技术领域
本发明涉及丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物及其制备方法与作为抗癌药的应用。
背景技术
丹参是我国传统医学药学中应用最早而且最广泛的药物之一，其脂溶性成分丹参酮IIA具有菲醌结构，其菲环可与DNA结合，呋喃环和醌类结构可产生自由基，引起DNA损伤，抑制肿瘤细胞DNA合成。丹参酮IIA还可以通过诱导肿瘤细胞凋亡,研究表明，5μg/mL的丹参酮IIA,对P388淋巴细胞白血病细胞的抑制率为50.05%（NicholsonDW.Nature,2001,410:33-34），可诱导HL60细胞DNA裂解成小的片段。
对具有抗癌作用的氮芥类药物在体内生物转化研究中发现，该类药物是通过转变为亚乙基亚胺活性中间体而发挥烷基化作用的，由此，开发出了低毒的亚乙基亚胺磷酰胺衍生物替派和塞替派，这两种药物临床上主要用于乳腺癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌的治疗。
本发明在丹参酮IIA的菲环、呋喃环和醌类结构不变的前提下，利用拼合原理，将具有烷基化功能的亚乙基亚胺活性中间体拼接到丹参酮IIA的结构中，得到了抗癌效果好的、毒性低的丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物，其具有良好的抗癌活性，并且毒性较低。
本发明的另一目的在于提供上述丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物的用途。
以下对本发明进行详细描述。
本发明提供通式（I）、（II）和（III）的丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物，结构如下所示：
式中，X为O，S。
作为优选方案，本发明的丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物选自如下化合物。
本发明还提供了上述通式（I）、（II）和（III）的化合物的制备方法，步骤包括：
式中，X为O，S。
本发明的丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物有显著的抗癌活性和较低毒性。
通过以下实施例进一步举例说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。
具体实施方式
实施例1
化合物（1）的制备：
将0.95g(0.022mol)乙撑亚胺和2.22g(0.022mol)Et3N溶于15mL二氯甲烷中，冷至0℃，滴加1.52g(0.01mol)的POCl3或1.68g(0.01mol)的PSCl3与5mL二氯甲烷的溶液，滴加完毕，室温反应3小时，过滤，浓缩，减压蒸馏，得到二乙撑亚胺磷酰氯或二乙撑亚胺硫磷酰氯，收率分别为79%和81%。
将3.10g(0.01mol)1-羟基丹参酮IIA溶于溶于15mL二氯甲烷中，加入1.11g(0.011mol)Et3N，冷至0℃，滴加1.83g(0.011mol)的二乙撑亚胺磷酰氯与8mL二氯甲烷的溶液，滴加完毕，室温反应7小时，过滤，浓缩，柱层析纯化，得到化合物（1），收率81%。1HNMR（300MHz，CDCl3）δ7.70-7.60(m,2H),7.22(s,1H),5.01(m,1H),2.07(m,1H),1.94(s,3H),1.84(m,1H),1.66(m,1H),1.63(t,J=4.2Hz,8H),1.40(m,1H),1.38(s,6H)。
实施例2
化合物（2）的制备：
将实施例1中1.83g(0.011mol)的二乙撑亚胺磷酰氯用2.00g(0.011mol)的二乙撑亚胺硫磷酰氯代替，其它操作同实施例1，得到化合物（2），收率83%。1HNMR（300MHz，CDCl3）δ7.70-7.60(m,2H),7.22(s,1H),4.97(m,1H),2.07(s,3H),1.90(m,1H),1.63-1.65(m,2H),1.63(t,J=4.2Hz,8H),1.40(m,1H),1.38(s,6H)。
实施例3
化合物（3）的制备：
将3.10g(0.01mol)17-羟基丹参酮IIA溶于溶于15mL二氯甲烷中，加入1.11g(0.011mol)Et3N，冷至0℃，滴加1.83g(0.011mol)的二乙撑亚胺磷酰氯与7mL二氯甲烷的溶液，滴加完毕，室温反应7小时，过滤，浓缩，柱层析纯化，得到化合物（3），收率78%。1HNMR（300MHz，CDCl3）δ7.69-7.56(m,2H),7.24(s,1H),5.29(s,2H),3.05(m,2H),1.67(t,J=4.2Hz,8H),1.63(m,2H),1.57(m,2H),1.30(s,6H)。
实施例4
化合物（4）的制备：
将实施例3中1.83g(0.011mol)的二乙撑亚胺磷酰氯用2.00g(0.011mol)的二乙撑亚胺硫磷酰氯代替，其它操作同实施例3，得到化合物（4），收率80%。1HNMR（300MHz，CDCl3）δ7.69-7.55(m,2H),7.24(s,1H),5.11(s,2H),3.05(m,2H),1.67(t,J=4.2Hz,8H),1.63(m,2H),1.56(m,2H),1.30(s,6H)。
实施例5
化合物（5）的制备：
将3.24g(0.01mol)15-亚甲羟基丹参酮IIA溶于溶于15mL二氯甲烷中，加入1.11g(0.011mol)Et3N，冷至0℃，滴加1.83g(0.011mol)的二乙撑亚胺磷酰氯与7mL二氯甲烷的溶液，滴加完毕，室温反应8小时，过滤，浓缩，柱层析纯化，得到化合物（5），收率81%。1HNMR（300MHz,CDCl3）δ7.62-7.53(m,2H),5.17(s,2H),2.95(m,2H),2.09(s,3H),1.67(t,J=4.2Hz,8H),1.64(m,2H),1.56(m,2H),1.30(s,6H)。
实施例6
化合物（6）的制备：
将实施例5中1.83g(0.011mol)的二乙撑亚胺磷酰氯用2.00g(0.011mol)的二乙撑亚胺硫磷酰氯代替，其它操作同实施例5，得到化合物（6），收率78%。1HNMR（300MHz，CDCl3）δ7.62-7.53(m,2H),4.97(s,2H),2.95(m,2H),2.09(s,3H),1.67(t,J=4.2Hz,8H),1.63(m,2H),1.56(m,2H),1.30(s,6H)。
实施例7
丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物对Lewis肺癌的抑制作用
C57BL/6小鼠，雌雄各半，18-20g。右前肢腋下皮下接种Lewis肺癌实体肿瘤。接种后第一天，动物随机分为5组，每组10只。分别给模型组腹腔注射0.4mL/只的生理盐水、阳性对照组腹腔注射1mg/kg的顺铂、丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物组腹腔注射20mg/kg的亚乙基亚胺磷酸酯衍生物。连续注射5天，第十一天剖取各组动物肿瘤，称取质量，计算抑瘤率。结果表明，各给药组与对照组相比，平均瘤质量显著降低（表1）。
实施例8
丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用
实验选MDA-MB-231细胞，其细胞浓度为5×105/mL对数生长期肿瘤细胞，按每孔100μL接种于96孔培养板中。置37℃、5%CO2培养箱内培养24h后，分别加入0.25μg/mL浓度的丹参酮IIA和丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物，设丹参酮IIA0μg/mL为空白对照，每种化合物设4各复孔，作用48h后，加入新配置的MTT液，置37℃、5%CO2培养箱内培养6h后加入DMSO，作用15min，置酶标仪中，选择波长570nm，测量各组的吸光度A570。计算细胞抑制率。抑制率（%）=（1-实验组A570/对照组A570）×100%。结果显示，空白对照组呈正常对数增长，各实验组丹参酮IIA和丹参酮IIA亚乙基亚胺磷酸酯衍生物对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长均有显著的抑制作用（表2）。