 5 2 3 的质量比例混合后， 粉碎至 80 目 ； 0047 6、 配料 ： 在容量为 500kg 的搅拌机中按照表 2 的原料配比进行准确配料 ； 0048 表 2 保水型复合微生物肥料的生产配料 0049 原料 水解渣 菌剂 尿素 磷酸一铵 氯。

28、化钾 硫酸锌 硼砂 硫酸镁 配比 ( ) 65.0 5.0 15.0 2.5 10.0 1.0 0.5 1.0 0050 7、 混合 ： 搅拌机搅拌 10-15min， 让物料充分混合 ； 0051 8、 粉碎 ： 将混合的物料进行粉碎、 细度达到 80 目 ； 0052 9、 分装入库 ： 用塑料袋分装、 每袋 5kg， 用 25kg 的编织袋作为外包装， 每包 5 袋 ； 0053 10、 成品基本性状见表 3， 重金属含量远远低于复合微生物肥料的行业标准， 故而 未测定。 0054 表 3 保水型复合微生物肥料检测结果 0055 0056 实施例 2 0057 菌株发酵条件为温度 30，。

29、 装液量为 25， 培养基初始 pH 为 7.0， 以酵母膏为 说 明 书 CN 102533594 A 7 6/8 页 8 氮源， 用量为 10g/L， 糖化玉米粉为碳源， 用量为 20g/L 时发酵， 发酵 48h 后可获得菌量为 4.51010CFU/mL ； 0058 水解渣中加入 6的氢氧化钾混合， 用链条粉碎机粉碎至 100 目后堆放 15h， 让其 充分反应 ； 0059 微生物菌剂制备中， 稻壳粉细度为100目， 菌剂与稻壳粉的吸附质量比例是15。 将三种分别吸附后的单一菌剂按照死谷芽孢杆菌枯草芽孢杆菌胶冻样芽孢杆菌 10 3 7 的质量比例混合。 0060 菌剂的加入比例为 。

30、6， 水解渣加入比例为 64， 皆为占最终成品肥料的质量百 分比。其他同实施例 1。 0061 实施例 3 0062 水解渣中加入 6的氢氧化钾混合， 用链条粉碎机粉碎至 120 目后堆放 8-12h， 让 其充分反应 ； 0063 保水型复合微生物菌剂制备中， 稻壳粉细度为 120 目， 菌液与稻壳粉的吸附比例 是 1 4。将三种分别吸附后的单一菌剂按照死谷芽孢杆菌枯草芽孢杆菌胶冻样芽孢 杆菌 15 10 7 的质量比例混合后， 粉碎至 80 目。 0064 菌剂的加入比例是 8， 水解渣加入比例为 63， 尿素的加入比例为 14， 皆为占 最终成品肥料的质量百分比。其它同实施例 1。 00。

31、65 实施例 4 0066 死谷芽孢杆菌发酵条件为 ： 温度 36， 装液量为 32， 培养基初始 pH 为 6.8， 以 酵母膏为氮源， 用量为 7g/L， 蔗糖为碳源， 用量为 25g/L 时发酵， 发酵 48h 后可获得菌量为 3.51010CFU/mL ； 0067 水解渣中加入占水解渣质量比 10的石灰混合， 用链条粉碎机粉碎至 120 目后堆 放 20h， 让其充分反应 ； 0068 保水型复合微生物菌剂制备中， 吸附介质为 100 目的草炭， 菌液与草炭的吸附质 量比例是 1 3.5。将三种分别吸附后的单一菌剂按照死谷芽孢杆菌枯草芽孢杆菌胶 冻样芽孢杆菌 11 4 5 的质量比例。

32、混合后， 粉碎至 60 目。 0069 菌剂的加入比例是 12， 水解渣加入比例为 88， 皆为占最终成品肥料的质量百 分比， 不添加无机肥料和微量元素肥料。其它同实施例 1。 0070 实施例 5 0071 死谷芽孢杆菌发酵条件为 ： 温度 37， 装液量为 30， 培养基初始 pH 为 7.0， 以 酵母膏为氮源， 用量为 10g/L， 蔗糖为碳源， 用量为 20g/L 时发酵， 发酵 48h 后可获得菌量为 6.21010CFU/mL ； 0072 水解渣中加入占水解渣质量比 12的石灰混合， 用链条粉碎机粉碎至 120 目后堆 放 18h， 让其充分反应 ； 0073 保水型复合微生物。

33、菌剂制备中， 吸附介质为 100 目的草炭， 菌液与草炭的吸附质 量比例是 1 3.5。将三种分别吸附后的单一菌剂按照死谷芽孢杆菌枯草芽孢杆菌胶 冻样芽孢杆菌 8 7 7 的质量比例混合后， 粉碎至 120 目。 0074 菌剂的加入比例是 20， 水解渣加入比例为 80， 皆为占最终成品肥料的质量百 分比， 不添加无机肥料和微量元素肥料。其它同实施例 1。 说 明 书 CN 102533594 A 8 7/8 页 9 0075 实施例 6 0076 死谷芽孢杆菌发酵条件为 ： 温度 31， 装液量为 28， 培养基初始 pH 为 7.0， 以 酵母膏为氮源， 用量为 9g/L， 蔗糖为碳源，。

34、 用量为 22g/L 时发酵， 发酵 48h 后可获得菌量为 7.01010CFU/mL ； 0077 水解渣中加入占水解渣质量比 12的石灰混合， 用链条粉碎机粉碎至 100 目后堆 放 18h， 让其充分反应 ； 0078 保水型复合微生物菌剂制备中， 吸附介质为 100 目的草炭， 菌液与草炭的吸附质 量比例是 1 3.5。将三种分别吸附后的单一菌剂按照死谷芽孢杆菌枯草芽孢杆菌胶 冻样芽孢杆菌 15 2 2 的质量比例混合后， 粉碎至 80 目。 0079 菌剂的加入比例是 15， 水解渣加入比例为 80， 硫酸钾的加入比例为 5， 皆为 占最终成品肥料的质量百分比。其它同实施例 1。 。

35、0080 试验例 0081 玉米幼苗盆栽试验 0082 试验在温室条件下进行， 每盆装土 10kg， 每盆播 6 粒露白的玉米种子， 待玉米 4 叶 时定植到 4 棵， 30 天后收获。肥料在基肥中一次施入， 与土拌匀后装入盆中。试验处理为 ： 0083 处理 1 ： 施用微生物肥料基质 + 常规水分管理 ； 0084 处理 2 ： 施用迪尔乐复合微生物肥料 + 常规水分管理 ； 0085 处理 3 ： 施用保水型复合微生物肥料 + 常规水分管理 ； 0086 处理 4 ： 施用微生物肥料基质 + 水分胁迫 ； 0087 处理 5 ： 施用迪尔乐复合微生物肥料 + 水分胁迫 ； 0088 处理。

36、 6 ： 施用保水型复合微生物肥料 + 水分胁迫 ； 0089 保水型复合微生物肥料为实例一中所述 ； 迪尔乐复合微生物肥料菌剂仅含有枯草 芽孢杆菌和胶冻样芽孢杆菌， 菌剂比例为 2 3， 其它生产工艺同保水型复合微生物肥料 ； 微生物肥料基质为灭活微生物肥料。各处理 N、 P、 K 养分含量一致。其中， 水分胁迫条件为 减少 50的水分补充量。收获后对作物的幼苗期玉米的生物量、 农艺性状进行测定。 0090 表 5 不同处理对玉米苗期生物量和农艺性状的影响 0091 说 明 书 CN 102533594 A 9 8/8 页 10 0092 由试验结果可知， 在相同水分条件下， 施用保水型复合微生物肥料与施用原复合 微生物肥料及微生物肥料基质相比较， 可以促进玉米幼苗生长， 改善幼苗农艺性状。 特别是 在水分胁迫条件下， 施用保水型复合微生物肥料的玉米幼苗的各项指标与常规水分条件下 迪尔乐复合微生物肥料处理几乎没有差异或差异不显著， 高于常规水分下施用微生物肥料 基质处理的指标。 而施用微生物肥料基质并且水分胁迫条件的玉米幼苗生长状况则极为不 良。 说 明 书 CN 102533594 A 10 1/1 页 11 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 102533594 A 11 。