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1、(10)申请公布号 CN 102558169 A (43)申请公布日 2012.07.11 CN 102558169 A *CN102558169A* (21)申请号 201010593706.5 (22)申请日 2010.12.10 C07D 453/04(2006.01) A61P 33/06(2006.01) A61P 9/06(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (71)申请人 江苏斯威森生物医药工程研究中心 有限公司 地址 215634 江苏省苏州市张家港保税区广 东路 7 号 D 栋 3 楼 (72)发明人 彭学东 王正濂 龚福春 张梅 (54) 发明名称 从。
2、金鸡纳树皮中高效提取分离纯化系列金鸡 纳生物碱的工业化生产方法 (57) 摘要 本发明以金鸡纳树皮为原料制备系列有抗疟 疾、 抗心律失常等作用的金鸡纳生物碱。 本方法应 用先进的超声细胞破碎提取、 简单的萃取分离和 高纯度柱纯化工艺。分别得到纯度均大于 99.5 的硫酸奎宁、 奎尼丁、 辛可尼丁和辛可宁。本方法 相比原有生产方法有更高的提取回收率、 工艺流 程环保低碳、 更加适用于 GMP 级别原料药和食品 添加剂的工业化大生产。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3。
3、 页 附图 2 页 1/1 页 2 1. 一种制备金鸡纳系列生物碱的方法, 其特征为以金鸡纳树皮为原料, 应用了先进高 效的提取、 分离和纯化技术。 2. 根据权利 1 要求所述方法, 金鸡纳树皮干燥、 粉碎过 60 目筛, 以浓度为 3强碱 ( 氢 氧化钠、 氢氧化钾或者氢氧化钙 ) 溶液浸泡, 以超声破碎金鸡纳树皮组织细胞, 再过滤、 压 干得到树皮粉。 3. 根据权利 1 和 2 要求所述方法, 其特征在于以工业甲醇或者工业乙醇溶剂提取金鸡 纳树皮粉, 过滤, 加压浓缩成流浸膏。 4. 根据权利 3 要求所述方法, 其特征在于先将流浸膏充分分散于水中, 再以浓硫酸调 pH 值至 3.5,。
4、 以 1/2 体积二氯乙烷 ( 二氯甲烷, 三氯甲烷等低碳卤代烃 ) 萃取除去脂溶性杂 质。 5. 根据权利 4 要求所述方法, 其特征在于将萃取得到水相以浓度为 5强碱 ( 氢氧化 钠、 氢氧化钾或者氢氧化钙)溶液调pH值至7.0, 析出硫酸奎宁, 过滤得粗晶, 甲醇重结晶得 硫酸奎宁精品。 6. 根据权利 5 要求所述方法, 其特征在于将 5 得到滤液继续以浓氨水调至 pH 值 12, 析 出晶体, 过滤得其他金鸡纳总生物碱。 7. 根据权利 6 要求所述方法, 其特征在于将金鸡纳总生物碱柱层析, 以石油醚乙酸 乙酯 9 1 至 7 3 梯度洗脱, 依次分别得到主要产物奎尼丁、 辛可尼丁和。
5、辛可宁。 权 利 要 求 书 CN 102558169 A 2 1/3 页 3 从金鸡纳树皮中高效提取分离纯化系列金鸡纳生物碱的工 业化生产方法 技术领域 0001 本发明涉及一种系列金鸡纳生物碱从非洲和东南亚产金鸡纳树皮中的高效分离 纯化方法。 金鸡纳系列生物碱有如治疗疟疾、 心律失常和抗炎等广泛的生理和药理活性。 本 提方法应用先进的超声组织细胞破碎提取、 简单的萃取分离和高纯度柱层析纯化工艺。 背景技术 0002 金鸡纳树又名鸡纳树、 奎宁树、 金鸡勒。约包含 25 种的物种, 属常绿灌木或小乔 木, 当中有些是小型灌木, 有些是大型乔木, 高度约 2.5-3m, 原产地源自南美安第斯山。
6、脉。 金鸡纳属中尚有红金鸡纳树 (C.succirubra)、 药金鸡纳树 (C.officinalis) 和西黄金鸡纳 树 (C.calisaya) 等种, 金鸡纳树的干皮、 根皮、 枝皮及种子, 含有约 26 种生物碱, 总称为金 鸡纳生物碱。其中含量最多且在医药上最重要的是奎宁, 其次是辛可宁、 辛可尼丁、 奎尼丁 (结构见说明书附图1)等, 其余在树皮中的含率很低。 金鸡纳生物碱中, 颇多互为立体异构 体的, 如 : 奎宁和奎尼丁, 辛可宁和辛可尼丁, 辛可亭和辛查米丁, 表奎宁和表奎尼丁, 氢奎 宁和氢奎尼丁等。 所以, 目前在不对称合成工业上的应用也越来越多。 此外, 还有辛可尼辛。
7、, 奎尼辛, 铜色树碱, 奎胺, 辛可那明, 奎尼酮, 阿立新以及杷日素, 红金鸡纳碱, 甲基红金鸡纳 碱, 康奎那明, 枯斯考尼丁, 二康奎宁等。 目前, 含金鸡纳生物碱生物量最高的一般生长在非 洲和东南亚, 其中尤其以印尼最多。 0003 虽然金鸡纳生物碱, 如奎宁早在 1820 年就已经提取分离得到, 但是关于奎宁生物 碱的提取分离和其他金鸡纳生物碱的提取分离方法的报道并不多。已有的报道主要有 : 蒲 含林等 (CN200810219041.4) 报道的方法为, 以酸水浸泡金鸡纳树皮提取总生物碱, 再以离 子交换树脂富集纯化奎宁, 其他生物碱分离方法未报道。肖崇厚等 ( 中药化学, 上海。
8、科技出 版社, 1987, 75) 报道方法为以消石灰溶液干法混匀树皮, 以甲苯或者汽油为溶剂提取, 再以 稀酸调以不同pH值梯度萃取、 分离和沉淀法纯化得到奎宁、 奎尼丁、 辛可宁和辛可尼丁等。 0004 目前金鸡纳生物碱分离纯化技术主要以下一些缺点 : 0005 (1) 大量使用强碱, 会破坏活性成分, 降低包括奎宁、 奎尼丁、 辛可宁等在内的生物 碱的回收率 ; 而碱液未能完全与金鸡纳树皮粉末混匀, 大量的螯合型生物碱不能被完全提 取出, 也会造成生物碱回收率低。 0006 (2) 未回收利用强碱性化合物的环境污染, 使用苯等毒性大有机溶剂, 浓缩大体积 含水溶剂高能耗等都有不环保、 不。
9、低碳的缺点。 0007 (3) 已报道技术并未对其他生物碱的提取、 分离和纯化的具体实施做深入研究, 没 有回收率和纯度等重要工艺和质量参数, 基本上不适合工业化大生产的需要, 所以应用价 值不大。 0008 本发明针对以上工艺的不足之处进行有效的研究和提高, 其目的旨在实现从金鸡 纳树皮中高效分离纯化系列金鸡纳生物碱。 0009 本发明与上述方法之不同特征之处在于 : (1) 应用高效的超声细胞破碎技术与溶 说 明 书 CN 102558169 A 3 2/3 页 4 剂提取法相结合, 大大提高金鸡纳系列生物碱的提取回收率 ; (2) 对粗提液的处理采用设 备简单、 操作简洁的萃取和结晶工艺。
10、 ; (3) 奎宁生物碱精品和其他金鸡纳生物碱纯化都采 用柱层析法, 得到含量高、 质量好、 符合药典要求的原料。 发明内容 0010 本发明需要解决以往技术中金鸡纳生物碱提取回收率低、 污染大、 能耗高、 除奎宁 外其他系列生物碱难以工业化大生产的缺点, 旨在建立高效、 低成本、 简洁的从金鸡纳树皮 中高效提取分离纯化系列金鸡纳生物碱的工业化工艺路线。 0011 本发明的目的通过以下技术方案实现 ( 工艺流程见说明书附图 2) : 0012 以金鸡纳树皮为原料, 经过粉碎、 过筛、 碱液浸泡、 超声破碎细胞、 甲醇提取、 浓缩、 梯度萃取、 柱层析和结晶重结晶等, 得到纯度高、 质量好的硫酸。
11、奎宁、 奎尼丁、 辛可宁和辛可 尼丁。具体步骤如下 : 0013 1、 将含水量低于 3 ( 否则先晒干 ) 的金鸡纳树皮粉碎, 过 60 目筛得到金鸡纳树 皮粉末。以 3的强碱溶液浸泡, 再超声破碎细胞, 过滤压干得金鸡纳树皮粉。碱液可回收 循环利用。 0014 2、 将上步得到金鸡纳树皮粉以 8 倍量工业甲醇提取 2-3 遍, 以 HPLC 检测, 奎宁生 物碱提取率 95以上。过滤, 浓缩, 得金鸡纳树皮甲醇提取流浸膏, 甲醇回收循环利用。 0015 3、 将上步得到金鸡纳树皮甲醇提取流浸膏分散于2倍水中, 加浓硫酸调pH值至约 3.5, 再以 1/2 体积二氯乙烷萃取 1 次, 除去脂。
12、溶性杂质。有机相回收二氯乙烷循环利用, 水 相先以活性炭脱色, 再以 5强碱溶液调 pH 值至 7.0, 析奎宁粗晶, 冷却至室温过滤。重结 晶得到硫酸奎宁精品, 母液待处理。 0016 4、 将上步母液继续以浓氨水调至 pH 值 12, 母液继续析出沉淀, 过滤, 得其他总生 物碱。将该总生物碱柱层析主要产物得到奎尼丁、 辛可尼丁和辛可宁。 0017 本发明提供了从金鸡纳树皮中高效分离纯化系列金鸡纳生物碱的工业化工艺路 线, 该工艺路线与文献报道的方法相比, 有更好的提取回收率、 更环保低碳以及更适用于工 业化大生产。 附图说明 : 0018 图 1 主要金鸡纳生物碱结构式 0019 图 2。
13、 金鸡纳系列生物碱制备工艺流程图 具体实施方式 : 0020 在下面的实施例中进一步说明了本发明, 这并不限制本发明的范围。 0021 实施例 1 奎宁生物碱的制备 0022 取水分含量小于 3的金鸡纳树皮, 粉碎过 60 目筛。称取金鸡纳树皮粉 2kg, 5 的氢氧化钠溶液 5L 浸泡, 超声破碎细胞 1h。过滤, 压干得金鸡纳树皮粉, 碱液回收循环利 用。将压干之金鸡纳树皮粉至于多功能提取罐, 以 16L 工业甲醇提取两次, 每次 3.5h(HPLC 检测奎宁生物碱提取回收率, 大于 95即可, 否则再以 8L 甲醇提取 2h), 过滤浓缩, 得金鸡 纳树皮甲醇提取流浸膏, 甲醇回收循环利。
14、用。将上述流浸膏分散于 2L 水中, 以浓硫酸调 pH 说 明 书 CN 102558169 A 4 3/3 页 5 值至 3.5, 再以 1L 二氯乙烷萃取 1 次。有机相回收二氯乙烷循环利用, 水相先以活性炭脱 色, 再以 5氢氧化钠溶液调 pH 值至 7.0, 析出硫酸奎宁, 冷却至室温过滤得硫酸奎宁粗 晶 14.3kg, 母液待处理。粗晶以甲醇重结晶得到硫酸奎宁精品 12.8kg, HPLC 检测含量大于 99.5。 0023 实施例 2 奎尼丁、 辛可尼丁和辛可宁的制备 0024 将上步母液继续以浓氨水调至 pH 值 12, 母液继续析出新的沉淀, 过滤, 得其他总 生物碱 4.6kg。将该总生物碱柱层析, 以石油醚乙酸乙酯 9 1 至 7 3 梯度洗脱, 依 次分别得到主要产物奎尼丁1.6kg、 辛可尼丁1.0kg和辛可宁1.2kg。 HPLC检测含量均大于 99.5。 说 明 书 CN 102558169 A 5 1/2 页 6 图 1 说 明 书 附 图 CN 102558169 A 6 2/2 页 7 图 2 说 明 书 附 图 CN 102558169 A 7 。