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喜树碱磺酰脒类化合物及其制备方法和用途.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510766116.0 (22)申请日 2015.11.11 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 105418623 A (43)申请公布日 2016.03.23 (73)专利权人兰州大学地址 730000 甘肃省兰州市天水南路222号 (72)发明人刘映前宋子龙朱高翔吴小兵王美娟 (74)专利代理机构兰州振华专利代理有限责任公司 62102 代理人张晋 (51)Int.Cl. C07D 491/22(2006.01) A61K 31/496(20。

2、06.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 103333172 A,2013.10.02,全文. 赵永龙.鬼臼毒素和喜树碱脒类衍生物的设计、合成及杀虫活性研究. 中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑 .2014,第E057- 25页. Xiao-Bo Zhao et al.Design and synthesis of new 7-(N-substituted- methyl)-camptothecin derivatives as potent cytotoxic agents. Bioorganic & Medicinal Chemistr。

3、y Letters .2014,第24卷 (第16期),第3850-3853页，摘要，第3851页 Scheme 1，化合物9a-9s，第3852页Table 1. Xiao-Bo Zhao et al.Design and synthesis of new 7-(N-substituted- methyl)-camptothecin derivatives as potent cytotoxic agents. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters .2014,第24卷 (第16期),第3850-3853页，摘要，第3851页 Sche。

4、me 1，化合物9a-9s，第3852页Table 1. 审查员吴永英 (54)发明名称喜树碱磺酰脒类化合物及其制备方法和用途 (57)摘要本发明公开一种喜树碱类化合物及其制备方法和用途。本发明的喜树碱磺酰脒类化合物是如式1示，式中： R1为甲基、乙基、对氯苯基、对硝基苯基、对甲基苯基、对氟苯基、苯基、噻吩基、吡啶基或萘基中的任一个； R2为氢、氟或甲氧基中的任一个。本发明的喜树碱类化合物的制备方法是：将7-苄基哌嗪-喜树碱三氟乙酸盐溶于二氯甲烷中，加入催化剂三乙胺并搅拌使溶液澄清，再依次加入磺酰叠氮化合物和炔，最后加入碘化亚铜催化反。

5、应，结束后，用二氯甲烷淬灭反应后除去溶剂得目标产物的粗产物。本发明的喜树碱磺酰脒类化合物可在制备治疗各种癌症的医药中应用。权利要求书1页说明书14页 CN 105418623 B 2018.06.12 CN 105418623 B 1.一种喜树碱磺酰脒类化合物，结构如式1所示：式中： R1为甲基、乙基、对氯苯基、对硝基苯基、对甲基苯基、对氟苯基、苯基、噻吩基、吡啶基或萘基中的任一个； R2为氢、氟或甲氧基中的任一个。 2.根据权利要求1所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于将7-哌嗪甲基喜树碱三氟乙酸盐溶于二氯甲烷中，加入催化剂三乙胺并搅。

6、拌使溶液澄清，再依次加入磺酰叠氮化合物和炔，所述的炔为苯乙炔、对甲氧基苯乙炔、对氟苯乙炔中的任意一个，待以上试剂加入完毕后，最后加入碘化亚铜催化反应，在常温下搅拌反应结束后，用二氯甲烷淬灭反应后除去溶剂得目标产物的粗产物，所述的磺酰叠氮化合物为甲基磺酰叠氮、乙基磺酰叠氮、苯基磺酰叠氮、对甲基苯基磺酰叠氮、对硝基苯基磺酰叠氮、对氟苯基磺酰叠氮、对氯苯基磺酰叠氮、 2-噻吩基磺酰叠氮、 3-吡啶基磺酰叠氮和2-萘基磺酰叠氮中的任意一个。 3.根据权利要求2所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于将所得到的目标产物的粗产物经柱层析纯化处理。 4.根。

7、据权利要求3所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于，目标产物的粗产物经柱层析纯化处理时用体积比为:70:1100:1的氯仿-甲醇洗脱。 5.根据权利要求4所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于层析用硅胶柱采用200300目的柱层析用硅胶。 6.根据权利要求2或3或4或5所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于，将0.2mmol7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于10mL二氯甲烷中，磺酰叠氮化合物和炔溶液加入量分别为0.220.44mmol，碘化亚铜的加入量为0.01mmol。 7.根据权利要求2或3或4或5所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其。

8、特征在于磺酰叠氮化合物与炔溶液用量分别为0.24mmol。 8.根据权利要求6所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于磺酰叠氮化合物与炔溶液用量分别为0.24mmol。 9.权利要求1所述的一种喜树碱磺酰脒类化合物在制备治疗肺腺癌、人乳腺癌或人口腔表皮样癌的药物中的应用。权利要求书 1/1 页 2 CN 105418623 B 2 喜树碱磺酰脒类化合物及其制备方法和用途技术领域 0001 本发明涉及药用化合物的制备方法及所制备的药物的用途，确切讲本发明是一种新的喜树碱类化合物，以及这种化合物的制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的用途。背景技术 0002 喜树碱是。

9、 W a l l 等于 1 9 6 6 年首先从中国特有的珙桐科植物喜树 (Camptothecaacuminata)中分离得到的一种具有显著细胞毒活性的喹啉类生物碱 (J.Nat.Prod.2004,67,129-135)，对骨癌、肝癌、膀胱癌和白血病等多种恶性肿瘤表现出较好的抑制作用，但在临床使用时发现，喜树碱在发挥其抗肿瘤活性时会产生骨髓抑制、呕吐和腹泻等较严重的副作用，同时因其分子结构中喹啉环上氮的特殊碱性而水溶性较差，不能直接人体非肠道给药。为进一步改善其水溶性和降低其毒副作用， 20世纪70年代初期对喜树碱的水溶性钠盐。

10、进行了期临床试验，虽然观察到了一定的抗癌活性和大大提高了该类药物的水溶性，却因其严重而且不可预见的毒副作用使得进一步临床试验中断。近年来，国内外研究者对喜树碱类药物进行了系统深入的研究，其中以其为先导衍生合成的多个活性化合物如伊立替康、拓扑替康、 9-氨基喜树碱、 9-硝基喜树碱、 DX-8951f、 GG211、 BNP-1350、 ST-1481和CKD-602等已被FDA批准上市或处于临床研究阶段 (Bioorg.Med.Chem.2004,12,1585-1604； Phytochem.2004,65,2735-2749)。根据目前现有的对喜树碱的构效关系研。

11、究(SAR研究)，可以发现，在喜树碱B环C-7位进行修饰取代而产生的化合物与喜树碱相比具有更高的抗癌活性，这可能是由于这些衍生物的取代基通常具有增加脂溶性、参与CPT与 Topo -DNA的相互作用和稳定E环羟基内酯环等多种特殊功能的结果。因此，对B环C-7位进行修饰和改造，以期提高该类化合物物的活性，并且通过提高内酯环形式在人体血浆中的比例从而间接提高该类化合物的活性并降低毒性，目前已经成为研发喜树碱类药物的主要研究课题之一。 0003 为了提高喜树碱的成药性，以现有喜树碱的构效关系研究为指导，考虑将喜树碱7 位进行修饰和改造，将有可能提高其活性并增强。

12、内酯环稳定性，从而得到活性更高、毒性更低的喜树碱衍生物。发明内容 0004 本发明的提供一类可克服现有技术不足的喜树碱磺酰脒类化合物，同时，本发明提供这一类新型化合物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的用途。 0005 本发明的喜树碱磺酰脒类化合物是如式1示喜树碱磺酰脒类化合物，说明书 1/14 页 3 CN 105418623 B 3 0006 0007 式中： R1为甲基、乙基、对氯苯基、对硝基苯基、对甲基苯基、对氟苯基、苯基、噻吩基、吡啶基或萘基中的任一个； R2为氢、氟或甲氧基中的任一个。 0008 本发明的喜树碱类化合物的制备方法是：将7-哌嗪甲基。

13、-喜树碱三氟乙酸盐溶于二氯甲烷中，加入催化剂三乙胺并搅拌使溶液澄清，再依次加入磺酰叠氮化合物和炔，所述的炔为苯乙炔、对甲氧基苯乙炔、对氟苯乙炔中的任意一个，待以上试剂加入完毕后，最后加入碘化亚铜催化反应，在常温下搅拌反应结束后，用二氯甲烷淬灭反应后除去溶剂得目标产物的粗产物，所述的磺酰叠氮化合物为甲基磺酰叠氮、乙基磺酰叠氮、苯基磺酰叠氮、对甲基苯基磺酰叠氮、对硝基苯基磺酰叠氮、对氟苯基磺酰叠氮、对氯苯基磺酰叠氮、 2-噻吩基磺酰叠氮、 3-吡啶基磺酰叠氮和2-萘基磺酰叠氮中的任意一个，参见式2。 0009 0010 经前述制备方法制备出的产物可。

14、以再经柱层析纯化处理。 0011 本发明的喜树碱类化合物的制备方法中，目标产物的粗产物经柱层析纯化处理时用体积比为:70:1100:1 的氯仿-甲醇洗脱；层析用硅胶柱可采用200300目的柱层析用硅胶。说明书 2/14 页 4 CN 105418623 B 4 0012 在本发明的喜树碱类化合物的具体制备方法中是将0.2mmol 7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于10mL 二氯甲烷中，磺酰叠氮化合物和炔溶液加入量分别为0 .22 0.44mmol，碘化亚铜的加入量为0.01mmol。 0013 本发明的喜树碱类化合物的制备方法中优选的磺酰叠氮化合物与炔溶液用量分别为0.24m。

15、mol。 0014 本发明所用的原料， 7 - 苄基哌嗪 - 喜树碱，的制备方法参见文献方法 J.Am.Chem.Soc.2013,135,9412-9419）。 0015 本发明运用 “多样性合成” 这一思想，将磺酰脒这一药物分子上常用的活性官能团与7-苄基哌嗪-喜树碱 0016 通过多组分反应的方式结合而合成了如式3至式21所示的18个新型喜树碱衍生物化合物，以寻求更具有成药性的喜树碱衍生物。 0017 经相关实验表明，本发明的这类喜树碱类化合物可在制备治疗各种癌症的医药中应用，经体外抗肿瘤活性筛选结果表明，式I的化合物对人。

16、肺腺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)、人口腔表皮样癌细胞(KB)、人口腔表皮样癌细胞耐药株(KBvin)和人乳腺癌细胞(MCF-7)表现出较强的抑制活性，且一些化合物高于目前临床药物伊立替康，因此，本发明的化合物可用于制备抗肿瘤的药物。本发明所述的喜树碱类化合物结构新颖、合成工艺简单、产品纯度高，对肿瘤细胞表现出较强的抑制作用，具有优良的应用前景。具体实施方式 0018 制备实施例 0019 实施例1：目标化合物Ia的合成 0020 0021 原料7-苄基哌嗪-喜树碱的合成：取喜树碱2.5克于圆底烧瓶中，加入60mL75的。

17、硫酸溶液使其搅拌溶解，随后在冰浴条件下，加入3.125克七水硫酸亚铁，搅拌5min，依旧在冰浴条件下，用恒压漏斗滴加40mL40的氯乙醛溶液，滴加完毕后搅拌5min，仍在冰浴条件下，用恒压漏斗加入12.5mL，的双氧水。冰浴条件下反应半小时后撤去冰浴。常温条件下反应10h后将反应进行冰浴，然后加入适量冰水，有大量黄色固体析出，抽滤，用冰水冲说明书 3/14 页 5 CN 105418623 B 5 洗滤饼多次，再用氯仿/正己烷7/3的溶液冲洗滤饼多次，将滤饼放入干燥塔干燥，备用，得7-苄氯-喜树碱(化合物2)。将7-苄氯-喜树碱1.5克。

18、于圆底烧瓶中，溶于适量的干燥DMF 中，再向其中加入1.6克的Boc哌嗪，室温搅拌10hr，减压浓缩，柱层析(氯仿-甲醇) 得到7- 苄基Boc哌嗪-喜树碱(化合物3)。取7-苄基Boc哌嗪-喜树碱1克于圆底烧瓶中，加入CH2Cl2 和TFA各4mL，室温搅拌10hr，减压浓缩至干燥状态，加入乙醚适量，从瓶壁上刮下化合物，过滤，得到化合物为黄色粉末(化合物4),其反应参见式4。 0022 0023 Ia的合成：取0.2mmol 7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于10mL二氯甲烷中，加入适量三乙胺使溶液澄清，再依次加入0.22mmol甲基磺酰叠氮和0.22。

19、mmol苯乙炔溶液。待以上试剂加入完毕后，最后加入0.01mmol碘化亚铜催化反应；在常温下搅拌反应30-60min。反应结束后，用2mL二氯甲烷淬灭反应，然后减压蒸除溶剂，粗产物经柱层析纯化，用氯仿- 甲醇洗脱，得目标产物，其反应参见式5。 0024 0025 产率:66；熔点： 0026 239-242； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.40(d,1H,J8Hz,C9-H),8.16(d,1H,J 8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J8Hz, C10-H),7.70(t,1H,J8Hz,C11-H),7.36-7.33(m,3H, Ar。

20、-H,C14-H),7.27-7.24(m,3H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 43(s,2H,C17-H),5.31(s, 2H,C5-H),4.38(s,2H,-CH2-Ar),4.05 (s,2H,-CH2-piperazine),3.68(s,2H,piperazine- H),3.30 (s,2H,piperazine-H),2.94(s,3H,Ms-CH3),2.54(s,2H,piperazine-H),2.30(s, 2H,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C 19-H),0.88(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESI。

21、m/z: 说明书 4/14 页 6 CN 105418623 B 6 664.3M+Na+.。 0027 实施例2：目标化合物Ib的合成 0028 0029 与实施例1同，仅以乙基磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:67；熔点： 233-238； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.40(d,1H,J8Hz,C9-H), 8.15(d,1H,J8Hz,C12-H) ,7.84(t,1H,J8Hz, C10-H) ,7.70(t,1H,J8Hz,C11-H) , 7.36-7.31(m,3H,Ar-H,C14-H),7.28-7.24(m,3H,A。

22、r-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 43(s,2H, C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.39(s， 2H,-CH2-Ar),4.05 (s,2H,-CH2-piperazine),3.67(s, 2H,piperazine-H),3.31(s,2H， piperazine-H),3.00-2.92(m,2H,-SO2-CH2-),2.54(s,2H, piperazine-H),2.28(s,2H,piperazine-H),1.92-1.80(m,2H, C19-H),1.26-1.14(m,3H,- SO2-CH2-CH3),0.88(t,3H,J8Hz,C。

23、18-H)； MS-ESIm/z:678.3M+Na+.。 0030 实施例3：目标化合物Ic的合成 0031 0032 与实施例1同，仅以苯基磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:65；熔点： 209-212； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.39(d,1H,J8Hz,C9-H), 8.15(d,1H,J8Hz,C12-H),7.86-7.79(m,3H, C10-H,Ar-H),7.69(t,1H,J8Hz,C11-H), 说明书 5/14 页 7 CN 105418623 B 7 7.57-7.47(m,3H,Ar-H),7.33-7.2。

24、1(m,6H,C14-H,Ar-H),6.53(s,1H,C20-O H),5.43(s,2H, C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.44(s,2H,-CH2-Ar),4.04 (s,2H,-CH2-piperazine),3.67(s, 2H,piperazine-H),3.29 (s,2H,piperazine-H),2.54(s,2H,piperazine-H),2.29(s,2H, piperazine-H),1.90-1.81(m,2H,C19-H),0.87(t,3H,J8 Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:726.3 M+Na+.。 0033 实施例4：目。

25、标化合物Id的合成 0034 0035 与实施例1同，仅以2-噻吩磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:53；熔点： 222-226； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.39(d,1H,J8Hz,C9-H), 8.15(d,1H,J8Hz,C12-H),7.86-7.79(m,2H, C10-H,thiophene-H),7.69(t,1H,J8Hz, C11-H),7.52-7.49(m,1H,Ar-H),7.34-7.30(m,3H,Ar-H,C14-H),7.26-7.23 (m,1H,Ar-H), 7.20-7.15(m,2H,thioph。

26、ene-H),7.08-7.04(m,1H,thiophene-H),6.54(s,1H,C20-OH), 5.43(s ,2H ,C17- H) ,5.30(s ,2H ,C5-H) ,4 .43(s ,2H ,-CH2-Ar) ,4 .05(s ,2H,-CH2- piperazine),3.73(s,2H,piperazine-H),3.35 (s,2H,piperazine-H),2.55(t,2H,J 4Hz,piperazine-H),2.30(t,2H,J4Hz,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H), 0.88 (t,3H,J8Hz,C18-H)。

27、； MS-ESIm/z:732.2M+Na+.。 0036 实施例5：目标化合物Ie的合成 0037 说明书 6/14 页 8 CN 105418623 B 8 0038 与实施例1同，仅以对氯苯磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:61；熔点:209-210； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.39(d,1H,J8Hz,C9-H), 8.15(d,1H,J8Hz,C12-H),7.86-7.77(m, 3H,C10-H,Ar-H),7.69(t,1H,J8Hz,C11-H), 7.55-7.52(m,2H,Ar-H),7.33-7.22(m,。

28、4H,Ar-H,C14-H),7.20-7.16(m, 2H,Ar-H),6.54(s, 1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.42(s,2H,-CH2-Ar),4.05 (s,2H,- CH2-piperazine),3.68(s,2H,piperazine-H),3.29 (s,2H,piperazine-H),2.54(s,2H, piperazine-H),2.31(s,2H,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H),0.88(t,3H,J8 Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:760.2M+Na。

29、+.。 0039 实施例6：目标化合物If的合成 0040 0041 与实施例1同，仅以3-吡啶磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:63； m.p.227-230； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.94(s,1H,pyridine-H),8.72- 8.70(m,1H,pyridine-H),8.4 0(d,1H,J8Hz,C9-H),8.20-8.14(m,2H,C12-H,pyridine- H),7.84(t,1H,J8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J8Hz,C11-H),7. 54-7.50(m,1H,pyridine- H。

30、),7.34-7.18(m,6H,Ar-H,C14-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5 -H),4.45(s,2H,-CH2-Ar),4.06(s,2H,-CH2-piperazine),3.70(d,2H,J8Hz,piperazine- H),3.37 (s,2H,piperazine-H),2.54(t,2H,J4Hz,piperazine-H),2.33(t,2H,J4Hz, piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H), 0.87(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:727。

31、.6 M+Na+.。 0042 实施例7：目标化合物Ig的合成 0043 说明书 7/14 页 9 CN 105418623 B 9 0044 与实施例1同，仅以3-吡啶磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:72；熔点： 195-197； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz):8.40-8.38(m,2H,C9-H, naphthalene-H),8.16-7.98(m,4H,C12-H,naph thalene-H) ,7.85-7.82(m,2H,C10-H, naphthalene-H),7.71-7.60(m,3H,C11-H,naphthalen。

32、e-H),7.32-7.17(m,6H,Ar -H,C14- H),6.53(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.47(s,2H， -CH2-Ar),4.03 (s， 2H， -CH2-piperazine),3.69(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.58 (d,2H,J8Hz,piperazine-H),2.29(s,2H,piperazine-H),1.91-1.82(m,2H,C19-H),0.86 (t, 3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:776.7。

33、M+Na+.。 0045 实施例8：目标化合物Ih的合成 0046 0047 与实施例2同，仅以对甲氧基苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:63；熔点： 230-234； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.40(d,1H,J8Hz,C9-H),8.16(d, 1H,J8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J8Hz, C10-H),7.70(t,1H,J8Hz,C11-H),7.33(s,1H, C14-H),7.20(d,2H,J8Hz,Ar-H),6.91-6.89(m,2H,Ar-H),6.54(s,1H, C20-OH),5.43(s, 2H。

34、,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.30(s,2H,-CH2-Ar),4.07 (s,2H,-CH2-piperazine),3.73 (s,3H,CH3-O-Ar),3.65(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.97(q,2H,J 8Hz,CH3-CH2-SO2-),2.55(s,2H,piperazine-H),2.31(s,2H,piperazine-H),1.9 2-1.81 (m,2H,C19-H),1.26-1.16(m,3H,-SO2-CH2-CH3),0.88(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ES。

35、Im/z: 708.4M+Na+.。 0048 实施例9：目标化合物Ii的合成说明书 8/14 页 10 CN 105418623 B 10 0049 0050 与实施例8同，仅以对甲基苯磺酰叠氮代替乙基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:70；熔点： 0051 208-210； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.38(d,1H,J8Hz,C9-H),8.14(d,1H,J 8Hz,C12-H),7.83(t,1H,J8Hz, C10-H),7.70-7.64(m,3H,C11-H,Ar-H),7.31-7.27(m, 3H,Ar-H,C14-H),7.0。

36、9(d,2H,J8Hz,Ar-H),6.85(d,2H,J8H z,Ar-H),6.53(s,1H,C20- OH) ,5.42(s,2H,C17-H) ,5.30(s,2H,C5-H) ,4.31(s,2H,-CH2-Ar) ,4.04 (s,2H,-CH2- piperazine) ,3 .72(s ,3H ,CH3-O-Ar) ,3 .63(s ,2H ,piperazine-H) ,3 .33 (s ,2H , piperazine-H),2.65(s,2H,piperazine-H),2.39-2.25(m,5H,piperazine-H,CH3-Ts), 1.88-1.83(m,2。

37、H,C19-H), 0.86(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:770.8M+Na+.。 0052 实施例10：目标化合物Ij的合成 0053 0054 与实施例8同，仅以对硝基苯磺酰叠氮代替乙基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:65；熔点： 0055 210-215； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.41(d,1H,J8Hz,C9-H),8.27(d,2H,J 8Hz,Ar-H),8.16(d,1H,J8Hz, C12-H),8.02(d,2H,J8Hz,Ar-H),7.85(t,1H,J8Hz, C10-H),7.70(t,1H。

38、,J8,C11-H),7.33(s,1H,C14-H),7.08(d,2H, J8Hz,Ar-H),6.85(d, 2H,J8Hz,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.35 (s, 2H,-CH2-Ar),4.08 (s,2H,-CH2-piperazine),3.71(s,5H,CH3-O-Ar,piperazine-H),3.38 (s,2H,piperazine-H),2.54(s,2H,piperazine-H) ,2.37(s,2H,piperazine-H),1.90- 1.83(m,2H,C19-H。

39、),0.88(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:789.3M+Na+.。 0056 实施例11：目标化合物Ik的合成说明书 9/14 页 11 CN 105418623 B 11 0057 0058 与实施例6同，仅以对甲氧基苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:61；熔点:238-242； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.98(d,1H,J8Hz,pyridine-H), 8.74(s,1H,pyridine-H),8.41(d,1H, J8Hz,C9-H),8.20-8.15(m,2H,C12-H,pyridine- H)。

40、,7.85(t,1H,J8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J8Hz,C11-H),7.55-7.5 2(m,1H,pyridine- H),7.33(s,1H,C14-H),7.13(d,2H,J8Hz,Ar-H),6.88(d,2H,J8Hz,Ar-H),6.54(s,1H, C20-OH),5. 44(s,2H,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.37(s,2H,-CH2-Ar),4.08 (s,2H,-CH2- piperazine),3.74(s,3H,CH3-O-Ar),3.69(d,2H,J8Hz,piperazine-H),3.39(d,2H,J 8Hz,p。

41、iperazine- H),2.54(s,2H,piperazine-H),2.36(t,2H,J4Hz,piperazine-H), 1.91-1.83(m,2H,C19-H),0.88(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:757.1M+Na+.。 0059 实施例12：目标化合物Il的合成 0060 0061 与实施例7同，仅以对甲氧基苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:72；熔点： 210-214； 1HNMR(DMSO-d 6,400MHz):8 .40-8 .37(m ,2H ,C9-H , naphthalene-H),8.15(d,1。

42、H,J8Hz,C12-H),8. 08(d,1H,J8Hz,naphthalene-H),8.01 (dd,2H,J8,16Hz,naphthalene-H),7.85-7.81(m,2H,C10-H,naphthalene-H), 7.71- 7.60(m,3H,C11-H,naphthalene-H),7.32(s,1H,C14-H),7.10(d,2H,J8Hz,Ar-H),6,80 (d,2H,J8Hz,Ar-H),6. 53(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.38 (s,2H， -CH2-Ar),4.06(s， 2H， -。

43、CH2-piperazine),3.68(s,5H,piperazine-H,CH3-O-Ar), 3.33 (s,2H,piperazine-H) ,2.56(s,2H,piperazine-H) ,2.33(s,2H,piperazine-H) , 1.91-1.81(m,2H,C19-H),0.87(t,3H,J8 Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:806.6M+Na+.。 0062 实施例13：目标化合物Im的合成说明书 10/14 页 12 CN 105418623 B 12 0063 0064 与实施例2同，仅以对氟苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率。

44、: 63；熔点： 239-243； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.41(d,1H,J8Hz,C9-H),8.17(d,1H,J 8Hz,C12-H),7.87(t,1H,J8Hz, C10-H),7.71(t,1H,J8Hz,C11-H),7.34-7.29(m,3H, Ar-H,C14-H),7.21-7.16(m,2H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 44(s,2H,C17-H),5.33(s, 2H,C5-H),4.37(s， 2H,-CH2-Ar),4.07 (s,2H,-CH2-piperazine),3.64(s,2H,piperazin。

45、e- H),3.31(s,2H， piperazine-H),2.99(q,2H,J8Hz,-SO2-CH2-),2.54(s,2H,piperazine- H),2.32(s,2H,piperazine-H),1.91-1.82(m,2H, C19-H),1.25(t,3H,J8Hz,-SO2-CH2- CH3),0.88(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:696.7M+Na+.。 0065 实施例14：目标化合物In的合成 0066 0067 与实施例9同，仅以对氟苯乙炔代替对甲氧基苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:70；熔点： 216-219； 1。

46、HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.40(d,1H,J8Hz,C9-H), 8.16(d,1H,J8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J8Hz, C10-H),7.71-7.66(m,3H,C11-H,Ar-H), 7.32-7.28(m,3H,Ar-H,C14-H),7.24-7.21(m,2H,Ar-H),7.17-7.12(m,2H, Ar-H),6.53(s, 1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.39(s,2H,-CH2-Ar),4.06 (s,2H,- CH2-piperazine),3.65(s,2H,pip。

47、erazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.58(s,2H, piperazine-H),2.34(s,5H,piperazine-H,CH3-Ts),1.90-1.83(m,2H,C19-H),0.87(t, 3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:758.7M+Na+.。 0068 实施例15：目标化合物Io的合成说明书 11/14 页 13 CN 105418623 B 13 0069 0070 与实施例6同，仅以对氟苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率: 58；熔点： 245-248； 1HNMR(DMSO-d6,40。

48、0MHz) :8.99(s,1H,pyridine-H),8.77(s,1H, pyridine-H),8.41(d,1H,J8Hz,C9- H),8.20-8.15(m,2H,C12-H,pyridine-H),7.84(t, 1H,J8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J8Hz,C11-H),7.54(d,1H,J4Hz,p yridine-H),7.33 (s,1H,C14-H),7.24(dd,2H,J4,8Hz,Ar-H),7.17-7.11(m,2H,Ar-H),6.54(s,1H,C20- OH) ,5.43(s,2H, C17-H) ,5.32(s,2H,C5-H) ,4。

49、.43(s,2H,-CH2-Ar) ,4.07 (s,2H,-CH2- piperazine),3.69(d,2H,J8Hz,piperazine-H),3.39 (s,2H,piperazine-H),2.54(d, 2H,J4Hz,piperazine-H),2.37(d,2H,J4Hz,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H) ,0.88(t,3H,J8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:745.1M+Na+.。 0071 实施例16：目标化合物Ip的合成 0072 0073 与实施例10同，仅以对氟苯乙炔代替对甲氧基苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:65；熔点： 212-215； 1HNMR(DMSO-d6,400MHz) :8.40(d,1H,J8Hz,C9-H), 8.29(d,2H,J8Hz,Ar-H),8.15(d,1H,J8Hz, C12-H),8.04(d,2H,J8Hz,Ar-H),7.85 (t,1H,J8Hz,C1。

摘要
申请专利号：	CN201510766116.0	申请日：	20151111
公开号：	CN105418623B	公开日：	20180612
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	C07D491/22,A61K31/496,A61P35/00	主分类号：	C07D491/22,A61K31/496,A61P35/00
申请人：	兰州大学
发明人：	刘映前,宋子龙,朱高翔,吴小兵,王美娟
地址：	730000 甘肃省兰州市天水南路222号
优先权：	CN201510766116A
专利代理机构：	兰州振华专利代理有限责任公司	代理人：	张晋
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内容摘要

本发明公开一种喜树碱类化合物及其制备方法和用途。本发明的喜树碱磺酰脒类化合物是如式1示，式中：R1为甲基、乙基、对氯苯基、对硝基苯基、对甲基苯基、对氟苯基、苯基、噻吩基、吡啶基或萘基中的任一个；R2为氢、氟或甲氧基中的任一个。本发明的喜树碱类化合物的制备方法是：将7‑苄基哌嗪‑喜树碱三氟乙酸盐溶于二氯甲烷中，加入催化剂三乙胺并搅拌使溶液澄清，再依次加入磺酰叠氮化合物和炔，最后加入碘化亚铜催化反应，结束后，用二氯甲烷淬灭反应后除去溶剂得目标产物的粗产物。本发明的喜树碱磺酰脒类化合物可在制备治疗各种癌症的医药中应用。

权利要求书

1.一种喜树碱磺酰脒类化合物，结构如式1所示：式中：R1为甲基、乙基、对氯苯基、对硝基苯基、对甲基苯基、对氟苯基、苯基、噻吩基、吡啶基或萘基中的任一个；R2为氢、氟或甲氧基中的任一个。 2.根据权利要求1所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于将7-哌嗪甲基喜树碱三氟乙酸盐溶于二氯甲烷中，加入催化剂三乙胺并搅拌使溶液澄清，再依次加入磺酰叠氮化合物和炔，所述的炔为苯乙炔、对甲氧基苯乙炔、对氟苯乙炔中的任意一个，待以上试剂加入完毕后，最后加入碘化亚铜催化反应，在常温下搅拌反应结束后，用二氯甲烷淬灭反应后除去溶剂得目标产物的粗产物，所述的磺酰叠氮化合物为甲基磺酰叠氮、乙基磺酰叠氮、苯基磺酰叠氮、对甲基苯基磺酰叠氮、对硝基苯基磺酰叠氮、对氟苯基磺酰叠氮、对氯苯基磺酰叠氮、2-噻吩基磺酰叠氮、3-吡啶基磺酰叠氮和2-萘基磺酰叠氮中的任意一个。 3.根据权利要求2所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于将所得到的目标产物的粗产物经柱层析纯化处理。 4.根据权利要求3所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于，目标产物的粗产物经柱层析纯化处理时用体积比为:70:1～100:1的氯仿-甲醇洗脱。 5.根据权利要求4所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于层析用硅胶柱采用200～300目的柱层析用硅胶。 6.根据权利要求2或3或4或5所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于，将0.2mmol7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于10mL二氯甲烷中，磺酰叠氮化合物和炔溶液加入量分别为0.22～0.44mmol，碘化亚铜的加入量为0.01mmol。 7.根据权利要求2或3或4或5所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于磺酰叠氮化合物与炔溶液用量分别为0.24mmol。 8.根据权利要求6所述的喜树碱磺酰脒类化合物的制备方法，其特征在于磺酰叠氮化合物与炔溶液用量分别为0.24mmol。 9.权利要求1所述的一种喜树碱磺酰脒类化合物在制备治疗肺腺癌、人乳腺癌或人口腔表皮样癌的药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及药用化合物的制备方法及所制备的药物的用途，确切讲本发明是一种新的喜树碱类化合物，以及这种化合物的制备方法和其在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

喜树碱是Wall等于1966年首先从中国特有的珙桐科植物喜树(Camptothecaacuminata)中分离得到的一种具有显著细胞毒活性的喹啉类生物碱(J.Nat.Prod.2004,67,129-135)，对骨癌、肝癌、膀胱癌和白血病等多种恶性肿瘤表现出较好的抑制作用，但在临床使用时发现，喜树碱在发挥其抗肿瘤活性时会产生骨髓抑制、呕吐和腹泻等较严重的副作用，同时因其分子结构中喹啉环上氮的特殊碱性而水溶性较差，不能直接人体非肠道给药。为进一步改善其水溶性和降低其毒副作用，20世纪70年代初期对喜树碱的水溶性钠盐进行了期临床试验，虽然观察到了一定的抗癌活性和大大提高了该类药物的水溶性，却因其严重而且不可预见的毒副作用使得进一步临床试验中断。近年来，国内外研究者对喜树碱类药物进行了系统深入的研究，其中以其为先导衍生合成的多个活性化合物如伊立替康、拓扑替康、9-氨基喜树碱、 9-硝基喜树碱、DX-8951f、GG211、BNP-1350、ST-1481和CKD-602等已被FDA批准上市或处于临床研究阶段(Bioorg.Med.Chem.2004,12,1585-1604；Phytochem.2004,65,2735-2749)。根据目前现有的对喜树碱的构效关系研究(SAR研究)，可以发现，在喜树碱B环C-7位进行修饰取代而产生的化合物与喜树碱相比具有更高的抗癌活性，这可能是由于这些衍生物的取代基通常具有增加脂溶性、参与CPT与 TopoⅠ-DNA的相互作用和稳定E环羟基内酯环等多种特殊功能的结果。因此，对B环C-7位进行修饰和改造，以期提高该类化合物物的活性，并且通过提高内酯环形式在人体血浆中的比例从而间接提高该类化合物的活性并降低毒性，目前已经成为研发喜树碱类药物的主要研究课题之一。

为了提高喜树碱的成药性，以现有喜树碱的构效关系研究为指导，考虑将喜树碱7位进行修饰和改造，将有可能提高其活性并增强内酯环稳定性，从而得到活性更高、毒性更低的喜树碱衍生物。

发明内容

本发明的提供一类可克服现有技术不足的喜树碱磺酰脒类化合物，同时，本发明提供这一类新型化合物的制备方法及其在抗肿瘤药物中的用途。

本发明的喜树碱磺酰脒类化合物是如式1示喜树碱磺酰脒类化合物，

式中：R1为甲基、乙基、对氯苯基、对硝基苯基、对甲基苯基、对氟苯基、苯基、噻吩基、吡啶基或萘基中的任一个；R2为氢、氟或甲氧基中的任一个。

本发明的喜树碱类化合物的制备方法是：将7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于二氯甲烷中，加入催化剂三乙胺并搅拌使溶液澄清，再依次加入磺酰叠氮化合物和炔，所述的炔为苯乙炔、对甲氧基苯乙炔、对氟苯乙炔中的任意一个，待以上试剂加入完毕后，最后加入碘化亚铜催化反应，在常温下搅拌反应结束后，用二氯甲烷淬灭反应后除去溶剂得目标产物的粗产物，所述的磺酰叠氮化合物为甲基磺酰叠氮、乙基磺酰叠氮、苯基磺酰叠氮、对甲基苯基磺酰叠氮、对硝基苯基磺酰叠氮、对氟苯基磺酰叠氮、对氯苯基磺酰叠氮、2-噻吩基磺酰叠氮、3-吡啶基磺酰叠氮和2-萘基磺酰叠氮中的任意一个，参见式2。

经前述制备方法制备出的产物可以再经柱层析纯化处理。

本发明的喜树碱类化合物的制备方法中，目标产物的粗产物经柱层析纯化处理时用体积比为:70:1～100:1 的氯仿-甲醇洗脱；层析用硅胶柱可采用200～300目的柱层析用硅胶。

在本发明的喜树碱类化合物的具体制备方法中是将0.2mmol 7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于10mL 二氯甲烷中，磺酰叠氮化合物和炔溶液加入量分别为0.22～0.44mmol，碘化亚铜的加入量为0.01mmol。

本发明的喜树碱类化合物的制备方法中优选的磺酰叠氮化合物与炔溶液用量分别为0.24mmol。

本发明所用的原料，7-苄基哌嗪-喜树碱，的制备方法参见文献方法J.Am.Chem.Soc.2013,135,9412-9419）。

本发明运用“多样性合成”这一思想，将磺酰脒这一药物分子上常用的活性官能团与7-苄基哌嗪-喜树碱

通过多组分反应的方式结合而合成了如式3至式21所示的18个新型喜树碱衍生物化合物，以寻求更具有成药性的喜树碱衍生物。

经相关实验表明，本发明的这类喜树碱类化合物可在制备治疗各种癌症的医药中应用，经体外抗肿瘤活性筛选结果表明，式I的化合物对人肺腺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)、人口腔表皮样癌细胞(KB)、人口腔表皮样癌细胞耐药株(KBvin)和人乳腺癌细胞(MCF-7)表现出较强的抑制活性，且一些化合物高于目前临床药物伊立替康，因此，本发明的化合物可用于制备抗肿瘤的药物。本发明所述的喜树碱类化合物结构新颖、合成工艺简单、产品纯度高，对肿瘤细胞表现出较强的抑制作用，具有优良的应用前景。

具体实施方式

制备实施例

实施例1：目标化合物Ia的合成

原料7-苄基哌嗪-喜树碱的合成：取喜树碱2.5克于圆底烧瓶中，加入60mL75％的硫酸溶液使其搅拌溶解，随后在冰浴条件下，加入3.125克七水硫酸亚铁，搅拌5min，依旧在冰浴条件下，用恒压漏斗滴加40mL40％的氯乙醛溶液，滴加完毕后搅拌5min，仍在冰浴条件下，用恒压漏斗加入12.5mL，的双氧水。冰浴条件下反应半小时后撤去冰浴。常温条件下反应10h后将反应进行冰浴，然后加入适量冰水，有大量黄色固体析出，抽滤，用冰水冲洗滤饼多次，再用氯仿/正己烷＝7/3的溶液冲洗滤饼多次，将滤饼放入干燥塔干燥，备用，得7-苄氯-喜树碱(化合物2)。将7-苄氯-喜树碱1.5克于圆底烧瓶中，溶于适量的干燥DMF中，再向其中加入1.6克的Boc哌嗪，室温搅拌10hr，减压浓缩，柱层析(氯仿-甲醇) 得到7-苄基Boc哌嗪-喜树碱(化合物3)。取7-苄基Boc哌嗪-喜树碱1克于圆底烧瓶中，加入CH2Cl2 和TFA各4mL，室温搅拌10hr，减压浓缩至干燥状态，加入乙醚适量，从瓶壁上刮下化合物，过滤，得到化合物为黄色粉末(化合物4),其反应参见式4。

Ia的合成：取0.2mmol 7-哌嗪甲基-喜树碱三氟乙酸盐溶于10mL二氯甲烷中，加入适量三乙胺使溶液澄清，再依次加入0.22mmol甲基磺酰叠氮和0.22mmol苯乙炔溶液。待以上试剂加入完毕后，最后加入0.01mmol碘化亚铜催化反应；在常温下搅拌反应30-60min。反应结束后，用2mL二氯甲烷淬灭反应，然后减压蒸除溶剂，粗产物经柱层析纯化，用氯仿-甲醇洗脱，得目标产物，其反应参见式5。

产率:66％；熔点：

239-242℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.16(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J＝8Hz, C10-H),7.70(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.36-7.33(m,3H,Ar-H,C14-H),7.27-7.24(m,3H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.38(s,2H,-CH2-Ar),4.05 (s,2H,-CH2-piperazine),3.68(s,2H,piperazine-H),3.30 (s,2H,piperazine-H),2.94(s,3H,Ms-CH3),2.54(s,2H,piperazine-H),2.30(s,2H,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C 19-H),0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:664.3[M+Na]+.。

实施例2：目标化合物Ib的合成

与实施例1同，仅以乙基磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:67％；熔点： 233-238℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.15(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J＝8Hz, C10-H),7.70(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.36-7.31(m,3H,Ar-H,C14-H),7.28-7.24(m,3H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.39(s，2H,-CH2-Ar),4.05 (s,2H,-CH2-piperazine),3.67(s,2H,piperazine-H),3.31(s,2H， piperazine-H),3.00-2.92(m,2H,-SO2-CH2-),2.54(s,2H,piperazine-H),2.28(s,2H,piperazine-H),1.92-1.80(m,2H, C19-H),1.26-1.14(m,3H,-SO2-CH2-CH3),0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:678.3[M+Na]+.。

实施例3：目标化合物Ic的合成

与实施例1同，仅以苯基磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:65％；熔点： 209-212℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.39(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.15(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.86-7.79(m,3H, C10-H,Ar-H),7.69(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.57-7.47(m,3H,Ar-H),7.33-7.21(m,6H,C14-H,Ar-H),6.53(s,1H,C20-O H),5.43(s,2H,C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.44(s,2H,-CH2-Ar),4.04 (s,2H,-CH2-piperazine),3.67(s,2H,piperazine-H),3.29 (s,2H,piperazine-H),2.54(s,2H,piperazine-H),2.29(s,2H,piperazine-H),1.90-1.81(m,2H,C19-H),0.87(t,3H,J＝8 Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:726.3[M+Na]+.。

实施例4：目标化合物Id的合成

与实施例1同，仅以2-噻吩磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:53％；熔点： 222-226℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.39(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.15(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.86-7.79(m,2H, C10-H,thiophene-H),7.69(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.52-7.49(m,1H,Ar-H),7.34-7.30(m,3H,Ar-H,C14-H),7.26-7.23 (m,1H,Ar-H),7.20-7.15(m,2H,thiophene-H),7.08-7.04(m,1H,thiophene-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17- H),5.30(s,2H,C5-H),4.43(s,2H,-CH2-Ar),4.05(s,2H,-CH2-piperazine),3.73(s,2H,piperazine-H),3.35 (s,2H,piperazine-H),2.55(t,2H,J＝4Hz,piperazine-H),2.30(t,2H,J＝4Hz,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H), 0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:732.2[M+Na]+.。

实施例5：目标化合物Ie的合成

与实施例1同，仅以对氯苯磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:61％；熔点:209-210℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.39(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.15(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.86-7.77(m, 3H,C10-H,Ar-H),7.69(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.55-7.52(m,2H,Ar-H),7.33-7.22(m,4H,Ar-H,C14-H),7.20-7.16(m, 2H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.42(s,2H,-CH2-Ar),4.05 (s,2H,-CH2-piperazine),3.68(s,2H,piperazine-H),3.29 (s,2H,piperazine-H),2.54(s,2H,piperazine-H),2.31(s,2H,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H),0.88(t,3H,J＝8 Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:760.2[M+Na]+.。

实施例6：目标化合物If的合成

与实施例1同，仅以3-吡啶磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:63％；m.p.227-230℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.94(s,1H,pyridine-H),8.72-8.70(m,1H,pyridine-H),8.4 0(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.20-8.14(m,2H,C12-H,pyridine-H),7.84(t,1H,J＝8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7. 54-7.50(m,1H,pyridine-H),7.34-7.18(m,6H,Ar-H,C14-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5 -H),4.45(s,2H,-CH2-Ar),4.06(s,2H,-CH2-piperazine),3.70(d,2H,J＝8Hz,piperazine-H),3.37 (s,2H,piperazine-H),2.54(t,2H,J＝4Hz,piperazine-H),2.33(t,2H,J＝4Hz,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H), 0.87(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:727.6[M+Na]+.。

实施例7：目标化合物Ig的合成

与实施例1同，仅以3-吡啶磺酰叠氮代替甲基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:72％；熔点： 195-197℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40-8.38(m,2H,C9-H,naphthalene-H),8.16-7.98(m,4H,C12-H,naph thalene-H),7.85-7.82(m,2H,C10-H,naphthalene-H),7.71-7.60(m,3H,C11-H,naphthalene-H),7.32-7.17(m,6H,Ar -H,C14-H),6.53(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.47(s,2H，-CH2-Ar),4.03(s，2H， -CH2-piperazine),3.69(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.58(d,2H,J＝8Hz,piperazine-H),2.29(s,2H,piperazine-H),1.91-1.82(m,2H,C19-H),0.86(t, 3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:776.7[M+Na]+.。

实施例8：目标化合物Ih的合成

与实施例2同，仅以对甲氧基苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:63％；熔点： 230-234℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.16(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J＝8Hz, C10-H),7.70(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.33(s,1H,C14-H),7.20(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6.91-6.89(m,2H,Ar-H),6.54(s,1H, C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.30(s,2H,-CH2-Ar),4.07 (s,2H,-CH2-piperazine),3.73(s,3H,CH3-O-Ar),3.65(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.97(q,2H,J＝8Hz,CH3-CH2-SO2-),2.55(s,2H,piperazine-H),2.31(s,2H,piperazine-H),1.9 2-1.81(m,2H,C19-H),1.26-1.16(m,3H,-SO2-CH2-CH3),0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:708.4[M+Na]+.。

实施例9：目标化合物Ii的合成

与实施例8同，仅以对甲基苯磺酰叠氮代替乙基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:70％；熔点：

208-210℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.38(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.14(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.83(t,1H,J＝8Hz, C10-H),7.70-7.64(m,3H,C11-H,Ar-H),7.31-7.27(m,3H,Ar-H,C14-H),7.09(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6.85(d,2H,J＝8H z,Ar-H),6.53(s,1H,C20-OH),5.42(s,2H,C17-H),5.30(s,2H,C5-H),4.31(s,2H,-CH2-Ar),4.04 (s,2H,-CH2-piperazine),3.72(s,3H,CH3-O-Ar),3.63(s,2H,piperazine-H),3.33 (s,2H,piperazine-H),2.65(s,2H,piperazine-H),2.39-2.25(m,5H,piperazine-H,CH3-Ts),1.88-1.83(m,2H,C19-H), 0.86(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:770.8[M+Na]+.。

实施例10：目标化合物Ij的合成

与实施例8同，仅以对硝基苯磺酰叠氮代替乙基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:65％；熔点：

210-215℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.41(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.27(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),8.16(d,1H,J＝8Hz, C12-H),8.02(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),7.85(t,1H,J＝8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J＝8,C11-H),7.33(s,1H,C14-H),7.08(d,2H, J＝8Hz,Ar-H),6.85(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.35 (s,2H,-CH2-Ar),4.08 (s,2H,-CH2-piperazine),3.71(s,5H,CH3-O-Ar,piperazine-H),3.38(s,2H,piperazine-H),2.54(s,2H,piperazine-H) ,2.37(s,2H,piperazine-H),1.90-1.83(m,2H,C19-H),0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:789.3[M+Na]+.。

实施例11：目标化合物Ik的合成

与实施例6同，仅以对甲氧基苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:61％；熔点:238-242℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.98(d,1H,J＝8Hz,pyridine-H),8.74(s,1H,pyridine-H),8.41(d,1H, J＝8Hz,C9-H),8.20-8.15(m,2H,C12-H,pyridine-H),7.85(t,1H,J＝8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.55-7.5 2(m,1H,pyridine-H),7.33(s,1H,C14-H),7.13(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6.88(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 44(s,2H,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.37(s,2H,-CH2-Ar),4.08 (s,2H,-CH2-piperazine),3.74(s,3H,CH3-O-Ar),3.69(d,2H,J＝8Hz,piperazine-H),3.39(d,2H,J＝8Hz,piperazine- H),2.54(s,2H,piperazine-H),2.36(t,2H,J＝4Hz,piperazine-H),1.91-1.83(m,2H,C19-H),0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)； MS-ESIm/z:757.1[M+Na]+.。

实施例12：目标化合物Il的合成

与实施例7同，仅以对甲氧基苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:72％；熔点： 210-214℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40-8.37(m,2H,C9-H,naphthalene-H),8.15(d,1H,J＝8Hz,C12-H),8. 08(d,1H,J＝8Hz,naphthalene-H),8.01(dd,2H,J＝8,16Hz,naphthalene-H),7.85-7.81(m,2H,C10-H,naphthalene-H), 7.71-7.60(m,3H,C11-H,naphthalene-H),7.32(s,1H,C14-H),7.10(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6,80(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),6. 53(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.38(s,2H，-CH2-Ar),4.06(s，2H， -CH2-piperazine),3.68(s,5H,piperazine-H,CH3-O-Ar),3.33 (s,2H,piperazine-H),2.56(s,2H,piperazine-H),2.33(s,2H,piperazine-H),1.91-1.81(m,2H,C19-H),0.87(t,3H,J＝8 Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:806.6[M+Na]+.。

实施例13：目标化合物Im的合成

与实施例2同，仅以对氟苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:63％；熔点： 239-243℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.41(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.17(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.87(t,1H,J＝8Hz, C10-H),7.71(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.34-7.29(m,3H,Ar-H,C14-H),7.21-7.16(m,2H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5. 44(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),4.37(s，2H,-CH2-Ar),4.07 (s,2H,-CH2-piperazine),3.64(s,2H,piperazine-H),3.31(s,2H， piperazine-H),2.99(q,2H,J＝8Hz,-SO2-CH2-),2.54(s,2H,piperazine-H),2.32(s,2H,piperazine-H),1.91-1.82(m,2H, C19-H),1.25(t,3H,J＝8Hz,-SO2-CH2-CH3),0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:696.7[M+Na]+.。

实施例14：目标化合物In的合成

与实施例9同，仅以对氟苯乙炔代替对甲氧基苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:70％；熔点： 216-219℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.16(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.84(t,1H,J＝8Hz, C10-H),7.71-7.66(m,3H,C11-H,Ar-H),7.32-7.28(m,3H,Ar-H,C14-H),7.24-7.21(m,2H,Ar-H),7.17-7.12(m,2H, Ar-H),6.53(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.39(s,2H,-CH2-Ar),4.06 (s,2H,-CH2-piperazine),3.65(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.58(s,2H,piperazine-H),2.34(s,5H,piperazine-H,CH3-Ts),1.90-1.83(m,2H,C19-H),0.87(t, 3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:758.7[M+Na]+.。

实施例15：目标化合物Io的合成

与实施例6同，仅以对氟苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:58％；熔点： 245-248℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.99(s,1H,pyridine-H),8.77(s,1H,pyridine-H),8.41(d,1H,J＝8Hz,C9- H),8.20-8.15(m,2H,C12-H,pyridine-H),7.84(t,1H,J＝8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J＝8Hz,C11-H),7.54(d,1H,J＝4Hz,p yridine-H),7.33(s,1H,C14-H),7.24(dd,2H,J＝4,8Hz,Ar-H),7.17-7.11(m,2H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H, C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.43(s,2H,-CH2-Ar),4.07 (s,2H,-CH2-piperazine),3.69(d,2H,J＝8Hz,piperazine-H),3.39 (s,2H,piperazine-H),2.54(d,2H,J＝4Hz,piperazine-H),2.37(d,2H,J＝4Hz,piperazine-H),1.92-1.81(m,2H,C19-H) ,0.88(t,3H,J＝8Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:745.1[M+Na]+.。

实施例16：目标化合物Ip的合成

与实施例10同，仅以对氟苯乙炔代替对甲氧基苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:65％；熔点： 212-215℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.29(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),8.15(d,1H,J＝8Hz, C12-H),8.04(d,2H,J＝8Hz,Ar-H),7.85(t,1H,J＝8Hz,C10-H),7.71(t,1H,J＝8,C11-H),7.33(s,1H,C14-H),7.24-7.07( m,4H,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.33(s,2H,C5-H),4.42(s,2H,-CH2-Ar),4.09 (s,2H,-CH2-piperazine),3.70(s,2H,piperazine-H),3.40 (s,2H,piperazine-H),2.55(s,2H,piperazine-H),2.38(s,2H,piperazine-H),1.90-1.83(m,2H,C19-H),0.86(t,3H,J＝8 Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:801.6[M+Na]+.。

实施例17：目标化合物Iq的合成

与实施例13同，仅以对氟苯磺酰叠氮代替乙基磺酰叠氮。反应所得产物检测数据如下：产率:65％；熔点： 218-219℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.40(d,1H,J＝8Hz,C9-H),8.16(d,1H,J＝8Hz,C12-H),7.96(m,2H,Ar-H) ,7.84(t,1H,J＝8Hz,C10-H),7.70(t,1H,J＝8,C11-H),7.45(m,2H,Ar-H),7.31(s,1H,C14-H),7.24-7.08(m,4H,Ar-H),6. 53(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.32(s,2H,C5-H),4.41(s,2H,-CH2-Ar),4.07 (s,2H,-CH2-piperazine),3.67(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.53(s,2H,piperazine-H),2.35(s,2H,piperazine-H),1.92-1.82(m,2H,C19-H),0.88(t,3H,J＝8 Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:762.4[M+Na]+.。

实施例18：目标化合物Ir的合成

与实施例7同，仅以对氟苯乙炔代替苯乙炔。反应所得产物检测数据如下：产率:72％；熔点： 200-203℃；1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ:8.41-8.39(m,2H,C9-H,naphthalene-H),8.17-7.98(m,4H,C12-H,naph thalene-H),7.86-7.82(m,2H,C10-H,naphthalene-H),7.71-7.62(m,3H,C11-H,naphthalene-H),7.32(s,1H,C14-H), 7.23(t,2H,J＝8Hz,Ar-H),7.09(t,2H,J＝8Hz,Ar-H),6.54(s,1H,C20-OH),5.43(s,2H,C17-H),5.31(s,2H,C5-H),4.45 (s,2H，-CH2-Ar),4.06(s，2H，-CH2-piperazine),3.69(s,2H,piperazine-H),3.31 (s,2H,piperazine-H),2.56(s,2H,piperazine-H),2.34(s,2H,piperazine-H),1.90-1.85(m,2H,C19-H),0.87(t,3H,J＝8 Hz,C18-H)；MS-ESIm/z:794.2[M+Na]+.。

化合物a-r的抗肿瘤活性的试验方法及结果

本发明的药理实验采用磺酰罗丹明B(sulforhodamineB，SRB)比色法。肿瘤细胞培养选用10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基，将肿瘤细胞接种于96孔板，每个孔培养3-5×103个细胞，加入不同浓度的待测试目标化合物溶液。培养72小时后，每孔加入预冷的三氯乙酸溶液(50％，w/v)固定细胞，冰箱中固定30分钟。待96孔板室温下晾干后，每孔加入0.04％(w/v)的SRB染液(1％的乙酸配制，购自SigmaChemical公司)，染色30分钟后倒掉染液，用乙酸冲洗4次，去除未结合的染料，室温晾干。用100μL非缓冲Tris-base碱液溶解与细胞蛋白结合的染料，水平摇床上振荡20分钟，采用 ELx800吸收光酶标仪(美国Bio-Tek公司生产，操作软件Gen5)测定515nm处吸收值。所有试验设3 个平行组或重复三次。化合物a-r的细胞毒活性测试结果见表1。

表1化合物Ia-r的细胞毒活性试验结果

注：(1)筛选方法：磺酰罗丹明B比色法；(2)作用时间：48小时(3)化合物编号Ia分别为前述实施例1至实施例18所得产物。

对五种肿瘤细胞体外细胞毒活性测试结果显示，本发明所合成的化合物均表现出良好的毒杀人肺腺癌细胞(A549)、人乳腺癌细胞株(MDA-MB-231)、人口腔表皮样癌细胞(KB)、人口腔表皮样癌细胞耐药株(KBvin)和人乳腺癌细胞(MCF-7)等肿瘤细胞的活性，且一些化合物表现出高于喜树碱临床药物伊立替康的体外细胞毒活性。所有衍生物中，化合物a、c、d、e、m、p、r对受试的五种细胞均显示出较高的活性，其活性高出伊立替康10～20倍，表现出较好的应用前景。