技术领域
本发明涉及一种猪去氧胆酸的精制方法，具体的是一种由熔点为170℃以上的猪去氧胆 酸粗品制备无腥味的、高纯度的猪去氧胆酸的方法，属于生物医药领域。
背景技术
猪去氧胆酸（Chenodeoxycholic Acid，HDCA）是广泛存在于动物胆汁中的一种生化物质， 含量为0.1%～0.2%，化学名称为3α,6α-二羟基-5β-胆烷酸，分子式C24H40O4，分子量为392.58， 在乙醇中易溶，丙酮中微溶，在乙酸乙酯、氯仿或乙醚中极微溶解，在水中几乎不溶。HDCA 具有降血脂、镇痉和祛痰的作用，临床上用于治疗高血脂症、动脉粥样硬化症、气管炎、小 儿病毒性上呼吸道炎症，以及由肝胆疾病引起的消化不良；对百日咳菌、白喉杆菌、金黄色 葡萄球菌等有一定的抑制作用；作为清开灵注射剂中的有效成分，经临床观察，对急性白血 病的治疗有良好作用，体外实验证明HDCA具有诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖分裂的作用。
HDCA是人工牛黄配方的重要原料，其产品质量要求是熔点在170℃以上。清开灵制剂 中HDCA是主要成分之一，其质量要求为熔点在190℃以上。并且，市售较纯一点的HDCA 均有一定的腥味，标准号WS-10001-（HD-0882）-2002规定猪去氧胆酸的性状为：白色或类 白色的粉末；无臭或微腥，味微苦。经过大量研究，本发明的发明人发现高纯度的HDCA是 无腥味的，含腥味HDCA不但影响患者顺应性，还可能会带来一定的注射过敏反应。
中国专利公开号CN101037463A（公开日2007-09-19）利用不同胆汁酸甲酯-苯加成物在 苯中的不同溶解度，将HDCA转化为猪去氧胆酸甲酯-苯加成物后碱分解，调节pH，沉淀， 得HDCA纯品（熔点为197-198.2℃，纯度＞99%）；CN102838647A（公开日2012-12-26）将 粗HDCA转化为粗猪去氧胆酸镁后，酸化、结晶，获得HDCA纯品（纯度＞99%，熔点 199-200℃）；CN102617689A（公开日2012-08-01）将HDCA粗品用氨水溶解过滤去除不溶 性杂质，乙酸乙酯除去脂溶性物质，酸化，析晶，过滤，水洗，干燥，得HDCA纯品（纯度 ≥99.8%，熔点＞197.5℃）；CN102775459A（公开日2012-11-14）将HDCA粗品经甲酯化、 柱层析分离、碱水解后，加入无水乙醇或乙酸中，在机械搅拌条件下加热至有机溶剂水溶液 完全沸腾，待HDCA溶解后，分次加入水，继续搅拌，待温度降至10～20℃，再机械搅拌 30～60min，进行抽滤，得晶体，真空干燥，得HDCA纯品（纯度＞99%）。上述四种方法均 需要将HDCA进行化学预处理，工艺步骤繁琐、不易操作、生产周期长，其中使用的苯为致 癌物质。
CN102863497A（公开日2013-01-09）将HDCA粗品加入5～10倍重量的甲醇、乙醇、乙二 醇、N,N-二甲基甲酰胺、冰醋酸或异丙醇，加热回流1～2小时，待其全部溶解后降至15～25℃， 向其中滴加水，直至出现混浊物，停止滴加，继续搅拌1小时，过滤后，再加入5～10倍重量 的甲醇、乙醇、乙二醇、N,N-二甲基甲酰胺、冰醋酸或异丙醇，加热回流1～2小时，待其全部 溶解后降至15～25℃，向其中滴加水，直至出现混浊物，立即停止滴加，继续搅拌1小时，过 滤干燥即得HDCA纯品（纯度＞98%）。由于甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇、N,N-二甲基甲酰 胺对HDCA的溶解度太大，加入水以降低溶解度进行析晶，这是一种很常规的析晶方法，且 由于本品的性质，加水后并未析出晶体而只是混浊，再进行过滤，不利于大生产。另外，采 用重结晶工艺处理，产品的收率将会大大降低。
综上所述，为了提高HDCA用药安全性和顺应性，克服现有HDCA纯化方法产品腥味、 工艺繁琐、不易操作、生产周期长、成本高等缺陷，急需开发一种具有易于工艺化大生产、 成本低、生产周期短等优势的制备无腥味的高纯度的HDCA的精制方法。
发明内容
本发明提供了一种猪去氧胆酸的精制方法，其制备的猪去氧胆酸具有无腥味、高纯度的 特点。该方法包括下列步骤：
步骤a：猪去氧胆酸中杂质的除去
取熔点170℃以上的猪去氧胆酸粗品，加酯类有机溶剂回流提取1～5次，每次加酯类有 机溶2～10倍量、提取10～50分钟，过滤，滤液弃去，药渣备用；
步骤b：猪去氧胆酸的精制
将步骤a所得药渣加酯类有机溶剂回流提取8～40次，每次加酯类有机溶剂2～8倍量、提 取10～40分钟，过滤，浓缩至热时有晶体析出时，放冷，过滤，残渣干燥粉碎，即得猪去氧 胆酸成品。
在一些优选实施方案中，步骤a中，回流提取次数为2～4次，每次加酯类有机溶剂3～6 倍量、提取20～40分钟。
在一些优选实施方案中，步骤b中，回流提取次数为8～30次，每次加酯类有机溶剂3～6 倍量、提取时间20～40分钟。
在另一些优选实施方案中，步骤a中，回流提取次数为2～4次，每次加酯类有机溶剂3～6 倍量、提取20～40分钟；步骤b中，回流提取次数为8～30次，每次加酯类有机溶剂3～6倍量、 提取20～40分钟。
本发明中，所述酯类有机溶剂的用量“倍量”是以粗品质量计算的体积重量比，例如当粗 品质量为1g，溶剂用量为6倍量是体积为6ml。
本发明中，所述“酯”是指含有4～6个碳原子的有机酯类，包括但不限于，乙酸乙酯、乙 酸丙酯、乙酸异丙酯、丙酸乙酯、异丙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、丁酸乙酯、异丁酸 乙酯等。在一些本发明的一些实施方案中，所述酯优选乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯，更 优选乙酸乙酯。
本发明中，所述“浓缩”是指将溶剂从体系中移除以增大溶质的浓度的过程，包括但不限 于，常压浓缩、减压浓缩等。
本发明中，所述HDCA“含量”是指HDCA在猪去氧胆酸粗品或成品中的质量百分比，其也 可以用纯度进行表述。
令人惊喜的是，本发明制备的猪去氧胆酸熔点可达196.5℃及以上，熔距小于2℃，含量 达98%以上，并且具有无腥味的特点，能够大大提升该品的安全性、增强患者的顺应性。
本发明的方法具有如下优点：（1）该方法制备的猪去氧胆酸无腥味、纯度高，药品安全 性和品质高；（2）该方法一步实现了产品精制且无腥味的技术效果，并且克服了复杂、繁琐 的预处理、结晶和析出工艺；（3）该方法所用有机溶剂毒性小、更经济，且经过回收后加入 到提取容器中，实现了溶剂的重复利用，降低了能耗成本。由此可见，本发明的方法具有产 品质量高、成品效率高、生产效率高、生产成本低、工艺简单而具有重复性等优势，从制药 工业观点来看，更适合工业应用、具有良好的应用前景。
具体实施方案
下述具体实施例来进一步解释和说明本发明，但并不以任何方式限制本发明。
实施例1
取猪去氧胆酸粗品（熔点为172.5℃～174.7℃，纯度为72%）750g，加乙酸乙酯回流提取 3次，每次加乙酸乙酯3000ml、回流提取30分钟，过滤，滤液弃去，药渣加乙酸乙酯回流提 取12次，每次加乙酸乙酯3000ml、回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至热时有晶体 析出时，过滤，残渣干燥粉碎，得白色的猪去氧胆酸成品393g，收率52.4%。熔点为 196.9℃～197.7℃。
按照中国药典2010年版第一增补本清开灵注射液项下猪去氧胆酸标准进行检测，成品中 猪去氧胆酸（HDCA）含量为99.4%。无腥味。
实施例2
取的猪去氧胆酸粗品（熔点为172.5℃～174.7℃）750g，加乙酸乙酯回流提取4次，每次 加乙酸乙酯2250ml、回流提取30分钟，过滤，滤液弃去，药渣加乙酸乙酯提取18次，每次 加乙酸乙酯2250ml、回流提取30分钟，过滤，滤液浓缩至热时有晶体析出时，放冷，过滤， 残渣干燥粉碎，得白色的猪去氧胆酸成品386g，收率为51.5%，熔点为197.5℃～198.1℃，HDCA 含量为98.9%，无腥味。
实施例3
取猪去氧胆酸粗品（熔点为172.5℃～174.7℃）750g，加乙酸丙酯回流提取4次，每次加 乙酸丙酯3500ml、回流提取30分钟，过滤，滤液弃去，药渣加乙酸丙酯回流提取20次，每 次加乙酸丙酯3500ml、回流提取25分钟，过滤，滤液浓缩至热时有晶体析出时，放冷，过 滤，残渣干燥粉碎，得白色的猪去氧胆酸成品380g，收率50.7%，熔点为196.7℃～198.2℃， HDCA含量为98.4%，无腥味。
实施例4
取猪去氧胆酸粗品（熔点为172.5℃～174.7℃）500g，加乙酸丁酯回流提取4次，每次加 3000ml、回流提取30分钟，过滤，滤液弃去，药渣加乙酸丁酯回流提取30次，每次加乙酸 丁酯3000ml、回流提取30分钟，过滤，滤液浓缩至热时有晶体析出时，放冷，过滤，残渣 干燥粉碎，得白色的猪去氧胆酸成品246.5g，收率49.3%，熔点为196.5℃～197.4℃，HDCA 含量为99.5%，无腥味。
工艺成品比较研究
1）乙酸乙酯-水结晶法
取猪去氧胆酸粗品（熔点为172.5℃～174.7℃，纯度为72%）200g，加乙酸乙酯600mL， 回流，不溶，再加水20mL，回流提取，溶解，加入20%无水硫酸钠脱水，过滤，放置两天， 析出晶体，取晶体压榨干燥，得猪去氧胆酸成品92g，所得中HDCA含量为88.4%，腥味较 大。
2）无水乙酸乙酯结晶
取猪去氧胆酸粗品（熔点为191.2℃～192.8℃，纯度为88.4%）20g，加入乙酸乙酯50倍量， 回流溶解，过滤，放置，析晶，取晶体压榨干燥，得猪去氧胆酸成品12.4g，HDCA含量为94.6%， 有一定的腥味。
3）丙酮结晶法
取猪去氧胆酸粗品（熔点为191.2℃～192.8℃，纯度为88.4%）50g，加丙酮500mL回流 溶解，放置两天，析出晶体，取晶体，再用丙酮重结晶一次，结果析出白色的针状晶体，取 晶体压榨过滤，干燥，得猪去氧胆酸成品23g，HDCA含量为99.4%，但仍含有一定的腥味。
较乙酸乙酯-水、乙酸乙酯和丙酮结晶法，本发明实施例1-4制备的猪去氧胆酸成品具有 无腥味、高纯度（HDCA含量＞98%）、产品收率高的特点，并且制备工艺更简单、工艺周期 更短、更利于工业化大生产。