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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611102212.6 (22)申请日 2016.12.05 (71)申请人 中国科学院大连化学物理研究所 地址 116023 辽宁省大连市中山路457号 (72)发明人 秦建华朱玉娟王丽 (74)专利代理机构 沈阳晨创科技专利代理有限 责任公司 21001 代理人 樊南星 (51)Int.Cl. C12M 3/02(2006.01) C12M 1/22(2006.01) (54)发明名称 一种低粘附培养板的制备方法 (57)摘要 一种低粘附培养板的制备方法： 将聚二甲基 。
2、硅氧烷单体与引发剂混合， 并均匀涂布到细胞培 养板或培养皿底面， 待胶体凝固后进行灭菌即可 制得低粘附培养板； 聚二甲基硅氧烷单体与引发 剂的混合比例为(550)： 1； 灭菌方法为： 紫外灭 菌或者高温高压灭菌。 本发明首次将聚二甲基硅 氧烷材料应用于细胞培养所需的低粘附板的制 备。 其可根据实验需求， 灵活制备各种低粘附的 培养板， 且成本低、 可重复使用。 本发明具有广阔 的应用前景。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 108148756 A 2018.06.12 CN 108148756 A 1.一种低粘附培养板的制备方法， 其特征在于： 将聚二甲基硅氧烷单体与引发剂混合， 。
3、并均匀涂布到细胞培养板或培养皿底面， 待胶体凝固后进行灭菌即可制得低粘附培养板； 聚二甲基硅氧烷单体与引发剂的混合比例为(550)： 1； 灭菌方法为： 紫外灭菌或者高温高 压灭菌。 2.按照权利要求1所述低粘附培养板的制备方法， 其特征在于： 将聚二甲基硅氧烷单体与引发剂混合后并均匀涂布到细胞培养板或培养皿底面后， 要 求进行抽真空操作除去气泡； 去除气泡后， 需将其放置在70-90的烘箱中20-30分钟以便 于胶体凝固。 3.按照权利要求1或2所述新型低粘附培养板的制备方法， 其特征在于： 在低粘附培养 板的制备之前， 针对前次使用完毕后的细胞培养板或培养皿， 用灭菌的磷酸缓冲盐溶液清 洗。
4、聚二甲基硅氧烷PDMS底面， 以便在去除残留的细胞碎片和培养基成分之后备用。 4.按照权利要求3所述一种新型低粘附培养板的制备方法， 其特征在于： 聚二甲基硅氧 烷表面在细胞培养之前进行修饰， 以便降低或增强其表面的疏水性质。 权利要求书 1/1 页 2 CN 108148756 A 2 一种低粘附培养板的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及细胞培养板的结构设计和应用技术领域， 特别提供了一种用于各种悬 浮细胞、 细胞球的的悬浮培养的低粘附培养板的制备方法。 背景技术 0002 实验室细胞培养经常涉及细胞悬浮培养。 细胞悬浮培养是指将游离的单细胞或细 胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基。
5、中进行培养的方法。 既可适用于各种原代细胞 或者细胞系， 又可使用于各种原代或干细胞分化过程中的细胞团。 但是目前市场上低粘附 的培养板品种单一、 选择范围很小， 很难满足各种复杂、 精细、 灵活的实验需求。 0003 聚二甲基硅氧烷PDMS(polydimethylsiloxane)， 因其成本低， 使用简单， 同硅片之 间具有良好的粘附性， 而且具有良好的化学惰性等特点， 成为一种广泛应用于微流控等领 域的聚合物材料， 简称有机硅。 PDMS作为一种高分子有机硅化合物， 具有光学透明， 且在一 般情况下， 被认为是惰性， 无毒， 不易燃。 PDMS是最广泛使用的以硅为基础的有机聚合物材 料。
6、， 其运用包括在生物微机电中的微流道系统、 填缝剂、 润滑剂、 隐形眼镜。 0004 液态时的二甲基硅氧烷为黏稠液体， 称做硅油， 是一种具有不同聚合度链状结构 的有机硅氧烷混合物， 其端基和侧基全为烃基(如甲基、 乙基、 苯基等)， 为无色、 无味、 无毒、 不易挥发的液体。 固态的二甲基硅氧烷为一种硅胶， 无毒、 疏水性和防水性， 惰性物质， 且为 非易燃性、 透明弹性体。 二甲基硅氧烷的制备流程简便且快速， 材料成本远低于硅晶圆， 且 其透光性良好、 生物相容性佳、 易与多种材质室温接合、 以及因为低杨氏模量导致的结构高 弹性等。 此外， PDMS易于在空气的界面上浓缩， 使得材料有疏水。
7、的自保护涂层， 可用于生产 纤维， 提高防污防垢性。 0005 人们迫切希望获得一种技术效果优良的低粘附培养板的制备方法。 发明内容 0006 本发明的目的是提供一种技术效果优良的低粘附培养板的制备方法。 该方法主要 基于PDMS材料的疏水性特质， 制作方法简单灵活， 可应用于各种细胞或细胞团的长时间悬 浮培养， 此外还可以重复使用， 降低成本， 具有广阔的应用前景。 0007 本发明提供了一种低粘附培养板的制备方法， 低粘附培养板应用于各种悬浮细 胞、 细胞球的悬浮培养； 其特征在于： 将聚二甲基硅氧烷PDMS(polydimethylsiloxane)单体 与引发剂按照相应比例混合， 并均。
8、匀涂布到细胞培养板或培养皿底面， 待胶体凝固后进行 灭菌即可制得低粘附培养板； 0008 聚二甲基硅氧烷PDMS单体与引发剂的混合比例为(550)： 1； 0009 灭菌方法为： 紫外灭菌或者高温高压灭菌。 0010 所述低粘附培养板的制备方法， 还有下述优选内容要求： 0011 要修饰的培养材料可根据需求灵活选取； 0012 聚二甲基硅氧烷PDMS聚合物的使用量决定了底面修饰的厚度， 因此其使用量可根 说明书 1/3 页 3 CN 108148756 A 3 据实际需求决定； 0013 将PDMS聚合物均匀分布到要修饰的材料底面的方法非常灵活， 可通过静置使其均 匀分布， 也可使用匀胶器等设。
9、备； 0014 将聚二甲基硅氧烷PDMS(polydimethylsiloxane)单体与引发剂按照相应比例混 合后并均匀涂布到细胞培养板或培养皿底面后， 要求进行抽真空操作除去气泡； 去除气泡 后， 需将其放置在70-90的烘箱中20-30分钟以便于胶体凝固。 0015 在低粘附培养板的制备之前， 针对前次使用完毕后的细胞培养板或培养皿， 用灭 菌的磷酸缓冲盐溶液PBS清洗聚二甲基硅氧烷PDMS底面， 以便在去除残留的细胞碎片和培 养基成分之后备用， 并且下次使用前无需灭菌。 0016 聚二甲基硅氧烷PDMS的表面在细胞培养之前根据实验需求进行相关修饰， 以便降 低或增强其表面的疏水性质。 。
10、0017 聚二甲基硅氧烷PDMS聚合物的使用量决定了底面修饰的厚度， 因此其使用量可根 据实际需求决定。 0018 将PDMS聚合物均匀分布到要修饰的材料底面的方法非常灵活， 可通过静置使其均 匀分布， 也可使用匀胶器等设备。 0019 本发明首次将聚二甲基硅氧烷PDMS材料应用于细胞培养所需的低粘附板的制备。 其可根据实验需求， 灵活制备各种低粘附的培养板， 且成本低、 可重复使用。 0020 本发明主要基于聚二甲基硅氧烷PDMS材料的疏水性特质， 制作方法简单灵活， 可 应用于各种细胞或细胞团的长时间悬浮培养， 此外还可以重复使用， 降低成本， 具有广阔的 应用前景。 附图说明 0021 。
11、下面结合附图及实施方式对本发明作进一步详细的说明： 0022 图1细胞团在应用于贴壁培养的培养皿与聚二甲基硅氧烷PDMS低粘附培养皿中的 生长状况示意； 0023 图2在应用于贴壁培养的培养皿与PDMS低粘附培养皿中培养一天后悬浮细胞团的 比例对照图。 具体实施方式 0024 图1为细胞团在应用于贴壁培养的培养皿与聚二甲基硅氧烷PDMS低粘附培养皿中 的生长状况示意。 自带荧光的胶质母细胞瘤细胞系GFP-U87成球后， 于贴壁培养的培养皿与 PDMS低粘附培养皿中生长一天的状况； 0025 依据图2， 统计GFP-U87细胞团在贴壁培养的培养皿与PDMS低粘附培养皿中生长一 天后贴壁的细胞团比。
12、例， 两组具有显著差异。 0026 实施例1 0027 一种低粘附培养板的制备方法， 新型低粘附培养板应用于各种悬浮细胞、 细胞球 的悬浮培养； 将聚二甲基硅氧烷PDMS(polydimethylsiloxane)单体与引发剂按照相应比例 混合， 并均匀涂布到细胞培养板或培养皿底面， 待胶体凝固后进行灭菌即可制得低粘附培 养板； 聚二甲基硅氧烷PDMS单体与引发剂的混合比例为(550)： 1； 灭菌方法为： 紫外灭菌 说明书 2/3 页 4 CN 108148756 A 4 或者高温高压灭菌。 0028 所述低粘附培养板的制备方法， 还有下述内容要求： 0029 要修饰的培养材料可根据需求灵活。
13、选取； 0030 聚二甲基硅氧烷PDMS聚合物的使用量决定了底面修饰的厚度， 因此其使用量可根 据实际需求决定； 0031 将PDMS聚合物均匀分布到要修饰的材料底面的方法非常灵活， 可通过静置使其均 匀分布， 也可使用匀胶器等设备； 0032 将聚二甲基硅氧烷PDMS(polydimethylsiloxane)单体与引发剂按照相应比例混 合后并均匀涂布到细胞培养板或培养皿底面后， 要求进行抽真空操作除去气泡； 去除气泡 后， 需将其放置在70-90的烘箱中20-30分钟以便于胶体凝固。 0033 在低粘附培养板的制备之前， 针对前次使用完毕后的细胞培养板或培养皿， 用灭 菌的磷酸缓冲盐溶液P。
14、BS清洗聚二甲基硅氧烷PDMS底面， 以便在去除残留的细胞碎片和培 养基成分之后备用， 并且下次使用前无需灭菌。 0034 聚二甲基硅氧烷PDMS的表面在细胞培养之前根据实验需求进行相关修饰， 以便降 低或增强其表面的疏水性质。 0035 聚二甲基硅氧烷PDMS聚合物的使用量决定了底面修饰的厚度， 因此其使用量可根 据实际需求决定。 0036 将PDMS聚合物均匀分布到要修饰的材料底面的方法非常灵活， 可通过静置使其均 匀分布， 也可使用匀胶器等设备。 0037 本实施例首次将聚二甲基硅氧烷PDMS材料应用于细胞培养所需的低粘附板的制 备。 其可根据实验需求， 灵活制备各种低粘附的培养板， 且。
15、成本低、 可重复使用。 本实施例主 要基于聚二甲基硅氧烷PDMS材料的疏水性特质， 制作方法简单灵活， 可应用于各种细胞或 细胞团的长时间悬浮培养， 此外还可以重复使用， 降低成本， 具有广阔的应用前景。 0038 实施例2 0039 低粘附六孔板的制备 0040 首先将PDMS单体与引发剂以10:1的比例混匀。 用枪头吸取1-2ml聚合物至六孔板 内， 左右摇晃孔板， 是聚合物完全覆盖整个孔板内部。 将孔板进行抽真空处理10分钟， 去除 气泡。 待气泡去除后， 将打开孔板盖子， 将孔板下层部分放置到60烘箱内20分钟， 使聚合 物凝固。 使用前将孔板放置到紫外灯下照射30分钟， 杀菌。 即可。
16、使用。 0041 实施例3 0042 在贴壁培养的培养皿(对照组)与PDMS低粘附培养皿中悬浮培养GFP-U87细胞团。 GFP-U87细胞是自带荧光的胶质母细胞瘤细胞系。 首先将制备好的U87细胞团转移至贴壁培 养的培养皿或PDMS低粘附培养皿中， 所用培养基为低糖DMEM， 具体成分为DMEM， 占总体积 10血清， 占总体积1GlutaMAX(100)和占总体积1penicillin-streptomycin(100 )。 U87细胞团的生长状况， 如图1所示， 标尺200 m。 悬浮细胞团的比例统计结果如图2所 示。 结果均表明PDMS低粘附板有效维持细胞团的悬浮培养状态。 说明书 3/3 页 5 CN 108148756 A 5 图1 图2 说明书附图 1/1 页 6 CN 108148756 A 6 。