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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811127057.2 (22)申请日 2018.09.27 (71)申请人 咸宁市农业科学院 地址 437100 湖北省咸宁市温泉镇贺胜路 168号 (72)发明人 张君岱涂修亮程繁杨马梦君 (51)Int.Cl. C08B 37/00(2006.01) (54)发明名称 一种茶毫提取茶多酚的提取方法 (57)摘要 本发明公开了一种茶毫提取茶多酚的提取 方法， 包括步骤： 酶解处理； 微波处理； 离心处理； 超滤处理； 浓缩处理； 离心处理： 冷冻干燥处理： 将茶多糖沉淀。
2、放入冷冻干燥设备中干燥， 得茶多 糖。 本专利利用茶毫进行提取茶多糖， 目标产物 温泉毫峰茶毫多糖容易溶于水中， 并且水提取物 具有价格低、 无毒、 安全的优点。 因此选用蒸馏水 作为提取溶剂， 对目标成份提取效率的影响因素 设定为料液比， 提取时间， 提取功率。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 109021142 A 2018.12.18 CN 109021142 A 1.一种茶毫提取茶多酚的提取方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 酶解处理： 选择茶叶加工厂的加工副产品茶毫放入玻璃容器中， 将茶毫中加水， 并加酸 调节溶液至6.36.8， 再加入多酚氧化酶， 在4555环境下反。
3、应4555min， 得到酶解液； 微波处理： 将酶解液置于微波设备中， 微波400500W条件下处理57min得到微波 液； 离心处理： 将微波液放入离心机中， 在25003000r/min的条件下离心1015min， 得到 离心液； 超滤处理： 将离心液送入超滤设备中进行超滤处理， 得到超滤液； 浓缩处理： 将超滤液在真空度-0.07MPa、 温度为4555的旋转蒸发器中减压浓缩至 原体积的1/31/4， 得到浓缩液； 透析处理： 将浓缩液装入分子量3000040000的透析袋中， 透析1天， 得到透析液； 沉淀处理： 将透析液加入3倍体积的95%乙醇， 沉淀68h， 得到沉淀液； 离心处理。
4、： 将沉淀在20003000r/min的条件下离心810min， 得到茶多糖沉淀； 冷冻干燥处理： 将茶多糖沉淀放入冷冻干燥设备中干燥， 得茶多糖。 权利要求书 1/1 页 2 CN 109021142 A 2 一种茶毫提取茶多酚的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及一种茶毫提取茶多酚的提取方法， 属于农业技术领域。 背景技术 0002 茶多糖(TeaPolysaccharide)是一种类似灵芝多糖和人参多糖的一种高分子化合 物(分子量4万-10万) ， 是一种酸性糖蛋白,并结合有大量的矿质元素， 称为茶叶多糖复合 物， 简称为茶叶多糖或茶多糖。 其蛋白部分主要由约20种常见的氨基酸组成，。
5、 糖的部分主要 由阿拉伯糖、 木糖、 岩藻糖、 葡萄糖、 半乳糖等， 矿质元素主要由钙、 镁、 铁、 锰等及少量的微 量元素， 如稀土元素等组成。 具有降血糖、 降血脂、 增强免疫力、 降血压、 减慢心率、 增加冠脉 流量、 抗凝血、 抗血栓和耐缺氧等作用， 近年来发现茶多糖还具有治疗糖尿病的功效。 从20 世纪70年代展开对多糖的研究始， 发展很快。 由于多糖多种多样的生物活性功能以及在功 能食品和临床上广泛使用， 使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃， 成为天然药物、 生 物化学、 生命科学的研究热点。 先期处理： 茶多糖主要来源是成品干茶。 通过将茶叶粉碎， 在 一定的温度下， 先用酸。
6、性、 中性或者弱碱性水浸提， 再通过沉淀分离或柱层析分离， 制备出 粗品。 0003 茶叶深加工是茶产业的新领域， 有着巨大的增值潜力和市场潜力。 随着茶叶研究 的不断深入以及和医学研究的交叉和渗透， 已经证实茶多糖具有降血糖、 增强免疫力、 降血 脂、 抗动脉粥样硬化、 抗凝血、 抗血栓等保健功能。 0004 传统的茶多糖提取用茶叶为原料， 以水提和超声波提取多见， 酶工程技术是近几 年来用于天然植物有效成分提取的一项生物工程技术。 选用恰当的酶， 可较温和地将植物 组织分解， 加速有效成分的释放， 从而提高其提取率。 0005 茶毫， 也叫茶毛， 是茶叶芽头上而细小的绒毛。 一方面， 茶毫。
7、是茶树品种和鲜叶嫩 度的重要品质指标之一， 其中含有丰富的茶多糖、 茶多酚和茶氨酸等营养物质。 0006 另一方面， 当对茶叶进行加工时， 茶叶失水干燥， 在热风的吹动下或者机械运动 时， 茶毫会从茶叶表面脱落。 加工过程中茶毫四处飘洒到车间内， 对整个车间的卫生条件产 生较大影响， 特别是精制茶厂。 许多茶叶加工企业对茶毫进行收集之后作为垃圾处理， 造成 大量的资源浪费。 如果空气中存在大量茶毫， 会对工人眼睛和呼吸系统产生影响， 严重危害 工人的健康。 其实这些茶毫有很高的营养价值， 可以把它们做成茶叶饼等食品。 发明内容 0007 本发明提供了一种经无毒、 安全的的茶毫提取茶多酚的提取方。
8、法。 0008 本发明的技术方案是： 一种茶毫提取茶多酚的提取方法， 包括步骤： 酶解处理： 选择茶叶加工厂的加工副产品茶毫放入玻璃容器中， 将茶毫中加水， 并加酸 调节溶液至6.36.8， 再加入多酚氧化酶， 在4555环境下反应4555min， 得到酶解液； 微波处理： 将酶解液置于微波设备中， 微波400500W条件下处理57min得到微波液； 说明书 1/5 页 3 CN 109021142 A 3 离心处理： 将微波液放入离心机中， 在25003000r/min的条件下离心1015min， 得到 离心液； 超滤处理： 将离心液送入超滤设备中进行超滤处理， 得到超滤液； 浓缩处理： 将。
9、超滤液在真空度-0.07MPa、 温度为4555的旋转蒸发器中减压浓缩至 原体积的1/31/4， 得到浓缩液； 透析处理： 将浓缩液装入分子量3000040000的透析袋中， 透析1天， 得到透析液； 沉淀处理： 将透析液加入3倍体积的95%乙醇， 沉淀68h， 得到沉淀液； 离心处理： 将沉淀在20003000r/min的条件下离心810min， 得到茶多糖沉淀； 冷冻干燥处理： 将茶多糖沉淀放入冷冻干燥设备中干燥， 得茶多糖。 0009 本专利利用茶毫进行提取茶多糖， 目标产物温泉毫峰茶毫多糖容易溶于水中， 并 且水提取物具有价格低、 无毒、 安全的优点。 因此选用蒸馏水作为提取溶剂， 对。
10、目标成份提 取效率的影响因素设定为料液比， 提取时间， 提取功率。 附图说明 0010 图1表示不同时料液比对茶多糖收率图； 图2表示提取时间对茶多糖收率图； 图3表示微波功率对茶多糖收率图。 具体实施方式 0011 下面结合附图对本发明作进一步说明： 现结合实施例详细说明本发明的技术方案。 应理解， 以下实施例仅用于说明本发明而 不用于限制本发明的范围。 在不背离本发明精神和实质的情况下， 对本发明步骤或条件所 作的修改或替换， 均属于本发明的范围。 0012 若未特别指明， 实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。 0013 实验材料： 茶毫。 0014 实验试剂： 多酚氧。
11、化酶、 95%乙醇、 浓硫酸、 苯酚、 TCA、 考马氏亮蓝G-250(称取考马 氏亮蓝G-250 50mg， 加体积百分比浓度为95乙醇25ml溶解， 加体积百分比浓度为85磷 酸50ml， H2O定容到500ml， 过滤去除少量未溶解物， 4保存备用)。 0015 仪器设备： 干燥箱、 电子天平、 数显恒温水浴锅、 pH计、 紫外线可见分光光度计、 旋 转蒸发器、 透析袋、 离心机、 冷冻干燥机。 0016 可溶性糖含量的测定： 采用蒽酮-硫酸法测定可溶性糖含量。 0017 糖醛酸含量： 硫酸-咔唑法。 0018 茶多糖得率干燥后的产物质量(g) /原料茶毫质量(g)100。 0019 处。
12、理前茶多糖得率100 实施例1 对于是否加酶的显著性分析 制备茶多糖粗提液， 实验组样品先加多酚氧化酶， 处理后再进行微波处理， 对照组样品 没有加多酚氧化酶而直接微波然后进行后面的步骤， 以两组样品处理前后溶液内茶多糖含 量变化来计算茶多糖得率， 结果见表1。 对所得数据进行差异显著性分析， 可知加酶组和不 加酶组在多糖得率、 可溶性糖含量和糖醛酸含量是有极显著(P0.01)差异的。 由此可初步 说明书 2/5 页 4 CN 109021142 A 4 判断， 实验假设成立， 加多酚氧化酶后可以显著提高多糖得率， 有效提高产物纯度。 0020 表1不同处理方法(不加酶/加酶)多糖得率 实施例。
13、2 对于是否微波的显著性分析 制备茶多糖粗提液， 实验组样品先加多酚氧化酶， 处理后再进行微波处理， 对照组样品 加多酚氧化酶之后不微波进行后面的步骤， 以两组样品处理前后溶液内茶多糖含量变化来 计算茶多糖得率， 结果见表2。 对所得数据进行差异显著性分析， 可知不微波组和微波组在 多糖得率、 可溶性糖含量和糖醛酸含量是有极显著(P0 .01)差异的。 由此可初步判断， 实 验假设成立， 微波可以显著提高多糖得率， 有效提高产物纯度。 0021 表2不同处理方法(不微波/微波)多糖得率 实施例3 对于是否透析的显著性分析 制备茶多糖粗提液， 实验组样品先加多酚氧化酶， 处理后再进行微波处理， 。
14、在沉淀之前 进行透析， 对照组不进行透析， 以两组样品处理前后溶液内可溶性糖含量和糖醛酸含量变 化来反映茶多糖纯度， 结果见表2。 对所得数据进行差异显著性分析， 可知不透析组和透析 组在多糖得率、 可溶性糖含量和糖醛酸含量是有极显著(P0 .01)差异的。 由此可初步判 断， 实验假设成立， 透析可以显著提高多糖得率， 有效提高产物纯度。 0022 表3 不同处理方法(不透析/透析)多糖含量 实施例4对于是否超声的显著性分析 制备茶多糖粗提液， 实验组样品先加纤维素酶和多酚氧化酶， 比例为10： 1， 处理后再进 行超声处理， 对照组样品加纤维素酶和多酚氧化酶之后不超声进行后面的步骤， 以两。
15、组样 品处理前后溶液内茶多糖含量变化来计算茶多糖得率， 结果见表4。 对所得数据进行差异显 著性分析， 可知不超声组和超声组在多糖得率、 可溶性糖含量和糖醛酸含量是有极显著(P 0 .01)差异的。 由此可初步判断， 实验假设成立， 超声可以显著提高多糖得率， 有效提高 产物纯度。 0023 表4不同处理方法(不超声/超声)多糖得率 说明书 3/5 页 5 CN 109021142 A 5 实施例4单因素实验 应用控制变量法并结合光管资料中多酚氧化酶的最适作用条件设定试验梯度进行单 因素试验 试验选用多酚氧化酶， 酶活应用控制变量法并结合相关资料中多酚氧化酶的最适作用 条件设定实验梯度进行单因。
16、素实验。 0024 1、 料液比 准确称取温泉毫峰茶毫样品1.000g置于100mL锥形瓶中， 加入一定比例(1:10、 1:15、 1: 20、 1:25、 1:30)的去离子水， 进行微波辅助提取茶多糖， 将提取液进行减压抽滤和减压旋转 浓缩， 将浓缩液与95%乙醇试剂1:3混合， 在4000r/min的转速下离心15min,得茶多糖沉淀， 冷冻干燥。 实验结果见图1。 0025 分析数据可知： 料也比不同对减少多糖得率效果差异极显著(P0.01) ， 并且在 1:20、 1:25、 1:30时多糖得率相对较好， 对这三个点(1:20、 1:25、 1:30)进行差异显著性分 析， 得到P。
17、0.05， 无显著性差异。 从节约成本和获得好的实验效果等方面综合考虑， 料也比 选择1： 20为宜。 0026 2、 提取时间 准确称取温泉毫峰茶毫样品1.000g置于100mL锥形瓶中， 加入20mL去离子水， 在一定时 间10min （15min. 20min. 25min. 30min)下进行微波辅助提取茶多糖， 将提取液进行减压 抽滤和减压旋转浓缩， 将浓缩液与95%乙醇试剂1:3混合， 在4000r/min的转速下离心15min, 得茶多糖沉淀， 冷冻干燥。 实验结果见图2。 0027 统计分析结果表明， 随着时间的变化， 茶毫多糖提取率呈现先升高后降低的趋势， 理论上说随着提取时。
18、间的增加茶毫茶多糖被大量浸出， 随着时间进一步增加， 浸提出来的 多糖有可能被破坏和水解， 不利于多糖的提取。 为了节约能源和提取成本， 选取提取时间选 择20min为宜。 0028 3、 微波功率 准确称取温泉毫峰茶毫样品1.000g置于100mL锥形瓶中， 加入20mL去离子水， 在一定功 率(50%. 60%. 70%. 80%. 90%)， 微波辅助提取茶多糖25min， 将提取液进行减压抽滤和减 压旋转浓缩， 将浓缩液与95%乙醇试剂1 3混合， 在4000r/min的转速下离心15min， 得茶多糖 沉淀， 冷冻干燥。 实验结果见图3。 0029 分析数据可知： 微波不同对减少多糖。
19、得率效果差异极显著(P0.01) ， 并且在80% 时多糖得率相对较好。 从节约成本和获得好的实验效果等方面综合考虑， 微波功率选择80% 为宜。 0030 本发明的具体实施例 酶解处理： 选择茶叶加工厂的加工副产品茶毫放入玻璃容器中， 将茶毫中加水， 并加酸 调节溶液至6.36.8， 再加入多酚氧化酶， 在4555环境下反应4555min， 得到酶解液； 微波处理： 将酶解液置于微波设备中， 微波400500W条件下处理57min得到微波液； 离心处理： 将微波液放入离心机中， 在25003000r/min的条件下离心1015min， 得到 离心液； 超滤处理： 将离心液送入超滤设备中进行超。
20、滤处理， 得到超滤液； 浓缩处理： 将超滤液在真空度-0.07MPa、 温度为45-55的旋转蒸发器中减压浓缩至原 说明书 4/5 页 6 CN 109021142 A 6 体积的1/31/4， 得到浓缩液； 透析处理： 将浓缩液装入分子量3000040000的透析袋中， 透析1天， 得到透析液； 沉淀处理： 将透析液加入3倍体积的95%乙醇， 沉淀68h， 得到沉淀液； 离心处理： 将沉淀在20003000r/min的条件下离心810min， 得到茶多糖沉淀； 冷冻干燥处理： 将茶多糖沉淀放入冷冻干燥设备中干燥， 得茶多糖。 说明书 5/5 页 7 CN 109021142 A 7 图1 图2 说明书附图 1/2 页 8 CN 109021142 A 8 图3 说明书附图 2/2 页 9 CN 109021142 A 9 。