一种多肽及其应用和药物组合物.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610658361.4 (22)申请日 2016.08.11 (71)申请人 珠海诺贝尔国际生物医药研究院有 限公司 地址 519080 广东省珠海市高新区唐家湾 镇港乐路1号A区厂房第15层1510单元 (72)发明人 徐岩黄子为安静 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 赵青朵 (51)Int.Cl. C07K 5/103(2006.01) C07K 7/06(2006.01) C07K 7/08(2006.01) A61K 38/0。

2、7(2006.01) A61K 38/08(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 一种多肽及其应用和药物组合物 (57)摘要 本发明涉及多肽药物技术领域， 特别涉及一 种多肽及其应用和药物组合物。 本发明提供的多 肽可抑制WDR5和MLL1蛋白结合的活性， 抑制MLL1 蛋白复合物甲基转移酶活性， 从而可有效抑制肿 瘤细胞的生长， 具备潜在的生物医药开发价值。 权利要求书2页 说明书8页 序列表7页 附图1页 CN 106146617 A 2016.11.23 CN 10614。

3、6617 A 1.一种如式I所示的多肽， 或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映异构体、 非对映 异构体及其混合物， 或其药学上可接受的盐以及它的前药； 其中， A独立选自Thr或Val； B独立选自Asp、 Asn、 Glu、 Thr、 His、 Leu、 Ala或Ile， 或没有氨基酸； C独立选自Pro、 His、 Asp、 Met、 Ser、 Ala、 Ile、 Leu或Val， 或没有氨基酸； D独立选自Pro、 Tyr、 Glu、 Met、 Asn、 Trp、 Ala、 Val、 Ile或Cys， 或没有氨基酸； E独立选自Met、 Tyr、 His、 Trp、 Asn、 。

4、Pro、 Ala、 Nal或Phe， 或没有氨基酸； F独立选自His、 Asn、 Ser、 Gln、 Thr、 Asp、 Ala、 Leu或Cys， 或没有氨基酸； X1为氨基酸A1、 B1、 C1、 D1、 E1中的一种或几种组成的片段， 至少包含一个氨基酸， 其中， A1独立选自Ile、 Leu、 Phe或Val； B1独立选自Tyr、 Ser或Thr； C1独立选自Ala、 Ile、 Leu、 Phe或Val； D1独立选自Ser、 Gly或Ala； E1独立选自Val、 Ala、 Leu、 Asp、 Ser、 Met或Cys； X2为A2、 B2、 C2、 D2中的一种或几种组成的片。

5、段， 或没有氨基酸， 其中， A2独立选自Gly、 Trp、 Thr、 Ser或Cys； B2独立选自Ala、 Ile、 Leu、 Ser或Lys； C2独立选自Leu、 Phe、 Val或Arg； D2独立选自Asn、 Asp、 Glu或Gln。 2.根据权利要求1所述的多肽， 其特征在于， 所述多肽的序列为： Ser-Val-Arg-Thr； 或者为Ac-Ala-Arg-Thr-Asp-Pro-Ala-Met-His-Trp-Ser-Arg； 或者为Ser-Val-Arg-Thr-Asp-Pro-Ala-Met-His-Trp-Ser-Arg； 或者为Leu-Arg-Thr-Asp-Leu。

6、-Val-His-Asn-Ser-Leu-Val-Gln； 或者为Gly-Ala-Arg-Thr-Glu-Val-Pro-Phe-Leu-Thr-Ile-Phe； 或者为Ser-Ala-Ala-Ser-Arg-Thr-Ile-Asp-Met-Trp-Ala-Thr； 或者为Asp-Arg-Thr-Thr-His-Tyr-Tyr-Leu-Gly-Lys-Leu-Glu； 或者为Ser-Ala-Arg-Val-Ala-Ile-Glu-Tyr-Asn-Thr-Ala-Arg； 或者为Ile-Ser-Ala-Ser-Met-Arg-Thr-Thr-Met-Asn-Asn-Ser； 或者为Gly-Ala。

7、-Arg-Thr-Glu-Val-Pro-1-Nal-Leu-Thr-Ile-Phe； 或者为Cys-Arg-Thr-Ala-Pro-Met-Pro-His-Cys； 或者为Ac-Cys-Arg-Thr-Ala-Pro-Met-Pro-His-Cys。 3.如权利要求1或2所述多肽中两个或两个以上的氨基酸残基环化所得到的多肽， 所述 环化通过二硫键或酰胺键形成。 4.根据权利要求3所述的多肽， 其特征在于， 所述多肽的序列为 权利要求书 1/2 页 2 CN 106146617 A 2 或者为 或者为 或者为 或者为 或者为 或者为 或者为 5.如权利要求1至4中任一项所述多肽的氨基酸序列中取。

8、代、 缺失或添加一个或多个氨 基酸残基所得到的多肽。 6.如权利要求1至4中任一项所述多肽的氨基酸序列N末端被磷酸化、 酰胺化、 烷基化、 泛素化、 聚乙二醇化修饰， 或氨基酸序列C末端被酯化、 酰胺化修饰所得到的多肽。 7.如权利要求1至4中任一项所述多肽的氨基酸序列中连接荧光标记或放射性标记所 得到的多肽， 所述荧光标记为FITC或FAM。 8.如权利要求1至7中任一项所述多肽在制备抑制WDR5和MLL1蛋白结合活性、 抑制MLL1 蛋白复合物的甲基转移酶活性或治疗细胞增殖相关疾病药物中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述细胞增殖相关疾病是癌症。 10.一种药物组合。

9、物， 包括权利要求1至7中任一项所述的多肽。 权利要求书 2/2 页 3 CN 106146617 A 3 一种多肽及其应用和药物组合物 技术领域 0001 本发明涉及多肽药物技术领域， 特别涉及一种多肽及其应用和药物组合物。 背景技术 0002 表观遗传修饰例如组蛋白的甲基化、 乙酰化和泛素化等在基因的转录表达中扮演 着重要的角色。 表观遗传修饰的异常和多种疾病， 例如癌症有着重要相关性。 此外， 在炎症、 代谢性疾病以及在再生医学中也有着相当重要的作用。 0003 近年来， 人们逐渐鉴定出了一系列组蛋白甲基化修饰位点。 组蛋白的甲基化修饰 主要发生在赖氨酸(K)和精氨酸(R)残基上。 赖氨。

10、酸甲基化修饰通常发生在组蛋白H3赖氨酸 4位、 9位、 27位、 36位、 79位残基(H3K4、 H3K9、 H3K27、 H3K36、 H3K79)， 以及组蛋白H420位赖氨 酸残基(H4K20)上。 通常认为H3K4、 H3K36、 H3K79的甲基化修饰介导基因转录活化， 而H3K9、 H3K27、 H4K20的甲基化修饰介导转录抑制。 0004 目前发现的可以催化H3K4位点甲基化的酶主要为MLL(Mixedlineageleukemia) 家族蛋白， 混合谱系白血病(MixedLineageLeukemia， MLL)蛋白是由MLL基因所编码的一 类蛋白， 也是第一个被发现的组蛋。

11、白H3的4位赖氨酸的甲基化转移酶， 包括MLL1、 MLL2、 MLL3、 MLL4、 SET1A、 SET1B以及ASH1。 人类有至少6种不同的H3K4甲基化酶， 包括： SET1A和 SET1B， 均为COMPASS的一部分， 而MLL(MLL1)， MLL2， MLL3， MLL4能够形成不同的COMPASS类似 物。 根据现有的研究报道， 可与甲基化H3K4修饰结合的效应蛋白主要有TAF3、 ING家族、 CHD1、 BPTF、 WDR5、 JMJD2A和BHC80。 0005 研究发现组蛋白H3K4甲基化酶的异常表达与多种癌症如白血病、 乳腺癌、 肺癌等 的发生有关。 其中， WD。

12、R5蛋白是WD40蛋白的一种， 是人类MLL和SET1组蛋白H3K4甲基化酶的 蛋白复合物的重要一员。 近期研究显示SET1蛋白和所有的MLL蛋白都可以通过它们的WDR5 结合区(Winmotif)结合于WDR5蛋白。 WDR5蛋白与MLL蛋白间的相互作用对MLL蛋白复合物 的形成和活性发挥着至关重要的作用。 因此， WDR5蛋白是抗肿瘤药物开发的重要靶点， 而 WDR5抑制剂在抗肿瘤， 尤其是白血病药物领域具有非常好的市场前景。 发明内容 0006 有鉴于此， 本发明提供了一种多肽及其应用和药物组合物。 该多肽可抑制WDR5和 MLL1蛋白的结合， 抑制MLL1蛋白复合物甲基转移酶活性， 从。

13、而可有效抑制肿瘤细胞的生长， 具备潜在的生物医药开发价值。 0007 为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技术方案： 0008 本发明提供了一种如式I所示的多肽， 或其互变异构体、 内消旋体、 外消旋体、 对映 异构体、 非对映异构体及其混合物， 或其药学上可接受的盐以及它的前药； 0009 说明书 1/8 页 4 CN 106146617 A 4 0010 其特征在于， A独立选自Thr或Val； 0011 B独立选自Asp、 Asn、 Glu、 Thr、 His、 Leu、 Ala或Ile， 或没有氨基酸； 0012 C独立选自Pro、 His、 Asp、 Met、 Ser、 Ala、 。

14、Ile、 Leu或Val， 或没有氨基酸； 0013 D独立选自Pro、 Tyr、 Glu、 Met、 Asn、 Trp、 Ala、 Val、 Ile或Cys， 或没有氨基酸； 0014 E独立选自Met、 Tyr、 His、 Trp、 Asn、 Pro、 Ala、 Nal或Phe， 或没有氨基酸； 0015 F独立选自His、 Asn、 Ser、 Gln、 Thr、 Asp、 Ala、 Leu或Cys， 或没有氨基酸； 0016 X1为氨基酸A1、 B1、 C1、 D1、 E1中的一种或几种组成的片段， 至少包含一个氨基酸， 其 中， 0017 A1独立选自Ile、 Leu、 Phe或Val。

15、； 0018 B1独立选自Tyr、 Ser或Thr； 0019 C1独立选自Ala、 Ile、 Leu、 Phe或Val； 0020 D1独立选自Ser、 Gly或Ala； 0021 E1独立选自Val、 Ala、 Leu、 Asp、 Ser、 Met或Cys； 0022 X2为A2、 B2、 C2、 D2中的一种或几种组成的片段， 或没有氨基酸， 其中， 0023 A2独立选自Gly、 Trp、 Thr、 Ser或Cys； 0024 B2独立选自Ala、 Ile、 Leu、 Ser或Lys； 0025 C2独立选自Leu、 Phe、 Val或Arg； 0026 D2独立选自Asn、 Asp、。

16、 Glu或Gln。 0027 在本发明提供的实施例中， 多肽为线状多肽， 多肽的序列为Ser-Val-Arg-Thr， 多 肽编号为SEQIDNO： 1； 0028 或者为Ac-Ala-Arg-Thr-Asp-Pro-Ala-Met-His-Trp-Ser-Arg， 多肽编号为SEQID NO： 2； 0029 或者为Ser-Val-Arg-Thr-Asp-Pro-Ala-Met-His-Trp-Ser-Arg， 多肽编号为SEQ IDNO： 3； 0030 或者为Leu-Arg-Thr-Asp-Leu-Val-His-Asn-Ser-Leu-Val-Gln， 多肽编号为SEQ IDNO： 4。

17、； 0031 或者为Gly-Ala-Arg-Thr-Glu-Val-Pro-Phe-Leu-Thr-Ile-Phe， 多肽编号为SEQ IDNO： 5； 0032 或者为Ser-Ala-Ala-Ser-Arg-Thr-Ile-Asp-Met-Trp-Ala-Thr， 多肽编号为SEQ IDNO： 6； 0033 或者为Asp-Arg-Thr-Thr-His-Tyr-Tyr-Leu-Gly-Lys-Leu-Glu， 多肽编号为SEQ IDNO： 7； 0034 或者为Ser-Ala-Arg-Val-Ala-Ile-Glu-Tyr-Asn-Thr-Ala-Arg， 多肽编号为SEQ IDNO： 8。

18、； 0035 或者为Ile-Ser-Ala-Ser-Met-Arg-Thr-Thr-Met-Asn-Asn-Ser， 多肽编号为SEQ IDNO： 9； 0036 或者为Gly-Ala-Arg-Thr-Glu-Val-Pro-1-Nal-Leu-Thr-Ile-Phe， 多肽编号为SEQ IDNO： 10； 0037 或者为Cys-Arg-Thr-Ala-Pro-Met-Pro-His-Cys， 多肽编号为SEQIDNO： 11； 说明书 2/8 页 5 CN 106146617 A 5 0038 或者为Ac-Cys-Arg-Thr-Ala-Pro-Met-Pro-His-Cys， 多肽编号为。

19、SEQIDNO： 12。 0039 本发明还提供了一种如式I所示的多肽中两个或两个以上的氨基酸残基环化所得 到的多肽， 优选地， 环化通过二硫键或酰胺键形成。 但本领域技术人员认为可行的环化方式 均在本发明的保护范围之内。 0040 在本发明提供的实施例中， 环化通过二硫键形成。 0041 在本发明提供的实施例中， 环状多肽的序列为： 0042多肽编号为SEQIDNO： 13； 0043或者为多肽编号为SEQIDNO： 14； 0044或者为多肽编号为SEQIDNO： 15； 0045或者为多肽编号为SEQIDNO： 16； 0046或者为多肽编号为SEQIDNO： 17； 0047或者为多肽。

20、编号为SEQIDNO： 18； 0048或者为多肽编号为SEQIDNO： 19； 0049或者为多肽编号为SEQIDNO： 20。 0050 本发明还提供了一种如式I所示多肽的氨基酸序列中取代、 缺失或添加一个或多 个氨基酸残基所得到的多肽， 且该多肽为具有抑制WDR5与MLL1蛋白结合活性的多肽。 0051 本发明还提供了一种如式I所示多肽的氨基酸序列N末端被磷酸化、 酰胺化、 烷基 化、 、 泛素化、 聚乙二醇化修饰， 或氨基酸序列C末端被酯化、 酰胺化修饰所得到的多肽， 且该 多肽为具有抑制WDR5与MLL1蛋白结合活性的多肽。 0052 本发明还提供了一种如式I所示多肽的氨基酸序列中连。

21、接荧光标记或放射性标记 所得到的多肽， 优选地， 荧光标记为FITC或FAM。 但本领域技术人员认可的荧光标记均在本 发明的保护范围之内。 0053 本发明还提供了如式I所示多肽在制备抑制WDR5和MLL1蛋白结合活性、 抑制MLL1 蛋白复合物的甲基转移酶活性或治疗细胞增殖相关疾病药物中的应用。 0054 在本发明提供的实施例中， 细胞增殖相关疾病是癌症。 0055 在本发明提供的实施例中， 癌症为白血病。 0056 本发明还提供了一种药物组合物， 包括如式I所示的多肽。 0057 本发明提供了一种多肽及其应用和药物组合物。 该多肽如式I所示， 或其互变异构 体、 内消旋体、 外消旋体、 对。

22、映异构体、 非对映异构体及其混合物， 或其药学上可接受的盐以 及它的前药。 本发明具有如下有益效果： 0058 本发明SEQIDNO:120所示线性多肽和环肽包含了保守的RT或RV序列， IC50在 说明书 3/8 页 6 CN 106146617 A 6 0.8200 M之间， 其中一些多肽(SEQIDNO:13、 5、 7、 8、 10、 1214)可以在纳摩尔到较低 的微摩尔级别的浓度下抑制WDR5和MLL1蛋白结合的活性， 具备潜在的生物医药开发价值； 0059 本发明提供的多肽可抑制MLL1蛋白复合物甲基转移酶活性， 尤其是SEQIDNO:3、 SEQIDNO:5、 SEQIDNO:。

23、7、 SEQIDNO:8、 SEQIDNO:13所示多肽可显著抑制MLL1蛋白复 合物甲基转移酶活性； 0060 本发明提供的多肽可有效抑制肿瘤细胞的生长， 具备潜在的生物医药开发价值。 附图说明 0061 图1示不同多肽化合物的对MLL蛋白复合物甲基化转移酶的抑制百分比； 0062 图2示多肽化合物SEQIDNO.10对肿瘤细胞活性的抑制作用。 具体实施方式 0063 本发明公开了一种多肽及其应用和药物组合物， 本领域技术人员可以借鉴本文内 容， 适当改进工艺参数实现。 特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术人员 来说是显而易见的， 它们都被视为包括在本发明。 本发明的方法及应。

24、用已经通过较佳实施 例进行了描述， 相关人员明显能在不脱离本发明内容、 精神和范围内对本文所述的方法和 应用进行改动或适当变更与组合， 来实现和应用本发明技术。 0064 本发明提供的多肽及其应用和药物组合物中所用氨基酸原料或药物均可由市场 购得。 其中部分试剂名称与缩写的对应如下： 0065 DMF： N,N-二甲基甲酰胺； 0066 DCM： 二氯甲烷； 0067 DIC： N,N-二异丙基碳二亚胺； 0068 HOBt： 1-羟基苯并三氮唑； 0069 PIP： 哌啶； 0070 Boc： 叔丁氧羰基； 0071 Pbf： 2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基； 0072 tB。

25、u： 叔丁基； 0073 Acm： 乙酰氨甲基。 0074 下面结合实施例， 进一步阐述本发明： 0075 实施例1线性多肽化合物的合成 0076 WDR5的抑制剂SEQIDNO:2的氨基酸序列为： Ac-Ala-Arg-Thr-Asp-Pro-Ala-Met- His-Trp-Ser-Arg采用Fmoc固相合成法按下列步骤合成。 具体步骤如下： 0077 称取714mg替代度为0.28mmol/g的RinkAmide-MBHA树脂于固相反应器中， 加入 DCM溶胀30min， 随后加入20PIP/DMF溶液脱保护2次， 分别反应5min和20min。 分别用DCM与 DMF洗涤多次， 抽干。。

26、 向固相反应器中加入Fmoc-Arg(Pbf)-OH(649mg， 1mmol),HOBt(135mg， 1mmol)， DIC(126mg， 1mmol)， DMF(6mL)， 室温反应2h。 将树脂洗涤抽干， 即得Fmoc-Arg(Pbf)- RinkAmide-MBHA树脂。 偶联完成后使用Kaiser测试检测， 检测通过后进行下一步反应。 加 入20PIP/DMF溶液反应分别为5+20min脱除Fmoc保护基， 分别用DCM， 与DMF洗涤3次， 得 NH2-Arg(Pbf)-RinkAmide-MBHA树脂。 说明书 4/8 页 7 CN 106146617 A 7 0078 向固相。

27、反应器中加入Fmoc-Ser(tBu)-OH(383mg， 1mmol)， HOBt(135mg， 1mmol)， DIC (126mg， 1mmol)， DMF(6mL)， 室温反应2h。 偶联完成后使用Kaiser测试检测， 检测通过后进行 下一步反应。 将树脂洗涤抽干， 即得Fmoc-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-RinkAmide-MBHA树脂。 以此 方法依次偶联剩余的氨基酸， 得到侧链全保护多肽树脂。 0079 于固相反应器中加入醋酐:DIEA:DCM(1:1:1)的混合溶液6mL。 反应30分钟。 分别用 DCM与DMF洗涤多次， 抽干。 0080 向固相反应器中加入冷冻的。

28、8mL裂解液(体积比为三氟乙酸:苯硫醚:水95:2.5: 2.5)， 室温反应2h。 裂解反应结束， 过滤树脂， 二氯甲烷洗涤树脂， 合并滤液和洗液， 旋蒸浓 缩。 加入10mL冷冻的乙醚溶液， 析出白色沉淀， 离心后收集白色固体， 真空干燥得粗肽 175mg。 粗肽使用制备型HPLC纯化， 将制备得到的液体冷冻干燥得到目标化合物MS(m/z): 1368.6346M+H+。 0081 本实施例中WDR5蛋白线性多肽抑制剂的氨基酸序列如表1所示， 除SEQIDNO:2以 外的序列按照上述方法合成。 0082 表1WDR5蛋白线性多肽抑制剂的氨基酸序列 0083 0084 实施例2环状多肽化合物。

29、的合成 0085 WDR5的环肽抑制剂SEQIDNO:13的氨基酸序列为： Cyclo(Cys-Arg-Thr-Ala-Pro- Met-Pro-His-Cys)采用Fmoc固相合成法按下列步骤合成。 0086 称取714mg替代度为0.28mmol/g的RinkAmide-MBHA树脂于固相反应器中， 加入 DCM溶胀30min， 随后加入20PIP/DMF溶液脱保护2次， 分别反应5min和20min。 分别用DCM与 DMF洗涤多次， 抽干。 向固相反应器中加入Fmoc-Cys(Acm)-OH(414mg， 1mmol),HOBt(135mg， 1mmol)， DIC(126mg， 1m。

30、mol)， DMF(6mL)， 室温反应2h。 将树脂洗涤抽干， 即得Fmoc-Cys(Acm)- RinkAmide-MBHA树脂。 偶联完成后使用Kaiser测试检测， 检测通过后进行下一步反应。 0087 加入20PIP/DMF溶液反应5+20min脱除Fmoc保护基， 分别用DCM， 与DMF洗涤3次， 得NH2-Cys(Acm)RinkAmide-MBHA树脂。 以此方法依次偶联剩余的氨基酸， 得到侧链全保护 多肽树脂。 0088 向固相反应器中加入DMF(2mL),碘粒(506mg,2mmol)的DMF/H2O4： 1(3mL)溶液， 室 温反应40min。 分别用DMF洗涤三次，。

31、 2的抗化血酸的DMF溶液洗涤两次， DCM与DMF洗涤多 说明书 5/8 页 8 CN 106146617 A 8 次， 抽干。 0089 向固相反应器中加入冷冻的8mL裂解液(体积比为三氟乙酸:苯硫醚:水95:2.5: 2.5)， 室温反应2h。 裂解反应结束， 过滤树脂， 二氯甲烷洗涤树脂， 合并滤液和洗液， 旋蒸浓 缩。 加入冷冻的乙醚溶液， 析出白色沉淀， 离心后收集白色固体， 冷冻干燥得粗肽。 0090 粗肽使用制备型HPLC纯化， 将制备得到的液体冷冻干燥得到目标化合物MS(m/z): 1012.4082M+H+。 0091 WDR5蛋白环状多肽抑制剂的氨基酸序列如表2所示， 除。

32、SEQIDNO:13序列外的序列 按照上述方法合成。 0092 表2WDR5蛋白环状多肽抑制剂的氨基酸序列 0093 0094 实施例3生物学活性 0095 1.活性测试荧光偏振竞争实验 0096 荧光极化实验使用黑色96孔板(Greiner,Sigma)， 荧光极化值在微孔板检测器上 检测。 实验中， 先加入稀释于PBS缓冲溶液中的500nMFITC标记的来源于MLL3win片段的多 肽(荧光探针)和不同浓度的WDR5蛋白(1nM-10 M)， 荧光探针与蛋白结合之后， 使总体积为 100 L。 铝箔纸封好后， 室温避光条件下孵育3小时。 荧光偏振竞争实验检测多肽分子与WDR5 蛋白的结合能。

33、力时， 使用500nMFITC标记的来源于MLL3的探针分子与500nM的WDR5蛋白结 合后与不同浓度的抑制剂多肽分子混合。 活性数据用IC50表示。 IC50定义为能够50竞争掉 荧光探针分子与WDR5蛋白结合时所需要的多肽分子浓度。 结果见表3。 0097 表3本发明多肽分子的活性 说明书 6/8 页 9 CN 106146617 A 9 0098 0099 由表3可知， SEQIDNO:120所示线性多肽和环肽包含了保守的RT序列。 其中一 些多肽可以在纳摩尔至较低的微摩尔级别的浓度下抑制WDR5和MLL1蛋白的结合， 具备潜在 的生物医药开发价值。 0100 2.甲基转移酶活性实验 。

34、0101 甲基转移酶活性实验可测试抑制剂多肽对MLL1蛋白复合物甲基转移酶活性的影 响。 挑选本申请中有代表性的数条抑制剂多肽进一步在该实验中进行了测试。 实验中， 7 g 的MLL蛋白复合物( MLL1 ,WDR5 ,RbBP5 ,Ash2L )与250MS-腺苷基甲硫氨酸( S- adenosylmethionine， SAM)以及10 M的组蛋白H3多肽(N端1-20氨基酸)， 不同浓度的抑制剂 多肽(0-1mM)在15的缓冲液(50mMTris-HCl(pH9.0)， 200mMNaCl， 3mMDTT， 1 M氯化锌， 5甘油， pH9.0)中孵育。 反应12小时后， 用0.5的三氟。

35、乙酸溶液终止。 终止后的混合溶液 用 -氰基-4-羟基肉桂酸( -Cyano-4-hydroxycinnamicacid， CHCA)稀释至四分之一。 使用 MALDI-TOF质谱(BrukerAutoFlexmassspectrometer)检测终止液的分子量。 不同多肽的 甲基转移酶活性实验结果见图1。 图1表示不同化合物对MLL复合物甲基化转移酶的抑制百 分比。 0102 由图1可知， SEQIDNO:3、 SEQIDNO:5、 SEQIDNO:7、 SEQIDNO:8、 SEQIDNO: 13都具有较好的抑制蛋白复合物甲基化的活性， 说明了这些抑制剂多肽可以抑制MLL1复合 说明书 7。

36、/8 页 10 CN 106146617 A 10 物的酶活性， 所得结果与荧光偏振竞争实验一致。 0103 3.肿瘤细胞活性实验 0104 本实验选择与MLL1蛋白活性密切相关的急性淋巴细胞白血病细胞系RS4； 11进行肿 瘤细胞的活性实验。 实验中， RS4； 11细胞以每孔5000个布板于96孔板， 后加入不同浓度的抑 制剂多肽(SEQIDNO:10)。 于37、 5CO2浓度下培养96小时， 取出并加入 进行测试。 实验结果如图2所示。 0105 图2的实验结果显示， 多肽SEQIDNO.10在25 M的浓度下即可抑制肿瘤细胞的活 性。 说明抑制剂多肽SEQIDNO.10具有潜在的抑制。

37、肿瘤生长的作用。 0106 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。 说明书 8/8 页 11 CN 106146617 A 11 0001 序列表 1/7 页 12 CN 106146617 A 12 0002 序列表 2/7 页 13 CN 106146617 A 13 0003 序列表 3/7 页 14 CN 106146617 A 14 0004 序列表 4/7 页 15 CN 106146617 A 15 0005 序列表 5/7 页 16 CN 106146617 A 16 0006 序列表 6/7 页 17 CN 106146617 A 17 0007 序列表 7/7 页 18 CN 106146617 A 18 图1 图2 说明书附图 1/1 页 19 CN 106146617 A 19 。